percobaan 35.pdf

8/18/2019 PERCOBAAN 35.pdf

1/13

PERCOBAAN 35

POPULASI MIKROBA DI TANAH : ENUMERASI

I. TUJUAN

1. Mengetahui flora mikroba di dalam tanah

2. Menentukan jumlah bakteri, actinomycetes, dan jamur dalam sampel tanah

II. PRINSIP PERCOBAAN

Tanah mengandung banyak jenis mikroorganisme, termasuk bakteri, protozoa, alga, dan

virus. Bakteri jenis actinomycetes dan jamur paling sering ditemukan di tanah. Untuk menentukan

jumlahnya, metode yang digunakan pada percobaan ini adalah metoda pengenceran. Setelah

sampel tanah di encerkan, diinokulasikan ke tiga jenis medium yaitu agar yeast glycerol yang

mendukung pertumbuhan actinomyetes, agar Saboraud atau PDA untuk isolasi jamur, dan agar

nutrisi untuk bakteri. Pada agar yeast glycerol dan agar saboraud/PDA ditambahkan 10 μg

Aureomycin (klortetrasiklin) untuk menghambat pertumbuhan bakteri.

III. TEORI DASAR

Pada tanah terdapat banyak sekali mikroba, yang sebagian besar mikroba tersebut adalah

bakteri, fungi, dan mikroalga. Kandungan organik dalam tanah berbanding lurus dengan jumlah

mikroba yang terdapat pada tanah tersebut, semakin banyak kandungan organiknya maka semakin

banyak pula jumlah dan jenis mikroorganisme yang terdapat pada tanah tersebut.

Istilah pertumbuhan umumnya dipergunakan bakteri dan mikroorganisme yang lainnya

dan biasanya lebih mengacu pada perubahan di dalam hasil panen sel dan bukanlah dilihat. Dari

pertambahan jumlah individu mikroorganisme tersebut. Suatu proses pertumbuhan menyatakan

pertambahan jumlah atau massa yang melebihi dari yang ada di dalam inokulum asalnya (Volk,

1985).

Tersedia banyak teknik di dalam laboratorium untuk mengukur pertumbuhan bakteri

tersebut. Alat- alat yang ada tersebut berkisar dari peralatan yang masih sederhana seperti sebuah

kaca objek dengan olesan yang diwarnai. Selain itu terdapat pula metode- metode yang lain dalam

pengukuran pertumbuhan bakteri, misalnya dengan metode hitung cawan, pengukuran kekeruhan


2/13

dari suatu suspensi, pengukuran dengan menggunakan membran atau filter molekuler dan

penentuan berat (Volk, 1985).

Suatu bakteri dapat dihitung secara elektronik yaitu dengan cara memasukkan biakan

melalui lubang yang sangat kecil pada alat penghitung partikel counter. Alat penghitung yang

semacam ini dapat dipakai secara rutin memecah sel darah, namun dapat pula disesuaikan untuk

memecah bakteri (Volk, 1985).

Akan tetapi, bukanlah laju pertumbuhan bakteri yang tepat melainkan ada atau tidaknya

pertumbuhan bakteri yang akan menjadi perhatian. Adapun cara yang dilakukan untuk

menentukannya, yaitu hanyalah dengan melihat biakan. Suatu medium cair akan berubah menjadi

keruh sedangkan medium yang padat paada umumnya akan memperlihatkan pertumbuhan, baik

itu pada permukaan dari medium maupun di dalam medium tersebut (Hadioetomo, 1996).

Untuk menentukan jumlah bakteri yang ada di dalam suatu medium maka dapat digunakan

beberapa cara sebagai berikut (Lay, 1994):

• Jumlah bakteri secara keseluruhan (total cell counts). Pada cara ini di hitung semua bakteri yang

ada di dalam suatu medium biakan baik yang hidup maupun yang mati.

