pengaruh lendir bekicot (achatina fulicarepository.ub.ac.id/3147/1/riyani, nadya jeihan.pdf ·...

i

PENGARUH LENDIR BEKICOT (Achatina fulica)

TERHADAP JUMLAH LIMFOSIT PADA PROSES PENYEMBUHAN

LUKA SOKET GIGI PASCA PENCABUTAN GIGI TIKUS WISTAR

(Rattus norvegicus)

SKRIPSI

Untuk Memenuhi Persyaratan

Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran Gigi

Oleh:

Nadya Jeihan Riyani

NIM. 135070400111024

PROGRAM STUDI SARJANA KEDOKTERAN GIGI

FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI

UNIVERSITAS BRAWIJAYA

MALANG

2017

ii

HALAMAN PENGESAHAN

SKRIPSI

PENGARUH LENDIR BEKICOT (Achatina fulica) TERHADAP JUMLAH

LIMFOSIT PADA PROSES PENYEMBUHAN LUKA SOKET GIGI PASCA

PENCABUTAN GIGI TIKUS WISTAR (Rattus norvegicus)

Untuk Memenuhi Persyaratan

Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran Gigi

Oleh:

Nadya Jeihan Riyani

NIM : 135070401111024

Telah diuji pada:

Hari : Senin

Tanggal : 20 Februari 2017

dan dinyatakan lulus oleh:

Penguji I

drg. Irwan Baga, Sp.BM NIP. 195812131987011001

Penguji II/Pembimbing I Penguji III/Pembimbing II

drg. Robinson Pasaribu, Sp. BM drg. Fredy Mardiyantoro, Sp. BM NIP. 197304052000121007 NIK. 2012088303181001

Mengetahui, Dekan Fakultas Kedokteran Gigi

drg. R. Setyohadi, MS NIP. 195802121985031003

iii

k “Teruntuk mereka—tempat kemana aku akan selalu pulang,

Teruntuk nama-nama yang tak pernah luput di dalam do’a,

Teruntuk yang selalu ada...”

k

iv

KATA PENGANTAR

Segala puji hanya bagi Allah SWT yang telah memberi petunjuk dan

hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul

“Pengaruh Lendir Bekicot (Achatina fulica) Terhadap Jumlah Limfosit Pada Proses

Penyembuhan Luka Soket Gigi Pasca Pencabutan Gigi Tikus Wistar (Rattus

norvegicus)” dan selesai tepat pada waktunya.

Dengan selesainya skripsi ini, penulis mengucapkan terimakasih yang tak

terhingga kepada:

1. drg. R. Setyohadi, MS. selaku Dekan Fakultas Kedokteran Gigi Universitas

Brawijaya

2. drg. Kartika Andari Wulan, Sp. Pros selaku Ketua Program Studi Sarjana

Kedokteran Gigi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Brawijaya

3. drg. Irwan Baga, Sp. BM selaku penguji I yang telah meluangkan waktunya

dan memberi saran-saran yang membangun

4. drg. Robinson Pasaribu, Sp. BM selaku dosen pembimbing pertama yang

dengan sabar membimbing dan senantiasa memberi semangat serta motivasi

sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini

5. drg. Fredy Mardiyantoro, Sp. BM selaku dosen pembimbing kedua yang

dengan sabar membimbing dan senantiasa memberi semangat serta motivasi

sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini

6. drg. Ester Handayani Lodra, Sp. BM dan drg. Citra Insany Irgananda, M.

MedEd selaku pembimbing akademik yang tak lelah untuk memotivasi

7. Segenap Tim Pengelola Skripsi Program Studi Sarjana Kedokteran Gigi

v

8. Ayahanda Ir. Yana Juhana, M. Sc Forest Trop, ibunda Ir. Rina Martini, M. Si,

adik Rayhan Ananda K. M. serta nenek Hj. Yati Rochayati dan keluarga

tercinta yang telah memberikan banyak do’a, waktu, dukungan, bimbingan,

semangat serta kasih sayang dalam penyusunan skripsi ini sehingga penulis

sangat termotivasi dalam menyelesaikan skripsi ini

9. Teman-teman terbaik dalam segala masa dan kondisi Anindita, Alvia, Rinda,

Tamara, Nadia, Della, Ridlo Ruditya, Bima, Kak Sabrina yang tak pernah

putus dalam memberikan do’a, dukungan, hiburan, dan motivasi

10. Teman-teman seperjuangan masa pre-klinik hingga menjadi dokter gigi kelak

Rulyta, Pretty, Desna, Nafa, Bonita, Fina, Karina, Louise, Amira, Chadella

serta “College Muse” (Monica, Helen, Ervin, Elian, Melda, Debby, Kak Novi

FKG 2013, Meriam Baja Cabang Malang, Manusia Bekicot, Atom 13, Geng

Arisan) yang selalu menyemangati dan membantu penulis dalam

menyelesaikan skripsi

11. Semua pihak yang telah membantu dalam menyelesaikan skripsi ini yang

tidak dapat disebutkan satu persatu

Penulis menyadari bahwa penulisan ini masih jauh dari sempurna, oleh

karena itu penulis membuka diri untuk segala saran dan kritik yang membangun.

Akhirnya semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi yang membutuhkan.

Malang, 20 Februari 2017

Penulis

viii

DAFTAR ISI

Halaman Judul ................................................................................................ i

Halaman Pengesahan ..................................................................................... ii

Halaman Peruntukan ....................................................................................... ii

Kata Pengantar ............................................................................................... iv

Abstrak ............................................................................................................ vi

Abstract ........................................................................................................... vii

Daftar Isi .......................................................................................................... viii

Daftar Gambar ................................................................................................ xii

Daftar Tabel .................................................................................................... xiv

Daftar Istilah, Simbol, Singkatan ..................................................................... xv

Daftar Lampiran .............................................................................................. xvii

BAB 1. PENDAHULUAN ................................................................................ 1

1.1 Latar Belakang ....................................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah ................................................................................. 2

1.3 Tujuan .................................................................................................... 3

1.3.1 Tujuan Umum ...................................................................... 3

1.3.2 Tujuan Khusus ..................................................................... 3

1.4 Manfaat Penelitian ................................................................................. 3

1.4.1 Manfaat Klinis ...................................................................... 3

1.4.2 Manfaat Akademis ............................................................... 4

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA ....................................................................... 5

2.1 Bekicot (Achatina fulica) ......................................................................... 5

2.1.1 Taksonomi ........................................................................... 5

ix

2.1.2 Morfologi .............................................................................. 6

2.1.3 Asal-usul dan Daerah Distribusi ........................................... 6

2.1.4 Habitat ................................................................................. 7

2.1.5 Lendir Bekicot ...................................................................... 7

2.2 Pencabutan Gigi ..................................................................................... 9

2.3.1 Definisi ................................................................................. 9

2.3.1 Pencabutan Gigi dan Perlukaan .......................................... 9

2.3 Penyembuhan Luka ............................................................................... 10

2.4.1 Definisi ................................................................................. 10

2.4.2 Fase Inflamasi ..................................................................... 10

2.4.3 Fase Proliferasi .................................................................... 13

2.5.4 Fase Maturasi atau Remodeling .......................................... 15

2.4 Macam Penyembuhan Luka ................................................................... 17

2.5 Penyembuhan Luka Pasca Pencabutan Gigi ......................................... 18

2.6. Limfosit ............................................................................................... 19

2.7. Tikus Wistar ........................................................................................... 22

BAB 3. KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN .................... 24

3.1 Kerangka Konsep ................................................................................... 24

3.2 Penjelasan Konsep Penelitian ................................................................ 25

3.3 Hipotesis Penelitian ................................................................................ 26

BAB 4. METODE PENELITIAN ...................................................................... 27

4.1 Desain Penelitian ................................................................................... 27

4.2 Populasi dan Sampel Penelitian ............................................................. 27

4.2.1 Jenis dan Sampel Penelitian ................................................ 27

4.2.2 Kriteria Sampel Penelitian .................................................... 27

x

4.2.3 Jumlah Sampel Penelitian ................................................... 28

4.3 Variabel Penelitian ................................................................................. 29

4.3.1 Variabel Bebas/Independen ................................................. 29

4.3.2 Variabel Terikat/Dependen .................................................. 29

4.3.3 Variabel Kendali/Kontrol ...................................................... 29

4.3.4 Variabel Tidak Terkendali .................................................... 30

4.4 Tempat dan Waktu Penelitian ................................................................ 30

4.5 Alat dan Bahan Penelitian ...................................................................... 30

4.5.1 Alat dan Bahan untuk Pemeliharaan Hewan Coba .............. 30

4.5.2 Alat Penimbang Berat Badan Tikus ..................................... 30

4.5.3 Alat dan Bahan Pencabutan Gigi Tikus................................ 30

4.5.4 Alat dan Bahan Perlakuan ................................................... 31

4.5.5 Alat dan Bahan Pengambilan dan Pembuatan Preparat ...... 31

4.6 Definisi Operasional ............................................................................... 32

4.6.1 Lendir Bekicot ...................................................................... 32

4.6.2 Limfosit ................................................................................ 33

4.6.3 Pencabutan Gigi .................................................................. 33

4.6.4 Soket Gigi ............................................................................ 33

4.6.5 Jaringan Granulasi Pasca Pencabutan Gigi ......................... 34

4.7 Prosedur Penelitian ................................................................................ 34

4.7.1 Ethical Clearance ................................................................. 34

4.7.2 Alur Penelitian ...................................................................... 34

4.7.3 Pengambilan Lendir Bekicot ................................................ 34

4.7.4 Persiapan Hewan Coba ....................................................... 34

4.7.5 Pencabutan Gigi Tikus ......................................................... 35

xi

4.7.6 Perawatan Tikus Pasca Pencabutan Gigi ............................ 35

4.7.7 Tahap Pengelompokkan dan Perlakuan Hewan Coba ......... 36

4.7.8 Pengambilan Sampel ........................................................... 37

4.7.9 Teknik Pemrosesan Jaringan............................................... 37

4.7.10 Penanaman Dalam Paraffin (Embedding) dan Penyayatan

Jaringan ............................................................................... 38

4.7.11 Pengecatan Preparat Jaringan ........................................... 39

4.7.12 Perhitungan Jumlah Limfosit ................................................ 40

4.8 Analisis Data .......................................................................................... 41

4.9 Alur Penelitian ........................................................................................ 43

BAB 5. HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA...................................... 44

5.1 Hasil Penelitian ...................................................................................... 44

5.2 Analisis Data .......................................................................................... 48

5.2.1 Uji Asumsi Data ................................................................... 49

5.2.2 Uji One Way ANOVA ........................................................... 51

5.2.3 Uji Post Hoc LSD ................................................................. 51

5.2.3 Uji Korelasi ........................................................................... 55

BAB 6. PEMBAHASAN .................................................................................. 60

BAB 7. PENUTUP .......................................................................................... 63

7.1 Kesimpulan ............................................................................................ 63

7.2 Saran ..................................................................................................... 64

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 65

Lampiran ......................................................................................................... 69

xii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Bekicot (Achatina fulica) .............................................................. 6

Gambar 2.2 Fase Inflamasi ............................................................................. 13

Gambar 2.3 Fase Proliferasi ............................................................................ 15

Gambar 2.4 Fase Remodeling ........................................................................ 16

Gambar 2.5 Sel Limfosit .................................................................................. 22

Gambar 2.6 Tikus Wistar (Rattus norvegicus) ................................................. 23

Gambar 3.1 Kerangka Konsep Penelitian ....................................................... 24

Gambar 4.1 Skema Alur Penelitian ................................................................. 43

Gambar 5.1 Gambar Limfosit (lingkaran hijau) Pada Kelompok Kontrol

Determinasi Hari Ke-3 (K1) dengan perbesaran 20x .................. 45





Gambar 5.4 Gambar Limfosit (lingkaran hijau) Pada Kelompok Perlakuan

Determinasi Hari Ke-3 (P1) dengan perbesaran 20x .................. 46





Gambar 5.7 Perbandingan jumlah limfosit antara interaksi kelompok kontrol dan

perlakuan dengan lama hari (H3, H5 dan H7) ............................. 54

xiii

Gambar 5.8 Grafik Linieritas antara jumlah limfosit hari ke-3 dengan pemberian

lendir bekicot pada proses penyembuhan luka pasca pencabutan

gigi .............................................................................................. 56



gigi .............................................................................................. 58



gigi .............................................................................................. 59

xiv

DAFTAR TABEL

Tabel 4.1 Tabel Proses Fiksasi, Dehidrasi, Clearing, dan Impregnasi ............. 38

Tabel 5.1 Tabel Rata-rata Hasil Penghitungan Jumlah Limfosit ...................... 48

Tabel 5.2 Tabel Uji Normalitas ........................................................................ 49

Tabel 5.3 Tabel Uji Kesamaan Ragam dengan Uji Levene ............................. 50

Tabel 5.4 Tabel Hasil Uji ANOVA .................................................................... 51

Tabel 5.5 Tabel Uji Pembandingan Berganda LSD ......................................... 52

Tabel 5.6 Tabel Urutan rata-rata jumlah limfosit antara interaksi kelompok

kontrol dan perlakuan dengan lama hari (H3, H5 dan H7 ................ 54

Tabel 5.7 Tabel Uji Korelasi ............................................................................ 55

xv

DAFTAR ISTILAH, SIMBOL, SINGKATAN

bFGF : basic Fibroblast Growth Factor

CD4+ : Helper T cells

CD8+ : Cytotoxic T cells

ECM : Extraellular Matrix

EDTA : Ethylenediaminetetraacetic acid

EGF : Epithelial Growth Factor

FGF : Fibroblast Growth Factor

GAG : Glycosaminoglycan

HE : Haemotoxylin-Eosin

IFN-Ɣ : interferon-Ɣ

IL-1 : interleukin-1

IL-1α : interleukin-1α

IL-1β : interleukin-1β






KGF : Keratinocyte Growth Factor

LSD : Least Significance Difference

MCP : Monocyte Chemotactic Protein

OlyVIA : Olympus Viewer for Imaging Application

PDGF : Platelet-Derived Growth Factor

xvi

RANTES : Regulated on Activation, Normal T Expressed and

Secreted (CCL5)

TGF-α : Transforming Growth Factor-α

TGF-β : Transforming Growth Factor-β

Th1 : T-helper (type I)

Th2 : T-helper (type II)

TNF-α : Tumor Necrosis Factor- α

VEGF : Vascular Endothelial Growth Factor

xvii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Pernyataan Keaslian Tulisan ........................................................ 68

Lampiran 2 Hasil Uji Statistik ........................................................................... 69

Lampiran 3 Dokumentasi Penelitian ................................................................ 77

Lampiran 4 Ethical Clearance ......................................................................... 79

Lampiran 5 Surat Determinasi Bekicot (Achatina fulica) .................................. 80

vi

ABSTRAK

Riyani, Nadya Jeihan. 2017. Pengaruh Lendir Bekicot (Achatina fulica) Terhadap Jumlah Limfosit Pada Proses Penyembuhan Luka Soket Gigi Pasca Pencabutan Gigi Tikus Wistar (Rattus norvegicus). Tugas Akhir, Program Studi Sarjana Kedokteran Gigi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Brawijaya. Pembimbing: (1) drg. Robinson Pasaribu, Sp. BM (2) drg. Fredy Mardiyantoro, Sp. BM

Pencabutan gigi merupakan suatu tindakan pengambilan gigi dari dalam soket pada tulang alveolar yang dapat menyebabkan kesatuan dari jaringan lunak dan jaringan keras gigi dalam rongga mulut mengalami kerusakan. Peradangan merupakan respon dasar terhadap adanya kerusakan jaringan atau luka pasca pencabutan gigi yang kemudian dilanjutkan dengan proses penyembuhan. Lendir bekicot dari spesies Achatina fulica diketahui mengandung protein achasin dan glycosaminoglycan yang berupa heparan sulfate sebagai alternatif obat yang mempercepat proses penyembuhan luka. Heparan sulfat diketahui memiliki fungsi sebagai pengikat dan penyimpanan bagi faktor pertumbuhan juga berperan dalam merangsang rekrutmen limfosit dan sel radang ke daerah luka sesaat setelah terjadi perlukaan, sehingga fase inflamasi berlangsung lebih singkat. Jenis penelitian yang digunakan adalah eksperimental laboratoris dengan desain penelitian Randomized Post-Test Only Control Group. Sampel dipilih menggunakan teknik Simple Random Sampling kemudian dibagi ke dalam dua kelompok, yaitu kelompok kontrol (K) dan perlakuan (P). Variabel yang diteliti pada penelitian ini adalah jumlah limfosit pada hari ketiga, kelima, dan ketujuh proses penyembuhan luka soket gigi tikus wistar yang diukur dari sediaan HPA dengan pengecata Hematoxylin-Eosin. Hasil penelitian menunjukan adanya perbedaan jumlah limfosit pada hari ketiga, kelima, dan ketujuh baik pada kelompok kontrol (K) maupun perlakuan (P). Kesimpulan pada penelitian ini adalah lendir bekicot (Achatina fulica) berpengaruh pada jumlah limfosit pada proses penyembuhan luka soket gigi tikus wistar (Rattus norvegicus).

