a1 selasa 13.00-16.00 kel 4 uji amilase 4 tujuan

8/16/2019 A1 Selasa 13.00-16.00 Kel 4 Uji Amilase 4 TUJUAN

1/15

“ UJI AKTIVITAS AMILASEMETODE KOLORIMETRI DENGAN

PEREAKSI LUGOL”KELOMPOK 4 :

LUTHFI UTAMI 260110150013CHAIRUNNISA 260110150014

PUTY PRIANTI NOVIRA 260110150017DERIF AZIS A. 26011015001

ZAFIRA ZAHRAH 260110150022


2/15

1. Mengetahui pengaruh suhuterhadap aktivitas Enzim2. Membuktikan bahwa derajat

keasaman pH mempengaruhienzim

3. Mengetahui pengaruh konsentrasienzim terhadap perombakansubstrat

4. Mengetahui konsentrasi substratterhadap aktivitas enzim

I. Tujuan

II. Prinsip

1. Absorbansi2. Enzim Amilase3. katan !likosidik4. Metode "olorimetri#. Metode $arawa% & 'omog%i


3/15

1. AbsorbansiCahaya yang diserap dinyatakan sebagai absorbansi (A) dandinyatakan dalam rumus :

A = -log T = - log(Prasetia,

!1").

. #n$im Amilase#n$im amilase merupakan en$im yang digunakan dalam pengolahanindustri pati yang ber%ungsi untuk menghidrolisis polisakarida men&adigula sederhana (Akpan, !!').

'. katan likosidik katan glikosidik adalah ikatan yang men&embatani antara *in*in-*in*in

unit monosakarida yang berkabung men&adi disakarida atau polisakarida(+inarto, !1 ).

".


4/15

". etode olorimetri etode kolorimetri adalah metode analisis yangmembandingkan larutan ber/arna yang tidak diketahui konsentrasinyadengan larutan baku ber/arna (Pud&aatmaka, !! ).

. etode Cara/ay 0 omogyietode Cara/ay- omogyi merupakan u&i berdasarkan pada hidrolisis

pati oleh amilase dan kompleks hitam biru yang terbentuk ketika yodium bereaksi dengan pati (Cheesbrough, !! ).


5/15

. 2 Amilum . -Amilum (3ebrianti, !1').

III. M!"#$%&'!R!#"&%

(+inarto, !1 ).

(Coney,1454).


6/15

- - 2

6 ' 2 2 78

Amilase adalah en$im yang mengkatalis peme*ahan pati men&adi gula.

Pada proses pen*ernaan makanan, en$im ini sangat dibutuhkan untukmengubah karbohidrat men&adi gula yang nantinya akan dirombak lagi untukmembentuk ATP (Athena, !1').

#n$im 9-amilase memiliki nama kimia/i, yaitu endo-1,"-9- -glu*anglu*ohydrolase, #C '. .1.1. #n$im 9-amilase merupakan en$im ekstraseluleryang mampu memotong ikatan 1,"-9- -glikosidik antara monomer glukosa

pada rantai linier amilosa. #n$im ini dikategorikan sebagai endoen$imkarena pemotongan pati dilakukan se*ara a*ak dari dalam (Pandey, !!!).

IV. Teori Dasar


7/15

Penentuan keakti%an ini berdasarkan pada penguraian substratoleh en$im. eakti%an 90amilase ditentukan dengan metode kolorimetri( etiasih, !!7).

3aktor yang mempengaruhi metode kolorimetri, yaitu pemakaianindikator tidak mempengaruhi p8 kolorimetri, karena umumnyaindikator adalah asam atau basa yang sangat lemah. 3aktor lain yangmempengaruhi adalah pemakaian indikator yang tidak *o*ok dengan p8larutan. engan adanya protein dan asam amino, karena bersi%at am%otersehingga dapat bereaksi dengan indikator asam maupun basa ( ukard&o,14; ).


8/15


9/15

VI. Pereaksi yang dibuat dan jumlahnya

1. Amilum !, dibuat sebanyak ! ml : 1!!mg amilum dilarutkandalam ! m? aBuadest, lalu dipanaskan hingga larut sempurna.

inginkan dan genapkan larutan hingga ! m? dengan aBuades(@atnaningsih, !! ).

