studi pendahuluan isolasi dan transfer...

15
STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia coli

Upload: ngoxuyen

Post on 11-May-2018

218 views

Category:

Documents


2 download

TRANSCRIPT

Page 1: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia

STUDI PENDAHULUANISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum

KE DALAM SEL Escherichia coli

Page 2: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia

T 589.23 SUS

Page 3: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia

ABSTRAK

Telah dilakukan isolasi dan proses transfer DNA P.

chrysogenum ke dalam sel E. coll. Isolasi DNA. dilakukan

dengan penambahan selulase-EDTA dan SDS untuk melisis dan

merusak dinding selnya. Kemudian diekstrak dengan campuran

kloroforrm dan isoamilalkohol (24:1). Setelah penambahan

etanol 70%, didapatkan DNA berupa kumparan benang-benang

halus. Untuk menguji hasil isolasi, dilakukan elektrofo-

resis dengan gel agarose. DNA yang didapat, dimurnikan

dengandengan penambahan salin sitrat dan isopropanol. Untuk

proses transformasi DNA, digunakan polietilen glikol (PEG)

6000 40% sebagai senyawa penginduksi dan diinkubasi pada

temperatur 37°C dengan waktu yang divariasikan (selama 0 - 2

jam). Hasil transformasi yang diregenerasi pada media NBA,

menunjukkan perbedaan morfologi koloni dari bentuk E. cols

asal. Berdasarkan hasil pengujian fisiologis secara

biokimia pada transforman, yang meliputi uji karbohidrat (

giukosa, laktosa, manitol, maltosa dan sukrosa), uji indol

dan uji Voges-Proskauer, labih menunjukkan sifat perpaduan

antara E. coil dan P. chrysogenum. Pengujian pertumbuhan

dalam media padat MacConkey (MC), memperlihatkan hasil

pertumbuhan yang berbeda antara transforman dan E. coli.

Dari pengujian antibiotik, diketahui

vi

Page 4: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia

transforman dapat menghasilkan antibiotik. Hasil peneli-

tian ini menunjukkan bahwa transformasi DNA dapat terjadi

pada sistem antargenera P. chrysogenum dengan E. coli.

Page 5: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia

ABSTRACT

A study has been conducted on the isolation and the

transfer process of the DNA P. chrysogenum into E. coil

cells. The isolation was done by using cellulase-EDTA and

SDS to lyse and destroy the system of the cell walls. It

was then extracted with the mixture of chloroform and

isoamyl alcohol (24:1). After adding 70% ethanol, a smooth

thread coils of DNA was found. To test the result of

isolation, electrophoresis was conducted with agarose

gel. The DNA which was produced was purified by adding

saline citrate and isopropanol. For DNA transformation

process, 40% polyethylene glicol (PEG) 6000 was used as

inducer. It was further incubated at temperature of 37°C,

with the various time (0 - 2 hours). Transformation result

which has been regenerated on the media of NBA showed that

the colony morphology was different from that the original

E.. coli cells. Based on the physio-biochemical test which

consisted of carbohydrate test (glucose, lactose, manitol,

maltose and sucrose), indole and Voges-Proskauer tests on

the transformant, the result showed that the recombination

process proceeded between E. coli cell and R. chrysogenum

DNA. The test of its growth on the MacConkey (MC) solid

media, showed the differences between the new recombinant

cell (transformant) and E. coli. Antimicrobial test showed

viii

Page 6: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia

that transformant could produce antibiotics. These results

of the research have shown that DNA transformation proceed-

ed on the system between different genera, P. chrysogenum

and E. coll.

ix

Page 7: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia
Page 8: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia
Page 9: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia
Page 10: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia
Page 11: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia
Page 12: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia
Page 13: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia
Page 14: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia
Page 15: STUDI PENDAHULUAN ISOLASI DAN TRANSFER …digilib.itb.ac.id/files/disk1/35/jbptitbpp-gdl-s2-1989-apelbudisu...ISOLASI DAN TRANSFER DNA Peniciilium chrysogenum KE DALAM SEL Escherichia