LAPORAN

PRAKTIKUM KIMIA TERPADU

LABORATORIUM BIOKIMIA

UJI TOTAL FENOL PADA DAUN KENTANG

Disusun Oleh:

Tuti Alawiyah 24030110120035

JURUSAN KIMIA

FAKULTAS SAINS DAN MATEMATIKA

UNIVERSITAS DIPONEGORO

SEMARANG

2013

ABSTRAK

Telah dilakukan peneliltian yang berjudul Uji Fenol pada Daun Kentang. Tujuan

dari penelitian ini adalah menegtahui cara pembuatan asam galat serta mengetahui kandungan

total fenol pada sampel yaitu daun kentang. Metode yang digunakan adalah spektrofotometri.

Spektrofotometri merupakan suatu metode analisa yang didasarkan pada pengukuran

serapan sinar monokromatis oleh suatu lajur larutan berwarna pada panjang gelombang

spesifik dengan menggunakan monokromator prisma atau kisi difraksi dengan detektor

fototube.

Prinsip dari spektrofotometri UV-Vis mengacu pada hukum Lambert-Beer. Apabila

cahaya monokromatik melalui suatu media (larutan), maka sebagian cahaya tersebut akan

diserap, sebagian dipantulkan dan sebagian lagi akan dipancarkan.

Hasil yang diperoleh dari penelitian ini adalah nilai absorbansi asam galat dengan

variasi konsentrasi 300, 400, 500, 600, 700 mg/mL pada =765 nm masing-masing sebesar

0,404; 0,511; 0,601; 0,836; 0,925 dan absorbansi sampel daun kentang pada =765 nm

masing-masing sebesar E= 0,284; F= 0,637 serta kadar fenol pada sampel daun kentang E=

203,6 ppm dan F= 461,5 ppm.

Kata kunci : spektrofotometri, daun kentang, dan uji fenol, asam galat

PRAKTIKUM KIMIA TERPADU

UJI TOTAL FENOL PADA DAUN KENTANG

I. TUJUAN PENELITIAN

1.1 Untuk mengetahui cara pembuatan asam galat.

1.2 Untuk mengetahui kadar total fenol pada daun kentang.

II. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Senyawa Fenol

Fenol atau asam karbolat atau benzenol adalah zat kristal tak berwarna yang memiliki

bau khas. Rumus kimianya adalah C6H5OH dan strukturnya memiliki gugus hidroksil (-OH)

yang berikatan dengan cincin fenil. Kata fenol juga merujuk pada beberapa zat yang memiliki

cincin aromatik yang berikatan dengan gugus hidroksil. Fenol memiliki kelarutan terbatas

dalam air, yakni 8,3 gram/100 ml. Fenol memiliki sifat yang cenderung asam, artinya dapat

melepaskan ion H+ dari gugus hidroksilnya. Pengeluaran ion tersebut menjadikan anion

fenoksida C6H5O yang dapat dilarutkan dalam air.

Fenol merupakan salah satu komponen kimia tumbuhan yang memiliki manfaat

sangat besar bagi tumbuhan maupun bagi manusia. Senyawa fenol memiliki ciri cincin

aromatik dan adanya satu atau dua penyulih hidroksil. Senyawa fenol lebih cenderung larut

dalam air, karena senyawa ini biasanya berikatan dengan gula. Senyawa fenol mencakup

beberapa golongan senyawa bahan alam. Mulai dari flavanoid, phenil propanoid, kuinon

phenolik, lignin, melanin, dan tanin merupakan golongan senyawa fenol.

Dibandingkan dengan alkohol alifatik lainnya, fenol bersifat lebih asam. Hal ini

dibuktikan dengan mereaksikan fenol dengan NaOH, di mana fenol dapat melepaskan H+.

Pada keadaan yang sama, alkohol alifatik lainnya tidak dapat bereaksi seperti itu. Pelepasan

ini diakibatkan pelengkapan orbital antara satu-satunya pasangan oksigen dan sistem

aromatik, yang mendelokalisasi beban negatif melalui cincin tersebut dan menstabilkan

anionnya.

