7/25/2019 945-9491

1/5

945 Aplikasi imunostimulan untuk meningkatkan imunitas ... (Fris Johnny)

ABSTRAK

Teknologi produksi benih ikan kerapu macan, Epinephelus fuscoguttatus, telah berkembang secara intensif

dalam dekade terakhir ini, namun tetap perlu disempurnakan. Intensifikasi dalam akuakultur ini ternyata

memicu terjadinya berbagai macam penyakit infeksi, termasuk infeksi virus. Suatu penelitian untuk mengetahui

efektivitas imunostimulan peptidoglycan (PG) dalam meningkatkan kekebalan non-spesifik ikan kerapu

macan telah dilakukan. Masing-masing 100 ekor benih kerapu macan (panjang total 810 cm) disuntik

secara intramuskular dengan 0,1 mL PG (setara dengan 200 mg PG/ekor ikan), sedangkan kontrol hanyadisuntik dengan Phosphat Buffered Saline(PBS). Ikan selanjutnya dipelihara dalam bak beton volume 2 m3.

Boosterdiberikan 30 hari pasca penyuntikan pertama. Pengukuran aktivitas fagositik (PA), indeks fagositik

(PI), dan aktivitas lisozim (LA) dilakukan 60 hari pasca penyuntikan pertama. Uji tantang dengan virus irido

dilakukan di akhir penelitian. Hasil penelitian menunjukkan bahwa PA, PI, dan LA kelompok ikan yang diberi

perlakuan PG lebih tinggi dibanding kontrol, yaitu dengan nilai masing-masing 19,50%; 1,87; dan 1,87 cm,

sedangkan pada kelompok kontrol adalah 9,67%; 1,47; dan 1,27 cm. Sintasan ikan kelompok perlakuan

setelah uji tantang adalah 72,00% dan pada kontrol hanya 18,67%. Dari penelitian ini dapat disimpulkan

bahwa pemberian imunostimulan PG efektif meningkatkan kekebalan non-spesifik ikan kerapu macan

terhadap penyakit infeksi.

KATA KUNCI: hatcheri, imunitas non-spesifik, imunostimulan, kerapu macan

PENDAHULUAN

Di Balai Besar Riset Perikanan Budidaya Laut, Gondol, Bali ikan kerapu macan, Epinephelus

fuscoguttatus telah berhasil dipijahkan secara terkontrol. Namun masih ditemukan beberapa kendala,

antara lain masih tingginya tingkat kematian pada stadia larva dan benih. Di panti benih,

pemeliharaan ikan secara intensif berpeluang untuk terserang lebih dari satu jenis penyakit pada

waktu bersamaan. Karena ,itu suatu upaya yang dianggap tepat untuk menekan angka kematian

ikan di panti benih adalah dengan cara meningkatkan ketahanan ikan tersebut baik terhadap stres

maupun terhadap panyakit.

Penyebab kematian benih ikan kerapu macan di hatcheri di antaranya karena penyakit infeksi

virus. Penyakit infeksi virus yang sering menimbulkan kematian massal pada benih ikan kerapu

adalah dari jenis Viral Nervous Necrosis (VNN) dan virus irido (Koesharyani et al., 2001). Kasus infeksivirus irido pertama dilaporkan terjadi di Sumatera Utara yang menyerang ikan kerapu lumpur. Di

hatcheri BBRPBL Gondol juga ditemukan virus ini pada benih kerapu lumpur asal Lamongan, Jatim.

Virus irido termasuk dalam famili iridoviridae, ikan yang terinfeksi menunjukkan gejala klinis berenang

lemah atau diam di dasar air, kadang-kadang seperti tidur, sehingga penyakit ini disebut juga penyakit

tidur. Secara histopatologi ditemukan sel-sel yang membesar (giant cell) dan merupakan ciri khas

infeksi virus irido pada jaringan haematopoitik dan saluran pencernaan. Infeksi virus irido pada ikan

kerapu dapat dideteksi secara cepat dengan metode PCR (Polymerase Chain Reaction) (Kurita et al.,

1998; Koesharyani et al., 2001). Virus ini juga terbukti sangat mudah menular dengan menggunakan

air sebagai media penularannya. Oleh karena itu, ikan yang terserang harus segera dipindahkan dan

dipisahkan dari ikan yang sehat. Salah satu upaya untuk meningkatkan ketahanan dan tanggap

kebal ikan adalah dengan penggunaan imunostimulan. Aplikasi imunostimulan sudah banyakditerapkan pada beberapa jenis ikan baik melalui pakan, perendaman maupun melalui suntikan.

