pengaruh air rebusan daun insulin (tithonia · pdf fileselama perkuliahan, penelitian, dan...

PENGARUH AIR REBUSAN DAUN INSULIN (Tithonia diversifolia

(Hemsl.) A. Gray) TERHADAP KADAR GLUKOSA DARAH TIKUS

JANTAN GALUR WISTAR YANG TERBEBANI GLUKOSA

SKRIPSI

Diajukan Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Mila Karmila Sri Setiomulyo

NIM: 128114039

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

PENGARUH AIR REBUSAN DAUN INSULIN (Tithonia diversifolia

(Hemsl.) A. Gray) TERHADAP KADAR GLUKOSA DARAH TIKUS

JANTAN GALUR WISTAR YANG TERBEBANI GLUKOSA

SKRIPSI

Diajukan Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Mila Karmila Sri Setiomulyo

NIM: 128114039

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016


ii

Persetujuan Pembimbing


iii

Pengesahan Skripsi Berjudul


iv

PERSEMBAHAN

Karya ini kupersembahkan untuk

Keluargaku tercinta

Teman-temanku

Almamaterku


v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH

UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS


vi

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA


vii

PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas

berkat dan rahmat-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang

berjudul “Pengaruh Air Rebusan Daun Insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A.

Gray) Terhadap Kadar Glukosa Tikus Jantan Galur Wistar yang Terbebani

Glukosa”. Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Farmasi (S.Farm).

Selama perkuliahan, penelitian, dan penyusunan skripsi, penulis banyak

mendapat bantuan dari berbagai pihak berupa bimbingan, sarana, dukungan,

semangat, doa, kritik dan saran. Oleh karena itu, penulis ingin menyampaikan

terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :

1. Ibu Yunita Linawati, S.Si., M.Sc., Apt. selaku Dosen Pembimbing yang

telah banyak meluangkan waktu, membimbing, dan memberi masukan,

solusi, nasehat serta semangat kepada penulis selama penelitian dan

penyusunan skripsi. Terima kasih untuk pengetahuan, pengalaman, dan

berbagai hal yang dibagikan kepada penulis.

2. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Apt., Ph.D. selaku Dosen Penguji yang telah

bersedia meluangkan waktu untuk menguji, memberikan masukan, kritik

dan saran kepada penulis.

3. Bapak Christianus Heru Setiawan, M.Sc., Apt. Selaku Dosen Penguji yang

telah bersedia meluangkan waktu untuk menguji, memberikan kritik dan

saran yang membangun.


viii

4. Ibu Agustina Setiawati, M.Sc., Apt. selaku Kepala Laboratorium Farmasi

yang telah memberikan ijin penggunaan semua fasilitas laboratorium guna

penelitian skripsi ini.

5. Bapak Enade Perdana Istyastono, Ph.D., Apt., selaku Dosen Pembimbing

Akademik atas bimbingan dan semangat selama perkuliahan hingga

penyusunan skripsi ini.

6. Segenap dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma atas segala

bimbingan selama perkuliahan.

7. Bapak Heru, Bapak Kayat, Bapak Parjiman dan semua staf laboratorium

yang telah bersedia membantu selama penelitian ini berlangsung.

8. Papa dan Mama tercinta yang telah memberikan pehatian, semangat,

dukungan, dan doa selama penyusunan skripsi ini.

9. Lia Natalia Setiomulyo, S.Farm., Apt dan Nia Aprinia Setiomulyo atas

dukungan,semangat, dan masukan yang telah diberikan kepada penulis.

10. Bapak Sie Mun Ding yang telah memberikan informasi adanya daun

Insulin.

11. Bapak Ir. Tjahjono Indrawan dan Ibu drh. Lianasari, atas masukan yang

telah diberikan kepada penulis.

12. Maria Magdalena Lita atas semangat dan waktu yang selalu ada untuk

mendengarkan curahan hati penulis.

13. Januaritha Dara Nastiandari dan Ludwina Dearesthea Onevita sebagai

teman satu tim, atas bantuan dan kerjasamanya.


ix

14. Eunike Lystia Florentein Kelana Jeversoon, Paulina Nugraheni Ageng

Prihanti, Christina Ari Listyani, Dewi Anugerah Fitriyani atas semangat

yang telah diberikan selama penyusunan skripsi ini.

15. Teman-teman FST 2012, Kelas A 2012, dan KKN L kelompok 16.

Terimakasih atas kebersamaan yang tidak akan terlupakan dan suka duka

yang pernah kita alami.

16. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu per satu, terima kasih atas

semua bantuan yang telah diberikan kepada penulis.

Penulis menyadari bahwa penelitian dan penulisan skripsi ini masih

banyak kekurangan,mengingat keterbatasan pengetahuan dan kemampuan penulis.

Oleh karena itu, penulis mengharapkan saran dan kritik membangun dari berbagai

pihak. Akhir kata, semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi perkembangan ilmu

pengetahuan.

Yogyakarta,

penulis


x

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ............................................................................... i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ........................................ ii

HALAMAN PENGESAHAN .................................................................. iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................... iv

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ..................... v

PERNYATAAN KEASLIAN PENELITIAN ........................................... vi

PRAKATA .............................................................................................. vii

DAFTAR ISI ........................................................................................... x

DAFTAR TABEL ................................................................................... xiv

DAFTAR GAMBAR ............................................................................... xv

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................ xvi

INTISARI ................................................................................................ xvii

ABSTRACT .............................................................................................. xviii

BAB I PENGANTAR .............................................................................. 1

A. Latar Belakang................................................................................. 1

1. Permasalahan............................................................................... 3

2. Keaslian Penelitian...................................................................... 3

3. Manfaat Penelitian....................................................................... 4

B. Tujuan Penelitian.............................................................................. 4

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA.......................................................... 6

A. Diabetes Mellitus.............................................................................. 6

1. Definisi......................................................................................... 6

2. Klasifikasi..................................................................................... 6


xi

3. Tanda dan Gejala.......................................................................... 8

4. Diagnosa....................................................................................... 9

B. Metabolisme Karbohidrat................................................................. 9

C. Glibenklamid.................................................................................... 13

D. Metode Uji Efek Antidiabetes.......................................................... 14

1. Metode Uji Toleransi Glukosa Oral............................................. 14

2. Metode Uji dengan Merusak Pankreas......................................... 14

E. Metode Pemeriksaan Kadar Glukosa Darah..................................... 15

1. Metode Reduksi-Oksidasi............................................................ 15

2. Metode Kondensasi....................................................................... 15

3. Metode Enzimatik......................................................................... 15

F. Daun Insulin ..................................................................................... 16

1. Uraian Tanaman............................................................................ 16

2. Taksonomi.................................................................................... 17

3. Kandungan Tanaman.................................................................... 17

G. Landasan Teori.................................................................................. 18

H. Hipotesis............................................................................................ 18

BAB III METODE PENELITIAN............................................................... 19

A. Jenis dan Rancangan Penelitian......................................................... 19

B. Variabel dan Definisi Operasional..................................................... 19

1. Variabel Utama.............................................................................. 19

2. Variabel Pengacau......................................................................... 20

3. Definisi Operasional........................................................................... 20


xii

C. Bahan dan Alat Penelitian....................................................................... 21

1. Bahan Penelitian................................................................................. 21

2. Alat Penelitian.................................................................................... 22

D. Tata Cara Penelitian................................................................................ 23

1. Determinasi Tanaman.......................................................................... 23

2. Pengumpulan Bahan Uji...................................................................... 23

3. Pembuatan Air Rebusan Daun Insulin................................................. 23

4. Perhitungan Dosis Pemberian Air Rebusan Daun Insulin................... 23

5. Preparasi Bahan................................................................................... 24

6. Orientasi Waktu Pemberian Glibenklamid.......................................... 25

7. Orientasi Dosis Pemberian Air Rebusan Daun Insulin....................... 26

8. Penetapan Waktu Pemberian Air Rebusan Daun Insulin.................... 27

9. Tahap Percobaan................................................................................. 27

10. Penetapan Kadar Glukosa Darah dengan Metode GOD-PAP......... 29

E. Tata Cara Analisis Hasil.......................................................................... 30

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN............................................................ 31

A. Hasil Determinasi Tanaman..................................................................... 31

B. Hasil Percobaan Pendahuluan.................................................................. 31

1. Penetapan Waktu Pemberian Glibenklamid........................................ 31

2. Penetapan Dosis Sediaan Air Rebusan Daun Insulin.......................... 33

C. Efek Penurunan Kadar Glukosa Darah Air Rebusan Daun Insulin......... 34

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN............................................................. 43

A. Kesimpulan.............................................................................................. 43


xiii

B. Saran........................................................................................................ 43

DAFTAR PUSTAKA......................................................................................... 44

LAMPIRAN....................................................................................................... 48

BIOGRAFI PENULIS....................................................................................... 70


xiv

DAFTAR TABEL

Tabel I. Kadar Glukosa Darah Sewaktu dan Puasa sebagai Patokan Penyaring

dan Diagnosis Diabetes Mellitus (mg/dL) ...................................... 9

Tabel II. Isi Pereaksi Enzim Glucose GOD-PAP ......................................... 21

Tabel III. Volume Pengukuran Kadar Glukosa Darah.................................. 29

Tabel IV. Perhitungan Selisih LDDK0-240

Suspensi Glibenklamid Sebelum

UTGO dengan Kontrol CMC ........................................................ 32

Tabel V. Rerata Kadar Glukosa Darah dan LDDK0-240

Setiap Perlakuan...... 36

Tabel VI. Hasil Post Hoc Scheffe LDDK0-240

Kadar Glukosa ..................... 39

Darah Tikus Terbebani Glukosa


xv

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Mekanisme Sekresi Insulin ........................................................ 11

Gambar 2. Struktur Glibenklamid ............................................................... 13

Gambar 3. Tanaman Insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) ......... 16

Gambar 4. Skema Penelitian ....................................................................... 27

Gambar 5. Diagram LDDK0-240

Glibenklamid Sebelum UTGO ................... 33

Gambar 6. Reaksi Enzimatik Antara Glukosa dengan Reagen GOD-PAP ... 35

Gambar 7. Kurva Hubungan Antara Waktu dengan Kadar Glukosa Darah .. 37


xvi

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat Keterangan Kelaikan Etik (Ethical Clearance) ................. 49

Lampiran 2. Surat Pengesahan Determinasi .................................................. 50

Lampiran 3. Foto Tanaman Insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) . 51

Lampiran 4. Foto Hewan Uji Tikus Jantan Galur Wistar ............................... 52

Lampiran 5. Foto Alat Penelitian................................................................... 53

Lampiran 6. Preparasi Bahan Perlakuan ........................................................ 54

Lampiran 7. Perhitungan Penetapan Peringkat Dosis Air Rebusan Daun

Insulin pada Kelompok Perlakuan ............................................ 56

Lampiran 8. Analisis Statistik Data LDDK0-240

Penetapan Waktu Pemberian

Glibenklamida Menggunakan SPSS 15 ..................................... 58


Orientasi Dosis Pemberian

Air Rebusan Daun Insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A.