Fenol didapatkan melalui oksidasi sebagian pada benzena atau asam benzoat dengan

proses Raschig. Fenol juga dapat diperoleh sebagai hasil dari oksidasi batu bara. Fenol

merupakan komponen utama pada antiseptik dagang, triklorofenol atau dikenal sebagai TCP

(trichlorophenol). Fenol juga merupakan bagian komposisi beberapa anestitika oral, misalnya

semprotan kloraseptik. Fenol berfungsi dalam pembuatan obat-obatan (bagian dari produksi

aspirin, pembasmi rumput liar, dan lainnya). Fenol yang terkonsentrasi dapat mengakibatkan

pembakaran kimiawi pada kulit yang terbuka. Rumus bangun fenol dapat dilihat pada gambar

1 di bawah ini:

Gambar 1. Struktur fenol

Fenol merupakan komponen utama pada anstiseptik dagang, triklorofenol atau dikenal

sebagai TCP (trichlorophenol). Fenol juga merupakan bagian komposisi beberapa anestitika

oral, misalnya semprotan kloraseptik. Fenol berfungsi dalam pembuatan obat-obatan (bagian

dari produksi aspirin) pembasmi rumput liar, dan lainnya. Fenol yang terkonsentrasi dapat

mengakibatkan pembakaran kimiawi pada kulit yang terbuka.

2.2 Klasifikasi Tanaman Kentang

Taksonomi tanaman kentang:

Kingdom : plantae (tumbuhan)

Subkingdom : tracheobionta

Super Divisi : spermatophyta

Divisi : magnoliophyta

Kelas : magnoliopsida

Subkelas : asteridae

Ordo : solanales

Family : solanaceae

Genus : solanum

Spesies : solanum tuberosum L

Tanaman kentang mengandung alkaloid dan falvonoid. Alkaloid merupakan senyawa kimia

tanaman metabolit sekunder, yang terbentuk berdasarkan prinsip pembentukan campuran.

Alkaloid biasanya mengandung minimal satu lingkaran heterosiklik dan mengandung gugus

N. sedangkan flavonoid adalah senyawa alami yang terdiri dari C6-C3-C6. Flavonoid

umumnya terdapat pada tumbuhan sebagai glikosida. Glikosida merupakan senyawa asal gula

dengan zat lain yang dapat terhidrolisis menjadi penyusunnya, misalnya glikosida

memberikan fruktosa, galaktosida mengahsilkan galaktosa, dan sebagainya. Gugusan gula

bersenyawa pada satu lebih ataua group hidroksil fenolik. Sedangkan pada cincin B gugusana

hidroksil atau alkoksil terdapat pada karbon nomor 3 dan 4.

Flavonoid terdapat pada seluruh bagian tanaman, termasuk pada buah, tepung sari dan

akar. Ada beberapa macam falvonoid diantaranya flavon, flavanonol, falvonol, isoflavon,

calkon, dan lain-lain. Kegunaan flavonoid bagi tumbuhan adalah untuk menarik perhatian

binatang yang membantu penyebaran biji. Flavonoid yang terdapat dalam kentang adalah

kuersetin (Quercetin) yang merupakan salah satu zat aktif kelas flavonoid yang secara

biologis sangat kuat. Kuersetin dipercaya dapat melindungi tubuh dari beberapa jenis

penyakit degenerative dengan cara mencegah terjadinya peroksidasi lemak. Struktur kuersetin

pada C nomor 3,5,7 dan C nomor 1,2 terdapat gugus hidroksil. Ketika flavonol kuersetin

bereaksi dengan radikal bebas, kuersetin mendonorkan protonnya dan menjadi senyawa

radikal tetapi electron yang tidak berpasangan yang dihasilkan didelokalisasi oleh resonansi.

Hal ini membuat senyawa kuersetin radikal mempunyai energy yang sangat rendah untuk

menjadi radikal yang reaktif.

