studi pendahuluan isolasi dan transfer...
TRANSCRIPT
STUDI PENDAHULUANISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum
KE DALAM SEL Escherichia coli
T 589.23 SUS
ABSTRAK
Telah dilakukan isolasi dan proses transfer DNA P.
chrysogenum ke dalam sel E. coll. Isolasi DNA. dilakukan
dengan penambahan selulase-EDTA dan SDS untuk melisis dan
merusak dinding selnya. Kemudian diekstrak dengan campuran
kloroforrm dan isoamilalkohol (24:1). Setelah penambahan
etanol 70%, didapatkan DNA berupa kumparan benang-benang
halus. Untuk menguji hasil isolasi, dilakukan elektrofo-
resis dengan gel agarose. DNA yang didapat, dimurnikan
dengandengan penambahan salin sitrat dan isopropanol. Untuk
proses transformasi DNA, digunakan polietilen glikol (PEG)
6000 40% sebagai senyawa penginduksi dan diinkubasi pada
temperatur 37°C dengan waktu yang divariasikan (selama 0 - 2
jam). Hasil transformasi yang diregenerasi pada media NBA,
menunjukkan perbedaan morfologi koloni dari bentuk E. cols
asal. Berdasarkan hasil pengujian fisiologis secara
biokimia pada transforman, yang meliputi uji karbohidrat (
giukosa, laktosa, manitol, maltosa dan sukrosa), uji indol
dan uji Voges-Proskauer, labih menunjukkan sifat perpaduan
antara E. coil dan P. chrysogenum. Pengujian pertumbuhan
dalam media padat MacConkey (MC), memperlihatkan hasil
pertumbuhan yang berbeda antara transforman dan E. coli.
Dari pengujian antibiotik, diketahui
vi
transforman dapat menghasilkan antibiotik. Hasil peneli-
tian ini menunjukkan bahwa transformasi DNA dapat terjadi
pada sistem antargenera P. chrysogenum dengan E. coli.
ABSTRACT
A study has been conducted on the isolation and the
transfer process of the DNA P. chrysogenum into E. coil
cells. The isolation was done by using cellulase-EDTA and
SDS to lyse and destroy the system of the cell walls. It
was then extracted with the mixture of chloroform and
isoamyl alcohol (24:1). After adding 70% ethanol, a smooth
thread coils of DNA was found. To test the result of
isolation, electrophoresis was conducted with agarose
gel. The DNA which was produced was purified by adding
saline citrate and isopropanol. For DNA transformation
process, 40% polyethylene glicol (PEG) 6000 was used as
inducer. It was further incubated at temperature of 37°C,
with the various time (0 - 2 hours). Transformation result
which has been regenerated on the media of NBA showed that
the colony morphology was different from that the original
E.. coli cells. Based on the physio-biochemical test which
consisted of carbohydrate test (glucose, lactose, manitol,
maltose and sucrose), indole and Voges-Proskauer tests on
the transformant, the result showed that the recombination
process proceeded between E. coli cell and R. chrysogenum
DNA. The test of its growth on the MacConkey (MC) solid
media, showed the differences between the new recombinant
cell (transformant) and E. coli. Antimicrobial test showed
viii
that transformant could produce antibiotics. These results
of the research have shown that DNA transformation proceed-
ed on the system between different genera, P. chrysogenum
and E. coll.
ix