Gray) Menggunakan SPSS 15.................................................. 60


Efek Penurunan Kadar

Glukosa Darah Air Rebusan Daun Insulin (Tithonia diversifolia

(Hemsl.) A. Gray) Menggunakan SPSS 15 .............................. 63

Lampiran 11. Leaflet Glibenklamid............................................................... 66

Lampiran 12. GOD-PAP ............................................................................... 68


xvii

INTISARI

Diabetes mellitus (DM) adalah penyakit metabolik dengan karakteristik

hiperglikemia karena kelainan insulin. Penderita DM setiap tahun terus

meningkat. Pengobatan secara tradisional banyak ditempuh, salah satunya dengan

menggunakan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) untuk

menurunkan kadar glukosa darah. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui

pengaruh air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray)

terhadap kadar glukosa tikus jantan galur wistar yang terbebani glukosa.

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni rancangan acak

lengkap pola searah dengan menggunakan 30 ekor tikus jantan galur Wistar dan

dibagi menjadi enam kelompok. Kelompok I (kontrol normal) CMC 1%,

kelompok II (kontrol positif) glibenklamid 0,45mg/kgBB, kelompok III (kontrol

negatif) glukosa 15% b/v; 1,75g/kgBB, kelompok IV, V, dan VI (perlakuan) air

rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis 630, 1373,

dan 3000 mg/kgBB. Pemberian pada tikus secara oral dan diuji dengan metode

Uji Toleransi Glukosa Oral (UTGO). Kadar glukosa darah ditetapkan pada menit

ke - 0, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 180, dan 240 dengan metode enzimatis GOD-PAP.

Data LDDK0-240

tiap kelompok dianalisis secara statistik menggunakan metode

One Way ANOVA dan uji Post-Hoc Scheffe bertaraf kepercayaan 95%.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa air rebusan daun insulin (Tithonia

diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dapat menurunkan kadar glukosa darah pada tikus

yang terbebani glukosa. Dosis air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia

(Hemsl.) A. Gray) yang dapat menurunkan kadar glukosa darah yaitu 1373

mg/KgBB dan 3000 mg/KgBB.

Kata Kunci : air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray),

glukosa darah, UTGO, GOD-PAP.


xviii

ABSTRAK

Diabetes mellitus (DM) is a metabolic diseases with characteristic

hyperglycemia due to insulin abnormalities. Patients DM continues to increase

every year. Traditional medicine widely taken, one of which is by using insulin

leaves (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) to lower blood glucose levels.

This study was conducted to determine the effect of boiled water of the leaves

insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) against glucose levels Wistar

strain male rats burdened glucose.

This study is a purely experimental randomized complete design with a

unidirectional pattern using 30 Wistar male rats and divided into six groups.

Group I (normal control) CMC 1%, group II (positive control) glibenclamide

0.45mg/kgBW, group III (negative control) Glucose 15% w/v; 1.75g/KgBW,

group IV, V, and VI (treated) boiled water of the leaves insulin (Tithonia

diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dose of 630, 1373, and 3000 mg/kgBW. Giving the

rats administered orally and tested methods Oral Glucose Tolerance Test

(UTGO). Blood glucose levels are set in minutes - 0, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 180,

and 240 by the enzymatic method GOD-PAP. LDDK0-240

each group were

statistically analyzed using One Way ANOVA and Post-Hoc Scheffe 95%

confidence level.

The results showed that the boiled water of the leaves insulin (Tithonia

diversifolia (Hemsl.) A. Gray) can lower blood glucose levels on rats in burdened

glucose. Dosage boiled water leaves insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A.

Gray) to lower blood glucose levels are 1373 mg/KgBW and 3000 mg/KgBW.

Keywords: boiled water of the leaves insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A.

Gray), blood glucose, UTGO, GOD-PAP.


1

BAB I

PENGANTAR

A. Latar Belakang

Diabetes mellitus (DM) merupakan permasalahan kesehatan serius di

seluruh dunia. Jumlah penduduk di dunia yang menderita DM cenderung

meningkat dari tahun ke tahun. Menurut WHO (2014), 347 juta orang di seluruh

dunia mengidap DM. DM merupakan penyebab langsung dari 1,5 juta kematian di

tahun 2012. Lebih dari 80% kematian karena DM terjadi di negara berpenghasilan

rendah dan menengah. WHO memproyeksikan bahwa DM akan menjadi 7

penyebab kematian utama pada tahun 2030. Di Indonesia, kekerapan DM berkisar

antara 1,4 - 1,6%, prevalensi DM diperkirakan mencapai 21,3 juta orang pada

tahun 2030.

DM adalah suatu kelompok penyakit metabolik dengan karakteristik

hiperglikemia yang terjadi karena kelainan sekresi insulin, kerja insulin, atau

kedua-duanya. DM dibagi menjadi 4 jenis yaitu DM tipe 1, DM tipe 2, DM tipe

lain, dan DM gestasional. Penatalaksanaan DM yaitu latihan jasmani dan terapi

farmakologis. Terapi farmakologis terdiri dari obat oral dan bentuk suntikan

(American Diabetes Association, 2011).

Kekurangan dari terapi obat oral maupun suntikan yaitu harga obat yang

tidak murah dan memiliki efek samping. Oleh karena itu, banyak digunakan obat

tradisional untuk mengobati DM. Obat tradisional adalah obat yang dibuat dengan

menggunakan bahan-bahan alami seperti tumbuhan sebagai bahan dasar obat.


2

Biasanya obat tradisional diolah dengan cara direbus, ditumbuk, atau dicampur

sesama bahan tradisional dengan komposisi tertentu (Rahmawati, 2013). Obat

tradisional banyak digunakan oleh masyarakat Indonesia dalam pengobatan,

contohnya yaitu air rebusan daun insulin yang digunakan untuk mengobati DM.

Tanaman ini memiliki nama ilmiah Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray.

Berasal dari Meksiko, daun insulin di kalangan orang Jawa dikenal dengan rondo

semoyo, kembang bulan atau kayu paik, kipait dan harsaga (Didik dan

Sulistijowati, 2001). Menurut penelitian yang dilakukan oleh Miura et al. (2005)

diketahui bahwa ekstrak etanol 80% daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.)

A. Gray) dosis 100, 500, dan 1500 mg/kgBB dapat menurunkan kadar glukosa

darah pada tikus model DM tipe 2 secara signifikan setelah 7 jam pemberian.

Berdasarkan penelitian oleh Thongsom et al. (2013) menunjukkan bahwa ekstrak

air daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis 500mg/kgBB dapat

menurunkan kadar glukosa darah pada tikus dengan metode Uji Toleransi

Glukosa Oral (UTGO) dan metode induksi aloksan. Menurut Prasetyo (2016)

penelitian infusa daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis 250,

500, dan 750 mg/kgBB dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus yang

diinduksi aloksan.

Daun insulin memiliki kandungan flavonoid, glikosida, saponin, dan tanin

(Purba, 2003). Mekanisme kerja saponin yaitu dengan menghambat GLUT-1

sehingga menurunkan absorbsi glukosa (Blasiak et al., 2003). Flavonoid pada DM

dapat menghindari absorpsi gula, menstimulasi pengambilan glukosa pada


3

jaringan perifer, juga dapat bertindak seperti insulin dengan cara mempengaruhi

mekanisme insulin signaling (Getha, 2010). Tanin dapat memacu metabolisme

glukosa dan lemak, sehingga timbunan dari kedua sumber kalori ini dapat

dihindari. Tanin juga memiliki aktivitas hipoglikemik dengan meningkatkan

glikogenesis (Dalimartha, 2005).

1. Permasalahan

Berdasarkan latar belakang tersebut, maka dapat dirumuskan masalah

sebagai berikut :

a. Apakah air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A.

Gray) dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus jantan galur Wistar yang

terbebani glukosa?

b. Berapakah dosis air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia

(Hemsl.) A. Gray) yang dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus jantan galur

Wistar yang terbebani glukosa?

2. Keaslian Penelitian

Penelitian tentang daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray)

yang pernah dilakukan yaitu oleh Miura et al. (2005) yang berjudul “Antidiabetic

effect of Nitobegiku, the herb Tithonia diversifolia, in KK-Ay diabetic mice”,

Thongsom et al. (2013) yang berjudul “Antioxidant and Hypoglycemic Effect of

Tithonia diversifolia Aqueous Leaves Extract in Alloxan-Induced Diabetic Mice”,

dan Prasetyo (2016) yang berjudul “Perbandingan Efek Hipoglikemik Infusa

Daun Kembang Bulan (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dan Metformin


4

pada Tikus yang Diinduksi Aloksan”. Perbedaan dengan penelitian ini adalah

bentuk sediaan yang digunakan, yaitu menggunakan air rebusan daun insulin.

Sejauh ini penelusuran pustaka terkait dengan penelitian mengenai

pengaruh air rebusan daun insulin belum pernah dilakukan.

3. Manfaat Penelitian

a. Manfaat Teoritis

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah mengenai air

rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) sebagai obat

tradisional yang berkhasiat menurunkan kadar glukosa darah.

b. Manfaat Praktis

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi dan menambah

wawasan kepada masyarakat pada umumnya dan khususnya bagi penderita DM

mengenai penggunaan air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A.

Gray) untuk menurunkan kadar glukosa darah.

B. Tujuan Penelitian

1. Tujuan Umum

Tujuan penelitian ini secara umum yaitu mengetahui pengaruh pemberian air

rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) terhadap kadar

glukosa darah.


5

2. Tujuan Khusus

Tujuan khusus dari penelitian ini, yaitu :

a. Mengetahui pengaruh pemberian air rebusan daun insulin (Tithonia

diversifolia (Hemsl.) A. Gray) terhadap penurunan kadar glukosa tikus jantan

galur Wistar yang terbebani glukosa.

b. Mengetahui dosis air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.)

A. Gray) yang dapat menurunkan kadar glukosa tikus jantan galur Wistar yang

terbebani glukosa.


6

BAB II

PENELAAHAN PUSTAKA

A. Diabetes Mellitus

1. Definisi

Diabetes Mellitus (DM) adalah suatu kelompok penyakit metabolik

dengan karakteristik hiperglikemia yang terjadi karena kelainan sekresi insulin,

gangguan kerja insulin, atau keduanya, yang menimbulkan berbagai komplikasi

kronik pada mata, ginjal, saraf, dan pembuluh darah (PERKENI, 2011). Menurut

American Diabetes Association (2015), DM merupakan suatu penyakit kronis

kompleks yang membutuhkan perawatan medis yang lama atau terus menerus

dengan cara mengendalikan kadar gula darah untuk mengurangi risiko

multifaktoral.