Gambar 2. Struktur flavonoid

2.3 Metode Spektrofotometri

Spektrofotometri merupakan analisa kimia kuantitatif di dalam kimia analisis

dengan mengukur berapa jauh energi radiasi yang diserap oleh absorbansi terisolasi suatu

panjang gelombang. Cara untuk mengetahui zat kimia adalah dengan bantuan warna yang

ditambahkan pada benda yang kita lewatkan cahaya pada suatu medium tertentu (zat kimia)

yang akan tampak cahaya yang diabsorbsi dan diteruskan untuk mendeteksi gugus

fungsional, mengidentifikan senyawa yang mengalisis campuran.

2.4 Spektrofotometer

Spektrofotometer sesuai dengan namanya adalah alat yang terdiri dari spektrometer

dan fotometer. Spektrometer menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang

tertentu dan fotometer adalah alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan,

direfleksikan atau diemisikan sebagai fungsi dari panjang gelombang. Suatu spektrofotometer

tersusun dari spektrum tampak yang kontinu, monokromator, sel pengabsorpsi untuk larutan

sampel atau blanko dan suatu alat untuk mengukur perbedaan absorbsi antara sampel dan

blanko ataupun pembanding.(Khopkar, 1990)

Spektrofotometer tersusun dari:

a. Suatu sumber energi cahaya yang berkesinambungan yang meliputi daerah spektrum

yang mana instrumen itu dirancang untuk beroperasi.

b. Monokromator

Yaitu suatu alat untuk memencilkan berkas radiasi dari sumber berkesinambungan

(menghasilkan sumber sinar yang monokromatis). Komponennya adalah suatu sistem

celah dan suatu unsur dispersif. Monokromator juga memencilkan pita sempit panjang

gelombang dari spektrum lebar yang dipancarkan oleh sumber cahaya.

c. Sel absorpsi

Dapat berupa cuvet kaca atau cuvet kaca cara, sedang di daerah UV digunakan sel

kuasa.

d. Detektor

Berupa transduser yang mengubah energi cahaya menjadi suatu syarat listrik detektor

diharapkan memiliki kepekaan tinggi dalam daerah spektra yang diamati, respon

linier terhadap gaya radiasi, waktu respon cepat, dapat digandakan dan kestabilan

tinggi.

e. Wadah untuk sampel

f. Penggandaan / amplifier dan rangkaian yang berkaitan yang membuat isyarat listrik

ini memadai untuk dibaca.

g. Sistem kaca, dimana pergerakan besarnya isyarat listrik.

(Underwood, 1992)

2.5 Asam Galat

Asam galat adalah senyawa golongan asam fenolik C6-C1 (phenolic acid) atau

hidroksibenzoat, yaitu asam 3,4,5-trihidroksibenzoat.

Asal kata galat adalah

kata galle dalam bahasa prancis yang berarti pembengkakan pada jaringan tanaman

setelah terserang serangga parasit. Senyawa ini dapat ditemukan pada daun dan anggur

dan memiliki aktivitas sebagai antioksidan (penangkal radikal bebas). Asam galat adalah

subunit dari galotanin, yaitu polimer heterogen yang mengandung berbagai molekul asam

galat yang saling terkait dengan asam galat lain serta dengan sukrosa dan gula lainnya.

Banyak galotanin yang menghambat pertumbuhan tanaman karena dapat

merombak enzim sitoplasma dengan cara mendenaturasi protein (enzim adalah protein),

dan ketahanan tumbuhan yang mengandungnya kemungkinan disebabkan karena

galatonin diangkut ke vakuola sehingga terpisah dari enzim di sitoplasma.

Gambar 3. Struktur Asam Galat

2.6 Analisa Bahan:

2.6.1 Asam galat

Berbentuk bubuk organik kristal tak berwarna. Asam galat mempunyai sifat

antifungal, antioksidan. (Nely, 2007)

2.6.2 Etanol

Berbentuk zat cair, tidak berwarna, rasa dan baunya khas, titik didih = 70,5 C,

sebagai pelarut, bahan bakar dan minuman, bila terbakar di udara berwarna biru.