• Jumlah bakteri yang hidup (Viable count). Cara ini hanya menggambarkan jumlah sel yang

hidup saja, sehingga lebih tepat jika dibandingkan dengan cara yang pertama tadi.

Dalam perhitungan jumlah mikroorganisme ini seringkali digunakan pengenceran. Di

dalam laboratorium, pengenceran di lakukan dengan botol pengenceran seperti lazimnya pada

SPC, namun dapat pula menggunakan tabung reaksi. Pada pengenceran dengan menggunakan

botol cairan terlebih dahulu dikocok dengan baik sehingga kelompok sel dapat terpisah.

Pengenceran sel dapat membantu untuk memperoleh perhitungan jumlah mikroorganisme yang

benar. Namun pengenceran yang terlalu tinggi akan menghasilkan lempengan agar dengan jumlah

koloni yang umumnya relatif rendah (Hadioetomo, !996).

Pada metode perhitungan cawan dilakukan pengenceran yang bertingkat yang mana

ditujukan untuk membentuk konsentrasi dari suatu suspensi bakteri. Sampel yang telah di encerkan

ini di hitung ke dalam cawan baru kemudian di tuang ke mediumnya (metode tuang). Kemudian

setelah diinkubasi selama 24- 48 jam, amati koloni yang tumbuh dan koloni yanng diamati

hanyalah koloni yang berjumlah 30- 300 koloni (Gobel, 2008).

Adapun prinsip dari metode hitung cawan ini adalah jika sel jasad renik yang masih hidup

ditumbuhkan pada suatu medium agar, maka sel jasad renik tersebut akan berkembang biak dan


3/13

membentuk koloni yang dapat di lihat langsung dan dihitung dengan mata tanpa menggunakan

alat bantu seperti mikroskop dan sebagainya. Metode hittung cawan ini merupakan cara yang

paling sensitif untuk menentukan jumlah jassad renik karena beberapa hal yaitu (Ferdiaz, 1992):

• Hanya sel yang masih hidup yang dihitung

• Beberapa jenis jasad renik dapat dihitung sekaligus

• Dapat digunakan untuk mengisolasi dan identifikasi jasad renik karena koloni yang terbentuk

mungkin berasal dari suatu jassad renik yang mempunyai penampakan yang spesifik.

Untuk metode MPN (Most probable number) digunakan medium cair dalam wadah berupa

tabung reaksi, perhitungan di lakukan bwerdasarkan jumlah tabung yang positif yaitu tabung yang

mengalami perubahan pada mediumnya baik itu berupa perubahan warna atau terbentuknya

gelembung gas pada dasar tabung durham. Pada metode perhitungan MPN ini digunakan bentuk

tiga seri pengenceran, yang pertama 10 ¹, 10 ², dan 10 ³. Kemudian dari hasil perubahan tersebut

dicari nilai MPNnya pada tabel nilai MPN, dan untuk jumlah bakterinya maka digunakan rumus

(Gobel, 2008):

Bakteri = nilai MPN x 1/pengenceran tengah

Selain dengan cara tidak langsung seperti yang telah dijelaskan di atas, perhitungan jumlah

mikroorganisme di dalm suatu medium dapat juga dilakukan secara langsung, dimana dengan

metode ini jumlah mikroorganisme tersebut dapat ditentukan langsung dengan menggunakn alat

bantu berupa mikroskop, Colony counter dan hemasitometer. Adapun keuntungan penggunaan

hemasitometer adalah penggunaannya yang tidak memakan waktu banyak dan juga biaya.

Sedangkan kelemahan dari penggunaan hemasitometer adalah tidak dapat membedakan antara sel

hidup dan sel mati, kesulitan dalam perhitungan bakteri yang berukuran kecil karena tidak dapat

dibantu dengan minyak imersi, hanya dapat dibantu dengan tween 80% (bahan anti gumpal (Gobel,

2008).