2. Klasifikasi

Klasifikasi DM yaitu DM tipe 1, DM tipe 2, DM tipe lain, dan DM

gestasional (American Diabetes Association, 2015).

a. DM tipe 1

DM tipe 1 terjadi karena adanya destruksi sel beta pankreas yang

disebabkan oleh autoimun. DM tipe ini terdapat sedikit atau tidak sama sekali

sekresi insulin yang dapat ditentukan dengan level protein c-peptida yang

jumlahnya sedikit atau tidak terdeteksi sama sekali. Manifestasi klinik pertama

dari penyakit ini yaitu ketoasidosis (American Diabetes Association, 2015).


7

Adanya gangguan katabolisme pada penderita DM tipe 1, dimana tidak

terdapatnya insulin dalam sirkulasi, meningkatnya glukagon plasma, dan gagalnya

sel-sel beta pankreas merespon semua stimulus insulinogenik, maka diperlukan

terapi dengan menggunakan insulin untuk mencegah ketosis dan menurunkan

peningkatan kadar glukosa darah (Katzung, 2002).

b. DM tipe 2

DM tipe ini terjadi hiperinsulinemia namun insulin tidak dapat membawa

glukosa masuk ke dalam jaringan karena terjadi resistensi insulin yang merupakan

turunnya kemampuan insulin untuk merangsang pengambilan glukosa oleh

jaringan perifer dan untuk menghambat produksi glukosa oleh hati. Oleh karena

terjadinya resistensi insulin maka mengakibatkan defisiensi relatif insulin. Hal ini

dapat mengakibatkan berkurangnya sekresi insulin sehingga sel beta pankreas

akan mengalami desensitisasi terhadap adanya glukosa. Onset DM tipe 2 terjadi

secara perlahan karena merupakan gejala asimtomatik. Adanya resistensi perlahan

akan mengakibatkan sensitivitas reseptor terhadap glukosa berkurang. DM tipe ini

biasanya terdiagnosis setelah terjadinya komplikasi (American Diabetes

Association, 2015).

c. DM tipe lain

DM tipe lain berkaitan dengan penyakit lain seperti, penyakit eksokrin

pankreas, defek genetik fungsi sel beta, defek genetik fungsi insulin,

endokrinopati, infeksi, imunologi, dan sindrom genetik (American Diabetes

Association, 2015).


8

d. DM Gestasional

DM tipe ini terjadi selama masa kehamilan, dimana intoleransi glukosa

didapati pertama kali pada masa kehamilan, biasanya pada trimester kedua dan

ketiga. DM gestasional berhubungan dengan meningkatnya komplikasi perinatal.

Penderita DM gestasional memiliki risiko lebih besar untuk menderita DM yang

menetap dalam jangka waktu 5-10 tahun setelah melahirkan (American Diabetes

Association, 2015).

3. Tanda dan Gejala

DM merupakan suatu sindrom yang ditandai oleh poliuria, polidipsia, dan

polifagia. Kondisi hiperglikemia dalam waktu lama akan terjadi glukosuria,

dimana reabsorbsi glukosa pada tubulus ginjal melebihi batas maksimal dan

glukosa diekskresikan dalam urin. Poliuria (volume urine meningkat) karena

terjadinya diuresis osmotik yang menyebabkan dehidrasi pada penderita DM,

sehingga tubuh berusaha mengatasi dengan banyak minum (polidipsia). Polifagia

(banyak makan) karena katabolisme protein dan lemak. Selain menyebabkan

polifagia, hal ini dapat menyebabkan kelemahan otot dan rasa lelah (Corwin,

2008).


9

4. Diagnosa

Berdasarkan PERKENI (2011), seseorang dinyatakan DM apabila

memiliki kadar glukosa darah seperti pada Tabel I.

Tabel I. Kadar Glukosa Darah Sewaktu dan Puasa Sebagai Patokan

Penyaring dan Diagnosis Diabetes Melitus (mg/dL) (PERKENI, 2011)

Bukan DM Belum pasti DM DM

Kadar glukosa

darah sewaktu

(mg/dL)

<100 100-199 ≥200

Kadar glukosa

darah puasa

(mg/dL)

<100 100-125 ≥126

B. Metabolisme Karbohidrat

Sumber energi terbesar pada manusia berasal dari karbohidrat. Karbohidrat

dari makanan dirombak diusus halus dan diubah menjadi glukosa, kemudian

dilepaskan ke aliran darah dan diangkut ke sel tubuh (Tjay dan Raharja, 2002).

Karbohidrat merupakan komponen utama dalam makanan yang menjadi sumber

energi utama bagi tubuh. Karbohidrat mengalami proses hidrolisis baik di mulut,

lambung, ataupun usus saat proses pencernaan. Hasil akhir dari pencernaan

tersebut yakni glukosa, fruktosa, galaktosa, dan manosa serta monosakarida

lainnya. Senyawa ini diabsorbsi melalui dinding usus lalu dibawa ke hati oleh

darah (Poedjiadi, 2006).

Glukosa hasil dari pencernaan tubuh merupakan bahan untuk proses

glikolisis, karena glukosa terdapat dalam jumlah banyak dibandingkan


10

monosakarida yang lain. Apabila jumlah glukosa berlebih maka akan disimpan

dengan diubah menjadi glukagon dalam hati dan jaringan otot, proses ini disebut

dengan glikogenesis. Glikogen juga dapat dibentuk dari asam laktat yang

dihasilkan pada proses glikolisis (Poedjiadi,2006).

Melalui proses kimiawi glukosa dan glikogen diubah menjadi asam

piruvat. Asam piruvat yaitu zat yang penting dalam metabolisme karbohidrat.

Asam piruvat selanjutnya akan diproses dalam siklus krebs dan dihasilkan CO2

dan H2O serta energi dalam ATP (Adenosine Triphosphate) yang juga berubah

menjadi ADP (Adenosin Diphosphate). Beberapa dari asam piruvat akan diubah

menjadi asam laktat dan akan masuk ke dalam hepar. Dalam hepar asam laktat

akan kembali berubah menjadi asam piruvat lalu menghasilkan energi

(Hutagalung, 2004).

Metabolisme karbohidrat selain dipengaruhi oleh enzim juga dipengaruhi

oleh hormon yaitu hormon insulin. Hormon insulin dihasilkan oleh pulau

langerhans dan berperan mempercepat oksidasi glukosa dalam jaringan,

merangsang perubahan glukosa menjadi glikogen dalam sel hepar dan otot. Hal

ini terjadi apabila kadar glukosa darah meninggi. Insulin juga merangsang

glukoneogenesis yaitu mengubah lemak atau protein menjadi glukosa

(Hutagalung, 2004).

Sekresi insulin (Gambar 1) oleh sel beta tergantung oleh 3 faktor utama

yaitu kadar glukosa darah, ATP-sensitive K-channels dan Voltage-sensitive

Calcium Channels sel beta pankreas. Kadar glukosa darah akan meningkat setelah


11

makan dan kemudian ditangkap oleh sel beta melalui glucose transporter 2

(GLUT 2) dan dibawa ke dalam sel. Di dalam sel, glukosa akan mengalami

fosforilase menjadi glukosa-6-fosfat (G6P) dengan bantuan enzim glukokinase.

Glukosa-6-fosfat kemudian mengalami glikolisis menjadi asam piruvat. Proses

glikolisis menghasilkan produk 6-8 ATP. Penambahan ATP meningkatkan rasio

ATP/ADP dan menutup kanal kalium. Penumpukan kalium dalam sel

mengakibatkan depolarisasi membran sel sehingga membuka kanal kalsium dan

kalsium akan masuk ke dalam sel dan insulin dilepaskan ke dalam sel (Marentek,

2006).

Gambar 1. Mekanisme Sekresi Insulin (Kasper et al., 2005)

Tanpa adanya hormon insulin, setelah makan kadar glukosa akan

meningkat dan sebaliknya kadar glukosa darah bisa sangat rendah, untuk

mencegah perubahan-perubahan tersebut maka tubuh meregulasi glukosa dengan


12

menggunakan hormon insulin dan glukagon. Setelah makan homon insulin akan

disekresikan oleh sel β pulau langerhans pankreas. Sekresi insulin ini berlangsung

dalam 2 fase. Fase I kadar insulin sangat tinggi terjadi 10 menit setelah kenaikan

glukosa darah dan dimungkinkan adanya insulin dalam granula. Fase II

berlangsung lebih dari 10 menit sampai 2 jam. Satu jam pertama setelah makan

kadar glukosa darah meningkat, namun setelah 2 jam kadar glukosa darah kembali

normal karena pengaruh insulin ( Hutagalung, 2004).

Hormon insulin meningkatkan glikolisis sel hati dengan meningkatkan

aktivitas enzim glukokinase, fosfofruktokinase, dan piruvat kinase. Meningkatnya

glikolisis akan meningkatkan penggunaan glukosa sehingga glukosa yang terlepas

ke plasma darah menurun. Insulin juga menurunkan aktivitas glukosa-6-fosfat

untuk mencegah penumpukan glukosa-6-fosfat yang memicu DM (King, 2007).

Konsentrasi glukosa darah manusia normal yaitu antara 80 dan

100mg/100ml, setelah makan sumber karbohidrat dapat meningkat menjadi 120-

130mg/100ml, lalu turun kembali dalam keadaan normal. Namun dalam keadaan

puasa konsentrasi glukosa dapat menurun hingga 60-70mg/100ml. Kondisi

dimana kadar glukosa darah lebih tinggi dari normal disebut hiperglikemia dan

kondisi dimana glukosa darah lebih rendah dari normal disebut hipoglikemia.

Dalam kondisi hiperglikemia maka sebagian glukosa akan dikeluarkan melalui

urin (Poedjiadi, 2006).


13

C. Glibenklamid

Gambar 2. Struktur glibenklamid (Departemen Kesehatan RI, 1995)

Glibenklamid (Gambar 2) merupakan obat antidiabetik golongan

sulfonilurea yang sukar larut dalam air dan mudah larut dalam alkohol.

Glibenklamid dapat terabsorbsi dengan cepat dan baik setelah diberikan secara

oral. Glibenklamid diberikan dalam dosis tunggal, dosis sehari 5-20 mg

(Ganiswarna, 1995).

Glibenklamid adalah obat hipoglikemik oral untuk mengobati DM tipe 2.

Mekanisme kerja glibenklamid yaitu merangsang sekresi hormon insulin pada sel

beta pankreas. Interaksi dengan ATP-sensitive K channel pada sel beta

menyebabkan depolarisasi membran sehingga kanal Ca akan terbuka. Terbukanya

kanal Ca, menyebabkan ion Ca2+

masuk ke dalam sel beta yang kemudian

merangsang granula yang berisi insulin dan akan terjadi sekresi insulin

(Suherman, 2007). Glibenklamid dimetabolisme dalam hati menjadi produk yang

memiliki aktifitas rendah, hanya 25% metabolit disekresi dan sisanya diekskresi

melalui empedu dan tinja (Handoko dan Suharto, 2003).

Glibenklamid efektif jika diminum 30 menit sebelum makan. Obat ini

mudah diserap dalam saluran pencernaan dan memiliki waktu paruh sekitar 4 jam.