. odium !,!1 dibuat sebanyak ! ml: larutkan '!! mg dalam1! m? aBuadest, lalu tambahkan '! mg dan aBuadest hingga !m?. Ambil m? larutan dan en*erkan dengan aBuadest dalam labuukur ! m? ( urma, !!4).

'. u%%er asetat dibuat sebanyak 1!! ml. !,';" gram asam asetatditimbang dan dimasukkan kedalam gelas kimia kemudian ditambah aBuadest !! m?. ebanyak 1,11 gr natrium asetat ditimbang dan dimasukkan kedalam gelas kimia dan di tambahaBuades !! m?. Asam asetat ' m? dan atrium asetat 7; m? di

*ampurkan hingga membentuk p8 sekitar (@ahmah, !1').


10/15

enghaluskan sampel dengan blender.

enambah bu%%er asetat p8 !, untuk sampel tertentu (untuk setiap 1 gr sampelditambah ml bu%%er asetat).

enyimpan selama 1! menit sambil mengo*ok.

engsentri%ugasi %iltrat selama ! menit dengan ke*epatan !!! rpm pada suhu DC.

enyaring dengan menggunakan kapas, kertas saring atau alat penyaring lain.

engukur Eolume supernatan (ekstrak en$im) yangdihasilkan dan menempatkannya ke dalam /adah steril

untuk dianalisis.

embuat ekstrak en$im sebanyak1!! ml ( uarni dan @aut, !!5).

E"s#ra"si en$i%a%&'ase


11/15

Ambil 1! m? larutan pati tergelatinisasi, en*erkan hingga 1!! m? dengan

aBuades. ?arutan ini digunakan sebagai larutan stok (substrat) untuk

pengu&ian(konsentrasi !,!" mgFm? = "! gFm?) (A%iuk/a, !!4).

enambahkan "! m? pati larut !, pada ! m? aBuades mendidihdalam beaker glass, sambil diaduk.

Ge'a#inisasi pa#i 'aru#

enapkan hingga 1!! m? dengan air. larutan pati tergelatinisasidibiarkan dingin pada suhu kamar (konsentrasi pati " mgFm?).


12/15

embuat kurEa baku

embuat blanko

emasukkan amilum sebanyak ! mikroliter ke dalam mi*roplate reader menggunakanmikropipet

asukkan sampel buah sebanyak 1!! mikro pereaksi ke dalam mi*roplate reader

enginkubasi selama 2- menit

emasukkan ke dalam mi*roplate reader

emba*a absorbansinya

enghitung konsentrasinya


13/15

- - 2

6 ' 2 2 78

DA(TAR PUSTAKA

A%iuk/a, et. al. !!4. etermination o% amylase a*tiEity o% *rude eGtra*t %rom partially germinated mango seeds ( angi%era

oraphila). African Journal of Biotechnology Vol. 8 (14), pp. 3294-329 , 2! July, 2!!9 . 17;" & '1 .

Akpan, . !!'. Produ*tion and stabili$ation o% amylase preparation %rom ri*e bran solid medium. "orl# Journal of $icro%iologi an# Biotechnology . !, "5- !.

Athena, Palas. !1'. Apa 3ungsi #n$im Amilase (Ptialin) dalam Air ?iur.. Tersedia online di :

http:FF///.&eplaG.*omF !1'F!;Fapa-%ungsi-en$im-amilase-ptialin-dalam.html Hdiakses 3ebruari !17 !. !I.

Cheesebrough, . 144;. &i'trict a%oratory ractice in *ropical +ountrie' . Cambridge: Tropi*al 8ealth Te*hnology.

Coney, +.1454. er entation an# n/i *echnology, 1 't e#. e/ Jork:


14/15

- - 2

6 ' 2 2 78

Pud&aatmaka, A. 8. !! . 0a u' 0i ia .


15/15

)E* MA "A' H

a1 selasa 13.00-16.00 kel 4 uji amilase 4 tujuan

Documents