modul mikrobiologi blok digestive

Upload: pusvanurmalasari

Post on 03-Feb-2018

232 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

  • 7/21/2019 Modul Mikrobiologi Blok Digestive

    1/13

    INFEKSIENTEROBACTERIACEAE

    (Salmonella typhi)

    Enterobacteriaceae adalah kelompok besar batang gram negatif yang

    heterogen, yang habitatnya adalah saluran usus manusia dan hewan. Famili ini

    mencakup banyak spesies (Escherichia coli, Shigella, Salmonella, Enterobacter,

    Klebsiella, Serratia danProteus). Beberapa organisme enterik, misalnya E. coli

    merupakan flora normal dan kadang-kadang menyebabkan penyakit, sementara

    lainnya Salmonella danShigellaselalu bersifat patogen untuk manusia.

    Salmonellasering bersifat patogen pada manusia atau hewan apabila

    masuk melalui mulut. Bakteri ini ditularkan dari hewan atau roduk hewan kepada

    manusia dan dapat menyebabkan enteritis, infeksi sistemik dan demam enterik.

    Salmonella resisten terhadap zat-zat kimia tertentu (misalnya brilliant green,

    natrium tetrationat, dan natrium deoksikolat) yang menghambat bakteri enterik

    lainnya karena itu senyawa ini bermanfaat untuk dimasukkan dalam perbenihan

    yang dipakai untuk mengisolasi Salmonella dari tin!a. Berdasarkan morfologi

    selnya, ukuran Salmonellasangat ber"ariasi pan!angnya.

    #eski pada awalnya Salmonella dideteksi berdasarkan sifat-sifat

    biokimianya, golongan dan spesiesnya harus diidentifikasi dengan analisis

    antigen. Salmonella memiliki beberapa antigen $ (dari keseluruhan yang

    ber!umlah lebih dari %&) dan anigen ' yang berbeda pada salah satu atau kedua

    fase. Beberapa Salmonellamempunyai antigen simpai () yang disebut i yang

    dapat mengganggu aglutinasi melalui antiserum $ antigen ini dihubungkan

    dengan sifat in"asif yang dimilikinya. *es aglutinasi dengan antiserum serapan

    untuk antigen $ dan ' yang berbeda merupakan dasar untuk klasifikasi

    +almonella secara serologik.

    Salmonellla typhi terutama menyebabkan infeksi pada manusia infeksi

    oleh organisme ini ditularkan dari sumber manusia. *etapi, sebagain besar

    Samonellaterutama bersifat patogen bagi hewan yang merupakan reser"oir untuk

    infeksi manusia. $rganisme ini hampir selalu masuk melalui mulut, biasanya

    bersama makanan dan minuman yang tercemar (kontaminasi). Bagi manusia,

    dosis infektif rata-rata untuk menimbulkan infeksi klinik atau sub-klinik adalah

  • 7/21/2019 Modul Mikrobiologi Blok Digestive

    2/13

    & - & bakteri (tetapi mungkin cukup dengan &/ organisme Salmonella).

    Faktor inang ikut berperan dalam resistensi terhadap infeksi Salmonella adalah

    keasaman lambung, flora normal usus, dan daya tahan usus.

    0ada manusia, Salmonella menyebabkan penyakit deman enterik

    (demam tifoid). 1e!ala deman tifoid ditimbulkan oleh beberapa +almonella,

    tetapi yang terpenting adalah S. typhi. Salmonellayang termakan mencapai usus

    halus dan masuk ke saluran getah bening lalu ke aliran darah. emudian baktei

    dibawa oleh darah menu!u berbagai organ, termasuk usus. $rganisme ini

    berkembang biak dalam !aringan limfoid dan diekskresi dalam tin!a.

    +etelah masa inkkubasi & 2 3 hari, timbul demam, lemah, sakit kepala,

    konstipasi, bradikardia dan mialgia. 4emam sangat tinggi dan limfa serta hati

    membesar. +ebelum masa antibiotika, komplikasi utama demam enterik adalah

    perdarahan usus dan perforasi angka kematiannya & 2 5. 0engobatan

    dengan kloramfenikol, ampisilin atau trimetoprim-sulfametoksazol mengurangi

    angka kematian men!adi kurang dari 5.