Kata Kunci: Pencabutan Gigi, Lendir Bekicot (Achatina fulica), Heparan Sulfat, Penyembuhan Luka, Limfosit

vii

ABSTRACT Riyani, Nadya Jeihan. 2017. The Effect of Snail Slime (Achatina fulica) on

Lymphocytes Number on Tooth Socket Healing Process Post White Rats (Rattus norvegicus) Tooth Extraction. Final Assignment, Faculty of Dentistry Brawijaya University. Supervisor: (1) drg. Robinson Pasaribu, Sp. BM (2) drg. Fredy Mardiyantoro, Sp. BM

Tooth extraction is a process of taking tooth from its socket in the alveolar bone which can lead the injury of soft tissue and hard tissue in oral cavity. Inflammation is a basic response to tissue injury or wound after tooth extraction which followed by the healing process. Snail slime from Achatina fulica species contain of achasin and glycosaminoglycan which known as an alternative medicine that can accelerates the wound healing process. Heparan sulfate that can be found in Achatina fullica’s slime is known to have function as a binder and storage for growth factors, it’s also play role in stimulating the recruitment of lymphocytes and other inflammatory cells into the wound area shortly after the injury that can make the inflammatory phase lasts shorter. The type of this study was experimental laboratory research and using Post Test Only Group Design. Samples were selected using simple random sampling technique then divided into two groups: control (K) and treatment (P). Variables examined in this study is the number of lymphocytes in the third, fifth, and seventh day in tooth socket healing process on wistar rats were measured from HPA preparations with Hematoxylin-Eosin staining. The results showed a significant differences in the number of lymphocytes on the third, fifth, and seventh day in tooth socket healing process both in the control group (K) and treatment (P). The conclusion of this research is snail slime (Achatina fulica) has effect on the number of lymphocytes in the tooth socket healing process post white rats (Rattus norvegicus) tooth extraction. Keywords: Tooth Extraction, Snail Slime (Achatina fulica), Heparan Sulfate, Wound Healing, Lymphocytes

1

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Masalah

Ekstraksi atau pencabutan gigi merupakan tindakan bedah yang sering

dilakukan dalam kedokteran gigi. Pencabutan gigi merupakan suatu tindakan

pengambilan gigi dari dalam soket pada tulang alveolar dimana tindakan dilakukan

pada gigi yang sudah tidak dapat dipertahankan lagi. Pencabutan gigi yang ideal

ialah pencabutan tanpa rasa sakit, baik pada pencabutan satu gigi utuh maupun

akar gigi, dengan trauma minimal terhadap jaringan pendukung gigi, sehingga

bekas pencabutan dapat sembuh sempurna dan tidak terdapat masalah prostetik

pascaoperasi di masa mendatang (Howe, 1999).

Tindakan pencabutan gigi atau ekstraksi gigi dapat menyebabkan kesatuan

dari jaringan lunak dan jaringan keras gigi dalam rongga mulut mengalami

kerusakan, dimana soket gigi akan terbuka dan mengalami perdarahan. (Howe,

1999). Peradangan merupakan respon dasar terhadap adanya kerusakan jaringan

atau luka pasca pencabutan gigi yang kemudian dilanjutkan dengan proses

penyembuhan (Lawler et al., 2002).

Proses penyembuhan luka merupakan sebuah proses yang dinamis dan

melibatkan interaksi kompleks dari molekul matriks ekstraseluler, mediator-

mediator yang dapat larut, serta infiltrasi dari subtipe leukosit. Tujuan dari

penyembuhan luka sendiri ialah untuk mendapatkan integritas jaringan dan

hemostasis. Proses penyembuhan luka melibatkan tiga fase, yaitu fase inflamasi,

proliferasi, dan remodeling. Pada saat fase inflamasi, terjadi agregasi platelet yang

diikuti oleh infiltrasi sel-sel leukosit menuju lokasi luka (Sabine et al., 2007).

2

Limfosit T yang juga merupakan subtipe dari sel-sel leukosit muncul secara

signifikan pada hari kelima sampai dengan hari ketujuh proses penyembuhan luka.

Akumulasi sel limfosit ditandai dengan adanya MCP1-4 yang disekresi oleh IFN-γ,

dimana makrofag merupakan sumber utama dari sitokin ini. Dalam hal ini, limfosit

T terutama sel T helper memiliki peran dalam menghasilkan sitokin yang akan

mempengaruhi fibroblas. Sitokin yang dihasilkan limfosit ialah seperti IL-2 dan

fibroblast activating factor yang nantinya akan meregulasi proses remodeling

jaringan bersama faktor-faktor lainnya (Sabine et al., 2007).

Dewasa ini telah banyak penelitian mengenai lendir bekicot yang secara

tradisional dipercaya masyarakat mampu sebagai penawar atau obat yang dapat

membantu proses penyembuhan luka. Di tengah kepercayaan masyarakat dalam

memilih obat alternatif untuk penyembuhan luka tersebut, menurut penelitian lendir

bekicot dari spesies Achatina fulica diketahui mengandung protein achasin dan

glycosaminoglycan yang berupa heparan sulfate, acharan sulfate, heparin, dan

hyaluronic acid. Heparan sulfate ini diketahui memiliki fungsi sebagai pengikat dan

penyimpanan bagi faktor pertumbuhan, di samping itu heparan sulphate juga

berperan dalam merangsang rekrutmen sel radang ke daerah luka sesaat setelah

terjadi perlukaan, salah satunya adalah limfosit. Achasin pada lendir bekicot juga

memiliki sifat antimikroba sehingga dapat mencegah terjadinya infeksi serta

memiliki efek menghambat inflamasi sehingga dapat mempercepat proses

penyembuhan luka dengan membantu proses pembekuan darah dan proliferasi

sel fibroblas (Ajoy et al., 2002; Muhartono et al., 2014; Christal et al., 2015).

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan uraian di atas, maka disusunlah rumusan masalah penelitian

sebagai berikut:

3

Bagaimanakah lendir bekicot (Achatina fulica) memiliki pengaruh terhadap

jumlah limfosit pada proses penyembuhan luka soket gigi pasca pencabutan gigi

tikus wistar (Rattus norvegicus)?

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum

Mengetahui bagaimanakah pengaruh lendir bekicot (Achatina fulica)

terhadap jumlah limfosit pada proses penyembuhan luka soket gigi pasca

pencabutan gigi tikus wistar (Rattus norvegicus).

1.3.2 Tujuan Khusus

1. Mengetahui jumlah limfosit di hari ketiga, kelima, dan ketujuh pada

proses penyembuhan luka soket gigi pasca pencabutan gigi tikus wistar

(Rattus norvegicus) yang tidak diberi perlakuan.

2. Mengetahui jumlah limfosit di hari ketiga, kelima, dan ketujuh pada

proses penyembuhan luka soket gigi pasca pencabutan gigi tikus wistar

(Rattus norvegicus) yang diberikan perlakuan dengan menggunakan

lendir bekicot (Achatina fulica).

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat Klinis

Memberikan informasi ilmiah dan alternatif pengobatan kepada masyarakat

mengenai manfaat lendir bekicot (Achatina fulica) untuk menyembuhkan luka

soket gigi pasca pencabutan gigi.

4

1.4.2 Manfaat Akademis

Menambah ilmu pengetahuan tentang bagaimanakah pengaruh lendir

bekicot (Achatina fulica) terhadap jumlah limfosit pada proses penyembuhan luka

soket gigi pasca pencabutan gigi pada tikus wistar (Rattus norvegicus).

5

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Bekicot (Achatina fulica)

Bekicot adalah hewan lunak namun memiliki cangkang keras, termasuk

dalam golongan mollusca dan kelas gastropoda. Bekicot berasal dari Afrika Timur

dan masuk ke Indonesia sekitar tahun 1942. Jenis hewan ini dapat berkembang

biak dengan cepat dan tersebar di laut, air tawar, dan dataran lembab (Turgeon et

al., 2015; Bappenas, 2000).

2.1.1 Taksonomi

Taksonomi bekicot menurut IT IS (Turgeon et al., 2015) adalah sebagai

berikut:

Kingdom : Animalia

Subkingdom : Bilateria

Infrakingdom : Prostosomia

Superfilum : Lophozoa

Filum : Mollusca

Kelas : Gastropoda

Ordo : Stylommatophora

Famili : Achatinidae

Sub famili : Achatininae

Genus : Achatina

Subgenus : Lissachatina

Spesies : Achatina fulica

6

2.1.2 Morfologi

Bekicot memiliki sebuah cangkang sempit berbentuk kerucut yang

panjangnya dua kali lebar tubuhnya dan terdiri dari 7-9 ruas lingkaran (paling

banyak 10 ruas lingkaran) ketika umurnya telah dewasa. Cangkang bekicot

umumnya memiliki warna coklat kemerahan dengan corak vertikal berwarna

kuning seperti pada Gambar 2.1 tetapi pewarnaan dari spesies tersebut

tergantung pada keadaan lingkungan dan jenis makanan yang dikonsumsi.

Panjang bekicot dewasa dapat mencapai 20 cm, tetapi rata-rata panjangnya

sekitar 5-10 cm dengan diameter sekitar 12 cm. Sedangkan berat rata-rata bekicot

adalah sekitar 32 gram. Bekicot dapat hidup hingga 3-5 tahun, namun dapat juga

hidup hingga 9 tahun (Cooling, 2005; Prasad et al., 2004).

Bekicot memakan tumbuhan, hewan, lumut, jamur, dan alga. Bekicot juga

diangap sebagai parasit karena mengambil nutrisi dari taman-tanaman pangan

dan hias dan kemudian menyebabkan kerusakan serius pada tanaman tersebut

(Neehall, 2004).

Gambar 2.1 Bekicot (Achatina fulica) (Odeyinka, 2014)

2.1.3 Asal-usul dan Daerah Distribusi

Bekicot berasal dari Afrika Timur, tersebar keseluruh dunia dalam waktu

relatif singkat, karena memiliki kemampuan untuk berkembang biak dengan cepat.

http://en.fotoalbum.eu/

7

Bekicot tersebar sampai di kepulauan Mauritius, Bangladesh, Fiji, China, Japan,

Kiribati, New Zealand, Palau, Papua New Guinea, Filipina, Samoa, Solomon

Island, Sri Lanka, Vunuatu, Vietnam, India, Malaysia, dan Indonesia. Sejak tahun

1933, bekicot telah ditemukan disekitar Jakarta, sumber lain menyatakan bahwa

bekicot jenis Achatina fulica masuk ke Indonesia pada tahun 1942 (masa

pendudukan Jepang). Sampai saat ini, bekicot jenis Achatina fulica banyak

terdapat di Pulau Jawa (Bappenas, 2000).

2.1.4 Habitat

Bekicot umumnya ditemukan di negara-negara dengan iklim tropis yang

lembab dan hangat. Spesies ini seringkali muncul di daerah pertanian, wilayah

pesisir dan lahan basah, hutan, zona riparian, tanah semak, dan juga dapat

ditemukan di daerah perkotaan. Bekicot lebih suka bertempat pada dataran rendah

yang panas dan beriklim hangat. Jika sedang dalam musim dingin, bekicot

menghabiskan waktunya untuk menjadi dorman dan tidak aktif (Prasad et al.,

2004).

Bekicot akan tetap aktif pada suhu 9º C hingga 29º C dan mampu bertahan

hidup hingga mencapai suhu 2º C dengan cara hibernasi. Bekicot juga dapat

bertahan hidup pada suhu mencapai 30º C dengan cara dorman/aktivasi. Bekicot

aktif pada malam hari dan seringkali mengahabiskan semua aktivitas dengan

terkubur didalam tanah. Bekicot mudah beradaptasi pada ilklim dingin maupun

panas dan berhibernasi 10 -15 cm jauh didalam tanah yang lunak selama kondisi

kurang menguntungkan dan dapat bertahan selama 1 tahun (Prasad et al., 2004).

2.1.5 Lendir Bekicot

Lendir bekicot mengandung glikokonjugat kompleks, yaitu

glikosaminoglikan dan proteoglikan. Molekul-molekul tersebut disusun dari gula

sulfat atau karbohidrat, protein globuler terlarut, asam urat, oligoelemen (tembaga,

8

seng, kalsium, dan besi). Glikosaminoglikan dan proteoglikan merupakan

pengontrol aktif fungsi sel, berperan pada interaksi matriks sel, proliferasi fibroblas,

spesialisasi dan migrasi, serta secara efektif mengontrol fenotip seluler (Dewi,

2010).

Glikokonjugat utama pada lendir bekicot adalah glikosaminoglikan yang

disekresi oleh granula-granula yang terdapat di dalam tubuh bekicot dan terletak

di permukaan luar. Glikosaminoglikan yang terisolasi dari bekicot ini terkait dengan

golongan heparin dan heparan sulfat. Heparan sulfat berperan dalam merangsang

rekrutmen sel radang, salah satunya makrofag dan leukosit.

Heparan sulfat sebagai salah satu glikosaminoglikan berfungsi sebagai

pengikat dan reservoir (penyimpanan) bagi faktor pertumbuhan fibroblas dasar

(bFGF) yang disekresikan kedalam ECM. ECM dapat melepaskan bFGF dimana

bFGF akan menstimulasi terbentuknya fibroblas dan pembuluh darah baru. Lendir

bekicot juga mengikat kation divales, seperti tembaga (II) yang dapat

mempercepat angiogenesis yang secara tidak langsung mempengaruhi

kecepatan penyembuhan luka (Dewi, 2010).

Heparan sulfat juga memiliki peran yang signifikan dalam meregulasi

interaksi antar sel dan antar sel dengan ECM. Heparan sulfat menstimulasi adhesi

sel terhadap ECM dengan mengikat keduanya pada matriks makromolekul seperti

fibroniktin atau laminin (Olcyzk et al., 2015).