Meskipun waktu paruhnya pendek hanya sekitar 4 jam, namun efek


14

hipoglikemiknya dapat mencapai 12 hingga 24 jam sehingga cukup diberikan satu

kali sehari. Penggunaan glibenklamid pada dosis besar atau pada jangka waktu

yang panjang dapat menyebabkan hipoglikemia (Suherman, 2007).

D. Metode Uji Efek Antidiabetes

Uji efek anti diabetes dapat dilakukan dengan dua metode yaitu :

a. Metode Uji Toleransi Glukosa Oral

Prinsip uji toleransi glukosa oral yaitu hewan uji dipuasakan selama 16-20

jam dan tetap diberi minum, kemudian diambil cuplikan darah sebagai kadar

glukosa awal dan dilanjutkan dengan diberikan sediaan obat secara oral. Hewan

uji diberikan larutan glukosa secara oral 30 menit setelah pemberian sediaan obat.

Pengambilan cuplikan darah diulangi pada waktu-waktu yang telah ditentukan

(Etuk, 2010).

b. Metode Uji dengan Merusak Pankreas

Metode ini dilakukan dengan pemberian diabetogen yang dapat merusak

pankreas hewan uji sehingga pankreas rusak, tidak dapat menghasilkan hormon

insulin dan memiliki kondisi sama seperti penderita DM (Permatasari, 2008).

Prinsip metode ini yaitu dengan memberikan diabetogen seperti aloksan secara

parenteral. Pemberian zat uji dilakukan delapan hari setelah pemberian aloksan

(Szkudelski, 2008).


15

E. Metode Pemeriksaan Kadar Glukosa Darah

Pemeriksaan kadar glukosa darah dapat ditentukan dengan tiga macam

metode, yakni :

a. Metode reduksi-oksidasi

Pengukuran glukosa berdasarkan pada sifatnya sebagai zat pereduksi

dalam larutan alkali panas. Metode ini kurang spesifik karena adanya zat-zat non

glukosa lainnya yang bersifat mereduksi (Roche, 2009).

b. Metode kondensasi

Prinsip dari metode ini yaitu protein yang terdapat dalam darah

diendapkan dengan asam trikloroasetat terlebih dahulu, kemudian di sentrifugasi

untuk memisahkan antara supernatan dengan endapan. Glukosa yang terdapat

dalam supernatan direaksikan dengan o-toluidin (Dubowsky, 2008).

c. Metode enzimatik

Dasar dari metode GOD-PAP yaitu glukosa dioksidasi oleh oksigen

dengan katalis enzim glukosa oksidase (GOD) yang kemudian akan membentuk

asam glukonik dan hidrogen peroksida (H2O2). Hidrogen peroksida akan bereaksi

dengan 4-aminoantipirin dan fenol dengan katalis peroksidase (POD) membentuk

quinonimin dan air. Quinonimin inilah yang menjadi indikator menunjukkan

kadar glukosa dalam darah (Barham dan Trinder, 1972).


16

F. Daun Insulin

Gambar 3. Tanaman insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray)

1. Uraian Tanaman

Tanaman insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) (Gambar 3) atau

yang sering dikenal dengan nama rondo semoyo, harsaga, kirinyu, atau kayu paik

(Didik dan Sulistijowati, 2001). Tanaman insulin merupakan tumbuhan perdu

tegak dan memiliki tinggi lebih kurang ± 5 meter. Batang dari tumbuhan ini

berkayu hijau, daunnya tunggal, dan warna daun berwarna hijau. Bunga tumbuhan

ini merupakan bunga majemuk (Hutapea, 1994).


17

2. Taksonomi

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Sub Divisi : Angiospermae

Kelas : Dicotyledoneae

Ordo : Asterales

Famili : Asteraceae

Genus : Tithonia

Spesies : Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray (Hutapea, 1994).

3. Kandungan Tanaman

Daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) mengandung

flavonoid, glikosida, saponin, tanin dan steroid menurut hasil skrining fitokimia

oleh Purba (2003). Menurut Taofik et al. (2010), ekstrak air daun insulin

mengandung flavonoid, alkaloid, dan tanin. Tanin memiliki aktivitas

hipoglikemik dengan meningkatkan glikogenesis (Dalimartha, 2005). Saponin

mampu menghambat GLUT-1 sehingga menurunkan absorbsi glukosa (Blasiak et

al., 2003). Flavonoid sebagai antioksidan dapat melindungi kerusakan progresif

sel β pankreas karena stress oksidatif sehingga dapat menurunkan DM tipe 2

(Song et al., 2005).


http://www.plantamor.com/index.php?plantsearch=Asteraceae

http://www.plantamor.com/index.php?plantsearch=Tithonia

18

G. Landasan teori

DM yaitu penyakit metabolik dengan karakteristik hiperglikemia yang

disebabkan kelainan sekresi insulin. Gejala DM yaitu polidipsia, poliurea, dan

polifagia menurut Parmar et al. (2011). Penelitian yang telah dilakukan oleh

Miura et al. (2005), menunjukan bahwa ekstrak etanol daun insulin (Tithonia

diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dapat menurunkan kadar glukosa darah. Menurut

Purba (2003), daun insulin memiliki kandungan saponin, tanin, dan flavonoid.

Adanya saponin dapat menghambat absorpsi glukosa, tanin memiliki aktivitas

hipoglikemik dengan meningkatkan glikogenesis, dan flavonoid dapat

menghindari absorpsi gula. Dalam penelitian ini menggunakan bentuk air rebusan

daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) karena penggunaan daun

insulin oleh masyarakat yaitu dengan cara direbus.

H. Hipotesis

Air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dapat

menurunkan kadar glukosa darah tikus jantan galur Wistar yang terbebani

glukosa.


19

BAB III

Metode Penelitian

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

Jenis penelitian yang digunakan yaitu jenis penelitian eksperimental

murni, yaitu penelitian terhadap kelompok perlakuan yang kemudian

dibandingkan dengan kelompok kontrol yang tidak diberikan perlakuan.

Penelitian dilakukan dengan rancangan acak lengkap pola searah yaitu

menetapkan sampel dengan pengacakan untuk kelompok perlakuan dan tanpa

perlakuan. Pengacakan sampel dimaksudkan agar setiap sampel memiliki

kesempatan yang sama untuk masuk dalam kelompok perlakuan maupun

kelompok tanpa perlakuan. Penelitian lengkap yaitu dalam menggunakan

kelompok positif, kelompok negatif, dan kelompok perlakuan. Pola searah artinya

adanya perlakuan yang sama untuk kelompok perlakuan yaitu dengan

memberikan air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray).

B. Variabel dan Definisi Operasional

1. Variabel Utama

a. Variabel Bebas yaitu dosis pemberian air rebusan daun insulin (Tithonia

diversifolia (Hemsl.) A. Gray).

b. Variabel Tergantung yaitu kadar glukosa darah tikus jantan galur wistar.

2. Variabel Pengacau

a. Variabel Pengacau Terkendali

1) Subjek Uji : tikus putih

2) Jenis Kelamin : jantan


20

3) Galur Spesies subjek uji : galur Wistar

4) Berat Badan subjek uji : 150-200 gram

5) Umur subjek uji : 2-3 bulan

6) Jalur Pemberian : peroral

b. Variabel Pengacau Tak Terkendali

1) Kondisi patologis hewan uji

3. Definisi Operasional

a. Air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray)

merupakan daun insulin segar yang direbus dalam 400 mL air hingga

menjadi 200 mL.

b. Dosis air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray)

merupakan sejumlah volume air rebusan daun insulin tiap berat badan

hewan uji dengan satuan ml/kgBB.

c. Uji Toleransi Glukosa Oral (UTGO) yaitu metode penetapan kadar

glukosa darah dengan membebankan glukosa pada tikus mengunakan

larutan glukosa secara oral dengan dosis 15% b/v;1,75g/kgBB.

d. LDDK0-240

kadar glukosa darah yaitu besaran yang menggambarkan

jumlah kadar glukosa dalam darah pada rentang waktu menit ke- 0 sampai

dengan menit ke -240 menggunakan metode trapezoid.


21

C. Bahan dan Alat Penelitian

1. Bahan Penelitian

a. Hewan uji

Tikus putih jantan galur Wistar, umur 2-3 bulan, berat badan 150-

200 gram diperoleh dari daerah Bantul.

b. Bahan uji

Daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) diambil dari

daerah kelurahan Jagalan, Surakarta.

c. Senyawa pembanding

Glibenklamid dari PT. Indofarma.

d. Pereaksi untuk pengukuran kadar glukosa

Enzim Glucose GOD FS*(Diaysis®, Germany), dengan komposisi

terlihat pada Tabel II.

Tabel II. Isi Pereaksi Enzim Glucose GOD-PAP

Reagen

Phospat buffer pH 7,5 250 mmol/l

Phenol 5 mmol/l

4-aminoantipyrine 0,5 mmol/l

Glukosa oksidase (GOD) ≥ 10 kU/l

Phenol Amino

Antipirin Peroksidase

(PAP) ≤ 1 kU/l

Glukosa standar 100 mg/dl (5,5 mmol/dl)

e. Lain-lain

1) Aquadest

2) Aquabidest

3) EDTA sebagai antikoagulan


22

4) Glukosa monohidrat dosis 15% b/v; 1,75g/kgBB sebagai larutan untuk

uji toleransi glukosa oral

5) CMC 1% sebagai kontrol normal dan pelarut glibenklamid

2. Alat Penelitian

a. Alat gelas (Beker glass, pengaduk, gelas ukur, tabung reaksi) merk pyrex®

b. Jarum suntik per oral (p.o)

c. Pipa kapiler

d. Tabung effendorf

e. Tabung reaksi

f. Mikropipet

g. Sentrifuge

h. Vortex

i. Microlab-200

j. Stopwatch

k. Alat timbang elektrik


23

D. Tata Cara Penelitian

1. Determinasi Tanaman

Determinasi dilakukan di Unit II Fakultas Farmasi UGM Yogyakarta,

Bagian Biologi Farmasi.

2. Pengumpulan Bahan Uji

Daun Insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) yang digunakan

adalah daun segar yang berasal dari tanaman daun insulin dari daerah kelurahan

Jagalan, Surakarta.

3. Pembuatan Air Rebusan Daun Insulin

Berdasarkan dari yang digunakan masyarakat pada umumnya yakni

sebanyak 7 gram daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) di rebus

dalam 400 ml aquadest sampai menjadi 200 ml.

4. Perhitungan Dosis Pemberian Air Rebusan Daun Insulin

Dosis pemakaian air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.)

A. Gray) untuk manusia dewasa (70 kg) adalah 7 gram daun insulin. Konversi

dosis manusia (70kg) ke tikus (200g) yaitu 0,018, sehingga dosis untuk tikus 200

gram sebagai berikut :

0,018 x 7 gram = 0,126 gram/200gBB

Dosis untuk 1 kg tikus : x 0,126 gram

= 0,63 gram/kgBB

= 630 mg/kgBB


24

Peringkat dosis tertinggi air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia

(Hemsl.) A. Gray) dihitung dengan menggunakan konsentrasi 40 gram/200mL.