    *es diagnostik menggunakan metode serologi dipergunakan untuk

    mengidentifikasi biakan yang tidak diketahui dengan serum yang diketahui dan

    dapat !uga digunakan untuk menentukan titer antibodi pada penderita yang tidak

    diketahui penyakitnya.

    . *es aglutinasi mikroskopik cepat

    4alam tes ini, serum yang diketahui dicampur dengan biakan yang tidak

    diketahui pada kaca ob!ek. 0enggumpalan ter!adi apabila dapat dillihat dalam

    beberapa menit. *es ini khususnya bermanfaat untuk identifikasi pendahuluan

    biakan secara cepat.

    6. *es aglutinasi pengenceran tabung (tes 7idall)8glutinasi serum meningkat dengan cepat selama minggu kedua dan ketiga

    pada infeksi Salmonella. +ekurang-kurangnya diperlukan dua bahan serum,

    yang diperoleh dengan selang waktu 9 2 & hari untuk membuktikan adanya

    kenaikan titer antibodi. +erum yang tidak dikenal diencerkan berturut-turut

    (dua kali lipatnya) kemudian dites terhadap antigen Salmonella. 'asilnya

    ditafsirkan sebagai berikut : (). *iter $ yang tinggi atau kenaikan titer $ (;

    : %&) menun!ukkan adanya infeksi aktif. (6). *iter ' yang tinggi (; : %&)

  • 7/21/2019 Modul Mikrobiologi Blok Digestive

    3/13

    menun!ukkan bahwa penderita itu pernah di"aksinasi atau pernah terinfeksi.

    (/). *iter i yang tinggi terdapat pada beberapa pembawa bakteri. 'asil tes

    serologik untuk infeksi Salmonella harus diinterpreatsikan secara hati-hati.

    emungkinan adanya antibodi reaksi silang membatasi penggunaan aerologi

    dalam diagnosis infeksi Salmonella.

    ISOLASI dan IDENTIFIKASISalmonella

    a. +ampel mutahan, feses, makanan diambil < gram dan dihaluskan atau darah,

    urin, minuman, air diambil < ml

    b. #asukkan dalam medium =actose Broth (=B) dan diinkubasi selama > 63

    !am, /9 $?

    c. +etelah inkubasi selesai, masukkan dalam medium +elenith Broth (+B) dan

    diinkubasi selama > 63 !am, /9 $?

    d. +etelah inkubasi selesai :

    d.. dengan menggunakan !arum ose, inokulasikan pada medium ++8 secara

    streak atau kuadran atau

    d.6. &, ml dengan mikropipet masukkan dalam medium ++8 dan diratakan

    dengan drugalsky

    e. @nkubasi pada suhu /9 $? selama -6 > 63 !am

    f. 8mati pertumbuhan koloni yang terbentuk : koloni warna merah atau bening

    keruh dan pada bagian tengahnya berwarna hitam menun!ukkan adanya koloni

    Salmonella.

    g. oloni yang diduga Salmonellakemudian dilakukan pewarnaan gram dengan

    cara :

    Buat preparat ulas dari suspensi kuman yang didugaS. typhi.

    =akukan fiksasi dengan hati-hati

    1enangi preparat dengan kristal ungu dan dibiarkan selama /& detik

    ?uci dengan air mengalir dan dikeringkan

    1enangi preparat dengan kalium iodida dan dibiarkan selama 3 detik

    ?uci dengan air mengalir

    ?uci dengan alkohol aseton sampai warna ungu hilang dan dikeringkan

  • 7/21/2019 Modul Mikrobiologi Blok Digestive

    4/13

    1enangi preparat dengan safranin dan dibiarkan selama /& detik

    ?uci dengan air mengalir dan dikeringkan

    8mati preparat dengan mikroskop.

    h. oloni tersebut !uga ditumbuhkan pada media tegak miring *+@8 (goresan

    dan tusukan), +@#8 (tusukan) dan A8 (tusukan) untuk identifikasi !enis

    +almonella. @nkubasi pada suhu / $? selama > 63 !am.

    i. 8mati pertumbuhan koloni dan perubahan media identifikasi. (). *+@8 lereng

    merah (alkalis), dasar kuning (asam) dan gas ( C -), (6). +@#8 : hidrogen

    sulfida ('6+) positif, indole (-) dan motiliti (aktif C ), (/). A8 negatif (tidak

    ter!adi perubahan warna media).