Kemunculan heparan sulfat sangat penting selama tahap awal perbaikan

jaringan. Hal ini dikarenakan heparan sulfat berperan dalam interaksi kimiawi antar

sel melalui pengikatan dan meregulasi aktivitas dari heparin-binding growth

factors, enzim proteolitik, dan inhibitor protease (Olcyzk et al., 2015).

9

Rantai heparan sulfat dari HSPG (Heparan Sulphate Proteglycans) dapat

terdiri dari keberagaman struktural yang luar biasa dikarenakan perbedaan posisi

kelompok sulfat sepanjang rantai polisakarida dan epimerization dari residu asam

glucoronik ke asam idorunik. Berdasarkan perbedaan modifikasi ini, diestimasikan

terdapat 48 disakarida yang terdapat dalam heparan sulfat, meskipun sejauh ini

hanya sebanyak 23 disakarida yang terdeteksi secara in vivo. Keberagaman

struktural ini, memungkinkan heparan sulfat untuk berinteraksi dengan berbagai

protein fungsional yang beragam, seperti faktor pertumbuhan, sitokin, kemokin,

protease, lipase, dan molekul adhesi sel (Parish, 2006).

Adanya ekspresi HSPG berupa syndecan-1, -2, 4 serta glypican-1-6 pada

permukaan sel menunjukan adanya peningkatan proliferasi dan/atau aktivasi sel

T (Parish, 2006).

2.2 Pencabutan Gigi

2.2.1 Definisi

Pencabutan atau ekstraksi gigi merupakan tindakan bedah yang sering

dilakukan dalam kedokteran gigi. Pencabutan gigi merupakan suatu tindakan

pengambilan gigi dari dalam soket pada tulang alveolar dimana tindakan dilakukan

pada gigi yang sudah tidak dapat dipertahankan lagi. Pencabutan gigi yang ideal

ialah pencabutan tanpa rasa sakit, baik pada pencabutan satu gigi utuh maupun

akar gigi, dengan trauma minimal terhadap jaringan pendukung gigi, sehingga

bekas pencabutan dapat sembuh sempurna dan tidak terdapat masalah prostetik

pascaoperasi di masa mendatang (Howe, 1999).

2.2.2 Pencabutan Gigi dan Perlukaan

Tindakan pencabutan gigi atau ekstraksi gigi dapat menyebabkan kesatuan

dari jaringan lunak dan jaringan keras gigi dalam rongga mulut mengalami

10

kerusakan, dimana soket gigi akan terbuka dan mengalami perdarahan (Howe,

1999).

Peradangan merupakan respon dasar terhadap adanya kerusakan jaringan

atau luka pasca pencabutan gigi yang kemudian dilanjutkan dengan proses

penyembuhan (Lawler et al., 2002). Hal ini akan menyebabkan sel-sel dari

pembuluh darah terutama sel makrofag, limfosit, dan sel plasma jumlahnya akan

meningkat disebut dengan leukositosis dalam pembuluh darah perifer (Robbins et

al., 2007; Saraf, 2006).

2.3 Penyembuhan Luka

2.3.1 Definisi

Proses penyembuhan luka merupakan sebuah proses yang dinamis dan

melibatkan interaksi kompleks dari molekul matriks ekstraseluler, mediator-

mediator yang dapat larut, serta infiltrasi dari subtipe leukosit. Tujuan dari proses

penyembuhan luka ini antara lain untuk mencapai integritas jaringan dan

hemostasis. Penyembuhan luka terdiri dari tiga fase yang saling tumpang tindih,

yaitu fase inflamasi, fase proliferasi, dan fase maturasi atau remodeling jaringan

(Sabine et al., 2007).

2.3.2 Fase Inflamasi

Fase inflamasi merupakan fase pertama dan juga merupakan tahapan yang

menjadi dasar proses penyembuhan luka. Beberapa literatur membagi fase

inflamasi menjadi dua bagian yang terdiri dari fase hemostasis dan fase inflamasi,

namun beberapa literatur lainnya hanya menuliskan sebagai satu fase inflamasi

saja. Agregasi platelet dan infiltrasi leukosit yang diaktivasi oleh sitokin pro-

inflammatori, seperti IL-1β, TNF-α, dan IFN-γ, merupakan komponen selular

terpenting dari fase ini (Johan et al., 2012).

11

Hemostasis merupakan reaksi pertama yang terjadi pasca terjadinya

perlukaan, fase ini bertujuan untuk mencegah kehilangan darah dan cairan

berlanjut, membentuk suatu pertahanan imun untuk melawan mikroorganisme

yang menginvasi. Fase ini dicapai dengan adanya vasokonstriksi dan

penggumpalan darah. Fase ini ditandai dengan adanya agregasi platelet yang

menginisiasi penggumpalan dengan membentuk platelet plug, yang kemudian

diikuti oleh gumpalan fibrin yang menyediakan matriks untuk tempat bergantung

sementara untuk migrasi sel nantinya. Platelet juga merupakan chemoattractants

yang menarik sel untuk berperan dalam fase inflamasi dengan mensekresikan

beragam faktor pertumbuhan dan sitokin seperti FGF, EGF, PDGF, TGF-β, VEGF

yang berada pada gumpalan fibrin. Platelet turut bertugas sebagai promotor dalam

proses penyembuhan luka dengan merekrut sel-sel inflamatori menuju lokasi

perlukaan dan menginisiasi angiogenesis (Johan et al., 2012; Sabine et al., 2007).

Setelah perdarahan terkontrol, sel-sel inflamasi bermigrasi ke lokasi

perlukaan. Ini merupakan awal dari fase inflamasi yang ditandai dengan adanya

infiltrasi netrofil, makrofag, dan limfosit yang dapat pada Gambar 2.2 (Johan et al.,

2012).

Netrofil ditemukan pada lokasi perlukaan 24 – 36 jam, sel-sel ini ditarik oleh

faktor-faktor pertumbuhan dari platelet. Sel ini bertansmigrasi melalui dinding sel

endotel dari kapiler darah. Netrofil menginisiasi debridemen dari jaringan-jaringan

yang melemah yang kemudian mem-fagositosis agen-agen infeksius maupun

bakteri yang mengkontaminasi. Sel ini juga melepaskan sitokin-sitokin pro-

inflamasi yang kemudian mengaktivasi fibroblas lokal dan keratinosit. Netrofil

kemudian mengalami penekanan jumlah sebagai hasil dari apoptosis sel yang

kemudian digantikan oleh makrofag. Sel ini juga menginisiasi respons imun

selama proses penyembuhan luka (Johan et al., 2012; Sabine et al., 2007).

12

Makrofag tampak pada hari kedua hingga hari keempat setelah terjadi

perlukaan, makrofag ini dapat berupa sel residen maupun sel yang direkrut dari

darah. Sel ini juga merupakan tipe sel utama yang berasal dari monosit darah.

Pada tahap awal dari proses penyembuhan luka, makrofag memfagositosis sisa

debris, bakteri, serta sel-sel yang apoptosis termasuk netrofil. Fungsi makrofag

antara lain ialah sebagai fagosit dan menyekresi berbagai sitokin yang nantinya

akan menstimulasi respons penyembuhan (Johan et al., 2012; Sabine et al., 2007).

Makrofag mengemigrasi monosit darah menuju lokasi perlukaan yang

diregulasi oleh adanya interaksi lambat dari antigen-4 (α4β1 integrin) dan adhesi

molekul sel vaskuler endothelial. Infiltrasi sel makrofag menuju lokasi perlukaan

diregulasi oleh adanya faktor pertumbuhan, sitokin pro-inflamatori, kemokin,

macrophage inflammatory, protein 1α, MCP-1, RANTES. Makrofag juga berperan

sebagai chemo-attractatnts yang menyebabkan adanya platelet di gumpalan fibrin

pada permukaan luka, hiperproliteratif dari keratinosit pada tepi luka, fibroblast,

dan subtipe leukosit (Sabine et al., 2007).

Fungsi makrofag secara immunologis ialah sebagai antigen-presenting

cells dan sebagai fagosit, serta berfungsi dalam integrasi peran dalam

menghasilkan respons penyembuhan yang sukses melalui sekresi faktor-faktor

pertumbuhan, diantaranya TGF-β, TGF-α, bFGF, PDGF, VEGF yang kemudian

mampu meningkatkan proliferasi sel dan mensintesis molekul ECM oleh sel

residen (Sabine et al., 2007).

Sel mast merupakan subset leukosit tambahan yang merupakan sumber

penting dari beragam mediator pro-inflamasi dan sitokin. Tampak pada awal injuri,

kemudian mengalami degranulasi sehingga tidak begitu tampak lagi, dalam 48 jam

kembali normal dan terjadi peningkatan jumlah sel pada proses perbaikan jaringan


13

Kemudian Limfosit T memasuki area perlukaan pada hari kelima dan

mencapai puncak pada hari ketujuh. Keberadaan makrofag dan limfosit T penting

pada penyembuhan luka normal. Jumlah sel limfosit memuncak pada akhir fase

proliferasi atau awal fase remodeling. Limfosit T berperan dalam mengontrol

proliferasi dan merupakan subset leukosit yang paling sering ditemukan pada

perlukaan pada kulit manusia sebagai sel-sel imun adaptif. Sel ini banyak

ditemukan selama fase remodeling jaringan, saat penutupan luka telah selesai dan

infeksi lokal telah teratasi (Johan et al., 2012; Sabine et al., 2007).

Gambar 2.2 Fase Inflamasi (Reinke, 2012)

2.3.3 Fase Proliferasi

Fase proliferasi mengikuti tahap penyembuhan luka selanjutnya dan

sebagian bertumpang tindih dengan fase inflamasi. Fase proliferasi dimulai pada

hari ke-3 hingga hari ke-14 setelah cedera dan dapat berlangsung selama sekitar

2-4 minggu. Fase ini ditandai dengan proliferasi epitel dan migrasi lebih matriks

sementara dalam luka (reepitelisasi), migrasi fibroblas, dan pembentukan jaringan

granulasi dengan adanya perkembangan proliferasi, fibrin/fibronektin sementara

digantikan oleh jaringan granulasi yang baru terbentuk.

14

Reepitelisasi area luka dimulai dalam beberapa jam setelah perlukaan. Sel

epidermis pada tepi luka mengalami perubahan fenotipik dan mulai bermigrasi ke

daerah luka. Migrasi sel epidermis memasuki gumpalan fibrin dalam luka,

memisahkan eschar kering dari jaringan yang layak. Sel epidermis kembali

migrasi, berproliferasi hingga matur dan akhirnya mengembalikan fungsi

penghalang epitel. Stimulus untuk migrasi dan proliferasi sel epidermis selama

reepitelisasi belum ditentukan secara jelas, namun beberapa kemungkinan

didokumentasikan dengan baik. Tidak adanya sel-sel tetangga pada margin luka

dapat menyebabkan migrasi maupun proliferasi sel epidermis. Pelepasan lokal

faktor pertumbuhan dan sitokin juga menstimulasi proses ini. Stimulus awal untuk

proliferasi dan migrasi sel-sel epidermis termasuk aksi EGF, TGF-α, IL-1 dan TNF-

α, yang dilepas oleh trombosit dan/atau makrofag yang teraktivasi. Keratinocyte

Growth Factors (KGFs) dan IL-6, yang dilepaskan oleh fibroblas, berperan dalam

menarik keratinosit untuk bermigrasi, berproliferasi, dan berdiferensiasi menjadi

epitel (Johan et al., 2012).

Migrasi fibroblas terjadi 2-4 hari setelah perlukaan. Fibroblas tertarik

menuju daerah perlukaan oleh sejumlah faktor, seperti PDGF dan TGF-β, dan

mendominasi populasi sel luka pada minggu pertama. Dalam area luka, fibroblas

berproliferasi dan menghasilkan beberapa struktur molekul, termasuk fibrin,

fibronektin, glikosaminoglikan (GAG), kemudian diikuti oleh kolagen. Bersama-

sama, komponen ini membangun fibrin/fibronektin sementara, yang memberikan

kontribusi untuk pembentukan jaringan granulasi (Johan et al., 2012).

Pembentukan jaringan granulasi mulai tiga sampai lima hari setelah cedera

yang ditandai dengan adanya angiogenesis. Banyak faktor angiogenik yang

disekresikan selama fase yang hemostatis, seperti FGF, VEGF, TGF-β, dan

PDGF, yang dapat meningkatkan angiogenesis. Empat langkah yang terdapat

dalam proses ini ialah: (1) degradasi proteolitik dari dasar membran inti pembuluh,

15

yang memungkinkan pembentukan kapiler yang baru; (2) migrasi dari sel-sel

endotel terhadap stimulus angiogenik; (3) proliferasi; (4) maturasi dan renovasi sel

endotel ke dalam tabung kapiler. Kapiler yang baru terbentuk menyerang

fibrin/fibronektin sementara dalam beberapa hari dan meregulasinya ke dalam

jaringan mikrovaskular padat. Hal ini disebut stroma tervaskularisasi, yang

kemudian bersama-sama dengan makrofag dan proliferasi fibroblas, membentuk

jaringan granulasi akut yang menggantikan fibrin/fibronektin sementara yang

dapat dilihat pada Gambar 2.3. Dengan adanya akumulasi kolagen, angiogenesis

berhenti dan kepadatan jaringan mikrovaskuler berkurang. Ketika homeostasis

antara sintesis kolagen dan degradasi dicapai, remodeling jaringan dimulai (Johan

et al., 2012).

Gambar 2.3 Fase Proliferasi (Reinke, 2012)

2.3.4 Fase Maturasi atau Remodeling

Fase remodeling jaringan adalah tahap akhir dari proses penyembuhan

luka. Dimulai satu minggu setelah cedera dan dapat berlangsung selama satu

tahun atau lebih. Fitur utama dari fase ini adalah deposisi kolagen dalam jaringan

yang terorganisir. Selama fase ini, semua peristiwa jangka pendek yang diaktifkan

16

setelah perlukaan seperti makrofag, sel endotel, fibroblas, dan myofibroblast

mengalami apoptosis atau keluar dari daerah perlukaan. Sel-sel tersebut

meninggalkan massa yang sebagian besar terdiri dari kolagen dan protein matriks

lainnya. Tanpa adanya peningkatan kandungan kolagen, matriks sebagian besar

aseluler ini kemudian diorganisir ulang, terutama tipe III serat kolagen yang

mengandung matriks sementara, menjadi sebuah struktur kisi yang sebagian

besar terdiri dari kolagen tipe I seperti pada Gambar 2.4 (Johan et al., 2012)

Fase ini juga merupakan sebuah proses yang tergantung pada sintesis

kolagen, yang sebagian merupakan hasil dari interaksi antara matriks

metaloproteinase dan inhibitor jaringan metalloproteinase. Selama fase ini, luka

secara terus-menerus mengalamai peningkatan kekuatan tarik. Namun demikian,

luka tidak pernah mendapatkan kembali kekuatan aslinya. Kekuatan maksimal dari

luka yang sembuh adalah 80% kekuatan kulit yang normal (Johan et al., 2012).