D x BB = C x V

D x 200 gram = 0,2 gram/mL x 3 mL

D = 0,6 gram/200gBB

D = 3 gram/kgBB

D = 3000 mg/kgBB

Dari kedua dosis tersebut kemudian ditentukan faktor pengali untuk

peringkat dosis :

F =

=

= 2,18

Peringkat dosis yang diperoleh berdasarkan faktor pengali :

Dosis I = 630 mg/kgBB

Dosis II = 1373 mg/kgBB

Dosis III = 3000 mg/kgBB

5. Preparasi Bahan

a. Pembuatan larutan stok glukosa monohidrat p.a 15,0 % b/v

Glukosa monohidrat p.a ditimbang sebanyak 3,75 gram dilarutkan dalam

aquadest panas dalam labu takar 25,0 mL sampai tanda batas.


25

b. Pembuatan larutan CMC 1% b/v

CMC ditimbang sebanyak 1 gram kemudian dilarutkan dalam 100 mL

aquadest dalam labu takar.

c. Penentuan dosis glibenklamid

Dosis glibenklamid untuk manusia 70 kgBB yaitu 5 mg, sehingga dosis

untuk 200 g tikus yaitu

5 mg glibenklamid x 0,018 = 0,09 mg glibenklamid / 200 gBB

= 0,45 mg glibenklamid / kgBB

d. Penetapan Konsentrasi Glibenklamid

Volume pemberian glibenklamid ditetapkan sebesar 0,8 mL, sehingga

diperoleh konsentrasi sebagai berikut :

Dosis x Berat Badan = Konsentrasi (C) x Volume

0,45 mg/kgBB x 0,200 kgBB = C x 0,8 mL

C =

C = 0,1125 mg/mL

6. Orientasi Waktu Pemberian Glibenklamid

Orientasi menggunakan dua belas ekor tikus yang dibagi menjadi 3

kelompok yaitu kelompok menit ke-15 sebelum UTGO, menit ke-30 sebelum

UTGO, dan menit ke-45 sebelum UTGO. Masing-masing kelompok mendapat

perlakuan kontrol positif dan negatif. Semua pemberian dilakukan dilakukan

secara peroral kemudian dilakukan UTGO dengan memberikan larutan glukosa

monohidrat dosis 15% b/v, 1,75 g/kgBB. Pengambilan darah dilakukan sesaat


26

sebelum UTGO sebagai menit ke-0 dan pada menit ke-15, 30, 45, 60, 90, 120,

180, dan 240 setelah UTGO. Selanjutnya dilakukan pengukuran kadar glukosa

darah dengan metode GOD-PAP dan dibuat kurva UTGO serta perhitungan harga

LDDK0-240

. Penentuan waktu pemberian glibenklamid berdasarkan pada nilai

LDDK0-240

kontrol positif terkecil.

7. Orientasi Dosis Pemberian Air Rebusan Daun Insulin (Tithonia

diversifolia (Hemsl.) A. Gray)

Dosis pemakaian air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.)

A. Gray) untuk manusia dewasa (70 kg) adalah 7 gram daun insulin. Konversi

dosis manusia (70kg) ke tikus (200g) yaitu 0,018, sehingga dosis untuk tikus 200

gram sebagai berikut :

0,018 x 7 gram = 0,126 gram/200gBB

Dosis untuk 1 kg tikus : x 0,126 gram

= 0,63 gram/kgBB

= 630 mg/kgBB

Dosis diatas digunakan sebagai dosis tertinggi, kemudian dibuat peringkat

dosis dengan menurunkan 1,5 kali. Sehingga diperoleh dosis tengah sebesar 420

mg/kgBB dan dosis terendah 280 mg/kgBB. Berdasarkan hasil orientasi, dosis

tersebut tidak menunjukkan hasil penurunan kadar glukosa darah yang berarti

sehingga ditetapkan dosis baru untuk digunakan dalam penelitian.


27

8. Penetapan Waktu Pemberian Air Rebusan Daun Insulin (Tithonia


Waktu pemberian air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.)

A. Gray) ditetapkan berdasarkan waktu pemberian glibenklamid.

9. Tahap Percobaan

Gambar 4. Skema Penelitian


28

a. Pengelompokan hewan uji

Penelitian ini menggunakan 30 ekor tikus dibagi secara acak menjadi 6

kelompok, masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor tikus. Tiap hewan uji

diadaptasikan dalam laboratorium selama 7 hari diberi pakan dan minum ad

libitum. Sebelum mendapat perlakuan masing-masing kelompok dipuasakan 10-

16 jam namun diberi minum ad libitum, kemudian setiap kelompok diberi

perlakuan sesuai kelompok seperti berikut :

1) Kelompok 1 : Kontrol normal, hewan uji diberi CMC 1% 20 ml/kgBB

tanpa dibebani glukosa

2) Kelompok 2 : Kontrol positif, hewan uji diberi glibenklamid dengan

dosis 0,45 mg/kgBB dan dibebani glukosa dengan dosis 15%

b/v;1,75g/kgBB

3) Kelompok 3 : Kontrol negatif, hewan uji diberi CMC 1% 20 ml/kgBB

dan dibebani glukosa dengan dosis 15% b/v;1,75g/kgBB

4) Kelompok 4 : Perlakuan, hewan uji diberikan air rebusan daun insulin

(Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis 630 mg/kgBB dan dibebani

glukosa dosis 15% b/v;1,75g/kgBB


(Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis 1373 mg/kgBB dan

dibebani glukosa dosis 15% b/v;1,75g/kgBB


29


(Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis 3000 mg/kgBB dan

dibebani glukosa dosis 15% b/v;1,75g/kgBB

Setiap kelompok diberi perlakuan sesuai dengan kelompoknya secara per

oral. Lalu setelah beberapa menit berdasarkan hasil orientasi glibenklamid,

diambil cuplikan darah sebelum UTGO sebagai menit ke-0 dan dilanjutkan

UTGO dengan memberikan larutan glukosa monohidrat dosis 15%

b/v;1,75g/kgBB. Pengambilan cuplikan darah dilakukan pada menit ke – 15, 30,

45, 60, 90, 120, 180, 240 setelah UTGO. Pengukuran kadar glukosa darah

dilakukan dengan metode GOD-PAP, lalu dibuat kurva UTGO dan perhitungan

harga LDDK0-240

.

10. Penetapan kadar glukosa darah dengan metode GOD-PAP

Darah tikus diambil melalui mata tikus (vena orbitalis) sebanyak 0,5ml

ditampung dalam effendorf, lalu disentrifuge 30 menit 3000 rpm. Plasma diambil

kemudian dimasukkan dalam tabung reaksi dan ditambahkan reagen lalu divortex

dan diukur absorbansinya menggunakan microlab-200 dengan λ 500 nm. Kadar

glukosa dinyatakan dalam mg/dL. Pengukuran kadar glukosa dilakukan di

laboratorium Fisiologi-Biokimia Fakultas Farmasi USD, Yogyakarta.

Tabel III. Volume Pengukuran Kadar Glukosa Darah

Bahan Sampel (ml) Standar (ml) Blanko (ml)

Supernatan 0,01 - -

Larutan baku glukosa - 0,01 -

Pereaksi GOD-PAP 1,00 1,00 1,00


30

E. Analisis Hasil

Nilai LDDK0-240

glukosa darah dari setiap kelompok diuji distribusi

menggunakan uji Kolmogrov Smirnov kemudian apabila distribusi termasuk

normal maka dilanjutkan dengan analisis One Way ANOVA dan Post Hoc Test

Scheffe dengan tingkat kepercayaan 95%. Apabila nilai LDDK0-240

memiliki

variansi yang berbeda maka dilakukan uji Kruskal Wallis dan dilanjutkan uji

Mann Whitney dengan tingkat kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan tiap

kelompok apakah bermakna (p<0,005) atau tidak bermakna (p>0,005).


31

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Determinasi Tanaman

Sebelum melakukan pengujian efek penurunan kadar glukosa darah dari

daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray), dilakukan determinasi

tanaman dengan tujuan untuk memastikan bahwa tanaman yang digunakan telah

benar dan dapat dipastikan tidak terjadi kesalahan dalam pengambilan bahan

tanaman uji.

Determinasi dilakukan di Unit II Fakultas Farmasi UGM Yogyakarta

Bagian Biologi Farmasi. Hasil determinasi menunjukkan bahwa tanaman yang

dideterminasi benar tanaman daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A.

Gray) (Lampiran 2).

B. Hasil Percobaan Pendahuluan

Percobaan pendahuluan dilakukan untuk menentukan langkah penelitian

selanjutnya. Percobaan pendahuluan yang dilakukan antara lain penetapan waktu

pemberian glibenklamid dan penetapan dosis sediaan air rebusan daun insulin

(Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray).

1. Penetapan Waktu Pemberian Glibenklamid

Penetapan waktu pemberian glibenklamid dilakukan agar memperoleh

waktu optimum yang dapat menghasilkan presentase penurunan kadar glukosa

darah terbesar berdasarkan penurunan harga luas daerah dibawah kurva dari menit


32

ke-0 hingga menit ke-240 (LDDK0-240

). Penetapan waktu pemberian glibenklamid

sebelum UTGO berdasarkan dari nilai LDDK0-240

kontrol positif terkecil.

Tabel IV. Nilai LDDK0-240

Suspensi Glibenklamid Sebelum UTGO

Waktu pemberian

suspensi glibenklamid

sebelum UTGO

LDDK0-240

(mg.menit/dL)

Kontrol Negatif

(CMC)

Kontrol Positif

(Glibenklamid)

15 33000,0 21701,5

30 32951,5 17783,0

45 33907,5 20483,0

Berdasarkan Tabel IV waktu pemberian suspensi glibenklamid pada menit

ke-30 sebelum UTGO memberikan nilai LDDK0-240

terkecil (17783,0)

dibandingkan menit ke-15 (21701,5) dan menit ke-45 (20483,0). Hal ini

menunjukkan bahwa menit ke-30 mempunyai kemampuan untuk menurunkan

kadar glukosa darah paling tinggi dibandingkan menit ke-15 dan menit ke-45.

Berdasarkan hasil tersebut maka waktu pemberian glibenklamid yang digunakan

adalah 30 menit sebelum UTGO.


33

Gambar 5. Diagram LDDK0-240 Glibenklamid Sebelum UTGO

2. Penetapan Dosis Sediaan Air Rebusan Daun Insulin (Tithonia


Penetapan dosis pemberian air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia

(Hemsl.) A. Gray) bertujuan untuk menentukan tingkatan dosis yang akan

digunakan pada penelitian. Penetapan dosis tertinggi menggunakan konversi dosis

manusia (70kg) ke dosis tikus (200gram) yaitu 630mg/KgBB, kemudian dibuat

tingkatan dosis dengan menurunkan 1,5 kali peringkat dosis. Didapatkan dosis

tengah sebesar 420 mg/KgBB dan dosis terendah sebesar 280 mg/KgBB. Hasil

dari ketiga dosis tersebut tidak menunjukkan hasil penurunan kadar glukosa darah

yang berarti, sehingga ditetapkan dosis baru dengan menaikkan peringkat dosis.