(Daintith,1994)

2.6.3 Aquabides

Sifat fisik : berbentuk cairan, tidak berwarna, berbau dan berasa,

titik didih 1000C, titik leleh 0

0C.

Sifat kimia : bersifat polar dan sebagai pelarut universal.

(Basri, 1996)

2.6.4 Folin ciacalteau

2.6.5 Na2CO3

Sifat fisik: padatan Kristal putih, Titik leleh 851C, densitas 2,5 dan 1,4

Sifat kimia: larut dalam air, sebagai soda pembersih, mudah melapuk oleh udara.

(Mulyono, 2001)

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Alat dan Bahan

3.1.1 Alat:

- Mortar

- Tabung reaksi

- Spektrofotometer

- Pipet tetes

- Kapas

3.1.2 Bahan:

- Daun kentang

- Asam galat

- Etanol 80 %

- Etanol 90 %

- Aquabides

- Folin ciacalteau

- Na2CO3 20 %

3.2 Skema Kerja:

3.2.1 Pembuatan Asam Galat

0,25 g asam galat

- Penambahan 5 ml etanol 96%

- Penambahan 50 ml aquabides

0,5 g asam galat 5mg/mL

- Pengambilan larutan induk masing-masing 6, 8, 10, 12, 14 ml

- Pengenceran dengan aquabides pada labu ukur 100 ml sampai dihasilkan

konsentrasi 300, 400, 500, 600, 700 mg/L asam galat

- Masing-masing konsentrasi di ambil 0,2 ml

- Penambahan 15,8 ml aquabides pada masing-masing konsentrasi

- Penambahan 1 ml folin ciocalteau

- Pendiaman 8 menit

penambahan 3 ml Na2CO3 20%

pengocokan hingga homogen

- Pengukuran Absorbansi pada = 765 nm

- Pembuatan kurva kalibrasi

Hasil

3.2.2 Penentuan Kadar Total Fenol

0,2 gram sampel

Tabung reaksi

- Penambahan 1 ml etanol 80 %

- Pengambilan ekstrak dengan pipet yang diberi kapas di ujungnya

Ekstrak etanol

Tabung reaksi

- Penambahan etanol hingga 2 ml

- Pengambilan 0,1 ml ekstrak etanol (triplo)

0,1 ml ekstrak etanol

- Penambahan aquabides 1,2 ml

- Pengadukan

- Penambahan 0, 1ml reagen folin

- Pendiaman selama 5 menit

- Penambahan 0,4 ml Na2CO3 20 %

- Penginkubasian selama 30 menit

- Penentuan Absorbansi pada = 765 nm

Hasil

BAB III

PEMBAHASAN

2.1 Pembuatan Asam Galat

2.2 Uji Total Fenol

Fenol meliputi berbagai senyawa yang berasal dari tumbuhan dan mempunyai ciri yang

sama, yaitu memiliki cincin aromatik yang mengandung satu atau dua gugus hidroksil.

Flavonoid merupakan golangan fenol terbesar, selain itu juga terdapat beberapa jenis fenol

lainnya seperti fenol monosiklik sederhana, fenilpropanoid dan kuinon fenolik. Gugus

aromatik yang dimiliki oleh senyawa fenol dapat menyerap kuat pada spektrum sinar UV.

Senyawa fenol cenderung mudah larut dalam air karena sering berikatan dengan gula sebagai

glikosida dan biasanya terdapat dalam vakuola sel (Harborne 1987).

Gambar 1. Struktur Kimia senyawa fenol

Pengujian total fenol ini menggunakan pelarut Follin-Ciocalteu dan sebagai pembanding

digunakan asam galat (Rohman dan Riyanto 2005). Prinsip kerja metode Follin-Ciocalteu

ini adalah reaksi antara senyawa fenol dengan reagen Follin-Ciocalteu. Reaksi ini melibatkan

oksidasi gugus fenolik (ROH) dengan campuran asam fosfotungstat dan asam molibdat

dalam reagen, menjadi bentuk quinoid (R=O). Reduksi reagen Follin-Ciocalteu ini

menghasilkan warna biru sesuai dengan kadar fenol total yang bereaksi. Selanjutnya warna

ini dihitung intensitasnya pada panjang gelombang 765 nm. Asam galat digunakan sebagai

standar pengukuran dikarenakan asam galat merupakan senyawa polifenol yang terdapat di

hampir semua tanaman. Kandungan fenol asam organik ini bersifat murni dan stabil

(Kusumaningati 2009).