Gambar 2.4 Fase Remodeling (Reinke, 2012)

17

2.4 Macam Penyembuhan Luka

Klinisi menggunakan kata primary intention dan secondary intention untuk

mendeskripsikan dua metode dasar pada proses penyembuhan luka. Beberapa

dokter bedah menggunakan kata tertiary intention untuk mengacu pada

penyembuhan luka melalui tissue graft untuk menutup luka besar dan

menjembatani pinggiran-pinggiran luka (Hupp, 2008).

a. Penyembuhan Luka Primer

Pada penyembuhan primer, tepi luka yang tidak mengalami kehilangan

jaringan ditempatkan dan distabilisasi pada posisi anatomis yang sama dengan

sebelum terjadinya luka. Perbaikan luka muncul dengan jaringan parut minimal.

Istilah penyembuhan primer ini digunakan untuk menandakan luka dengan tepi

berdekatan. Pada penyembuhan ini, jumlah reepitelialisasi, deposisi kolagen,

kontraksi, dan remodeling lebih sedikit dibutuhkan saat proses

penyembuhan.Sehingga, penyembuhan lebih cepat dengan resiku infeksi dan

formasi jaringan parut yang lebih rendah dibandingnkan penyembuhan sekunder.

b. Penyembuhan Sekunder

Sebaliknya, pada penyembuhan sekunder terdapat ruang diantara tepi-tepi

luka atau laserasi atau diantara tulang atau ujung saraf, dengan kata lain terdapat

kehilangan jaringan pada luka yang mengakibatan tepi luka tidak berdekatan.

Pada situasi ini diperlukan migrasi epitel, deposisi kolagen, kontraksi, dan

remodeling dalam jumlah besar saat proses penyembuhan luka. Penyembuhan

lebih lambat dan memproduksi lebih banyak jaringan parut daripada

penyembuhan primer.

18

c. Penyembuhan Tersier

Beberapa ahli bedah menggunakan kata penyembuhan tersier untuk

menandakan penyembuhan luka melalui penggunaan tissue graft atau graft

jaringan untuk menutupi luka besar dan menjembatani ruang diantara tepi luka.

2.5 Penyembuhan Luka Pasca Pencabutan Gigi

Penyembuhan luka pasca pencabutan gigi adalah salah satu contoh

penyembuhan sekunder. Segera setelah pengambilan gigi dari soket, darah

memenuhi lokasi ekstraksi. Jalur intrinsik dan ekstrinsik koagulasi diaktivasi. Jaring

resultan fibrin yang berisi sel darah merah yang terjebak menutup pembuluh

darah yang robek dan mengurangi ukuran luka ekstraksi. Pembentukan gumpalan

dimulai pada 24 hingga 48 jam pertama disertai pembesaran pembuluh darah di

dalam sisa-sisa periodontal ligamen, diikuti migrasi leukositik dan formasi lapisan

fibrin.

Pada minggu pertama, gumpalan membentuk perancah sementara untuk

migrasi sel inflamasi. Epitelium pada batas luka bertumbuh diatas permukaan

bentukan gumpalan tersebut. Osteoklas terakumulasi sepanjang tulang alveolar

crest membuat tempat untuk aktivasi resorpsi crestal. Proses angiogenesis dimulai

pada sisa-sisa ligamen periodontal. Pada minggu kedua, gumpalan terus

terbentuk melalui fibroplasia dan pembuluh darah baru mulai berpenetrasi menuju

pusat gumpalan.

Trabekula osteoid memanjang secara perlahan ke dalam gumpalan

alveolus dan resorpsi osteoklastik kortikal margin alveolar soket semakin terlihat.

Pada minggu ketiga paska ekstraksi, soket dipenuhi jaringan granulasi dan tulang

yang terkalsifikasi secara buruk terbentuk pada batas pinggir luka. Permukaan

luka mengalami reepitelialisasi secara penuh dengan jaringan parut minimal atau

19

tanpa ada jaringan parut sama sekali. Remodeling tulang secara aktif oleh deposisi

dan resorpsi terus berlanjut untuk beberapa minggu.

Gambaran radiografik pada formasi tulang tidak terlihat nyata hingga

minggu ke 6 hingga 8 setelah ekstraksi. Oleh karena proses remodeling tulang

yang sedang berjalan, hasil akhir penyembuhan pasca ekstraksi tidak dapat

terlihat secara tajam pada radiograf setelah 4 hingga 6 bulan. Kadang-kadang

gumpalan darah gagal terbentuk atau mungkin hancur, menyebabkan osteitis

alveolar local. Pada keadaan seperti ini, penyembuhan tertunda dan soket terisi

secara berangsur-angsur. Ketika tidak ada jaringan matriks granulasi yang sehat,

aposisi dari regenerasi tulang pada tulang alveolar yang tersisa memakan waktu

lebih lama disbanding soket normal. Soket yang terinfeksi biasanya tetap terbuka

atau tertutup sebagian oleh epitelium hiperplastik untuk kurun waktu tertentu

(Petterson, 2012).

2.6 Limfosit

Limfosit merupakan elemen kunci dalam produksi imun. Setelah lahir,

beberapa limfosit terbentuk di sumsum tulang. Namun, sebagian besar terbentuk

di kelenjar getah bening, timus, limpa dan dari sel prekursor yang berasal dari

sumsum tulang dan diproses di timus. Limfosit memasuki aliran darah untuk

sebagian besar melalui sistem limfatik. Pada waktu tertentu, hanya sekitar 2% dari

limfosit tubuh berada dalam darah perifer. Sebagian besar sisanya berada di organ

limfoid. Telah dihitung bahwa pada manusia, 3,5 × 1010 limfosit per hari memasuki

sirkulasi melalui saluran toraks saja; Namun, jumlah ini termasuk sel-sel yang

masuk limfatik dan dengan demikian melintasi saluran toraks lebih dari sekali

(Ganong, 2003).

Limfosit dalam darah berukuran sangat bervariasi sehingga pada

pengamatan sediaan apus darah dibedakan menjadi: limfosit kecil (7-8 μm),

20

limfosit sedang dan limfosit besar (12 μm) yang dapat dilihat pada Gambar 2.5.

Jumlah limfosit menduduki nomer 2 setelah netrofil yaitu sekitar 1000-3000 per

mm3 darah atau 20-30% dari seluruh leukosit. Di antara 3 jenis limfosit, limfosit

kecil terdapat paling banyak. Limfosit kecil ini mempunyai inti bulat yang kadang-

kadang bertakik sedikit. Intinya gelap karena khromatinnya berkelompok dan tidak

nampak nukleolus. Sitoplasmanya yang sedikit tampak mengelilingi inti sebagai

cincin berwarna biru muda. Kadang-kadang sitoplasmanya tidak jelas mungkin

karena butir-butir azurofil yang berwarna ungu. Limfosit kecil kira-kira berjumlah

92% dari seluruh limfosit dalam darah (Subowo, 2006).

Limfosit merupakan komponen yang berperan pada akhir inflamasi.

Limfosit T merupakan limfosit predominan walau limfosit B juga ditemukan pada

jaringan perlukaan manusia. Pada hewan percobaan yang dilakukan deplesi

limfosit T, terjadi penghambatan proses penyembuhan luka (Barbul, 1990).

Limfosit T juga ditemukan berperan dalam mengontrol proliferasi. Sel ini

merupakan subset leukosit yang paling sering ditemukan pada perlukaan pada

luka kulit manusia sebagai sel-sel imun adaptif. Sel ini banyak ditemukan selama

fase remodeling jaringan, saat penutupan luka telah selesai dan infeksi lokal telah

teratasi. Kemokin merupakan mediator penting bagi kemotaksis dan fungsi

limfosit. Akumulasi limfosit berkaitan dengan awal kemunculan dari MCP-1 saat 4

hari setelah terjadinya perlukaan oleh kemokin IFNγ-inducible protein-10 dan

monokin yang diinduksi oleh IFN-γ. Makrofag merupakan sumber utama untuk

sitokin tersebut. IFN-γ adalah induktor utama inducible protein-10 dan monokin

yang diinduksi oleh IFN-γ, yang dapat mencerminkan pergeseran penting pada

profil ekspresi sitokin dari mediator proinflamasi menjadi IFN-γ. Hasil penelitian

pada IFN-γ deficient mice menunjukkan adanya pengurangan jumlah netrofil,

makrofag dan sel T dikarenakan minimnya aktivasi endotel (Sabine et al., 2007).

21

Adanya aktivitas Th1 dan Th2 juga dapat dilihat, Th1 dapat dilihat dengan

adanya pelepasan IFN-γ, IL-2, TNF-α dan Th2 secara klasik melepaskan IL-4, IL-

5, dan IL-10 dimana hal ini dapat meregulasi lingkungan perlukaan dengan

mengeluarkan sitokin yang berbeda terkait dengan beragam proses remodeling

jaringan (Sabine et al., 2007).

Sel T juga mempengaruhi respons penyembuhan melalui direct cell-cell

interaction dengan sel residen maupun non residen pada lokasi luka. Interaksi

antara membran-terikat glikoprotein CD40 dan CD40 ligan memainkan peran

penting dalam interaksi ini, dimana CD40 ligan mengungkapkan sel T berinteraksi

dengan CD40 mengekspresikan keratinosit, fibroblast, trombosit, makrofag, yang

kemudian mengubah profil ekspresi mereka mediator inflamasi dan fungsi

perbaikan konsekuen (Sabine et al., 2007).

Sel T baru-baru ini terbukti terlibat dalam keratinosit yang dimediasi

hyaluronan deposisi dalam ECM dan merangsang makrofag selanjutnya infiltrasi

ke dalam situs luka mempengaruhi respons penyembuhan oleh interaksi sel-sel

langsung dengan sel residen dan non residen di lokasi perlukaan (Sabine et al.,

2007).

Limfosit T dibagi menjadi 2, yaitu limfosit CD4+ (Helper T cells) dan limfosit

CD8+ (Cytotoxic T cells) pembagian fungsinya mengikuti aturan dari

keseimbangan respon imun. Terdapat hubungan yang relevan pada proses

penyembuhan luka hewan percobaan, bahwa limfosit CD8+ menghambat

penyembuhan luka dan limfosit CD4+ mendorong penyembuhan luka pada

penelitian terhadap penyembuhan tikus in vitro. 37 Dukungan terhadap percobaan

ini berupa penelitian pada manusia selama satu minggu setelah pembedahan, jika

terjadi peningkatan jumlah sel-sel limfosit CD4+ dibandingkan dengan kenaikan

jumlah sel-sel limfosit CD8+ (rasio CD4+/CD8+) maka akan ditemukan dengan

segera penutupan pada luka (Boyce et al., 2000).

22

35 Penelitian lain menunjukan deplesi limfosit CD4+ memperlihatkan

penurunan yang signifikan terhadap kekuatan pokok (ultimate strength),

kekenyalan (resilience) dan kekerasan (toughness) pada jaringan luka.

Sedangkan deplesi limfosit CD8+ memperlihatkan kenaikan yang signifikan

terhadap kekuatan pokok, kekenyalan dan kekerasan atau keliatan jaringan luka.

Penelitian ini menyimpulkan bahwa deplesi limfosit T pada penyembuhan luka

pada tingkat subset-subsetnya terdapat pengaturan yang berlawanan, yaitu

limfosit CD8+ merupakan downregulator of wound healing sedangkan limfosit

CD4+ merupakan upregulator of wound healing (Boyce et al., 2000).

Gambar 2.5 Sel Limfosit Besar dan Kecil (Eroschenko, 2005)

2.7 Tikus Wistar

Tikus wistar putih (Rattus norvegicus) atau biasa dikenal dengan nama lain

Norway Rat berasal dari wilayah Cina dan menyebar ke Eropa bagian barat (Sirois,

2005). Pada wilayah Asia Tenggara, tikus ini tersebar di Filipina, Indonesia, Laos,

Malaysia, dan Singapura (Adiyati, 2011).

Tikus Wistar saat ini menjadi salah satu yang strain tikus paling popular

yang digunakan untuk penelitian laboratorium. Ditandai dengan adanya kepala

23

lebar, telinga panjang, dan memiliki panjang ekor yang selalu kurang dari panjang

tubuhnya seperti pada Gambar 2.6 (Sirois, 2005).

Kingdom : Animalia

Filum : Chordata

Kelas : Mamalia

Ordo : Rodentia

Subordo : Sciurognathi

Famili : Muridae

Sub-Famili : Murinae

Genus : Rattus

Spesies : Ratus norvegicus

Gambar 2.6 Tikus wistar (Rattus norvegicus) (Alexandru, 2011)

24

BAB III

KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Konsep

Gambar 3.1 Kerangka Konsep Penelitian

Pencabutan Gigi

Perlukaan Jaringan

Platelet

Lendir Bekicot (Achatina fullica)

Glycosaminoglycans: Heparan sulphate

(HSPG Syndecan-1,-2,-4 dan Glypican-1-6)

Sel PMN (Netrofil)

Growth Factors (FGF, EGF, IGF,

PDGF, VeGF, TGF)

Sitokin

Limfosit (Sel T Helper) ↑↓

Neurofil, Sel mast, Sel endotel

CD40-ligand, IL-2, TNF-α/IL-4, -5, -10

Keratinosit, Fibroblas

Jaringan granulasi

Jaringan Ikat

Remodelling jaringan (penyembuhan luka) ↑↓

Keterangan : : Variabel yang diteliti : Variabel yang tidak diteliti

Makrofag

25

3.2 Penjelasan Konsep Penelitian

Tindakan pencabutan gigi dapat menyebabkan kerusakan pada kesatuan

jaringan lunak dan jaringan keras pada rongga mulut, dimana soket gigi terbuka

dan mengalami perdarahan yang menyebabkan perlukaan jaringan. Selanjutnya,

terjadi proses penyembuhan luka yang dinamis serta tumpang tindih yang terdiri

dari 3 fase, yaitu fase inflamasi, fase proliferasi, dan fase maturasi atau

remodeling. Salah satu sel yang yang berperan penting dalam proses

penyembuhan luka adalah makrofag. Ketika terjadi perlukaan, makrofag

berpindah menuju sumber luka dan bertindak sebagai pusat pertahanan jaringan.

Lendir bekicot (Achatina fulica) mengandung heparan sulfat merupakan

salah satu jenis glikosaminoglikan (GAG) yang mempunyai struktur paling

kompleks dibandingkan jenis lainnya. Dari penelitian diketahui bahwa heparan

sulfat dapat merangsang rekrutmen sel radang ke daerah luka sesaat setelah

terjadi perlukaan jaringan, salah satunya adalah sel makrofag dan leukosit. Rantai

heparan sulfat dari HSPG dapat terdiri dari keberagaman struktural yang luar biasa

dikarenakan perbedaan posisi kelompok sulfat sepanjang rantai polisakarida dan

epimerisasi dari residu asam glukoronik ke asam idorunik. HSPG ini juga

memungkinkan heparan sulfat untuk berinteraksi dengan berbagai protein

fungsional yang beragam, seperti faktor pertumbuhan, sitokin, kemokin, protease,

lipase, dan molekul adhesi sel

Adanya ekspresi HSPG berupa syndecan-1, -2, 4 serta glypican-1-6 pada

permukaan sel menunjukan adanya peningkatan proliferasi dan/atau aktivasi sel

T. Sel ini kemudian mensintesis CD40-ligan, IL-2, TNF-α/ IL-4, -5, -10 yang

diketahui memiliki pengaruh pada aktivasi keratinosit dan fibroblas pada fase

proliferasi yang nantinya membentuk jaringan granulasi dan jaringan ikat, hingga

terjadinya regulasi remodeling jaringan.