Penetapan dosis baru menggunakan hasil konversi dosis manusia (70kg)

ke dosis tikus (200gram) sebagai dosis terendah yaitu 630 mg/KgBB, sedangkan

dosis tertinggi ditetapkan dari konsentrasi tertinggi yang dapat masuk dalam spuit

dan tidak toksik terhadap hewan uji yakni 0,2 gram/mL sehingga dosis tertinggi


34

sebesar 3000mg/KgBB. Dari dosis terendah dan tertinggi dapat dihitung faktor

pengali untuk menentukan dosis tengah. Hasil faktor pengali yang didapatkan

yaitu 2,18, sehingga dosis tengah sebesar 1373 mg/KgBB.

C. Efek Penurunan Kadar Glukosa Darah Air Rebusan Daun Insulin

(Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray)

Penelitian ini menggunakan metode Uji Toleransi Glukosa Oral (UTGO)

yaitu uji yang dapat menggambarkan kenaikan kadar glukosa darah dalam waktu

yang cepat setelah pemberian glukosa secara oral dan akan memberikan gambaran

kadar glukosa darah setelah pemberian senyawa obat secara cepat. Kekurangan

dari metode ini yaitu kadar glukosa yang digambarkan hanya untuk jangka waktu

yang pendek, oleh karena itu diperlukan metode lain untuk penelitian selanjutnya

seperti metode perusakan pankreas dengan menginduksi aloksan atau dengan

metode resistensi insulin.

Penetapan kadar glukosa darah menggunakan metode enzimatik yaitu

dengan menambahkan reagen GOD PAP. Prinsip reaksinya adalah GOD (glukosa

oksidase) akan mengkatalisis oksidasi glukosa menjadi asam glukonat dan

hidrogen peroksida. Glukosa akan bereaksi dengan reagen GOD-PAP dan

membentuk senyawa kuinonimin yang berwarna merah muda. Kadar glukosa

darah berbanding lurus dengan intensitas warna kompleks kuinonimin.

Pembentukan kompleks warna membutuhkan waktu inkubasi selama 20 menit

agar reaksi antara glukosa dengan enzim-enzim yang terdapat dalam reagen dapat

bereaksi sempurna kemudian diukur kadarnya dengan menggunakan micro

vitalab. Komposisi reagen GOD-PAP yaitu dapar fosfat 250 mmol/L, fenol 5


35

mmol/L, 4-aminoantipirin 0,5 mmol/L, glukosa oksidase (GOD) ≥ 10ku/L, dan

peroksidase (POD) ≥ 1 ku/L.

Gambar 6. Reaksi enzimatik antara glukosa dengan reagen GOD PAP

(Barham dan Trinder, 1972).

Tujuan dari penelitian uji efek hipoglikemik ini adalah untuk melihat efek

penurunan kadar glukosa darah dari air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia

(Hemsl.) A. Gray) dari 3 peringkat dosis yakni 630 mg/kgBB, 1373 mg/kgBB,

dan 3000 mg/kgBB.

Data rata-rata kadar glukosa darah tiap perlakuan untuk setiap waktu

pengambilan disajikan dalam Tabel V dan kurva hubungan antara waktu dengan

kadar glukosa darah disajikan dalam Gambar 7.


36

Tabel V. Data Rata-Rata Kadar Glukosa Darah dan LDDK0-240

Setiap

Perlakuan

Kelompok

Perlakuan

Kontrol

Normal

Kontrol

Positif

Kontrol

Negatif

Perlakuan

I

Perlakuan

II

Perlakuan

III

Rata-

rata

kadar

glukosa

darah

(mg/dL)

0 79,8 79,6 81,6 79,8 80,0 80,0

15 81,4 110,4 127,8 108,0 104,4 100,2

30 81,4 115,4 138,2 125,2 118,0 119,6

45 80,6 104,6 132,2 111,2 104,8 100,6

60 81,0 101,2 126,8 108,6 99,4 95,8

90 81,4 92,0 122,6 102,0 93,0 90,0

120 81,4 84,0 118,0 93,6 87,4 84,2

180 81,6 76,0 111,8 84,2 80,0 78,0

240 81,0 64,4 102,4 71,4 68,6 64,4

LDDK0-240

±

SD

19503,0

±177,292

20862,0

±337,775

28206,0

±507,329

22674,0

±606,026

21325,5

±283,645

20662,5

±326,272

Keterangan :

Kontrol normal : CMC 1% 20 ml/kgBB tanpa dibebani glukosa

Kontrol positif : Glibenklamid 0,45 mg/kgBB dan dibebani glukosa dosis

15%b/v; 1,75g/kgBB

Kontrol negatif : CMC 1% 20 ml/kgBB dan dibebani glukosa dosis

15%b/v; 1,75g/kgBB

Perlakuan I : Air rebusan daun insulin 630 mg/kgBB dan dibebani

glukosa dosis 15%b/v; 1,75g/kgBB

Perlakuan II : Air rebusan daun insulin 1373 mg/kgBB dan dibebani


Perlakuan III : Air rebusan daun insulin 3000 mg/kgBB dan dibebani



37

Gambar 7. Kurva hubungan antara waktu dengan kadar glukosa darah

Kelompok kontrol normal memiliki nilai LDDK0-240

paling rendah

(19503,0) dibandingkan kelompok kontrol positif (20862,0), kelompok kontrol

negatif (28206,0), dan semua kelompok perlakuan air rebusan daun insulin

(Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) (22674,0; 21325,5; 20662,5). Hal ini

menunjukkan bahwa kadar glukosa darah hewan uji yang digunakan dalam

penelitian adalah normal dan penurunan kadar glukosa darah kontrol positif serta

semua kelompok perlakuan air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia

(Hemsl.) A. Gray) belum mencapai kadar glukosa normal.

Kelompok kontrol positif memiliki nilai LDDK0-240

lebih rendah (20862,0)

dibandingkan kontrol negatif (28206,0). Hal ini menunjukkan bahwa

glibenklamid dapat menurunkan kadar glukosa darah. Glibenklamid merupakan

obat antidiabetik oral golongan sulfonilurea yang mempunyai efek terapetik untuk


38

menurunkan kadar glukosa darah dengan merangsang sekresi insulin pada sel beta

pankreas.

Kelompok kontrol negatif memiliki nilai LDDK0-240

yang paling tinggi

(28206,0) dibandingkan dengan kelompok kontrol normal (19503,0), kelompok

kontrol positif (20862,0) dan semua kelompok perlakuan air rebusan daun insulin

(Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) (22674,0; 21325,5; 20662,5). Hal ini

menunjukkan bahwa CMC 1% tidak dapat menurunkan kadar glukosa darah.

Nilai LDDK0-240

yang didapat kemudian diuji normalitas distribusi data

dengan Kolmogorov-Smirnof. Berdasarkan hasil uji Kolmogorov-Smirnof terlihat

data memiliki nilai p = 0,060 (p>0,05), artinya data memiliki distribusi normal

(Lampiran 10).

Analisis dilanjutkan dengan One Way ANOVA yang didahului dengan uji

Homogenity of Variance. Uji One Way ANOVA bertujuan untuk melihat apakah

terdapat perbedaan nilai LDDK0-240

yang bermakna dari setiap kelompok

perlakuan. Hasil uji Homogenity of Variance One Way ANOVA menunjukkan

bahwa variasi LDDK0-240

berbeda tidak bermakna dengan nilai p = 0,063 (p>0,05)

(Lampiran 10). Hasil uji One Way ANOVA memiliki nilai p = 0,000 (p<0,05),

artinya terdapat perbedaan nilai LDDK0-240

yang bermakna dari setiap kelompok

perlakuan (Lampiran 10). Analisis dilanjutkan dengan uji Post Hoc Scheffe untuk

melihat pasangan kelompok mana yang berbeda secara signifikan seperti terlihat

pada Tabel VI.


39

Tabel VI. Hasil Post Hoc Scheffe LDDK0-240

Kadar Glukosa Darah

Tikus Terbebani Glukosa

Kontrol

Normal

Kontrol

Positif

Kontrol

Negatif

Perlakuan

I

Perlakuan

II

Perlakuan

III

Kontrol

Normal

- BB BB BB BB BB

Kontrol

Positif

BB - BB BB BTB BTB

Kontrol

Negatif

BB BB - BB BB BB

Perlakuan

I

BB BB BB - BB BB

Perlakuan

II

BB BTB BB BB - BTB

Perlakuan

III

BB BTB BB BB BTB -

Keterangan :

Kontrol normal : CMC 1% 20 ml/kgBB tanpa dibebani glukosa

Kontrol positif : Glibenklamid 0,45 mg/kgBB dan dibebani glukosa dosis

15%b/v; 1,75g/kgBB

Kontrol negatif : CMC 1% 20 ml/kgBB dan dibebani glukosa dosis

15%b/v; 1,75g/kgBB

Perlakuan I : Air rebusan daun insulin 630 mg/kgBB dan dibebani


Perlakuan II : Air rebusan daun insulin 1373 mg/kgBB dan dibebani


Perlakuan III : Air rebusan daun insulin 3000 mg/kgBB dan dibebani


BB : Berbeda Bermakna

BTB : Berbeda Tidak Bermakna

Hasil uji Post Hoc menunjukkan kelompok kontrol normal dengan

kelompok kontrol positif dan kelompok kontrol negatif memiliki perbedaan yang

bermakna. Artinya, kelompok kontrol positif dapat menurunkan kadar glukosa

darah tetapi tidak sampai pada kadar normal dan CMC tidak dapat menurunkan

kadar glukosa darah. Hasil analisis kontrol positif dengan kontrol negatif terdapat

perbedaan bermakna. Artinya kelompok kontrol positif dapat menurunkan kadar

glukosa darah.


40

Kelompok perlakuan air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia

(Hemsl.) A. Gray) dosis 630 mg/kgBB terhadap kontrol normal, kontrol positif,

kontrol negatif, kelompok perlakuan air rebusan daun insulin (Tithonia

diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis 1373 mg/kgBB dan dosis 3000 mg/kgBB

terdapat perbedaan bermakna. Hal ini menunjukkan kelompok perlakuan air

rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis 630 mg/kgBB

memiliki kemampuan untuk menurunkan kadar glukosa darah namun lebih rendah

dari kontrol positif, kelompok perlakuan air rebusan daun insulin (Tithonia

diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis 1373 mg/kgBB dan dosis 3000 mg/kgBB

serta belum sampai pada kadar glukosa normal.


(Hemsl.) A. Gray) dosis 1373 mg/kgBB terhadap kelompok kontrol normal dan

kontrol negatif menunjukkan adanya perbedaan bermakna, sedangkan terhadap

kontrol positif dan kelompok perlakuan air rebusan daun insulin (Tithonia

diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis 3000 mg/kgBB terdapat perbedaan tidak

bermakna. Artinya, kelompok perlakuan air rebusan daun insulin (Tithonia

diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis 1373 mg/kgBB memiliki kemampuan untuk

menurunkan kadar glukosa darah sama dengan kontrol positif dan kelompok

perlakuan air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis

3000 mg/kgBB tetapi belum mencapai pada kadar glukosa normal.