4/13

IV. ALAT DAN BAHAN

Alat:

- Pembakar bunsen

- Colony counter

- 3 buah Pipet steril 1 ml

- Pipet mekanik 1 buah

- Batang gelas berbentuk L 1 buah

Bahan

- 4 cawan petri berisi agar yeast

glycerol

- 1 buah 95% alkohol pada beaker

glass 500 mL

- 4 cawan petri agar Saboraud

- 4 cawan petri agar nutrisi

- 2 erlenmeyer berisi 99 ml air steril

- Satu gram sampel tanah dari

kebun yang subur dimasukkan

dalam erlenmeyer berisi 99 ml air

steril

V. HASIL PENGAMATAN

Pengamatan Senin 7 Maret 2016

Keterangan Foto Hasil pengamatan Deskripsi

Bakteri (medium

NA)

Setelah diinkubasi

selama 72 Jam

Gambar 5.1 Pengenceran 10-4 pada Medium NA

Sumber : Kelompok 27

Pengenceran 10-4

Jumlah koloni :

Bakteri : 16

Jamur : 17


5/13



Pengenceran 10-5

Jumlah koloni :

Bakteri : 6

Jamur : 5



Pengenceran 10-6

Jumlah koloni :

Bakteri : 2



Pengenceran 10-7

Jumlah koloni :

Bakteri : 18


6/13

Pengamatan Kamis 10 Maret 2016

Keterangan Foto Hasil pengamatan Deskripsi

Actinomycetes

(Medium Agar

Yeast

Glycerol)

Setelah

diinkubasi

selama 4 hari.

Gambar 5.5 Pengenceran 10-3 pada Medium Agar Yeast

Glycerol


Pengenceran 10-3

Jumlah koloni

Actinomycetes : 85

Jamur : 4


Glycerol


Pengenceran 10-4

Jumlah koloni

Merah : 2

Putih : 17

Oranye : 2

Jamur : 1


7/13


Glycerol


Pengenceran 10-5

Jumlah koloni

Actinomycetes : 13

Jamur : 1


Glycerol


Pengenceran 10-6

Jumlah koloni

Kuning : 10

Jamur : 6


8/13

Jamur

(medium

Saburoud)

Setelah

diinkubasi

selama 4 hari.

Gambar 5.9 Pengenceran 10-2 pada Medium Saburoud


Pengenceran 10-2.

Jumlah koloni

Jamur : 39



Pengenceran 10-3.

Jumlah koloni

Jamur : 13


9/13



Pengenceran 10-4.

Jumlah koloni

Jamur : 48



Pengenceran 10-5

Tidak ada Koloni

Tabel Hasil Pengamatan (data yang tidak valid dihitung)

MikroorganismeJumlah Koloni

Sel (CFU)

Rata-

rata

Jumlah

Kolonisel

(CFU)

Faktor

Pengenceran

(1/mL)

Konsentrasi

sel (CFU/

mL)

Rata-rata

konsentrasi

sel (CFU/mL)

Bakteri (Medium NA)

16

10.5

1 x 104 160000

45690000 6 1 x 105 600000

2 1 x 106 2000000

18 1 x 107 1.8 x 10-8


10/13

Actinomycetes(Medium Agar

Yeast Glycerol)

85

32.25

1 x 103 85000

289875021 1 x 104 210000

13 1 x 105 1300000

101 x 106 10000000

Jamur (Medium

Saburoud)

39

25

1 x 102 3900

12422513 1 x 103 13000

48 1 x 104 480000

0 1 x 105 0

Tabel Hasil Pengamatan (data yang tidak valid tidak dihitung)

MikroorganismeJumlah Koloni

Sel (CFU)

Rata-

rata

Jumlah

Kolonisel

(CFU)

Faktor

Pengenceran

(1/mL)

Konsentrasi

sel (CFU/

mL)

Rata-rata

konsentrasi

sel (CFU/mL)

Bakteri (Medium NA)

16 (tidak valid)