26

3.3 Hipotesis Penelitian

Lendir bekicot (Achatina fulica) berpengaruh terhadap jumlah limfosit pada

proses penyembuhan luka pada soket gigi pasca pencabutan gigi tikus wistar

(Rattus norvegicus).

27

BAB IV

METODOLOGI PENELITIAN

4.1 Desain Penelitian

Jenis penelitian yang digunakan adalah Eksperimental Laboratoris

(Notoatmodjo, 2010). Desain penelitian yang digunakan adalah Randomized Post-

Test Only Control Group Design dimana subyek dibagi menjadi 6 kelompok secara

random (Tjokronegoro et al., 2004).

Sampel dipilih dengan Simple random sampling kemudian ditempatkan

pada:

a. K (Kelompok Kontrol): kelompok yang tidak diberikan perlakuan berupa

pemberian lendir bekicot pasca pencabutan gigi.

b. P (Kelompok Perlakuan): kelompok yang diberi perlakuan berupa

pemberian lendir bekicot pada soket gigi pasca pencabutan gigi.

4.2 Populasi dan Sampel Penelitian

4.2.1 Jenis Sampel Penelitian

Sampel penelitian ini adalah hewan percobaan berupa tikus Wistar jantan

(Rattus norvegicus) yang dipelihara di Laboratorium Faal Fakultas Kedokteran

Universitas Brawijaya Malang.

Tikus galur Wistar dipilih sebagai populasi karena merupakan hewan coba

yang tergolong jinak, mudah perawatannya, dan fungsi metabolismenya mirip

dengan manusia.

4.2.2 Kriteria Sampel Penelitian

Kriteria inklusi sampel penelitian yang digunakan, yaitu:

28

a. Jenis kelamin jantan (untuk menghindari efek hormonal yang lebih dominan

pada tikus betina)

b. Berat badan tikus 200 – 350 gram

c. Usia tikus 2 – 3 bulan

d. Keadaan umum tikus sehat yang ditandai dengan gerakannya yang aktif,

mata jernih, dan bulu mata tebal berwarna putih mengkilap

e. Tikus diadaptasikan terlebih dahulu selama 7 hari

Kriteria eksklusi sampel penelitian yang digunakan, yaitu:

a. Tikus yang selama penelitian tidak mau makan

b. Berat badan tikus kurang dari 200 gram

c. Tikus yang mengalami diare pada saat penelitian. Ditandai dengan feses

tikus yang tidak berbentuk

d. Tikus yang mengalami tanda-tanda infeksi pada soket gigi

e. Tikus mati selama penelitian

4.2.3 Jumlah Sampel Penelitian

Teknik randomisasi untuk pengelompokan perlakuan menggunakan

Rancangan Acak Lengkap (RAL) mengingat baik hewan coba, bahan pakan, dan

bahan penelitian lainnya adalah homogen. Pada rancangan ini dimungkinkan

setiap hewan coba mempunyai kesempatan menjadi sampel dalam kelompok

perlakuan atau kelompok kontrol.

Besar sampel yang digunakan pada penelitian berdasarkan rumus Federer

(1963), yaitu:

( n – 1 ) (t – 1 ) ≥ 15

Keterangan :

n = jumlah pengulangan penelitian

t = jumlah kelompok

29

Oleh karena itu, perhitungan menjadi :

( n – 1 ) ( t – 1) ≥ 15

( n – 1 ) (6 – 1 ) ≥ 15

5n – 5 ≥ 15

5n ≥ 20

n ≥ 4

Jadi, jumlah sampel minimum yang digunakan adalah 4 sampel untuk

masing-masing kelompok. Penelitian ini menggunakan 4 ekor tikus dengan 1 ekor

tikus cadangan pada setiap kelompok yang akan dideterminasi dan diambil sampel

rahang pada waktu yang berbeda-beda.

4.3 Variabel Penelitian

4.3.1 Variabel Bebas/Independen

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah lendir bekicot.

4.3.2 Variabel Terikat/Dependen

Variabel terikat dalam penelitian ini adalah jumlah limfosit pada hari ketiga,

kelima, dan ketujuh pada proses penyembuhan luka soket gigi pasca pencabutan

gigi insisivus pertama rahang bawah kiri tikus wistar.

4.3.3 Variabel Kendali/Kontrol

a. Hewan Coba (Tikus wistar)

i. Jenis kelamin hewan coba

ii. Berat badan hewan coba

iii. Usia hewan coba

iv. Makan dan minum hewan coba

b. Teknik pencabutan gigi hewan coba

c. Pemilihan dan pengambilan lendir bekicot

30

d. Jumlah sampel bahan percobaan yang dimasukkan ke dalam soket gigi

tikus pasca pencabutan gigi

e. Pengambilan preparat jaringan

4.3.4 Variabel Tidak Terkendali

a. Pengiriman bahan coba

b. Keterampilan operator

c. Homogenitas lendir bekicot

4.4 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian dilakukan di Laboratorium Faal dan Laboratorium Patologi

Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang pada bulan pertama

sampai bulan ketiga penelitian pada tahun 2016.

4.5 Alat dan Bahan Penelitian

4.5.1 Alat dan Bahan untuk Pemeliharaan Hewan Coba

a. 6 buah box plastik berukuran 15 x 30 x 42 cm3 yang diisi 4 ekor tikus wistar

dengan kawat kassa sebagai sebagai tutup box dan sekam sebagai dasar

box.

b. Tempat minum hewan coba

4.5.2 Alat Penimbang Berat Badan Tikus

Neraca Ohaus (Sartorius)

4.5.3 Alat dan Bahan Pencabutan Gigi Tikus

a. Tikus putih jantan

b. Pinset

c. Pinset sirurgis

d. Le cron (pisau model) modifikasi

31

e. Needle holder modifikasi

f. Ekskavator

g. Sonde setengah lingkaran

h. Blade dan blade holder

i. Anestesi (Ketamin 40mg/kgBB)

j. Disposible syringe insulin 1 ml (Terumo, Japan)

k. Kapas

l. Kassa

m. Cawan

4.5.4 Alat dan Bahan Perlakuan

a. Tikus wistar jantan (Rattus norvegicus)

b. Lendir bekicot (Achatina fulica)

c. Pakan hewan coba

d. Cotton buds

e. Masker dan sarung tangan

4.5.5 Alat dan Bahan Pengambilan Jaringan dan Pembuatan Preparat

a. Blade no.11

b. Pinset

c. Tabung fiksasi berlabel

d. Gelas ukur

e. Object glass dan deck glass

f. Cover glass

g. Counter

h. Mikroskop cahaya

i. Mikroskop Olympus photo slide BX51 dengan kamera DP71 12 megapixel

j. Alkohol 70%, 80%, 95%, 96%

32

k. Albumin

l. Zenker

m. Formalin 10%

n. Decalsification agent (EDTA 14%)

o. HCL 5%

p. Amonium oksalat 1%

q. Xylol

r. Paraffin

s. Alat cetak paraffin

t. Water-bath

u. Pewarna Hematoksilin dan Eosin

v. Air

w. Akuades

x. Balsam Kanada

y. Ether chloride

z. Asam format 50%

aa. Rotari mikrotom

4.6 Definisi Operasional

4.6.1 Lendir Bekicot

Lendir Bekicot adalah lendir yang diperoleh dari salah satu peternak bekicot

di daerah Blitar, Jawa Timur. Lendir sudah diambil dari dalam cangkang bekicot

dan diolah oleh peternaknya terlebih dahulu. Tidak ada kriteria khusus tentang

umur dan berat bekicot yang digunakan (Cooling, 2005; Prasad et al., 2004).

33

4.6.2 Limfosit

Limfosit dalam darah berkuran sangat bervariasi sehingga pada

pengamatan sediaan apus darah dibedakan menjadi: limfosit kecil (7-8 μm),

limfosit sedang dan limfosit besar (12 μm). Jumlah limfosit menduduki nomer 2

setelah netrofil yaitu sekitar 1000-3000 per mm3 darah atau 20-30% dari seluruh

leukosit. Di antara 3 jenis limfosit, limfosit kecil terdapat paling banyak. Limfosit

kecil ini mempunyai inti bulat yang kadang-kadang bertakik sedikit. Intinya gelap

karena khromatinnya berkelompok dan tidak nampak nukleolus. Sitoplasmanya

yang sedikit tampak mengelilingi inti sebagai cincin berwarna biru muda. Kadang-

kadang sitoplasmanya tidak jelas mungkin karena butir-butir azurofil yang

berwarna ungu. Limfosit kecil kira-kira berjumlah 92% dari seluruh limfosit dalam

darah (Subowo, 2006).

Alat ukur: -

4.6.3 Pencabutan Gigi

Pencabutan gigi dari alveolus gigi insisivus satu kiri rahang bawah tikus

wistar jantan yang dilakukan dengan menggunakan le cron dan needle holder

modifikasi (Harty et al., 1995).

Alat ukur: -

4.6.4 Soket Gigi

Soket gigi yang dimaksud dalam penelitian ini adalah soket gigi mandibula

tikus wistar. Soket gigi adalah lubang dalam tulang alveolar pada rahang yang

memberikan tempat untuk melekatnya akar gigi. Bagian tengah dari soket

mandibula dipotong secara sagital dan diambil untuk pembuatan sediaan histologi.

Alat ukur: -

34

4.6.5 Jaringan Granulasi Pasca Pencabutan Gigi

Jaringan pada luka pasca pencbutan gigi yang berupa pembentukan suatu

massa jaringan kecil, bulat, dan tersusun sebagian besar dari kapiler dan fibroblas,

sering dengan sel radang dan massa jaringan seperti jaringan ikat (Dorland, 1996).

Alat ukur: -

4.7 Prosedur Penelitian

4.7.1 Ethical Clearance

Penelitian ini diawali dengan pengurusan ethical clearance di Komisi Etik

Penelitian Kesehatan Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya

4.7.2 Alur Penelitian

Tahapan-tahapan yang ditempuh dalam penelitian ini tersaji pada Gambar

4.1 pada akhir Bab IV.

4.7.3 Pengambilan Lendir Bekicot

Lendir bekicot didapatkan langsung dari peternak bekicot, bekicot

dibersihkan dengan air mengalur kemudian ditempatkan dalam kotak plastik (75 x

40 x 30 cm) selama 3 hari untuk mencegah kontaminasi material biologikal. Lendir

bekicot dihasilkan dari glandula podal yang terletak pada otot perut bekicot.

Pengambilan lendir dilakukan setiap hari untuk menjaga kesegaran bahan lendir

saat aplikasi lendir ke dalam soket gigi.

Lendir dapat dikumpulkan dengan stimulasi manual glandula podal bekicot

dengan cara pemberian semprotan air pada badan bekicot yang kemudian lendir

ditampung dalam wadah steril (Purnasari, 2012).

4.7.4 Persiapan Hewan Coba

a. Tikus diadaptasikan dalam kandang kurang lebih selama 1 minggu pada

temperatur konstan (20-25ºC) dengan 12 jam siklus terang gelap untuk

35

proses aklimatisasi. Tikus dipelihara dalam box plastik berukuran 15 x 30 x

42 cm3 yang ditutup dengan kawat kassa dengan dasar sekam yang diganti

setiap minggu. Selama proses tersebut, dijaga agar kebutuhan makan dan

air putih mentah untuk minum tetap terpenuhi dengan diet normal terdiri

dari 67% Comfeed PAR-S, 33% terigu, dan air secukupnya (Anwari, 2003).

b. Tikus dipuasakan selama 12-18 jam sebelum perlakuan, namun air putih

mentah untuk minum tetap diberikan ad libitum (Parveen et al., 2007;

Rajavel et al., 2007).

c. Berat badan tiap tikus ditimbang dan dikelompokkan menjadi 6 kelompok

secara acak dengan jumlah masing-masing kelompok adalah 4 ekor

kemudian berat tikus ditimbang lagi sebelum dilakukan pencabutan,

dimana berat badan yang dibutuhkan adalah 200-350 gram.

4.7.5 Pencabutan Gigi Tikus

Pencabutan gigi tikus dilakukan pada gigi insisivus satu kiri mandibula

dikarenakan tidak ada perbedaan morfologi dari struktur dan jaringan anatara gigi

insisivus dengan gigi tikus yang lainnya. Sebelum dilakukan pencabutan,

dilakukan anestesi intra-muscular dengan ketamin 40mg/kgBB, lalu dilakukan

pencabutan gigi tikus dengan arah sejajar dengan soket giginya secara hati-hati

dengan kekuatan yang sama untuk menimalkan risiko patahnya gigi tikus.

Pencabutan gigi dilakukan dengan le cron dan needle holder modifikasi. Kemudian

soket diirigasi dengan akuades steril (Fitriani, 2010).

4.7.6 Perawatan Tikus Pasca Pencabutan Gigi

Pemberian makan dilakukan secara normal dan dilakukan 2 kali sehari

setiap pagi dan sore hari.

36

4.7.7 Tahap Pengelompokkan dan Perlakuan Hewan Coba

Sebanyak 24 ekor tikus dengan berat badan 200 – 350 gram dibagi ke

dalam 6 kelompok sebagai berikut:

a. Kelompok Kontrol

Kelompok kontrol terdiri dari 12 ekor tikus dilakukan pencabutan gigi

insisivus satu bawah kirinya pada hari ke nol tetapi tidak diberi perlakuan berupa

pemberian lendir bekicot pada soket giginya sebagai berikut:

i. Kelompok K1 hari ketiga: Pada hari ketiga, 4 ekor tikus dideterminasi

dan diambil sampel rahangnya.

ii. Kelompok K2 hari kelima: Pada hari kelima, 4 ekor tikus

dideterminasi dan diambil sampel rahangnya.

iii. Kelompok K3 hari ketujuh: Pada hari ketujuh, 4 ekor tikus


b. Kelompok Perlakuan

Kelompok perlakuan terdiri dari 12 ekor tikus dilakukan pencabutan

kemudian gigi insisivus kiri bawah kirinya pada hari ke nol dan diberi perlakuan

berupa pemberian lendir bekicot kedalam soket gigi sebanyak 1cc dengan

menggunakan spuit yang dimasukkan sampai ke dasar soket untuk mencegah

adanya gelembung udara yang terperangkap di dalam soket gigi, sebagai berikut:

i. Kelompok P1 hari ketiga: Pada hari ketiga, 4 ekor tikus dideterminasi

dan diambil sampel rahangnya.

ii. Kelompok P2 hari kelima: Pada hari kelima, 4 ekor tikus


iii. Kelompok P3 hari ketujuh: Pada hari ketujuh, 4 ekor tikus


37

4.7.8 Pengambilan Sampel

Pengambilan sampel dilakukan pada hari ketiga, kelima, dan ketujuh untuk

melihat jumlah limfosit di jaringan granulasi di soket gigi hewan coba, dilakukan

anastesi pada tikus masing-masing kelompok perlakuan dengan menggunakan

inhalasi eter dosis lethal dengan cara yang sama dengan proses anetesi. Sebelum

determinasi dan diambil rahang bawahnya, konfirmasi kematian tikus harus

dilakukan dengan cara melihat aspirasinya, apabila sudah tidak ada aktivitas

respirasi, tikus dideterminasi menggunakan scalpel dengan blade no.11 dan

diambil rahang bawahnya dimana terdapat soket bekas pencabutan gigi

sebelumnya. Rahang bawah kemudian dimasukkan ke dalam tabung berisi larutan

formalin 10% untuk fiksasi jaringan dan diberi label. Jasad tikus kemudian

dikuburkan dalam tanah dengan kedalaman 40 cm di bawah tanah dengan

bantuan tenaga ahli dari laboratorium terkait.