    KoloniSalmonella pada media Salmonella Shigella Agar

  • 7/21/2019 Modul Mikrobiologi Blok Digestive

    5/13

    Gambar pewarnaan GRAM

  • 7/21/2019 Modul Mikrobiologi Blok Digestive

    6/13

    Identifia!iSalmonella pada TSIA

    Identifia!iSalmonella pada SIM Agar

  • 7/21/2019 Modul Mikrobiologi Blok Digestive

    7/13

    "#I SEROLOGI

    +erologi adalah telaah ilmu tentang reaksi antara antigen dengan

    antibodi di dalam serum. Deaksi serologi dapat digunakan sebagai :

    . #enentukan antigen atau antibodi apabila salah satu dari hal tersebut telahdiketahui

    6. #engukur titer atau kadar

    *es serologi berdasarkan pada ter!adinya ikatan antigen antibodi. +erum

    penderita yang diduga mengandung suatu antibodi, direaksikan dengan antigen

    yang sudah diketahui !enisnya. 8pabila ter!adi reaksi (reaksi positif), berarti

    penderita sebelumnya telah pernah terinfeksi oleh antigen tersebut. umlah

    antibodi (titer antibodi) yang terdapat di dalam serum penderita dapat dipakai

    sebagai dasar untuk diagnosa penyakitnya.

    ?ontoh, reaksi 7idall dipakai untuk mendiagnosis penyakit typus

    abdominalis yang disebabkan oleh Salmonella typhi. +elain dapat dipakai untuk

    menentukan !enis kuman yang diasingkan dari penderita, !uga dapat digunakan

    untuk menentukan golongan darah sebelum melakukan transfusi darah, memilih

    donor yang tepat pada transplantasi !aringan.

    Salmonella typhi mempunyai tiga macam antigen, yaitu : O antigen

    (somatik antigen),H antigen(flagellar antigen) dan Vi antigen("irulensi antigen)

    ada !uga pustaka menambahkanK antigen(kapsul antigen).

    0ada reaksi aglutinasinya :

    . 8glutinasi $ berbentuk butir-butir pasir yang tidak hilang apabila dikocok

    6. 8glutinasi ' berbentuk butir-butir pasir yang hilang apabila dikocok

    /. 8glutinasi i berbentuk awan

    Deaksi 7idall adalah reaksi serum (sero-test) untuk mengetahui adatidaknnya antibodi terhadap Salmonella typhi, dengan !alan mereaksikan serum

    seseorang dengan antigen $, ', dan i dari laboratorium. 8pabila ter!adi

    aglutinasi, dikatakan reaksi 7idall positif berarti serum orang tersebut

    mempunyai antibodi terhadap S. typhi, baik setelah "aksinasi, setelah sembuh dari

    penyakit tifus ataupun sedang menderita tifus. Deaksi 7idall negatif artinya tidak

    memiliki antibodi terhadap S. typhi.

    Deaksi 7idall dipakai untuk menegakkan diagnosis penyeakit tifus

    abdominalis. 0eninggian titer aglutinin $ menun!ukkan adanya infeksi yang aktif,

    peninggian titer aglutinin ' disebabkan "aksinasi dan peninggian titer aglutinin i

    menun!ukkan karier.

    Antigen adalah zat yang dapat merangsang terbentuknya antibodiapabila dimasukkan dalam !aringan tubuh Antibodi adalah zat yang dihasilkan

    tubuh setelah dimasuki suatu antigen. 8ntibodi ini dapat berupa antibakteri,

    anti"irus maupun antitoksin, bergantung dari antigen yang masuk.

