BIOPROSESPerhitungan mikroba

Kelompok 9:1. Agustina Eka

P. 2. Ayu Diah O.

Perhitungan Jumlah Mikroba

Terdapat 2 macam pengukuran dasar:

1. Penentuan Jumlah sel mikroorganisme bersel tunggal

2. Penentuan massa sel mikroorganisme bersel tunggal dan mikroorganisme berfilamen

Metode hitungan mikroorganisme secara mikroskopis:Metode Petroff-Hauser

Metode Hitungan Cawan

Metode MPN (Most Probable Number)

Metode Hitungan Turbidimetri

Metode Hitungan Berat Massa Sel

Metode petroff-Hauser: Bantuan Skala (menggunakan hemasitometer)

1. Ukuran skala 1 mm²

2.Terdapat 25 kotak besar (0.04 mm²) 3. Kedalaman 0.1 mm³

4. Terdapat 9 area

Hemasitometer

Contoh perhitungan: (metode petroff-hauser)

Area:I = 30 selII = 30 selIII = 20 selIV = 40 sel V = 30 selJumlah total sel 150150 x 5= 750 sel / mm²

Luas 1 area adalah 1 mm² dan kedalaman hemasitometer 0.1 mm³ volume 1 area = 1 mm² x 0.1 mm³ =0.1 mm³1 ml = 1 cm³1 cm³ = 1000 mm³

Sehingga:=750 sel/0.1 mm³=7500 sel/mm³=7500 sel/mm³ = 7.500.000 sel/cm³ = 7.500.000 sel/ml

Kelemahan metode Petrof-Hauser:

Sel yang mati dan hidup tidak bisa dibedakan

Perlu ketelitian yang tinggi

Untuk mempertinggi ketelitian , jumlah sel di

dalam suspensi harus cukup tinggi . (karena setiap bidang pandang harus terdapat jumlah sel terhitung)

Tidak dapat digunakan pada bahan yg mengandung debris atau ekstrak makanan

Metode hitungan cawan (menggunakan colony counter): Metode ini merupakan cara yang paling sensitif untuk

menentukan jumlah jasad renik:

1. Hanya sel hidup yg dapat dihitung2. Beberapa jasad renik dapat dihitung3. Dapat digunakan untuk isolasi mikroba

Kelemahan metode ini :

1. Hasil tidak menunjukkan perhitungan sel sebenarnya2. Jika medium dan kondisi inkubasi berbeda maka jumlah berbeda3.Waktu persiapan dan inkubasi lama

Catatan:Jumlah koloni yang dapat dihitung 30-300 koloni

Colony Counter

Contoh perhitungan hitungan (SPC): Biakan 10^

-210^-3

10^-4

SPC Keterangan

A 175

208

15

20

5

2

=(17500+20800)/2

=1,9 x 10^4

Data lain < 30

B 135

163

45

45

5

8

=(13500+16500)/2

1,5 x 10^4

45000/13500 > 240000/28000 < 2, maka dilaporkan pengenceran terendah

C 275

285

35

40

5

7

=(27500+35000)/2 = a=(28500+40000)/2 = b(a+b)/2=3,3 x 10^4

35000/27500 < 240000/28500 < 2, maka dilaporkan hasil rata-rata

D 290

305

25

28

5

0

=(29000+30500)/2=3 x 10^4

25 < 30, dirata rata meskipun 305 > 300

Metode perhitungan MPN ( Most Probable Number) Metode hitungan cawan menggunakan medium padat tetapi metode

MPN menggunakan medium cair dalam tabung reaksi

Berdasarkan jumlah tabung reaksi positif (mengamati kekeruhan/ terbentuknya gas dalam tabung durham.

Pengenceran sampel harus tinggi hingga beberapa tabung terdapat hanya 1 jasad renik,beberapa tabung lain >1 sel, dan tabung lain tidak ada sel

Metode ini dapat digunakan untuk mengitung mikroba tertentu dalam campuran mikroba lain

Rumus :Nilai MPN dari tabel x 1/pengenceran tabung tengah

Metode perhitungan Turbidimeteri: Menggunakan alat nephelometri (alat

pengukur pemantulan cahaya [turbidimeteri] yang dapat mengukur cahaya yang terserap pada suspensi bakteri)

Keuntungan Lebih praktis

Jumlah bakteri dinyatakan dalam OD (Optical Density Load)

Rumus : OD=Log 100-Log GG=pembacaan pada alat

Metode perhitungan berat sel keringMengukur berat kering sel/filamen miselium

Cara kerja:1. Sampel (media cair)2.Disentrifugasi / disaring3.Dicuci4.Dikeringkan5.Beratnya ditimbang

Terimakasih

Risky : metode yang terbaikMarita: kelamahan turbidimetriRoby : kelebihan dan kekurangan setiap

metode