4.7.9 Teknik Pemrosesan Jaringan

a. Dilakukan proses dekalsifikasi dengan cara direndam dalam larutan EDTA

14%. Proses dekalsifikasi ini dilakukan selama 30 hari untuk menunggu

jaringan tulang mandibula menjadi lunak dan dapat dipotong kecil. Larutan

dekalsifikasi ini harus diganti setiap hari untuk mendapatkan hasil yang

baik. Setelah proses dekalsifikasi selesai, maka dilakukan pencucian pada

air mengalir selama 3-8 jam untuk menghilangkan sisa dari bahan

dekalsifikasi.

b. Melakukan proses fiksasi, dehidrasi, clearing, dan impregnasi dengan cara

mencelupkan jaringan kedalam larutan seperti yang tersaji pada Tabel 4.1

sesuai dengan waktu yang telah ditentukan.

38

Tabel 4.1 Tabel Proses Fiksasi, Dehidrasi, Clearing, dan Impregnasi

Tabung Larutan Waktu Proses

1 Formalin 2 jam Clearing

2 Alkohol 70% 1 jam Dehidrasi



5 Alkohol 96% + Prusi 2 jam Dehidrasi



8 Xylol 1 jam Clearing



11 Parafin cair (58-60ºC) 2 jam Impregnasi

12 Parafin cair (58-60ºC) 2 jam Impregnasi

Catatan :

- Dehidrasi dengan konsentrasi alkohol yang meningkat sampai kadar alkohol mencapai 96%. Dehidrasi dimulai dengan alkohol 70% selama 1 jam, 80% selama 2 jam, 95% selama 2 jam, dan 96% selama 5 jam.

- Masukkan jaringan dalam xylol (clearing) sebanyak 3 kali pada 3 tabung yang berbeda dengan ketentuan waktu 1 jam, 2 jam, dan 3 jam.

4.7.10 Penanaman Dalam Paraffin (Embedding) dan Penyayatan Jaringan

Melakukan embedding dan penyayatan jaringan dengan rotari mikrotom

dengan cara:

a. Alat cetak yang terbuat dari logam berbentuk siku-siku disusun di atas

permukaan kaca. Alat dan alas diolesi gliserin untuk mempermudah

pemisahan alat cetak dan kaca dengan blok paraffin yang sudah beku.

b. Paraffin cair ditempatkan dalam dua wadah yaitu untuk bahan embedding

dan paraffin sebagai media penyesuaian tempreratur yang akan ditanam.

c. Paraffin cair pada tempat pertama dituangkan ke dalam alat cetak hingga

penuh permukaannya, lalu jaringan ditanam pada posisi yang sesuai dan

bagian permukaan jaringan yang menempel pada kaca diusahakan rata.

39

d. Pembuatan preparat jaringan dengan pemotongan blok paraffin

menggunakan rotari mikrotom.

e. Bila paraffin sudah cukup keras, alat cetak dilepaskan dan blok paraffin

diberi label dan siap disayat.

f. Blok paraffin ditempatkan pada alat pemegangnya yang berupa lempengan

logam yang sudah dipanasi. Perhatikan sisi blok mana yang akan dipotong,

kemudian didinginkan sampai suhu kamar agar tidak melekat erat.

g. Pisau mikrotom dipasang pada pegangannya, membentuk sudut 5º-10º.

Pisau harus tajam dan permukaannya harus benar-benar rata.

h. Water-bath dipersiapkan dengan mengatur suhu air dibawah titik leleh

paraffin (± 48ºC).

i. Blok yang sudah menempel pada pemegangnya dipasang pada rotary

mikrotom dan siap dilakukan pemotongan tipis yaitu 5 mikron.

j. Hasil pemotongan berupa pita tipis dengan hati-hati dipindahkan kedalam

water-bath agar sayatan jaringan mengembang dengan baik.

k. Potongan yang sudah diseleksi dipindahkan pada object glass yang telah

diolesi dengan egg albumin atau polisin sebagai bahan perekatnya yang

sudah diberi label lalu sediaan dibiarkan kering dan dimasukkan kedalam

oven dengan suhu optimum (58 - 60ºC) selama 30 menit.

4.7.11 Pengecatan Preparat Jaringan

Menurut Ross (1985) dan Hammersen (1993) pengecatan preparat

jaringan dilakukan dengan tahapan sebagai berikut:

a. Deparaffinisasi dengan menggunakan xylol.

b. Preparat dimasukkan ke dalam xylol selama 2 menit.

c. Memasukkan kembali ke dalam xylol II dalam wadah yang berbeda selama

2 menit.

40

d. Dilakukan dehidrasi dengan larutan alkohol 96%, 95% dan 80% masing-

masing selama 1 menit.

e. Preparat dibilas dengan air mengalir selama 3-5 menit, mula-mula dengan

aliran lambat kemudian lebih kuat dengan tujuan menghilangkan semua

kelebihan alkohol.

f. Preparat diwarnai dengan zat warna Hematoxilin Mayer’s selama 15 menit.

g. Dibilas kembali di bawah air mengalir selama 5 menit.

h. Preparat direndam eosin selama 15 detik sampai 2 menit.

i. Dilakukan dehidrasi kembali dengan larutan alkohol konsentrasi meningkat

95% dan 96% masing-masing 2 menit sebanyak 2 kali dengan wadah yang

berbeda (bak I dan II).

j. Setelah melalui alkohol absolut, preparat dipindahkan ke xylol.

k. Mounting.

l. Beri setetes medium Entellan yang mempunyai indeks refraksi hampir

sama dengan indeks refraksi kaca pada sediaan hapus. Kemudian sediaan

itu ditutup dengan kaca penutup dan dibiarkan mengering.

4.7.12 Penghitungan Jumlah Limfosit

Limfosit pada sediaan preparat jaringan dihitung menggunakan mikroskop

cahaya binokuler dengan perbesaran 400x. Setiap preparat terdiri dari 3 potongan

jaringan yang sebelumnya diletakkan satu tetes minyak emersi. Tiap potongan

jaringan jumlah limfosit dihitung secara sistematis mulai dari pojok kiri bawah

kemudian digeser ke kanan dan ditarik ke atas demikian seterusnya sehingga

semua lapang pandang terbaca, dilanjutkan hingga pada potongan jaringan

kelima. Kemudian dihitung jumlah limfosit rata-rata dari lima potongan jaringan

tersebut.

41

4.8 Analisis Data

Hasil pengukuran jumlah limfosit pada tikus kontrol dan perlakuan dianalisa

secara statistik dengan menggunakan program komputer dengan tingkat

signifikansi 0,05 (p = 0,05) dan taraf kepercayaan 95% (α = 0,05). Langkah-

langkah uji hipotesis komparatif dan korelatif adalah sebagai berikut:

a. Uji Normalitas: bertujuan untuk menginterpretasikan apakah suatu data

memiliki sebaran atau distribusi normal atau tidak, karena pemilihan

penyajian data dan uji hipotesis bergantung dari normal tidaknya distribusi

data. Untuk penyajian data yang berdistribusi normal digunakan mean dan

standar deviasi sebagai pasangan ukuran pemusatan dan penyebaran,

sedangkan untuk penyajian data yang tidak terdistribusi normal

menggunakan median dan minmum-maksimum sebagai pasangan ukuran

pemusatan dan penyebaran. Untuk uji hipotesis, jika sebaran data normal,

maka digunakan uji parametric, sedangkan, jika sebaran data tidak normal

digunakan uji non-parametrik.

b. Uji homogenitas: bertujuan untuk menguji berlaku atau tidaknya asumsi

ANOVA, yaitu apakah data yang diperoleh dari setiap perlakuan memiliki

varian yang homogen. Uji menggunakan Levene test, jika didapatkan

varian yang homogen, maka analisis selanjutnya dapat menggunakan

uji ANOVA. Uji one way ANOVA berlaku untuk membandingkan nilai dari

rata-rata dari masing-masing kelompok perlakuan dan mengetahui bahwa

minimal terdapat dua kelompok yang berbeda secara signifikan.

c. Data penelitian yang terdistribusi normal (p>0,05), dilanjutkan dengan uji

parametrik menggunakan one way ANOVA dengan tingkat kepercayaan

95%(α=0,05) dan bila ada perbedaan dilanjutkan dengan uji LSD (Least

Significance Difference) dengan tingkat kepercayaan 95% (α=0,05). Bila

data penelitian tidak terdistribusi normal dan homogen, dilakukan uji

42

nonparametric dengan Kruskal-Wallis dengan tingkat kepercayaan 95%

(α=0,05) dan bila ada perbedaan nyata antara kelompok sampel,

dilanjutkan dengan uji statistik Mann-Whitney dengan derajat kemaknaan

95% dengan nilai α=0,05 (Notoatmodjo, 2002).

d. Post-Hoc Test (Uji Least Significant Difference): bertujuan untuk

mengetahui kelompok mana yang bereda secara signifikan dari hasil tes

ANOVA. Uji Post-Hoc yang digunakan adalah uji LSD dengan tingkat

signifikansi 95% (p<0,05).

e. Uji korelasi Pearson: untuk mengetahui besarnya perbedaan secara

kualitatif kelompok yang berbeda secara signifikan, yang telah ditentukan

sebelumnya dari hasil uji Post-Hoc (LSD).

43

4.9 Alur Penelitian

H-7

H

H+3

H+5

H+7

Gambar 4.1 Skema Alur Penelitian

Sampel Tikus Wistar (Rattus norvegicus)

Adaptasi Selama 7 Hari

Pencabutan gigi insisivus kiri rahang bawah

Irigasi dengan akuades steril

Determinasi

hari ke -5

Determinasi

hari ke -3

Determinasi

hari ke -7

Determinasi

hari ke -5

Determinasi

hari ke -3

Determinasi

hari ke -7

Pengambilan sampel rahang

Dekalsifikasi dengan EDTA

Fiksasi, Dehidrasi, Clearing, Impregnasi

Embedding dan penyayatan jaringan

Pengecatan HE

Penghitungan jumlah limfosit

Analisis data

K2 4 ekor tikus tidak diberi perlakuan



P2

4 ekor tikus

diberi perlakuan

P1

4 ekor tikus

diberi perlakuan

P3

4 ekor tikus

diberi perlakuan

44

BAB V

HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA

5.1 Hasil Penelitian

Pada penelitian ini hewan coba dibagi menjadi dua kelompok, yaitu

kelompok kontrol (K) dan kelompok perlakuan (P), masing-masing dibagi menjadi

3 kelompok berdasarkan hari determinasi hewan coba. Kelompok kontrol

merupakan tikus wistar yang tidak diberikan perlakuan berupa lendir bekicot,

kelompok perlakuan merupakan tikus wistar yang diberikan perlakuan berupa

lendir bekicot.

Sampel diperoleh dengan mengambil rahang yang terdapat soket gigi yang

telah dilakukan pencabutan terlebih dahulu. Determinasi dilakukan pada hari

ketiga, kelima, dan ketujuh setelah pencabutan gigi tikus wistar, kemudian

dilakukan pembuatan preparat dengan pengecatan Hematoxylin-Eosin.

Pengamatan dilakukan menggunakan software OlyVIA (Viewer for Imaging

Applications) dengan perbesaran 20x yang setara dengan perbesaran 400x pada

mikroskop cahaya binokuler. Hasil yang diperoleh berupa gambaran limfosit

dengan bentuk bulat atau oval dengan sitoplasma sempit berwarna biru keunguan

yang dapat dilihat pada Gambar 5.1-6.

45

Gambar 5.1 Gambar Limfosit (lingkaran hijau) Pada Kelompok Kontrol Determinasi Hari 3 (K1) dengan perbesaran 20x


46


Gambaran limfosit pada kelompok kontrol memperlihatkan jumlah yang

lebih banyak pada kelompok kontrol hari ketujuh (Gambar 5.3) kemudian diikuti

pada hari kelima (Gambar 5.2). Gambaran yang limfosit yang paling sedikit

jumlahnya dapat dilihat pada kelompok kontrol hari ketiga (Gambar 5.1).

Gambar 5.4 Gambar Limfosit (lingkaran hijau) Pada Kelompok Perlakuan Determinasi Hari 3 (P1) dengan perbesaran 20x

47



48

Pada kelompok perlakuan, jumlah limfosit terbanyak diperoleh pada hari

kelima (Gambar 5.5) apabila dibandingkan dengan hari ketiga (Gambar 5.4).

Gambaran limfosit menurun pada kelompok perlakuan hari ketujuh (Gambar 5.6).

Analisa data hasil penghitungan jumlah limfosit dapat dilihat pada Tabel 5.1

dengan format mean ± standar deviasi.

Tabel 5.1 Tabel Rata-rata Hasil Penghitungan Jumlah Limfosit

Kelompok Mean Std. Deviation

Determinasi Hari ke-3

Kontrol

(K1) 5,48 3,01552

Perlakuan

(P1) 11,64 8,70766


Kontrol

(K2) 4,60 3,22749

Perlakuan

(P2) 16,52 8,25187


Kontrol

(K3) 64,48 36,98775

Perlakuan

(P3) 10,80 9,56121

5.2 Analisis Data

Analisis jumlah limfosit dilakukan dengan menggunakan metode One-way

ANOVA. Sebelum dilakukan pengujian dengan one way Anova dilakukan uji

normalitas dan uji homogenitas ragam. Uji normalitas menggunakan uji

Kolmogorov smimov, uji homogenitas menggunakan Levene Test, kemudian

dilanjutkan dengan one way ANOVA. Apabila hasil uji terdapat perbedaan maka

dilanjutkan dengan Post-Hoc Test menggunakan uji LSD (Least Significance

Difference) dan dilanjutkan dengan uji korelasi Pearson.

49

5.2.1 Uji Asumsi Data

Sebelum melakukan analisis data dengan menggunakan one way ANOVA,

maka diperlukan pemenuhan atas beberapa asumsi data, yaitu data jumlah limfosit

pada hari ketiga, kelima, dan ketujuh harus mempunyai sebaran normal dan

mempunyai ragam yang homogen.

a. Normalitas Data

Menurut Santoso (2004), sebelum melakukan pengujian dengan

menggunakan statistika inferensial, maka diperlukan pemenuhan terhadap asumsi

kenormalan data. Distribusi normal merupakan distribusi teoritis dari variabel

random yang kontinyu (Dajan, 1995). Kurva yang menggambarkan distribusi

normal adalah kurva normal yang berbentuk simetris. Untuk menguji apakah

sampel penelitian merupakan jenis distribusi normal maka digunakan uji

Kolmogorov smirnov terhadap variabel yang diamati.

Tabel 5.2. Tabel Uji Normalitas

Variabel K-S

Statistik Nilai

Signifikansi Kesimpulan

Jumlah limfosit K1 (Kontrol Hari Ke-3)

0.155 0.126 Data berdistribusi normal

Jumlah limfosit P1 (Perlakuan Hari Ke-3)










50

Berdasarkan pengujian normalitas data pada Tabel 5.2 dengan

menggunakan Uji Kolmogorov smirnov, data jumlah limfosit pada hari ketiga,

kelima, dan ketujuh baik pada kelompok kontrol maupun perlakuan mempunyai

nilai signifikansi yang lebih besar dari alpha 0.05 (p>0.05), sehingga dapat

disimpulkan bahwa data variabel tersebut menyebar mengikuti sebaran normal.