(Hemsl.) A. Gray) dosis 3000 mg/kgBB memiliki perbedaan bermakna terhadap


41

kontrol normal dan kontrol negatif. Sedangkan terhadap kelompok kontrol positif

terdapat perbedaan tidak bermakna. Hal ini menunjukkan kelompok perlakuan air

rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis 3000

mg/kgBB memiliki kemampuan untuk menurunkan kadar glukosa darah sama

dengan kelompok kontrol positif namun belum sampai pada kadar normal.

Berdasarkan hasil penelitian, dosis yang dapat menurunkan kadar glukosa

darah yaitu air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dosis

1373 dan dosis 3000 mg/kgBB. Air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia

(Hemsl.) A. Gray) dosis 1373 mg/kgBB lebih dianjurkan untuk digunakan karena

dosis 1373 mg/kgBB sudah dapat menurunkan kadar glukosa darah. Penelitian

terkait uji toksisitas akut perlu dilakukan untuk mengetahui besar dosis yang

memiliki efek toksik atau lethal terhadap hewan uji.

Efek hipoglikemik daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray)

diduga berasal dari kandungan tanin, saponin, dan flavonoid yang terdapat dalam

daun insulin. Mekanisme tanin terhadap penurunan kadar glukosa darah yaitu

dengan menurunkan absorbsi nutrisi dengan menghambat penyerapan glukosa di

intestinal, selain itu menginduksi regenerasi sel β pankreas sehingga

meningkatkan sekresi insulin yang berefek pada peningkatkan trigliserida di sel

adipose dan glikogen dalam hati dan otot (Kumari, 2012). Mekanisme kerja

saponin yaitu menghambat GLUT-1 sehingga menurunkan absorbsi glukosa

(Blasiak et al., 2003). Flavonoid dapat menghambat GLUT-2 mukosa usus


42

sehingga dapat menurunkan absorbsi glukosa, selain itu juga sebagai antioksidan

dapat mencegah kerusakan progresif sel β pankreas (Song et al., 2005).

Namun, kandungan air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia

(Hemsl.) A. Gray) yang yang paling berpotensi terhadap penurunan kadar glukosa

darah belum diketahui, sehingga perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai

isolasi kandungan air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A.

Gray) yang paling berpotensi menurunkan kadar glukosa darah.


43

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

Berdasarkan penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa :

1. Air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dapat

menurunkan kadar glukosa darah pada tikus jantan galur Wistar yang

terbebani glukosa.

2. Dosis air rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray)

yang dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus jantan galur Wistar

yang terbebani glukosa adalah dosis 1373 mg/KgBB dan dosis 3000

mg/KgBB.

B. Saran

1. Perlu dilakukan penelitian efek penurunan kadar glukosa darah dari air

rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) dengan

metode yang lain misal, perusakan pankreas.

2. Perlu dilakukan uji toksisitas akut.

3. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai isolasi kandungan air

rebusan daun insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) yang

paling berpotensi menurunkan kadar glukosa darah.


44

DAFTAR PUSTAKA

American Diabetes Association, 2015, Diagnosis and Classification Of Diabetes

Mellitus, Vol. 37, pp. 81-90.

American Diabetes Association, 2011, Diagnosis and Classification Of Diabetes

Mellitus, Vol. 34, pp. 62-69.

Anonim, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan RI, hal.

410.

Barham, D., and Trinder, D., 1972, An Improved Color Reagen for Determination

of Blood Glucose by the Oxydase System. Analist. pp. 97, 142-145.

Blasiak J., et al., 2003, Free Radical Scavengers Can Modulate the DNA-

Damaging Action of Alloxan, Acta Biocem, Pol. 50 (I), pp. 205-10.

Brahmachari, G., 2011, Bio-Flavonoids With Promising Antidiabetic Potentials:

A Critical Survey, Research Signpost, pp 187-212.

Corwin, E. J., 2008, Buku Saku Patofisiologi, Penerbit EGC, Jakarta, hal. 624-

630.

Dalimartha, S., 2005, Ramuan Tradisional Untuk Pengobatan Diabetes Mellitus,

Penerbit Penebar Swadaya, Bogor.

Departemen Kesehatan, 2005, Diabetes Mellitus Masalah Kesehatan Masyarakat

yang Serius, http://www.depkes.go.id/, diakses pada 10 September 2015.

Didik, G., dan Sulistijowati, A., 2001, Efek Ekstrak Daun Kembang Bulan

Terhadap candida albicans serta Profil Kromatogramnya Dalam Cermin

Dunia Kedokteran, UI Press, Jakarta, hal. 31-32, 35.

Dubowsky, K. M., 2008, An O-toluidine ethod for Body-Fluid Glucose

Determination, Clin Chem, 54 (11), pp. 1919-1920.

Etuk, E. U., 2010, Animals Models for Studying Diabetes Mellitus, Agric. Biol. J.

N. Am., Algiculture and Biological Journal of North America, 1 (2), pp.

130-134.

Ganiswarna, S. G, 1995, Farmakologi dan Terapi, Edisi IV, Bagian Farmakologi

Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta, hal. 52.


http://www.depkes.go.id/

45

Geethaa, Saghal, Ramanathan, S., et al., 2010, Brine Shrimp Lethality and Acute

Oral Toxicity Studies on Swetenia Mahagoni (Linn) Jacq. Seed

Methanolic Extract, Pharmacognosy Research 2 (4), pp. 215-220.

Hutagalung, H., 2004, Karbohidrat, Universitas Sumatra Utara, Sumatra Utara,

hal. 7-8.

Handoko, T., dan Suharto, B., 2003, Insulin, Glukagon dan antidiabetik Oral,

Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta,

hal. 469, 471, 476- 477.

Hutapea, J. R., 1994, Inventaris Tanaman Obat Indonesia, Badan Penelitian dan

Pengembangan Kesehatan, Jakarta, hal. 297.

Kasper et al, 2005, Harrison’s Principles of Internal Medicine, Sixteenth Edition,

McGraw-Hill, USA, pp 1425-1433.

Katzung, B.G., 2002, Basic And Clinical Pharmacology (Farmakologi Dasar Dan

Klinik), Edisi III, EGC, Jakarta, hal. 585-587.

King M. W., 2007., Glycolysis : Process of Glucose Utilization and Homeostasis.

Kumari, M., 2012, Tannins : An Antinutrient with Positive Effect to Manage

Diabetes, Researh Journal of Recent Science, Vol. 1 (12), pp. 70-71.

Merentek, E., 2006, Resistensi Insulin Pada Diabetes Mellitus Tipe 2, Majalah

Cermin Dunia Kedokteran, No. 150, Jakarta, hal. 38-39.

Miura, T., Nosaka, K., Ishii,H., Ishida, T., 2005, Antidiabetic Effect of

Nitobegiku, the Herb Tithonia diversifolia, in KK-Ay Diabetic Mice, Biol.

Pharm. Bull.,28 (11), pp. 2152-2154.

Nugroho, B. A., 2004, Pengaruh Diet Ekstrak Rumput Laut (Euchema sp.)

Terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah Tikus Putih (Ratus Nuvegicus)

yang diinduksi Aloksan, Skripsi, Universitas Dipenogoro, Semarang.

Parmar, K., Patel, S., Patel, J., Patel, B., Patel. M.B., 2011, Effect of Bittergourd

(Momordica charantia) Fruit Juice on Glucose Tolerance and Lipid Profile

in Type-II Diabetic Rats, International Journal of Drug Development &

Researc, 3(2), pp.139-146.

Perkeni, 2011, Konsensus Pengelolaan dan Pencegahan Diabetes Mellitus tipe 2

di Indonesia 2011, PB. Perkeni, Jakarta.


46

Poedjiadi, A., Titin, S., 2006, Dasar-Dasar Biokimia, UI Press, Jakarta, 247,251-

260.

Prasetya A, dkk., 2016, Perbandingan Efek Hipoglikemik Infusa Daun Kembang

Bulan (Tithonia diversifolia (Hamsley) A. Gray) dan Metformin pada

Tikus yang Diinduksi Aloksan, Vol. 43, No. 2, Hal. 91-94.

Purba, E.D., 2003, Analisis Senyawa Kimia dan Uji Hipoglikemik Ekstrak Etanol

Daun Kembang Bulan ( Tithonia diversifolia (Hemsley) Gray) terhadap

Kelinci, Skripsi, 34, Universitas Sumatra Utara, Medan.

Rahmawati, S., 2013, Efektifitas Ekstrak Kulit Batang, Akar, dan Daun Sirsak

(Annona mucirata L.) Terhadap Kadar Glukosa Darah, Skripsi, 3,

Universitas Islam Negeri Sunan Kalijaga, Yogyakarta.

Roche Diagnostics, 2009, Accu-Chek Active; Test Strips, Mannheim, Germany.

Song, Y., Joann, E.M., Jullie E.B., Howard, D.S., Simin, L., 2005. Association of

Dietary Flavonoids with Risk of Type 2 Diabetes, and Markers of Insulin

Resistance and Systemic Inflammation in Women : A Prospective Study

and Cross-Sectional Analysis, Journal of the American College of

Nutrition, Volume 24, Issue 5.

Suherman, S. K., 2007, Insulin dan Antidiabetik Oral, Departemen Farmakologi

dan Terapeutik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta.

Szkudelski, T., 2008, The Mecanism of Alloxan and Streptozotocin Action in β

Cells of The Rat Pancreas, Physiology, Res 50, pp. 536-546.

Taofik, M., Yuianti, E., Barizi, A., Hayati, E.K., 2010, Isolasi dan Identifikasi

Senyawa Aktif Ekstrak Air Daun Paitan ( Tithonia diversifolia ) sebagai

Bahan Insektisida Botani untuk Pengendalian Hama Tungau Eriophydae,

Alchemi, 2(1), pp. 104-157.

Thonsom et al., 2013, Antioxidant and Hypoglycemic Effect of Tithonia

diversifolia Aqueous Leaves Extract in Alloxan-Induced Diabetic Mice,

Advances in Environmental Biology, 7(9), pp 2116-2125.

Tjay, T. H., dan Rahardja, K., 2002, Obat-Obat Penting: Khasiat Penggunaan

dan Efek Samping, Edisi IV, Direktorat Jenderal Pengawasan Obat Dan

Makanan, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal.567-

584.