    +ifat antigen :

    . selalu berupa protein yang mempunyai berat molekul lebih dari &.&&&

    6. tidak mudah hancur dan terurai oleh cairan-cairan tubuh (darah, limfa dan

    sebagainya)

    +ifat antibodi :

    . terdiri dari suatu zat yang menempel pada gamma globulin

    6. berada dalam keadaan larut dalam cairan badan (serum)

    /. dapat direaksikan dengan antigen secara spesifik

  • 7/21/2019 Modul Mikrobiologi Blok Digestive

    8/13

    3. dibuat dalam reticulo endothelial system (sumsum tulang, kelen!ar limfa,

    li"er)

    . antibodi bersifat thermolabil dan tidak tahan apabila kena sinar matahari,

    karena itu harus disimpan pada tempat yang dingin dan gelap.

    +el bakteri, "irus maupun toksinnya yang terdiri atas protein akanbertindak sebagai antigen apabila sehingga merangsang dibentuknya antibodi.

    Beberapa !enis karbohidrat dan lemak, apabila masuk dalam !aringan tubuh tidak

    akan bersifat antigen, tetapi apabila berikatan dengan suatu protein akan bersifat

    antigen, sehingga merangsang terbentuknya antibodi. arbohidrat atau lemak

    yang dapat berikatan dengan protein dan bersifat antigen disebut $A%TEN&

    $bat-obat tertentu apabila diberikan kepada seseorang yang sensiti",

    dapat merupakan hapten karena berikatan dengan protein tubuh sehingga

    merangsang dibentuknya antibodi. #isalnya, seseorang men!adi alergi terhadap

    obat sulfa atau penisilin.

    @stilah Deaksi 8ntigen dengan 8ntibodi

    Antigen Antibodi Rea!i

    8glutinogen

    0recipinogen

    +el bakteri

    *oksin

    8glutinin

    0recipitin

    Bakteriolysin

    8ntitoksin

    8glutinasi

    0recipitasi

    Bakteriolisis

    Flokulasi

    7eil Feli> (9) menemukan bahwa antigen badan kuman (antigen $,

    antigen somatik) berlainan dengan antigen dari flagel (antigen ') dan hasil

    aglutinasinya !elas berbeda.

    8ntibodi ', didapat dengan cara menyuntikan kuman yang masihbergerak dalam bentuk suspensi kuman hidup atau dimatikan dan antigen

    somatiknya dirusak dengan formalin, ke dalam tubuh binatang percobaan. *iter

    yang didapat biasanya tinggi karena antibodi ' mempunyai afinitas tinggi

    terhadap flagela dan mudah menyebabkan bergerombolnya flagela. 0ada

    manusia, titer yang tinggi menun!ukkan adanya infeksi atau pernah di"aksinasi,

    tetapi tidak ada hubungannya dengan dera!at kekebalan tubuh karena antigen '

    tidak berhubungan dengan "irulensi.

    8ntibodi $, didapat dengan cara menyuntikan kuman yang flagelanya

    telah dirusak dengan mencampur alkohol dan dieram pada suhu /9 $? selama 63-

    /% !am. Biasanya titer yang diperoleh tidak begitu tinggi karena aglutinasi sel

    kuman diperlukan lebih banyak molekul antibodi.

    8ntibodi i, hanya terdapat pada kuman yang baru diasingkan dan

    terbatas pada +almonella typhi serta beberapa !enis salmonella lainnya dan kuman

    enterik non patogen. i, kependekan dari "irulensi, pada mulanya dianggap

    sebagai faktor penting untuk menentukan "irulensi kuman, tetapi kemudian

    ternyata antigen i tidak sepenting reaksi aglutinasi dengan serum yang

    mengandung antibodi $. 8ntigen i dapat dihilangkan dengan cara pembiakkan

    berulangkali.

    *u!uan : #engu!i secara serologi mikroba patogen yang menyebabkan

    penyakit

  • 7/21/2019 Modul Mikrobiologi Blok Digestive

    9/13

    Bahan : 8ntigen Salmonella typhi', serum darah penderita tyfus

    8lat : $b!eck glass, mikropipet segala ukuran, pipet tetes

    0rosedur :

    '& Titer '()*8mbil 6& Gl serum (antibodi) 3& Gl ( tetes) reagen 7idall (antigen S. typhi

    ')

    +& Titer '(',*

    8mbil & Gl serum (antibodi) 3& Gl ( tetes) reagen 7idall (antigen S. typhi

    ')

    -& Titer '(-+*

    8mbil Gl serum (antibodi) 3& Gl ( tetes) reagen 7idall (antigen S. typhi

    ')

    3. 8mati masing-masing, apabila ter!adi aglutinasi maka reaksi positif, dan

    apabila tidak ter!asi aglutinasi (tidak ada antigen Salmonella typhi ' pada

    serum penderita) maka reaksi negatif. 0eker!aan diteruskan hingga reksi negatif. Antuk titernya dihitung

    kelipatannya.