Dengan demikian dapat dilakukan pengujian dengan uji t maupun ANOVA, karena

asumsi kenormalan distribusi data telah terpenuhi.

b. Homogenitas Ragam Data

Untuk mendeteksi ada atau tidaknya heterogenitas menurut Santoso, S. &

Tjiptono, F (2002:39) dilakukan dengan menggunakan uji kesamaan ragam yaitu

uji Levene (Levene test homogeneity of variances), dengan hasil pengujian

sebagai berikut (Tabel 5.3).

Tabel 5.3 Uji Kesamaan Ragam dengan Uji Levene

Variabel Uji Levene

nilai p

jumlah limfosit 0.062

Oleh karena nilai sign. (p) dari uji levene data jumlah limfosit mempunyai

nilai signifikansi 0.062 menunjukkan lebih besar dari alpha 0.05 (p>0.05), maka

dapat disimpulkan bahwa ragam data jumlah limfosit masih relatif homogen.

Sehingga dapat dilakukan pengujian dengan uji ANOVA pada tahap berikutnya,

karena asumsi homogentitas ragam data telah terpenuhi.

51

5.2.2 Uji One Way ANOVA

Perbandingan jumlah limfosit antara interaksi kelompok kontrol dan

perlakuan dengan lama hari (hari ke ketiga, kelima, dan ketujuh), dianalisis dengan

menggunakan one way ANOVA (Analysis of Variance). Hipotesis ditentukan

melalui H0 diterima bila nilai signifikansi yang diperoleh > alpha 0,05, sedangkan

H0 ditolak bila nilai signifikansi yang diperoleh < alpha 0,05. H0 dari penelitian ini

adalah tidak ada perbedaan rata-rata jumlah limfosit antara interaksi kelompok

kontrol dan perlakuan dengan lama hari (hari ketiga, kelima dan ketujuh). H1 dari

penelitian ini adalah terdapat perbedaan rata-rata jumlah limfosit antara interaksi

kelompok kontrol dan perlakuan dengan lama hari (hari ketiga, kelima, dan

ketujuh). Hasil uji ANOVA dapat dilihat pada Tabel 5.4.

Tabel 5.4 Tabel Hasil Uji ANOVA

Keterangan p-value

jumlah limfosit antara kelompok kontrol dan perlakuan

dengan lama hari (hari ketiga, kelima, dan ketujuh) 0.000

Berdasarkan hasil analisis ragam pada Tabel 5.4 untuk data jumlah limfosit,

menunjukkan nilai signifikansi sebesar 0.000 (p<0,05), sehingga Ho ditolak, dan

dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan jumlah limfosit antara interaksi

kelompok kontrol dan perlakuan dengan lama hari.

5.2.3 Uji Post Hoc LSD

Langkah selanjutnya adalah mengolah data yang ada dengan

menggunakan metode post hoc test sebagai uji pembandingan berganda (multiple

comparisons) dengan uji LSD sebagai salah satu uji pembandingan berganda

dalam ANOVA untuk menguji adanya perbedaan antar perlakuan dalam multiple

52

comparisons. Dengan metode ini akan dilakukan pembandingan yang berganda

terhadap data jumlah limfosit antara interaksi kelompok kontrol dan perlakuan

dengan lama hari (hari ketiga, kelima, dan ketujuh), karena dari hasil uji ANOVA

menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan. Adapun hasil uji LSD dapat

dilihat pada Tabel 5.5.

Tabel 5.5. Tabel Uji Pembandingan Berganda LSD

Pembandingan antar

Kelompok

Beda rata-

rata Sig. Kesimpulan

Kontrol

(K1)

Perlakuan (P1) -6.160 0.188 Tidak berbeda signifikan

Kontrol (K2) 0.880 0.850 Tidak berbeda signifikan

Perlakuan (P2) -11.040 0.019 Berbeda signifikan

Kontrol (K3) -59.000 0.000 Berbeda signifikan


Perlakuan

(P1)

Kontrol (K2) 7.040 0.132 Tidak berbeda signifikan



Perlakuan (P3) 0.840 0.857 Tidak berbeda signifikan

Kontrol

(K2)

Perlakuan (P2) -11.920 0.011 Berbeda signifikan



Perlakuan

(P2)


Perlakuan (P3) 5.720 0.221 Tidak berbeda signifikan

Kontrol

(K3) Perlakuan (P3) 53.680 0.000 Berbeda signifikan

53

Keterangan:

Jika nilai signifikansi (p) <alpha 0.05= ada perbedaan yang signifikan

Jika nilai signifikansi (p) >alpha 0.05= tidak ada perbedaan yang signifikan

Hasil uji pembandingan berganda (LSD Test) pada setiap perlakuan pada

tabel di atas, menunjukkan bahwa jumlah limfosit pada kelompok K1 berbeda

signifikan (bermakna) dengan kelompok P2, dan K3 (p<0.05), namun jumlah

limfosit pada kelompok K1 tidak berbeda signifikan (bermakna) dengan kelompok

P1, K2, dan P3.

Perbandingan jumlah limfosit pada kelompok P1 berbeda signifikan

(bermakna) dengan kelompok K3 (p<0.05), namun jumlah limfosit pada kelompok

P1 tidak berbeda signifikan (bermakna) dengan kelompok K1, K2, P2, dan P3.

Perbandingan jumlah limfosit pada kelompok K2 berbeda signifikan

(bermakna) dengan kelompok P2, K1 dan K3 (p<0.05), namun jumlah limfosit pada

kelompok K2 tidak berbeda signifikan (bermakna) dengan kelompok P1, dan P3.

Perbandingan jumlah limfosit pada kelompok P2 berbeda signifikan

(bermakna) dengan kelompok K2, K1 dan K3 (p<0.05), namun jumlah limfosit pada

kelompok P2 tidak berbeda signifikan (bermakna) dengan kelompok P1, dan P3.

Perbandingan jumlah limfosit pada kelompok K3 berbeda signifikan (bermakna)

dengan kelompok K1, K2, P1, dan P2 (p<0.05).

Perbedaan rata-rata jumlah limfosit antara interaksi kelompok kontrol dan

perlakuan dengan lama hari tersebut dapat dilihat pada Gambar 5.7.

54

Gambar 5.7. Perbandingan jumlah limfosit antara interaksi kelompok

kontrol dan perlakuan dengan lama hari

Plot respon (main effect) pada Gambar 5.7 menunjukkan besarnya

pengaruh interaksi kelompok kontrol dan perlakuan dengan lama hari terhadap

jumlah limfosit. Berdasarkan plot respon tersebut dapat dibentuk urutan jumlah

limfosit dari yang paling rendah sampai dengan yang paling tinggi yang dapat

dilihat pada Tabel 5.6.

Tabel 5.6 Tabel Urutan rata-rata jumlah limfosit antara interaksi

kelompok kontrol dan perlakuan dengan lama hari (hari

ketiga, kelima, dan ketujuh)

No Kelompok jumlah limfosit (mean±std.dev.)

1 Kontrol (K2) 4.6±3.23

2 Kontrol (K1) 5.48±3.02

3 Perlakuan (P3) 10.8±9.56

4 Perlakuan (P1) 11.64±8.71

5 Perlakuan (P2) 16.52±8.25

6 Kontrol (K3) 64.48±36.99

Kontrol, Hari ke-3, 5.48



Perlakuan, Hari ke-3, 11.64

Perlakuan, Hari ke-5, 16.52 Perlakuan, Hari ke-

7, 10.8

Rat

a-ra

ta J

um

lah

Lim

fosi

t

Kontrol

Perlakuan

55

Kelompok kontrol pada hari ketiga (K1) mempunyai rata-rata jumlah limfosit

yang paling rendah (mean=4.6 satuan) dibandingkan dengan kelompok kontrol

pada hari kelima (K2), sehingga kelompok kontrol pada hari kelima (K2) mampu

menurunkan rata-rata jumlah limfosit yang lebih rendah daripada kelompok kontrol

pada hari ketiga (K1). Tetapi kelompok kontrol pada hari kelima (K2) mampu

menurunkan rata-rata jumlah limfosit yang lebih rendah daripada kelompok

perlakuan pada hari ketujuh (P3). Adapun kelompok perlakuan pada hari ketujuh

(P3) lebih mampu menurunkan rata-rata jumlah limfosit yang lebih rendah

daripada kelompok perlakuan pada hari ketiga (P1). Kelompok perlakuan pada

hari ketiga (P1) lebih mampu menurunkan rata-rata jumlah limfosit yang lebih

rendah daripada kelompok perlakuan pada hari kelima (P2). Sedangkan jumlah

limfosit pada kelompok kontrol pada hari ketujuh (K3) menunjukkan peningkatan

yang paling besar dibandingkan kelompok lainnya.

5.2.4 Uji Korelasi

Untuk mengetahui hubungan antara jumlah limfosit pada hari ketiga, kelima

dan ketujuh dengan pemberian lendir bekicot pada proses penyembuhan luka

pasca pencabutan gigi tikus wistar, maka dilakukan uji korelasi pearson dapat

dilihat pada tabel 5.7.

Tabel 5.7 Tabel Uji Korelasi

Korelasi (r) Sig. (p)

Hubungan antara jumlah limfosit hari ketiga dengan pemberian lendir bekicot

0.435 0.002

Hubungan antara jumlah limfosit hari kelima dengan pemberian lendir bekicot

0.697 0.000

Hubungan antara jumlah limfosit hari ketujuh dengan pemberian lendir bekicot

-0.712 0.000

56

Berdasarkan hasil uji korelasi pada Tabel 5.7, dapat diketahui bahwa

hubungan antara jumlah limfosit pada hari ketiga dengan pemberian lendir bekicot

pada proses penyembuhan luka pasca pencabutan gigi tikus wistar mempunyai

koefisien korelasi sebesar 0.435 dengan nilai signifikansi sebesar 0.002 (p<0.05),

sehingga dapat disimpulkan bahwa terdapat hubungan yang signifikan antara

jumlah limfosit pada hari ketiga dengan pemberian lendir bekicot pada proses

penyembuhan luka pasca pencabutan gigi tikus wistar. Koefisien korelasi bernilai

positif, artinya pemberian lendir bekicot pada proses penyembuhan luka pasca

pencabutan gigi, dapat meningkatkan jumlah limfosit pada hari ketiga

dibandingkan dengan kelompok yang tidak diberi lendir bekicot. Grafik linieritas

dapat dilihat pada Gambar 5.8.

Gambar 5.8 Grafik Linieritas antara jumlah limfosit hari ke-3 dengan

pemberian lendir bekicot pada proses penyembuhan luka pasca

pencabutan gigi

1.00 1.25 1.50 1.75 2.00

Kelompok

0.00

10.00

20.00

Ju

mla

h l

imfo

sit

(H

ari

Ke

-3)

57

Berdasarkan grafik linieritas pada gambar 5.8 menunjukkan garis menuju

ke kanan atas, yang dapat diartikan bahwa terdapat hubungan yang signifikan

antara jumlah limfosit pada hari ketiga dengan pemberian lendir bekicot pada

proses penyembuhan luka pasca pencabutan gigi tikus wistar. Koefisien korelasi

bernilai positif, artinya pemberian lendir bekicot pada proses penyembuhan luka

pasca pencabutan gigi, dapat meningkatkan jumlah limfosit pada hari ketiga

dibandingkan dengan kelompok yang tidak diberi lendir bekicot.

Hubungan antara jumlah limfosit pada hari kelima dengan pemberian lendir

bekicot pada proses penyembuhan luka pasca pencabutan gigi tikus wistar

mempunyai koefisien korelasi sebesar 0.697 dengan nilai signifikansi sebesar

0.000 (p<0.05), sehingga dapat disimpulkan bahwa terdapat hubungan yang

signifikan antara jumlah limfosit pada hari kelima dengan pemberian lendir bekicot

pada proses penyembuhan luka pasca pencabutan gigi tikus wistar. Koefisien

korelasi bernilai positif, artinya pemberian lendir bekicot pada proses

penyembuhan luka pasca pencabutan gigi, dapat meningkatkan jumlah limfosit

pada hari kelima dibandingkan dengan kelompok yang tidak diberi lendir bekicot.

Grafik linieritas dapat dilihat pada Gambar 5.9.

58



pencabutan gigi


ke kanan atas, yang dapat diartikan bahwa terdapat hubungan yang signifikan

antara jumlah limfosit pada hari kelima dengan pemberian lendir bekicot pada


bernilai positif, artinya pemberian lendir bekicot pada proses penyembuhan luka

pasca pencabutan gigi, dapat meningkatkan jumlah limfosit pada hari kelima

dibandingkan dengan kelompok yang tidak diberi lendir bekicot.

Hubungan antara jumlah limfosit pada hari ketujuh dengan pemberian

lendir bekicot pada proses penyembuhan luka pasca pencabutan gigi tikus wistar

mempunyai koefisien korelasi sebesar -0.712 dengan nilai signifikansi sebesar

0.000 (p<0.05), sehingga dapat disimpulkan bahwa terdapat hubungan yang

signifikan antara jumlah limfosit pada hari ketujuh dengan pemberian lendir bekicot

1.00 1.25 1.50 1.75 2.00

Kelompok

0.00

10.00

20.00

30.00

Ju

mla

h l

imfo

sit

(H

ari

Ke

-5)

59

pada proses penyembuhan luka pasca pencabutan gigi tikus wistar. Koefisien

korelasi bernilai negatif, artinya pemberian lendir bekicot pada proses

penyembuhan luka pasca pencabutan gigi, dapat menurunkan jumlah limfosit

pada hari ketujuh yang lebih rendah dibandingkan dengan kelompok yang tidak

diberi lendir bekicot. Grafik linieritas dapat dilihat pada Gambar 5.10.



pencabutan gigi


ke kanan bawah, yang dapat diartikan bahwa terdapat hubungan yang signifikan

antara jumlah limfosit pada hari ketujuh dengan pemberian lendir bekicot pada


bernilai negatif, artinya pemberian lendir bekicot pada proses penyembuhan luka

pasca pencabutan gigi, dapat menurunkan jumlah limfosit pada hari ketujuh yang

lebih rendah dibandingkan dengan kelompok yang tidak diberi lendir bekicot.

1.00 1.25 1.50 1.75 2.00

Kelompok

0.00

40.00

80.00

120.00

Ju

mla

h l

imfo

sit

(H

ari

Ke

-7)

60

BAB VI

PEMBAHASAN

Penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui jumlah limfosit

secara time series pada hari ketiga, kelima, dan ketujuh pada proses

penyembuhan luka soket gigi pasca pencabutan gigi tikus wistar jantan. Penelitian

menggunakan hewan coba tikus wistar jantan sebanyak 30 ekor tikus yang dibagi

ke dalam 2 kelompok besar yaitu kelompok kontrol (K) dan kelompok perlakuan

(P), kelompok kontrol merupakan kelompok hewan coba yang tidak diberikan

perlakuan setelah pencabutan gigi. Kelompok perlakuan adalah kelompok hewan

coba yang diberikan perlakuan berupa lendir bekicot yang diberikan sebanyak 1cc

setiap harinya setelah dilakukan pencabutan gigi. Setiap kelompok besar dibagi

menjadi 3 kelompok kecil berdasarkan hari determinasi yaitu K1/P1 yang

dideeterminasi pada hari ketiga pasca pencabutan gigi, K2/P2 yang dideterminasi

pada hari kelima pasca pencabutan gigi, dan K3/P3 yang dideterminasi pada hari

ketujuh pasca pencabutan gigi.