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk meningkatkan imunitas non-spesifik benih ikan kerapu

macan sebagai tindakan pencegahan penyakit infeksi di hatcheri.

APLIKASI IMUNOSTIMULAN UNTUK MENINGKATKAN IMUNITAS NON-SPESIFIK IKAN

KERAPU MACAN, Epinephelus fuscoguttatus TERHADAP PENYAKIT INFEKSI DI HATCHERI

Fris Johnny, Des Roza, dan Indah Mastuti

Balai Besar Riset Perikanan Budidaya Laut

Jl. Br. Gondol Kecamatan Gerokgak Kabupaten Buleleng, Kotak Pos 140, Singaraja, Bali 81101

E-mail : frisjravael@yahoo.com

7/25/2019 945-9491

2/5

Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur 2010 946

BAHAN DAN METODE

Masing-masing sebanyak 100 ekor ikan kerapu macan, Epinephelus fuscoguttatusukuran antara 8

10 cm disuntik 0,1 mL/ekor ikan dengan imunostimulan peptidoglikan, atau sebanyak 200 mg/kg BB

secara intra muskular, sedangkan kontrol hanya disuntik dengan PBS. Masing-masing perlakuan

diulang 3 kali. Selanjutnya ikan dipelihara dalam bak beton volume 2 m3berisikan air sebanyak 1,5m3 masing-masing sebanyak 3 bak untuk perlakuan imunostimulan dan 3 bak untuk kontrol. Pada

hari ke-30 dilakukan penyuntikan ulang sebagai booster. Pada hari ke-60 dilakukan samplingdarah

untuk uji aktivitas fagositik dan lisosim. Ikan dipelihara selama 60 hari dan pada akhir percobaan

dilakukan uji tantang. Pengamatan dilakukan terhadap tingkat imunitas dan sintasan.

Koleksi Darah dan Pemisahan Leukosit

Darah ikan uji diambil dari vena anterior setelah terlebih dahulu ikan uji dipingsankan dengan

menggunakan bahan pembius. Setelah ikan uji pingsan, sampel darah disedot dengan spuit plastik

steril volume 1 mL yang di dalamnya telah berisikan antikoagulan, selanjutnya sampel darah disimpan

dalam tabung evendoff. Koleksi darah pada tabung evendoff disedot dengan tabung kapiler plastik,

ditutup dengan lilin lebah dan disentrifusa pada kecepatan 12.000 rpm selama 5 menit. Selanjutnyatabung kapiler dipotong dengan gunting pada batas leukosit dengan eritrosit, koleksi leukosit disimpan

pada tabung evendoff baru, siap digunakan untuk uji fagositosis. Sisa koleksi darah pada tabung

evendoff disentrifusa, dipisahkan plasma darah ke tabung evendoff baru, plasma darah siap digunakan

untuk uji aktivitas lisosim. Untuk pemisahan leukosit dan plasma darah dengan menggunakan

modifikasi dari metode Klontz (1994).

Uji Aktivitas Fagositik (PA) dan Indeks Fagositik (PI)

Untuk kegiatan ini dibutuhkan bahan enzim Zymosan yang berasal dari Saccharomyces cerevisiae.

Ambil Zymosan A sebanyak 50 L yang telah dilarutkan dengan larutan PBS, dimasukkan ke dalamtabung evendoff. Ambil leukosit yang telah disiapkan sebanyak 50 L dan dicampurkan dengan

Zymosan A, diaduk rata dengan mikro pipet, disimpan pada suhu 25C selama 1 jam. Selanjutnyaditeteskan pada kaca slide sebanyak satu tetes, dibuatkan preparat ulas tipis, dilakukan pewarnaan

darah dengan May-Gruenwalds Solution Modified dan Gyemsa Solution 3%. Terakhir dilakukan

penghitungan aktivitas fagositik (PA) dan indeks fagositik (PI).