  • 7/21/2019 Modul Mikrobiologi Blok Digestive

    10/13

    I S O L A S I DAN E N " M E R A S I

    K " M A N % A T O G E N .Escherichia coli/

    0emeriksaan laboratorium merupakan bagian dari rangkaian pemeriksaan

    untuk mengetahui penyebab penyakit, menilai perkembangan penyakit setelah

    diberikan pengobatan atau menyakinkan kebenaran penyebab penyakit yang

    diduga berdasarkan ge!ala klinisnya yang khas (ge!ala pathognomonic).

    Antuk mengetahui penyakit infeksi, diusahakan isolasi dan identifikasi

    mikroorganisme dari spesimen (sampel) yang diambil dari penderita. 'asil

    pemeriksaan ini dipakai sebagai pedoman dalam pengobatan, perawatan ataupun

    tindakan lainnya pada penderita.

    #engingat hasilnya yang sangat penting ini, maka pengambilan dan

    penanganan spesimen harus dilakukan dengan benar. +ecara umum pemeriksaan

    yang dilakukan di laboratorium, adalah :

    a. 0emeriksaan mikroskopis

    b. 4itanam pada perbenihan buatan, binatang percobaan atau perbenihan

    !aringan

    c. *est serologis

    8dapun medium yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorgansime

    tergantung dari tu!uan isolasi. Antuk isolasi bakteri, misalnya Staphylococcus

    aureusmenggunakan media #+8, Salmonelladan Shigellamenggunakan media

    ++8, Escherichia coli menggunakan #ac ?onkeyCEndo 8garCE#B8CB1=B8,

    Candida albicansmenggunakan media +48,Neserria gonorrhoaemenggunakan

    media ?oklar 8gar, golongan kapang menggunakan media 048 dll.

    %ENGAM0ILAN DAN %ENGIRIMAN S%ESIMEN

    0engambilan +pesimen merupakan langkah awal yang penting untuk

    keberhasilan isolasi dan identifikasi kuman, karena seringkali kegagalan usaha ini

    bukan disebabkan kesalahan teknik di laboratorium, melainkan dalam

    pengambilan spesimen.

    Antuk menghindari kesalahan tersebut, maka pengambilan dan pengiriman

    spesimen harus dilakukan sebagai berikut :

  • 7/21/2019 Modul Mikrobiologi Blok Digestive

    11/13

    . 0engambilan harus dilakukan sebelum penderita diberi pengobatan antibiotik

    atau kemoterapeutika.

    adang-kadang dokter memberikan obat antibiotik berdasarkan ge!ala

    penyakitnya, tanpa melakukan identifikasi kumannya, sehingga isolasi kuman

    men!adi sulit atau men!adi tidak mungkin. arena itu, pengambilan spesimen

    harus dilakkan sebelum obat diberikan.

    6. 0engambilan harus dilakukan pada saat di mana kemungkinan besar

    kumannya bisa ditemukan.

    +pesimen harus diambil pada saat dimana kemungkinan besar kuman bisa

    ditemukan. #isalnya untuk mengisolasi Plasmodiiumsp. pengambilan darah

    harus dilakukan saat penderita sedang deman. Beberapa laboratorium

    melakukan pengambilan spesimen / hari berturut-turut untuk memperbesar

    kemungkinan mendapatkan kumannya.

    Beberapa !enis kuman patogen hanya bisa ditemukan pada stadium tertentu

    dari penyakitnya. #isalnya Treponema pallidum, sangat mudah di isolasi

    pada saat stadium awal sipilis dan sukar sekali ditemukan pada stadium lan!ut.

    T. pallidumdengan mudah bisa diisolasi dari spesimen yang berasal dari ulcus

    durum (ge!ala sipilis primer) dan langsung dilihat dengan mikroskop Dark

    Field. *elihat bakteri yang berbentuk spiral dan dapat bergerak.