Soket gigi diperoleh dengan melakukan pencabutan gigi insisivus kiri

rahang bawah tikus wistar. Tikus dideterminasi dan diambil rahang bawahnya

untuk dibuatkan preparat. Setelah itu, dilakukan perhitungan jumlah limfosit pada

tiap preparat dan didapatkan limfosit muncul pada hari ketiga dan mengalami

peningkatan jumlah limfosit pada hari kelima dan terjadinya penurunan jumlah

limfosit pada hari ketujuh.

Dari hasil penelitian diperoleh bahwa kelompok kontrol memiliki jumlah

limfosit lebih sedikit dibandingkan kelompok perlakuan pada hari ketiga dan kelima

pasca pencabutan. Sedangkan kelompok kontrol hari ketujuh kelompok kontrol

61

memiliki jumlah limfosit yang lebih banyak dibandingkan dengan kelompok

perlakuan.

Hasil penelitian ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Olcyzk

(2015) yang menyatakan bahwa lendir bekicot terdapat glikosaminoglikan yang

mengandung heparan sulfat yang berfungsi untuk merekrut sel radang

diantaranya makrofag dan leukosit. Heparan sulfat memiliki peran yang signifikan

dalam meregulasi interaksi antar-sel dan antara sel dengan ECM. Heparan sulfat

juga menstimulasi adhesi dari sel terhadap ECM dengan pengikatan sel pada

matriks makromolekul seperti misalnya fibronektin atau laminin. Dengan adanya

heparan sulfat sebagai reseptor dari banyak extracellular ligands, faktor-faktor

pertumbuhan, dan kemokin maka dapat meregulasi proliferasi sel, diferensiasi,

angiogenesis, serta proses migrasi sel-sel leukosit (Olcyzk, 2015).

Selain itu, menurut Parish (2006), HSPG dari heparan sulfat

memungkinkan heparan sulfat untuk berinteraksi dengan berbagai protein

fungsional yang beragam, seperti faktor pertumbuhan, sitokin, kemokin, protease,

lipase, dan molekul adhesi sel. Selain itu, adanya ekspresi HSPG berupa

syndecan-1, -2, 4 serta glypican-1-6 pada permukaan sel menunjukan adanya

peningkatan proliferasi dan/atau aktivasi sel T. (Parish, 2006)

Pada proses penyembuhan luka, pertama diawali dengan fase inflamasi

dimana limfosit mulai tampak dan menginfiltrasi daerah perlukaan bersamaan

dengan netrofil dan makrofag (Johan et al., 2012). Kemudian limfosit mengalami

peningkatan pada area perlukaan pada hari kelima atau pada fase proliferasi


Penurunan limfosit pada hari ketujuh pada kelompok perlakuan sesuai

dengan pernyataan Cookbill (2002), bahwa pada proses penyembuhan luka

jumlah limfosit yang ada akan mengalami penurunan. Hal tersebut diduga karena

sel radang yang ada termasuk limfosit akan mengalami apoptosis dikarenakan

62

tugasnya sebagai agen fagositosis tergantikan oleh adanya fibroblast yang

membentuk jaringan baru (regenerasi) (Setianingtyas, 2012). Selain itu penurunan

jumlah sel radang termasuk limfosit dan makrofag, menandakan bahwa proses

penyembuhan telah masuk ke tahap selanjutnya sehingga proses inflamasi lebih

singkat dan proses penyembuhan luka lebih cepat (Pratiwi, 2011).

Jumlah limfosit yang tinggi pada kelompok kontrol sesuai dengan

pernyataan Johan et al. (2012) dan Sabine et al. (2007) bahwa jumlah sel limfosit

memuncak pada akhir fase proliferasi atau awal fase remodeling. Limfosit T

berperan dalam mengontrol proliferasi dan merupakan subset leukosit yang paling

sering ditemukan pada perlukaan pada kulit manusia sebagai sel-sel imun adaptif.

Sel ini banyak ditemukan selama fase remodeling jaringan, saat penutupan luka

telah selesai dan infeksi lokal telah teratasi (Johan et al., 2012; Sabine et al., 2007).

Berdasarkan hasil penelitian, maka dapat dikatakan bahwa lendir bekicot

berpengaruh terhadap jumlah limfosit pada proses penyembuhan luka soket gigi

pasca pencabutan gigi tikus wistar dengan adanya perbedaan jumlah limfosit pada

hari ketiga, kelima, dan ketujuhs pada kelompok tikus yang tidak diberi perlakuan

dan diberi perlakuan. Hal ini menunjukkan bahwa hipotesis penelitian yang telah

disusun dapat diterima.

63

BAB VII

PENUTUP

7.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa:

1. Pemberian lendir bekicot berpengaruh terhadap jumlah limfosit pada

proses penyembuhan luka soket gigi pasca pencabutan gigi tikus

wistar.

2. Proses penyembuhan luka soket gigi pasca pencabutan gigi tikus

wistar yang tidak diberi perlakuan memiliki rerata jumlah limfosit pada

hari ketiga sebanyak 5,48 perlapang pandang, pada hari kelima

sebanyak 4,60 perlapang pandang, pada hari ketujuh sebanyak 64,48

perlapang pandang.

3. Proses penyembuhan luka soket gigi pasca pencabutan gigi tikus

wistar yang diberi perlakuan berupa lendir bekicot sebanyak 2 tetes

setiap harinya memiliki rerata jumlah limfosit pada hari ketiga sebanyak

11,64 perlapang pandang, pada hari kelima sebanyak 16,52 perlapang

pandang, dan pada hari ketujuh sebanyak 10,80 perlapang pandang.

4. Lendir bekicot memiliki pengaruh terhadap proses penyembuhan luka

soket gigi pasca pencabutan gigi tikus wistar yang dapat diamati dari

perbedaan jumlah limfosit. Pada kelompok kontrol, limfosit mulai

muncul pada hari ketiga kemudian mengalami sedikit penurunan

jumlah pada hari kelima, dan mengalami peningkatan pada hari

ketujuh. Pada kelompok perlakuan, limfosit mulai muncul pada hari

ketiga dengan jumlah yang lebih banyak dari kelompok kontrol,

64

kemudian mengalami peningkatan pada hari kelima, dan penurunan

pada hari ketujuh.

7.2 Saran

Berdasarkan hasil yang diperoleh pada penelitian ini maka diperlukan

penelitian yang lebih lanjut sebagai berikut:

1. Menambahkan hari pada time series, yaitu pada hari pertama pasca

pencabutan gigi.

2. Diperlukan sediaan lain (tidak berupa lendir murni) untuk pendekatan

aplikasi pada pengobatan manusia.

65

DAFTAR PUSTAKA

Adiyati, P. N. 2011. Ragam Jenis Ektoparasit pada Hewan Coba Tikus Putih. (Rattus norvegicus) Galur Sprague Dawley. Bogor: Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor.

Ajoy Kumar Ghosh et al. 2002. Inhibition by Acharan Sulphate of Angiogenesis in Experimental Inflammation Models. British Journal of Pharmacology, 137, 441-448

Alexandru, Iliuta. 2011. Experimental Use of Animals in Research Spa. Balneo–Research Journal, 2, 65-69

Anwari, J. S., S., Iqbal. 2003. Antihistamines and Potentiation of Opoid Induced Sedation and Respiratory Depression. Journal of the Association of Anaesthetists of Great Britain and Ireland, 58, 409-514.

Bappenas. (2000). Proyek Pengembangan Ekonomi Masyarakat Pedesaan. Jakarta: Kantor Deput Menegristek Bidang Pendayagunaan dan Pemasyarakatan Ilmu Pengetahuan dan Teknologi.

Barbul A, Lazarou SA, Efron DT, Wasserkrug HL, Efron G. 1990. Arginine Enhances Wound Healing and Lymphocyte Immune Responses in Humans.

Boyce DE, Jones WD, Ruge F. 2000 The Role of Lymphocytes in Human Dermal Wound Healing. Aidline national library or medicine. Jul; 143 (1): 59-65.

Christal G. Oroh, Damajanty H. C. Pangemanan, Christy N. Mintjelungan. 2015. Efektivitas Lendir Bekicot (Achatina Fulica) Terhadap Jumlah Sel Fibroblas Pada Luka Pasca Pencabutan Gigi Tikus Wistar. Jurnal e-Gigi, 3, 2, 515-520

Cooling, V. (2005). Risk Assessment of the Giant African Snail (Achatina fulica) Bowdich in New Zealand. LPSC 7700 Integrative Report. New Zealand.

Dajan, A. 1995. Pengantar Metode Statistik. Jilid I. Jakarta: Pustaka LP3ES Indonesia

Dewi, SP. 2010. Perbedaan Efek Pemberian Lendir Bekicot (Achatina fulica) dan Gel Bioplacenton terhadap Penyembuhan Luka Bersih pada Tikus Putih. Surakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret

66

Dorland. 1996. Dorland’s Illustrated Medical Dictionary. Disadur Tim Penerjemah

Eroschenko, Victor P. 2008. diFiore's Atlas of Histology with Functional Correlations, Eleventh Edition. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins.

Ganong, William F. 2003. Review of Medical Physiology 21st Edition. San Francisco: Lange Medical Publications.

Fitriani, Delvi. 2010. Secretory Leukoprotease Inhibitor Sebagai Kandidat Biomaterial Untuk Mencegah Resorbsi Kresta Alveolar Pasca Ekstraksi Gigi Pada Tikus Wistar. Thesis.Tidak diterbitkan, Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya, Malang.

Federer WT. 1963. Experimental Design. Nueva York: MacMillan.

Hammersen, F.M.D. 1993. “Histologie, Atlas der Mikroskopischen Anatomie”. Disadur Adrianto, P. Histologi Atlas Berwarna Anatomi Mikroskopik: Edisi Ketiga. Jakarta: EGC.

Harty, F.J dan R. Ongston. 1995. Concise Illustrated Dental Dictionary (1995). Disadur Sumawinata, N. Kamus Kedokteran Gigi. Jakarta: EGC.

Howe, Geoffrey L. 1999. Pencabutan Gigi Geligi. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC

Hupp, Edward. 2008. Essentials of Pathology for Dentistry. New York: Harcourt Publishers.

Johan van Neck, Bastiaan Tuk, Dennis B., Miao T. 2012. Heparan Sulfate Proteoglycan Mimetics Promote Tissue Regeneration: An Overview. Rotterdam: Departement of Plastic and Reconstructive Surgery University Medical Center

Lawler, W; Ahmed, A dan Hume, J. 2002. Essential Pathology for Dental Student. Disadur Djaya, A. Buku Pintar Patologi Untuk Kedokteran Gigi. Jakarta: EGC.

Muhartono, Hendra Tarigan Sibero, Bayu Putra D. 2014. Snail’s Slime as Alternative Hydrogel for Healing Burns Wound on Rats (Rattus norvegicus) Sprague Dawley Strain. Jurnal Kesehatan Unila, 4, 8, 144-150

67

Neehall, C. (2004). The Giant African Snail (Achatina fulica). Research divisio MALMR Trinidad and Tobago.

Notoatmodjo, S. 2010. Metodologi Penelitian Kesehatan. Jakata: Rineka Cipta

Olczyck, Pawel., Mencner, Lukasz., Komosinska-Vassev, Katarzyna. 2015. Diverse Roles of Heparan Sulfate and Heparin in Wound Repair. Hindawi Publishing Corporation BioMed Research International, 2015, 549147, 1-7.

Parish, Christopher R. 2006. The Role of Heparan Sulphate in Inflammation. Division of Immunology and Genetics, John Curtin School of Medical Research, Australian National University. Australia: Nature Publishing Group.

Parveen, Deng, Saeed, Dai, Ahamad & Yu. 2007. Antiinflamatory and Analgesic Activities of Thesium Chinense Turez Extracts and Its Mayor Flavonoids, Kaempferol and Kaempferol 3-O-Glucoside. Yakugaku Zasshi 127 (8).

Peterson, Larry. 2012. Principles of Oral and Maxillofacial Surgery 3rd Edition. New York: Elsevier.

Prasad, G. S., Singh, D. R., Senani, S., & Medhi, R. (2004). Ecofriendly way to keep away pestiferous Giant African Snail, Achatina fulica Bowdich from nursery. Current Science 87, 1657-1659.S. Dwi Sulistyowati, Meri Oktariani. 2015. Perbandingan Efektivitas Lendir Bekicot (Achatina fulica) dengan Kitosan Terhadap Penyembuhan Luka. Jurnal Kesmadaska, 104-110

Pratiwi, M. 2011. Efek Ekstrak Lerak (Sapindus rarak DC) Terhadap Penurunan Sel-Sel Radang Pada Tikus Wistar Jantan (Penelitian In Vivo). Paper Fakultas Kedokteran Universitan Sumatera Utara.

Purnasari PW, Fatmawati D, Yusuf I. Pengaruh Lendir Bekicot (Achatina fulica) terhadap Jumlah Sel Fibroblas pada Penyembuhan Luka Sayat. Sains Medika; 2012;4(2):195-203

Rajavel, Sivakumar, Jagadeeswaran & Malliaga. 2007. Evaluation of Analgesic and Antiinflammatory Activities of Oscillatoria Willei in Experimental Animal Models. Journal of medicinal plant research vol3 (7).

Reinke, J. M., Sorg, H. 2012. Wound Repair and Regeneration. European Surgical Research, 49, 35-43

68

Robbins, S. RS. dan Kumar, V. 2007. Basic Pathology. Disadur Staf Pengajar Laboratorium Patologi Klinik Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. Buku Ajar Patologi: Edisi 7. Jakarta: EGC.

Ross, M. H. dan Edward, J. R. 1985. Histology: A Text and Atlas. New York: J.B Lippincot Company.

Sabine A. Eming, Thomas Krieg, Jeffrey M. Davidson. 2007. Inflammation in Wound Repair: Molecular and Celullar Mechanism. Journal of Investigative Dermatology, 2007, 127, 514-525

Santoso, S. 2004. Buku Statistik Multivariat. Jakarta: Penerbit PT Elex Media Komputindo

Santoso, S. & Tjiptono, F, 2002, Riset Pemasaran Konsep&Aplikasi Dengan SPSS, Jakarta: Penerbit PT Elex Media Komputindo

Saraf, Sanjay. 2006. Text Book of Oral Pathology: First Edition. New Delhi: Jaypee Brother Medical Publisher Ltd.

Setianingtyas Dwi. 2012. Pengaruh Pemberian Ekstrak Ganggang Coklat (Phaeophyceae) Jenis Sargasum sp. Terhadap Jumlah Limfosit Pada Ulkus Traumatikus. Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Hang Tuah Surabaya.

Subowo. 2006. Bahan Ajar Histologi FKG Unpad: Histologi Darah. Sumedang: Departemen Histologi FKG Unpad.

Sirois. 2005. Laboratory Animal Medicine: Principles and Procedures. USA: Elsevier.

Tjokronegoro A, Utama. 2004. Metodologi Penelitian Bidang Kedokteran Cetakan III. Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia

Turgeon, D. D., Bogan, A. E., Coan, E. V., Emerson, W. K., Lyons, W. G., & Pratt, W. (2015, November 29). Achatina Fulica. Retrieved November 30, 2015, from IT IS Report: http://www.itis.gov/servlet/SingleRpt/SingleRpt?search_topic=TSN&sear ch_value=76978

pengaruh lendir bekicot (achatina fulicarepository.ub.ac.id/3147/1/riyani, nadya jeihan.pdf ·...

Documents