Uji Aktivitas Lisosim (LA)

Sebelumnya disiapkan media agar yang mengandung Micrococcus lysodeikticuspada cawan petri.

Diambil cawan petri, dibuatkan lobang kecil sebanyak tiga lubang pada permukaan agar dengan

menggunakan straw (pipet). Masukkan plasma darah pada kedua lobang sebanyak 10 L, dan padalubang satunya dimasukkan chicken egg white lysozyme sebagai kontrol. Diamkan dulu selama 10

menit pada suhu kamar, kemudian disimpan pada inkubator dengan suhu 25C, dicek setiap hari

zona aktivitas lisosism (LA) dan diukur, pengamatan dilakukan selama 3 hari. Metode yang digunakanuntuk respons imun non-spesifik adalah modifikasi dari metode Siwicki & Anderson (1993).

Pembuatan Inokulum Iridovirus

Inokulum iridovirus disiapkan berpedoman pada metode Arimoto et al. (1993). Limpa kerapu

yang terinfeksi virus irido secara alami dicampur dengan Phosphat Buffered Saline (PBS) dengan

perbandingan 1:9 dan digerus dalam gelas homogenizer. Suspensi tersebut selanjutnya disentrifugasi

dengan kecepatan 3.000 rpm selama 30 menit dan supernatannya difilter dengan membran filter

(0,45 m). Hasil filtrasi tersebut disimpan dalam biofreezer85C sampai digunakan sebagai inokulumuntuk uji tantang.

Uji Tantang

Dilakukan setelah 60 hari perlakuan dengan menggunakan inokulum virus irido dengan

penyuntikan secara intramuskular dengan dosis 1 mL/kg bobot ikan. Uji tantang dilakukan pada

tangki beton volume 2 m3berisikan air laut sebanyak 1,5 m3. Masing-masing bak diisi 50 ekor ikan

uji. Pengamatan dilakukan selama 10 hari terhadap gejala klinis dan sintasan.

7/25/2019 945-9491

3/5

947 Aplikasi imunostimulan untuk meningkatkan imunitas ... (Fris Johnny)

HASIL DAN BAHASAN

Data sintasan benih ikan kerapu macan selama 60 hari penelitian dengan aplikasi imunostimulan

peptidoglikan melalui penyuntikan dengan dosis 200 mg/kg bobot ikan kerapu macan diperoleh

sebesar 84,33% dan lebih tinggi daripada kontrol (61,67%). Selama penelitian terlihat peningkatan

yang nyata pada kelompok ikan yang diberi imunostimulan peptidoglikan dibandingkan kontrol(Tabel 1).

Nilai aktivitas fagositik (PA), indeks fagositik (PI), dan aktivitas lisosim (LA) dengan penggunaan

imunostimulan peptidoglikan pada benih ikan kerapu macan setelah 60 hari pemeliharaan disajikan

secara lengkap pada Tabel 2. Pada hari ke-60 setelah pemeliharaan nilai tertinggi yaitu 19,50% diperolehpada pemberian imunostimulan peptidoglikan, sedangkan pada kontrol sebesar 9,67%, secara statistik

berbeda nyata. Hal ini juga terjadi pada ikan kerapu tikus, Cromileptes altivelis (Roza et al.,2003)

tetapi dosisnya lebih rendah yaitu 100 mg/kg memberikan nilai PA sebesar 17,56%. Sedangkan

penyuntikan imunostimulan bakterin dengan kepadatan 107 cfu/mL dosis 0,1 mL/ekor pada benih

ikan kerapu lumpur, Epinephelus coioides memberikan nilai PA sebesar 17,33% (Johnny et al.,2001).