47

WHO, 2014, Diabetes Mellitus, http://www.who.int/diabetes/en/, diakses pada

tanggal 26 November 2014.


http://www.who.int/diabetes/en/

48

LAMPIRAN


49

Lampiran 1. Surat Keterangan Kelaikan Etik (Ethical Clearance)


50

Lampiran 2. Surat Pengesahan Determinasi


51

Lampiran 3. Foto Tanaman Insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray)

Gambar 1. Tanaman Daun Insulin

Gambar 2. Air Rebusan Daun Insulin


52

Lampiran 4. Foto Hewan Uji Tikus Jantan Galur Wistar


53

Lampiran 5. Foto Alat Penelitian

b. Timbangan Analitik a. Centrifuge

d. Vortex c. Microlab-200


54

Lampiran 6. Preparasi Bahan

a. Pembuatan Larutan Stok Glukosa monohidrat p.a 15,0 % b/v

Bobot kertas = 0,4008 gram

Bobot kertas + glukosa monohidrat = 4,1511 gram

Bobot kertas + sisa = 0,4010 gram

Bobot Glukosa monohidrat = 3,7501gram

Glukosa monohidrat sebanyak 3,75 gram dan dilarutkan dengan aquadest

panas dalam labu takar 25,0 mL sampai tanda.

b. Keseragaman bobot tablet

Tablet Ke- Berat (mg) Tablet Ke- Berat (mg)

1 202 11 203

2 201 12 193

3 203 13 200

4 200 14 202

5 206 15 205

6 201 16 198

7 202 17 198

8 201 18 198

9 200 19 196

10 204 20 200

Bobot rata-rata tablet glibenklamida = 200,65 mg. Berdasarkan Anonim

1979 tablet dengan bobot rata-rata 151 mg – 300 mg memiliki penyimpangan

rata-rata tablet pada kolom A = 7,5% dan kolom B = 15%.

Kolom A : 7,5% x 200,65 = 15,05 mg ± 200,65

Kolom B : 15% x 200,65 = 30,1 mg ± 200,65


55

Berdasarkan penimbangan 20 tablet, tidak ada tablet yang menyimpang

dari range 185,6 mg – 215,7 mg dan juga tidak ada yang menyimpang dari

range 170,55 mg - 230,75 mg. Hal ini menunjukkan bahwa semua tablet

memenuhi keseragaman bobot.

c. Pembuatan larutan Glibenklamida 0,1125 mg/mL

Bobot rata-rata tablet Glibenklamida = 200,65 mg

Tiap tablet mengandung 5 mg zat aktif Glibenklamida sehingga serbuk

yang harus ditimbang untuk mendapatkan 25 mg zat aktif yaitu

(25 mg : 5 mg) x 200,65 mg = 1003 mg

Sebanyak 1003 mg dilarutkan dalam labu ukur 10 mL sebagai larutan

induk dengan konsentrasi 0,25%. Untuk mendapatkan larutan Glibenklamida

dengan konsentrasi 0,1125 mg/mL dengan volume 10 mL, maka :

C1 . V1 = C2 . V2

2,5 mg/mL . x = 0,1125 mg/mL . 10 mL

x = 0,45 mL

Sebanyak 0,45 mL larutan induk dilarutkan dalam labu ukur 10 mL

dengan aquadest hingga tanda.


56

Lampiran 7. Perhitungan Penetapan Peringkat Dosis Air Rebusan Daun

Insulin pada Kelompok Perlakuan

Dasar penetapan peringkat dosis :

1. Bobot tertinggi tikus = 200 gram

2. Konsentrasi = 0,2 gram/mL

3. Volume = 3 mL

Dengan dasar tersebut, maka dapat ditetapkan dosis tertinggi air rebusan

daun insulin

Dosis x Berat Badan = Konsentrasi x Volume pemberian

D x BB = C x V

D x 200 gramBB = 0,2 gram/mL x 3 mL

D = 0,6 gram/200 gramBB

= 3 gram/KgBB

= 3000 mg/KgBB

Dosis yang digunakan berdasarkan pengobatan pada masyarakat sehari

hari, dosis pada perlakuan ini yaitu 7 gram/ 70 KgBB manusia.

Konversi manusia (70 kg ke tikus 200 g) = 0,018

Dosis untuk 200 gram tikus = 0,018 x 7 gram

= 0,126 gram/ 200gBB

Dosis tikus 1 Kg = x 0,126 gram

= 0,63 gram/ KgBB

= 630 mg/ KgBB

Dosis terapi manusia yang telah dikonversi ke tikus dan dosis tertinggi

menjadi dasar mendapatkan faktor pengali untuk peringkat dosis perlakuan

F =

=


57

= 2,18

Peringkat dosis yang diperoleh berdasarkan faktor pengali :

Dosis I = 630 mg/kgBB

Dosis II = 1373 mg/kgBB

Dosis III = 3000 mg/kgBB


58


Penetapan Waktu Pemberian

Glibenklamida Menggunakan SPSS 15


59


60


Orientasi Dosis Pemberian Air

Rebusan Daun Insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) Menggunakan

SPSS 15


61


62


63


Efek Penurunan Kadar

Glukosa Darah Air Rebusan Daun Insulin (Tithonia diversifolia (Hemsl.) A.

Gray) Menggunakan SPSS 15

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

30

22205,50

2914,142

,242

,242

-,160

1,325

,060

N

Mean

Std. Deviation

Normal Parametersa,b

Absolute

Positive

Negative

Most Extreme

Differences

Kolmogorov-Smirnov Z

Asymp. Sig. (2-tailed)

LDDK

Test distribution is Normal.a.

Calculated from data.b.

Oneway

Descriptives

LDDK

5 19503,00 177,292 79,287 19282,86 19723,14 19305 19695

5 20862,00 337,775 151,058 20442,60 21281,40 20565 21323

5 28206,00 507,329 226,885 27576,07 28835,93 27728 28815

5 22674,00 606,026 271,023 21921,52 23426,48 21938 23475

5 21325,50 283,645 126,850 20973,31 21677,69 21008 21653

5 20662,50 326,272 145,913 20257,38 21067,62 20400 21195

30 22205,50 2914,142 532,047 21117,34 23293,66 19305 28815

Kontrol Normal

Kontrol Positif

Kontrol Negatif

Dosis I

Dosis II

Dosis III

Total

N Mean Std. Deviation Std. Error Lower Bound Upper Bound

95% Confidence Interval for

Mean

Minimum Maximum

Test of Homogeneity of Variances

LDDK

2,442 5 24 ,063

Levene

Statistic df1 df2 Sig.


64

ANOVA

LDDK

2,4E+008 5 48489240,00 303,982 ,000

3828330 24 159513,750

2,5E+008 29

Between Groups

Within Groups

Total

Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons

Dependent Variable: LDDK

Scheffe

-1359,000* 252,598 ,001 -2273,36 -444,64

-8703,000* 252,598 ,000 -9617,36 -7788,64

-3171,000* 252,598 ,000 -4085,36 -2256,64

-1822,500* 252,598 ,000 -2736,86 -908,14

-1159,500* 252,598 ,007 -2073,86 -245,14

1359,000* 252,598 ,001 444,64 2273,36

-7344,000* 252,598 ,000 -8258,36 -6429,64

-1812,000* 252,598 ,000 -2726,36 -897,64

-463,500 252,598 ,648 -1377,86 450,86

199,500 252,598 ,985 -714,86 1113,86

8703,000* 252,598 ,000 7788,64 9617,36

7344,000* 252,598 ,000 6429,64 8258,36

5532,000* 252,598 ,000 4617,64 6446,36

6880,500* 252,598 ,000 5966,14 7794,86

7543,500* 252,598 ,000 6629,14 8457,86

3171,000* 252,598 ,000 2256,64 4085,36

1812,000* 252,598 ,000 897,64 2726,36

-5532,000* 252,598 ,000 -6446,36 -4617,64

1348,500* 252,598 ,001 434,14 2262,86

2011,500* 252,598 ,000 1097,14 2925,86

1822,500* 252,598 ,000 908,14 2736,86

463,500 252,598 ,648 -450,86 1377,86

-6880,500* 252,598 ,000 -7794,86 -5966,14

-1348,500* 252,598 ,001 -2262,86 -434,14

663,000 252,598 ,268 -251,36 1577,36

1159,500* 252,598 ,007 245,14 2073,86

-199,500 252,598 ,985 -1113,86 714,86

-7543,500* 252,598 ,000 -8457,86 -6629,14

-2011,500* 252,598 ,000 -2925,86 -1097,14

-663,000 252,598 ,268 -1577,36 251,36

(J) Perlakuan

Kontrol Positif

Kontrol Negatif

Dosis I

Dosis II

Dosis III

Kontrol Normal

Kontrol Negatif

Dosis I

Dosis II

Dosis III

Kontrol Normal

Kontrol Positif

Dosis I

Dosis II

Dosis III

Kontrol Normal

Kontrol Positif

Kontrol Negatif

Dosis II

Dosis III

Kontrol Normal

Kontrol Positif

Kontrol Negatif

Dosis I

Dosis III

Kontrol Normal

Kontrol Positif

Kontrol Negatif

Dosis I

Dosis II

(I) Perlakuan

Kontrol Normal

Kontrol Positif

Kontrol Negatif

Dosis I

Dosis II

Dosis III

Mean

Difference

(I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound

95% Confidence Interval

The mean difference is significant at the .05 level.*.


65

Homogeneous Subsets

LDDK

Scheffea

5 19503,00

5 20662,50

5 20862,00

5 21325,50

5 22674,00

5 28206,00

1,000 ,268 1,000 1,000

Perlakuan

Kontrol Normal

Dosis III

Kontrol Positif

Dosis II

Dosis I

Kontrol Negatif

Sig.

N 1 2 3 4

Subset for alpha = .05

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

Uses Harmonic Mean Sample Size = 5,000.a.

Means Plots

Perlakuan

Dosis IIIDosis IIDosis IKontrol NegatifKontrol PositifKontrol Normal

Mean

of

LD

DK

30000

28000

26000

24000

22000

20000

18000


66

Lampiran 11. Leaflet Glibenklamid


67


68

Lampiran 12. GOD-PAP


69


70

BIOGRAFI PENULIS

Skripsi yang berjudul “Pengaruh Air Rebusan Daun Insulin

(Tithonia diversifolia (Hemsl.) A. Gray) Terhadap Kadar

Glukosa Darah Tikus Jantan Galur Wistar yang Terbebani

Glukosa“ ini ditulis oleh Mila Karmila Sri Setiomulyo. Penulis

merupakan anak kedua dari tiga bersaudara dari pasangan

Bapak Singgih Utomo Setiomulyo dan Ibu Setiowati

Setiodarmo, yang lahir di Surakarta pada tanggal 11 Juni 1994.

Penulis menempuh pendidikkan formal pada tahun 1997-2000

di TK Mesen Surakarta, pada tahun 2000-2006 di SD Kanisius Keprabon II

Surakarta, pada tahun 2006-2009 di SMP PL Bintang Laut Surakarta, dan pada

tahun 2009-2012 penulis menyelesaikan pendidikkan di SMA Negeri III

Surakarta. Pada tahun 2012 penulis mengawali pendidikkannya sebagai

mahasiswa Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Selama

masa kuliah, penulis pernah menjadi asisten praktikum biokimia pada tahun 2014

dan tahun 2015.


pengaruh air rebusan daun insulin (tithonia · pdf fileselama perkuliahan, penelitian, dan...

Documents