10.5

1 x 104 (tidak valid)

(tidak valid)6 (tidak valid) 1 x 105 (tidak valid)

2 (tidak valid) 1 x 106 (tidak valid)


Actinomycetes

(Medium Agar

Yeast Glycerol)

85

32.25

1 x 103 85000



10 (tidak valid) 1 x 106

(tidak valid)

Jamur (Medium

Saburoud)

39

25

1 x 102 3900


48 1 x 104 480000


VI. ANALISIS

Pada percobaan ini dicari tiga jenis mikroorganisme yang terdapat dalam tanah, yaitu

bakteri, actinomycetes, dan jamur. Untuk mengetahui ketiga jenis mikroorganisme tersebut,

dilakukan metoden pengenceran secara bertahap yang kemudian ditanamkan pada tiga jenis

medium, medium NA untuk mengetahui bakteri, medium agar yeast glycerol untuk mengetahui

actinomycetes, dan medium agar Saburoud untuk mengetahui jamur. Pengenceran yang dilakukan

menggunakan aquades steril dengan tujuan supaya tidak terjadi kontaminasi sampel tanah dengan


11/13

mikroorganisme yang terdapat pada zat pengencer, serta untuk menjaga pH agar tetap netral, pH

yang netral akan meminimalisir tekanan osmotik yang terjadi antara cairan sel mikroorganisme

dangan larutan tempat mikroorganisme tersebut terlarut, apabila perbedan tekanan osmotik yang

terjadi ialah besar, maka mikroorganisme yang terlarut akan mengalami lisis. Jumlah

mikroorganisme didapatkan dengan mengalikan jumlah koloni yang terdapat pada masing masing

medium dalam cawan petri yang telah diinkubasi dengan koefisien keencerannya. Perhitungan

koloni yang dilakukan ialah yang terdapat koloni antara 30 sampai 300 koloni,angka ini digunakan

karena apabila terdapat mikroorganisme lebih dari 300 ada kemungkinan pertumbuhan padat pada

cawan petri telah menghambat beberapa mikroba untuk tumbuh. Sedangkan jika kurang dari 30

ini dianggap meragukan karena mungkin mikroba yang ada mengalami kekurangan nutrisi saat

pertumbuhan.

Inokulasi dilakukan dalam keadaan steril dengan dilakukannya pemijaran terhadap jarum

oose dan mulut tabung, penggunaan pipet mekanik yang selalu mengganti ujungnya setiap kali

digunakan,hal ini bertujuan untuk mencegah kontaminasi sehingga perhitungan jumlah

mikroorganisme yang ada akurat.

Pada saat inkubasi, cawan petri diletakkan dalam keadaan terbalik dengan tujuan untuk

menghindari kondensasi yang dapat terbentuk pada cawan, apabila diletakkannya tidak terbalik,

pada tutup cawan akan terbentuk uap air yang nantinya akan jatuh ke medium yang terdapat pada

cawan petri tersebut sehingga dapat mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme yang terdapat

pada medium. Inkubasi yang dilakukan pada percobaan ini terdapat dua durasi, yaitu 2-3 hari untuk

inkubasi bakteri, dan 4-7 hari untuk inkubasi jamur dan actinomycetes, hal ini disebabkan oleh

waktu pertumbuhan mikroorganisme yang berbeda-beda sehingga diberlakukan waktu inkubasi

yang berbeda pula untuk beberapa jenis mikroorganisme.

Pada medium NA setelah diinkubasi, didapatkan data koloni per pengenceran yang masing

masing jumlahnya kurang dari 30 yang berarti hasil ini tidak valid, hal ini dapat disebabkan oleh

kesalahan praktikan saat menginokulasikan sampel tanah ataupun saat pengenceran dilakukan,

sehingga pada setiap tabung pengenceran didapatkan data yang kurang dari 30. Namun hal tersebut

juga bias disebabkan oleh kurang idealnya sampel tanah yang digunakan, bisa dikatakan bahwa

jumlah bakteri yang terdapat pada tanah tersebut memang nyaris tidak ada, sehingga pengenceran

yang dilakukan pun menghasilkan jumlah koloni yang kurang dari 30.