Aktivitas fagositik (PA) adalah suatu kegiatan sel-sel fagosit untuk melakukan fagositosis dalam

suatu sistem kekebalan non-spesifik, dengan melibatkan sel mononuklier (monosit dan makrofag),

granulosit (neutrofil), dan limfosit. fagosit mempunyai kemampuan intrisik untuk mengikat

mikroorganisme secara langsung. Fagositosis yang efektif pada invasi kuman dini akan dapat mencegah

timbulnya infeksi. Dalam kerjanya, sel fagosit juga berinteraksi dengan komplemen dan sistem

kekebalan spesifik. Monosit ditemukan dalam sirkulasi, tetapi dalam jumlah yang lebih kurangdibanding neutrofil. Sel-sel tersebut bermigrasi ke jaringan dan di sana berdiferensiasi menjadi

makrofag yang seterusnya hidup dalam jaringan. Makrofag dapat hidup lama, mempunyai beberapa

granul dan melepas berbagai bahan, antara lain lisosim, komplemen, interferon, dan sitokin yang

semuanya memberikan kontribusi dalam sistem kekebalan non-spesifik dan spesifik (Tizard, 1988;

Stoskopf, 1993; Secombes, 1996; Baratawidjaja, 2002). Hasil nilai indeks fagositik (PI) dengan

penggunaan imunostimulan peptidoglikan pada benih ikan kerapu macan memberikan nilai sebesar

1,87 dan pada kontrol sebesar 1,47 dan secara statistik berbeda nyata (P

7/25/2019 945-9491

4/5

Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur 2010 948

Lisosim adalah enzim hidrolitik yang ada di dalam lendir, serum, dan sel-sel fagositik dari berbagai

spesies ikan. Kemungkinan zat ini memberikan daya kekebalan yang penting terhadap patogen

mikrobik. Neutrofil dan monosit dari ikan-ikan mengandung lisosim dalam sitoplasmanya dan lisosim

serum mungkin berasal dari leukosit-leukosit tersebut (Ellis, 1993). Upaya peningkatan kekebalan

pada ikan budidaya laut sudah banyak dilaporkan. Matsumaya et al. (1992) melaporkan bahwa

penyuntikan imunostimulan Schizophyllan derivat dari Schizophyllum communedan -glucan derivatdari Sclerotium glucanicumsecara intraperitoneal dengan dosis 210 mg/kg dapat meningkatkan daya

tahan ikan yellowtail, Seriola quinqueradiata terhadap infeksi bakteri Streptococcussp.

Pada Tabel 3, sintasan setelah benih ikan kerapu macan diuji tantang dengan virus irido pada hari

ke-10 setelah pemeliharaan hasil tertinggi (72%) diperoleh pada penggunaan imunostimulan

peptidoglikan dan kontrol sebesar 18,67%. Nilai ini secara statistik berbeda nyata (P0,05)

Perlakuan Ulangan Sintasan (%)

1 72

2 76

3 68

Rataan 72,00b

1 20

2 14

3 22

Rataan 18,67a

Imunostimulan

Kontrol

Tabel 2. Aktivitas fagositik (PA), indeks fagositik (PI), aktivitas lisosim (LA)

ikan kerapu macan, Epinephelus fuscoguttatus selama 60 hari

penelitian dengan menggunakan imunostimulan peptidoglikan

* Angka-angka dalam kolom yang diikuti dengan huruf yang sama menunjukkan tidak beda

nyata (P>0,05)

Perlakuan Ulangan Aktivitas fagositik(PA/%)

Indeks fagositik(PI)

Aktivitas lisosim(LA/cm)

1 18,5 1,8 1,8

2 20,0 2,0 1,8

3 20,0 1,8 2,0

Rataan 19,50b

1,87b

1,87b

1 10,0 1,4 1,3

2 9,0 1,5 1,3

3 10,0 1,5 1,2

Rataan 9,67a

1,47a

1,27a

Imunostimulan

Kontrol

7/25/2019 945-9491

5/5

949 Aplikasi imunostimulan untuk meningkatkan imunitas ... (Fris Johnny)

KESIMPULAN

Imunostimulan peptidoglikan dengan dosis 200 mg/kg bobot badan efektif meningkatkan

kekebalan non-spesifik ikan kerapu macan. Nilai aktivitas fagositik (PA), indeks fagositik (PI) dan

aktivitas lisosim (LA) pada kelompok perlakuan masing-masing adalah 19,50%, 1,87 dan 1,87 cm,

sedangkan pada kelompok kontrol masing-masing adalah 9,67%, 1,47 dan 1,27 cm. Sintasan ikansetelah uji tantang adalah 72,00% pada kelompok perlakuan imunostimulan dan 18,67% pada

kelompok kontrol.