    /. 0engambilan harus dilakukan pada tempat dimana infeksinya sedang

    berlangsung.

    +pesimen harus diambil dari bagian tubuh yang mengalami infeksi aktif

    karena kadang-kadang kumannya hanya terdapat dibagian tersebut. #isalnya,

    penyakit karena !amur Epidhermophyton loccusumyang menyebabkan tinea

    cruris, !amurnya akan mudah diisolasi dari bagian kullit yang mengalamiinfeksi aktif, yaitu pada pinggir dari kelainan kulitnya.

    3. +pesimen harus diambil dalam !umlah yang cukup.

    +pesimen harus diambil dalam !umlah yang cukup agar bisa memenuhi

    kebutuhan berbagai !enis pemeriksaan yang diperlukan. #isalnya sputum

    biasanya dibagi men!adi dua (6) bagian masing-masing cc (ml) untuk

    perbenihan, sehingga paling sedikit dibutuhkan & cc.

  • 7/21/2019 Modul Mikrobiologi Blok Digestive

    12/13

    . 0engambilan harus dilakukan dengan alat dan tempat penampungan yang tepat

    sebelum dikirim ke laboratorium.

    8lat untuk mengambil spesimen, misalnya kapas untuk apusan (swab) atau

    !arum suntik dan tabungnya tidak boleh mengandung daya hidup kumannya.

    8lat penyimpanan spesimen untuk pengiriman ke laboratorium harus steril

    dan terhindar dari kontaminasi oleh mikroorganisme lain.

    %. 'arus segera dikirim ke laboratorium untuk analisis.

    +pesimen haru segera dikirim ke laboratorium, apabila tidak memungkinkan

    harus disimpan dalam medium khusus dalam pengirimannya agar kuman tetap

    hidup.

    9. 'arus disimpan dalam lingkungan atau medium yang tepat sebelum saatnya

    diproses.

    . +pesimen harus segera diproses agar kemungkinan untuk berhasilnya proses

    isolasi lebih besar.

    E. colimerupakan flora normal, hidup komersial di dalam kolon manusia

    dan di duga membantu pembuatan "itamin yang penting untuk pembekuan

    darah. E. colidapat digunakan untukCsebagai indikator pencemaran air oleh tin!a,

    terutama untuk air yang digunakan keperluan rumah tangga. E. coli dapat

    menyebabkan epidemi penyakit saluran pencernaan, seperti kolera, tipus, disentri

    dan penyakit cacing.

    0D$+E4AD EHA#ED8+@

    ) +ampel urin dilakukan pengenceran sampai &-, dengan cara :

    a. m= urin dimasukkan dalam aIuadestCgaram fisiologis steril m=

    menggunakan mikropipet biru (&&& J=) sebagai pengenceran &-(@)

    b. m= pengenceran &-(@) dimasukkan dalam aIuadestCgaram fisiologis

    steril m= menggunakan mikropipet biru (&&& J=) sebagai

    pengenceran &-6 (@@)

    c. m= pengenceran &-6 (@@) dimasukkan dalam aIuadestCgaram fisiologis

    steril m= menggunakan mikropipet biru (&&& J=) sebagai

    pengenceran &-6 (@@@) seterusnya sampai pengenceran &-.

    6) 4ua pengenceran terakhir dilakukan penanaman dengan duplo (masing2

    masing pengenceran 6 cawan) pada media #c ?onkey 8gar cawan secara

    spread plate(&& J=)

  • 7/21/2019 Modul Mikrobiologi Blok Digestive

    13/13

    /) @nkubasi dilakukan selama 6 > 63 !am pada suhu /9&?.

    3) 4ihitung !umlah pertumbuhan koloniE. coli(koloni sedang, merah bataCtua,

    smooth, kepingCsedikit cembung) pada masing-masing cawan.

    ). 0ertumbuhan koloni dihitung dengan metode Total Plate Count(*0?), yaitu :

    koreksiaktor!n!am"CF#koloni$umlah C,)C( =

    eterangan :

    a : !umlah koloni

    n : faktor pengenceran (&-, &-6, &-/dst)

    aktor koreksi : metode penanaman (Spread plate : &pour plate : )

    (=ay, 3).