PRAKTIKUM BIOKIMIAPERCOBAAN 1

PENETAPAN KADAR ASAM AMINO DENGAN METODE TITRASI

FORMOL

Pengampu Percobaan 1Gol. I Dora, Gol. II Nilam, Gol. III FeraGol. IV Drs. Ibrahim Arifin, M.Sc., Apt.

Kelas Sore Desy

• TUJUAN PRAKTIKUMMengetahui kadar asam amino dalam

gelatin yang dipecah oleh enzim papain dengan titrasi formol.

• TEORIAsam amino terdiri dari sebuah gugus

amino, sebuah gugus karboksil, sebuah atom hidrogen, dan rantai cabang yang terikat pada sebuah atom Cα.

• Dalam protein terdapat 20 asam amino utama yang berperan sebagai pembangun. Masing-masing asam amino berbeda satu dengan yang lain pada rantai samping atau gugus R.

• Asam-asam amino diperlukan dalam sintesis protein tubuh

• Metabolisme asam amino dibagi dalam tiga jalur, yaitu ;2 jalur katabolisme yang merupakan proses degradasi

dan glukoneogenesis1 jalur anabolisme yang merupakan proses sintesis

protein

• Hasil akhir dari metabolisme asam amino yaitu berupa urea, keratin, asam urat, dll.

• Prinsip titrasi formol yaitu :Larutan protein dinetralkan dengan

basa (NaOH), kemudian ditambah formalin sehingga terbentuk dimetilol.

Dengan terbentuknya dimetilol maka gugus amino protein sudah terikat dan tidak mempengaruhi reaksi antara asam (gugus karboksil) dengan basa NaOH sehingga akhir titrasi dapat diakhiri dengan tepat.

• Reaksi yang terjadi :

ALAT DAN BAHAN PERCOBAAN

• ALAT(2) Biuret(2) Klem dan statim(2) Beker glass(2) Batang

pengaduk(2) Lampu spiritus (2) Gelas ukur(12) Erlenmeyer

• BAHANLarutan gelatin 5%NaOH 0,1 NPhenolpthaleinHCl 0,1 NFormaldehid 16%

dinetralkan dengan alkali

Larutan papain 1%Indikator universal

YANG PERLU DIPERSIAPKAN !!!

• Buatlah Aqua Bebas CO2 sehari sebelum praktikum!

• Pembuatan Larutan Gelatin 5% sebanyak 100 ml

• Pembuatan NaOH 0,1 N sebanyak 100 ml• Pembuatan HCl 0,1 N sebanyak 50 ml• Pembuatan Formaldehid 16% sebanyak 200 ml• Pembuatan Larutan Papain 1% sebanyak 25 ml

CARA KERJA100 ml larutan gelatin 5%

+ PP

Ditambah NaOH 0,1 N ad merah muda konstan

Ditambah dengan HCl 0,1 N hingga jernih (pH 8) cek dg indikator universal

HASIL 1

25 ml larutan papain 1% + PP

Ditambah NaOH 0,1 N ad merah muda konstan

Ditambah dengan HCl 0,1 N hingga jernih (pH 8) cek dg indikator universal

HASIL 2

Tepat jam ke “0” masukkan HASIL 2 dalam HASIL 1Maka asam amino akan pecah (hidrolisis)

Campuran HASIL 2 dalam HASIL 1

Ambil 10 ml sampel campuran tersebut dalam interval waktu 0, 15, 30, 60, 90, dan 120, masukkan sampel dalam

erlenmeyer berlabel(lakukan duplo / replikasi 2x)

Panaskan hingga mendidih lalu dinginkan, kemudian tambah 15 ml Formalin netral

Tambahkan 3 tetes Phenolptalein

Titrasi dengan NaOH 0,1 N ad merah muda konstan, catat vol. NaOH yang keluar, lalu hitung %N-Asam Amino

CATATAN : Jangan lupa selalu foto hasil dari setiap langkah, tulisan/label pada erlenmeyer terlihat jelas

BUATLAH TABEL TITRASI FORMOL SEPERTI BERIKUT :

WAKTUVOLUME NaOH 0,1 N YANG DIBUTUHKAN

REPLIKASI 1 REPLIKASI 2

0 ...........ml ...........ml

15 ...........ml ...........ml

30 ...........ml ...........ml

60 ...........ml ...........ml

90 ...........ml ...........ml

120 ...........ml ...........ml

Catatan : tabel telah dipersiapkan dan dibuat pada laporan sementara

Rumus menghitung %N-Asam Amino :%N = Vol NaOH titrasi formol x N

NaOH x 1,4 x 100%0,5 x 10

WAKTUREPLIKASI 1 REPLIKASI 2

Vol. NaOH %N-Asam Amino Vol. NaOH %N-Asam

Amino0 ...........ml ...........% ...........ml ...........%

15 ...........ml ...........% ...........ml ...........%

30 ...........ml ...........% ...........ml ...........%

60 ...........ml ...........% ...........ml ...........%

90 ...........ml ...........% ...........ml ...........%

120 ...........ml ...........% ...........ml ...........%

BUATLAH TABEL PERHITUNGAN %N-ASAM AMINO SEPERTI BERIKUT :Catatan : tabel telah dipersiapkan dan

dibuat pada laporan sementara

Buatlah Kurva Titrasi Waktu Vs Volume NaOH 0,1 N pada Titrasi

Formol• Contoh :

0 20 40 60 80 100 120 1400

2

4

6

8

10

12

14

Kurva Titrasi waktu Vs Volume NaOH 0,2 N

Waktu (menit)

Volu

me

NaO

H 0,

2 N

(ml)

• Contoh :

Buatlah Kurva Waktu Vs %N-Asam Amino

0 20 40 60 80 100 120 1400%

5%

10%

15%

20%

25%

30%Kurva Waktu Vs %N-Asam Amino

Waktu (menit)

%N

-Asa

m A

min

o