UCAPAN TERIMA KASIH

Penelitian ini dibiayai dari Dana Hibah Penelitian bagi peneliti dan perekayasa kerja sama Depdiknas

dan DKP Tahun 2009. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Slamet Haryanto dan Muhamad

Ansari sebagai teknisi Laboratorium Patologi atas bantuannya selama penelitian ini berlangsung.

DAFTAR ACUAN

Arimoto, M., Mori, K., Nakai, T., Muroga, K., & Furusawa, I. 1993. Pathogenicity of the causative agent

of viral nervous necrosis disease in striped jack, Pseudocaranx dentex(Bloch and Schneider).J. FishDiseases, 16: 461469.

Baratawidjaja, K.G. 2002. Imunologi Dasar Edisi Kelima. Balai Penerbit FK-UI. Jakarta. 457 hal.

Ellis, A.E. 1993. Lysozyme Assays. InStolen et al. (Eds.). Techniques in Fish Immunology-1. Sos Publi-

cations, Fair Haven, NJ 077043303. USA, p. 101103.

Johnny, F., Koesharyani, I., Roza, D., Tridjoko, Giri, I N.A., & Suwirya, K. 2001. Respon ikan kerapu

bebek, Cromileptes altivelis terhadap imunostimulan peptidoglycan melalui pakan pelet. J. Pen.

Perik. Indonesia, VII(4) 5256.

Klontz, G.W. 1994. Fish Hematology. In Stolen et al. (Eds.). Techniques in Fish Immunology-3. Sos

Publications, Fair Haven, NJ 07704-3303. USA, p. 121131.

Koesharyani, I., Roza, D., Mahardika, K., Johnny, F., Zafran & Yuasa, K. 2001. Marine Fish and Crusta-

ceans Diseases in Indonesia In Manual for Fish Diseases Diagnosis II (Eds.) Sugama, K., Hatai, K.,& Nakai, T. Gondol Research Station for Coastal Fisheries, CRIFI and Japan International Coopera-

tion Agency, 49 pp.

Kurita, J., Nakajima, K., Hirono, I., & Aoki, T. 1998. Plymerase chain reaction (PCR) amplification of

DNA of red sea bream iridovirus (RSIV). Fish Pathology, 33: 1723.

Matsuyama, H., Mangindaan, R.E.P., & Yano, T. 1992. Protective effect of schzophyllan and scleroglucan

against Streptococcus sp. infection in yellowtail (Seriola quinqueradiata). Aquaculture, 101: 197

203.

Roza, D., Johnny, F., & Mahardika, K. 2003. Viral diseases of grouper in Indonesia. Makalah pada

Training on Grouper Hatchery Seed Production. Balai Besar Riset Perikanan Budidaya Laut Gondol

NACA Bangkok. Gondol 121 Mei 2003, 12 pp.

Secombes, C.J. 1996. The Nonspecific Immune System; Cellulae Defences. InThe fish immune system:

organism, pathogen and environment. Iwama, G. & Nakanishi, T. (Eds.), Academic Press. USA, p.

6395.

Siwicki, A.K. & Anderson, D.P. 1993. Immunostimulation in Fish; Measures the effects of stimulants

by serological and immunological methods, International Workshop and Training Course in Poland,

15 pp.

Stoskopf, M.K. 1993. Fish Medicine. W.B. Saunders Company. Philadelphia. Pensylvania, 664 pp.

Tizard, I. 1988. An introduction to veterinary immunology. Penterjemah P. Masduki dan S. Hardjosworo.

Pengantar imunologi veteriner. Universitas Airlangga. Surabaya, 497 hlm.