12/13

Pada medium Saburoud setelah diinkubasi, didapatkan data koloni per pengenceran

dimana pada data pengenceran 10-3 dan 10-5 tidak valid. Hal ini dapat disebabkan oleh kesalahan

praktikan saat pengenceran ataupun saat sampling. Kesalahan lain yang dapat terjadi ialah jamur

tidak mendapatkan nutrisi yang cukup untuk tumbuh pada media Saburoud dan menyatunya koloni

pada media yang ada, sehingga perhitungan jumlah koloni menjadi kecil sedangkan luas area yang

ditumbuhi jamur menjadi semakin besar. Pada pengenceran 10-2 dan 10-4 data masih valid akan

tetapi jumlah jamur pada pengenceran 10-4 lebih banyak jika dibandingkan dengan jumlah jamur

pada pengenceran 10-2, hal ini tidak sesuai dengan prinsip pengenceran, dimana pengenceran

dilakukan dengan tujuan untuk mengecilkan jumlah mikroorganisme yang ada pada sampel

sebelumnya.

Pada medium Agar Yeast Glycerol, didapatkan data yang valid pada pengenceran 10-3 saja,

sedangkan pada data yang lainnya didapatkan jumlah bakteri actinomycetes dengan jumlah

tertentu kurang dari 30. Terdapat perbedaan warna pada koloni yang ada pada media yang

diencerkan 10-4, yaitu warna merah, putih, dan oranye. Perbedaan warna pada koloni tersebut

menggambarkan adanya beberapa jenis bakteri actinomycetes dalam sampel.

Berdasarkan data yang didapat dari proses pengenceran ini banyaknya data yang

menunjukkan jumlah koloni yang kurang dari 30, sehingga dapat diperkirakan bahwa sampel tanah

yang digunakan memiliki kandungan organik yang kecil, sehingga mikroorganisme yang terdapat

pada sampel tanah sedikit. Menurut literatur, kandungan organik yang terkandung dalam tanah

berbanding lurus dengan jumlah mikroorganisme yang terdapat pada tanah tersebut. Apabila

perhitungan tetap dilakukan meskipun data tidak valid, didapatkan bahwa jumlah bakteri lebih

banyak jika dibandingkan dengan actinomycetes dan jamur.

VII. KESIMPULAN

1. Berdasarkan percobaan ini didapatkan bahwa di dalam sampel tanah terbukti terdapat bakteri,

actinomycetes, dan jamur.

2.

Jika data yang tidak valid tetap dimasukkan dalam perhitungan mikroorganisme, maka

jumlah dari masing masing mikroorganisme adalah :

- Bakteri : 45690000 CFU/ mL

- Actinomycetes : 2898750 CFU/ mL

- Jamur : 124225 CFU/ mL


13/13

Apabila data yang valid saja yang dimasukkan dalam perhitungan, maka jumlah dari masing

masing mikroorganisme adalah

- Bakteri : Tidak ada karena data tidak valid

- Actinomycetes : 85000 CFU/ mL

- Jamur : 241950 CFU/ mL

VIII. DAFTAR PUSTAKA

Gobel, Risco, B., dkk., 2008, Mikrobiologi Umum Dalam Praktek , Universitas Hasanuddin,

Makassar.

Hadioetomo, R., 1990, Mikrobiologi Dasar-Dasar Dalam Praktek , Gramedia, Jakarta.

Lay, B., 1994, Analisis Mikroba di Laboratorium, Raja Grafindo Persada, Jakarta.

Volk, dan Wheeler., 1993, Dasar- Dasar Mikrobiologi, Erlangga, Jakarta.

percobaan 35.pdf

Documents