Nilai total fenol diperoleh dari pengukuran nilai absorban dan perhitungan menggunakan

persamaan regresi linear asam galat. Data pada tabel menunjukkan perbedaan kandungan

total fenol yang dihasilkan. Ekstrak kasar pada sampel F memiliki kandungan total fenol yang

paling tinggi yaitu sebesar 461.5 ppm, dan yang paling sedikit kandungannya adalah sampel

E yaitu sebesar 203.6 ppm. Kevalidan hasil ini masih sedikit diragukan, hal ini dikarenakan

sampel yang digunakan berbeda-beda. Pada sampel E bagian yang diambil adalah bagian

batang saja dan untuk sampel F bagian tanaman yang diambil adalah daun. Perbedaan

pengambilan bagian tanaman pada sampel inilah yang dikhawatirkan mempengaruhi

kandungan fenolnya itu sendiri. Kandungan total fenol dalam ekstrak kasar tanaman kentang

dapat dilihat pada tabel dibawah ini:

Sampel

E F

Kadar Total

Fenol (ppm)

203.6 461.5

LAMPIRAN 1 : HASIL ABSORBANSI

Tabel 2. Hasil Absorbansi Variasi Konsentrasi Asam Galat

Konsentrasi Asam galat

(mg/mL)

Absorbansi

(=765 nm)

300 0.404 400 0.511 500 0.601 600 0.836 700 0.925

Tabel 3. Hasil Absorbansi Sampel Tanaman Kentang

Sampel Absorbansi Absorbansi

Rata-Rata I II III

E 0.253 0.390 0.210 0.284

F 0.725 0.581 0.607 0.637

Gambar 2. Grafik Kurva Standar Asam Galat

LAMPIRAN 2 : PERHITUNGAN

y = 0,0014x - 0,0281 R = 0,9717

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1

0 200 400 600 800

Ab

sorb

ansi

(

= 7

65

nm

)

Konsentrasi Asam Galat (mg/L)

Kurva Standar Asam Galat

Absorbansi ( = 765 nm)

Linear (Absorbansi ( = 765 nm))

Tabel 4. Regresi Linear Asam Galat

x y xy x2

300 0.404 1.212 90000

400 0.511 2.044 160000

500 0.601 3.005 250000

600 0.836 5.016 360000

700 0.925 6.475 490000

= 2500 = 3.277 = 17.752 = 1350000

=

(2) ()2

=517.752 25003.277

5(1350000) (2500)2

=683.5

500000

= 0.001367

= +

0.404 = 0.001367(300) +

= 0.4101 0.404

= 0.0061

Menghitung Konsentrasi Kadar Fenol

Sampel E

= +

0.284 = 0.001367 + 0.0061

=0.284 0.0061

0.001367

= 203.6 ppm

Sampel F

= +

0.637 = 0.001367 + 0.0061

=0.637 0.0061

0.001367

= 461.5 ppm

DAFTAR PUSTAKA

Basri, S., 1996. Kamus Kimia. Rineka Cipta. Jakarta

Harborne JB. 1987. Phytochemical methods. Ed ke-2. New York: Chapman and Hall.

Kusumaningati RW. 2009. Analisis kandungan fenol total jahe (Zingiber officinale Roscoe)

secara in vitro [skripsi]. Jakarta: Fakultas Kedokteran, Universitas Indonesia.

Mulyono, 2001. Kamus kimia. PT Gramedia Pustaka Utama. Bandung

Rohman A, Riyanto S. 2005. Daya antioksidan ekstrak etanol daun kemuning (Murraya

paniculata (L) Jack) secara in-vitro. Majalah Farmasi Indonesia 16(3):136-140.