lineamientos para la vigilancia por laboratorio de ... · entomología del indre, mediante oficio,...

Prolongación de Carpio No. 470, Col. Santo Tomas, Delegación

Miguel Hidalgo, C. P. 11340, México, D. F.

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INSTITUTO DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLÓGICOS

Prolongación de Carpio 470, Col. Casco de Santo Tomás, Del. Miguel Hidalgo, México, DF, 11340 t. +52 (55) 5342 7550 | f. +52 (55) 5341 3264 | www.cenavece.salud.gob.mx/ indre/ interior/ intd_index.html

LINEAMIENTOS PARA LA VIGILANCIA POR LABORATORIO DE DIAGNÓSTICO, CONTROL DE CALIDAD Y REFERENCIA

DE ENFERMEDADES TRANSMITIDAS POR VECTORES

InDRE – RNLSP 2012



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SECRETARIA DE SALUD

SALOMÓN CHERTORIVSKI WOLDENBERG

SECRETARIO DE SALUD

DR. PABLO KURI MORALES

SUBSECRETARIO DE PREVENCIÓN Y PROMOCIÓN DE LA SALUD

DR. JESÚS FELIPE GONZÁLEZ ROLDÁN

DIRECTOR GENERAL DE EPIDEMIOLOGÍA


DR. JOSÉ ALBERTO DÍAZ QUIÑONEZ

DIRECTOR GENERAL ADJUNTO

DRA. MA. DEL CARMEN GUZMÁN BRACHO

DIRECTORA DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA

QFB. LUCÍA HERNÁNDEZ RIVAS

DIRECTORA DE SERVICIOS Y APOYO TÉCNICO

LIC. JESÚS OMAR CASTILLO HERNÁNDEZ

SUBDIRECTOR DE OPERACIÓN

QBP. IRMA HERNÁNDEZ MONROY

JEFA DEL DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGÍA

M EN C IRMA LÓPEZ MARTÍNEZ

JEFA DEL DEPARTAMENTO DE VIROLOGÍA

QFB. ROBERTO VÁZQUEZ CAMPUZANO

JEFE DEL DEPARTAMENTO DE ENFERMEDADES EMERGENTES Y URGENCIA

QC. ISRAEL PARRA ORTEGA

JEFE DEL DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGÍA

DRA. CLARA GORODEZKY LAUFERMAN

JEFA DEL DEPARTAMENTO DE INMUNOLOGÍA

M EN C JUDITH ESTÉVEZ RAMÍREZ

JEFA DEL DEPARTAMENTO DE CONTROL DE MUESTRAS Y SERVICIOS

DR. ERNESTO RAMÍREZ GONZÁLEZ

JEFE DEL DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y

VALIDACIÓN DE PRUEBAS

M EN C. HERON HUERTA JIMENEZ

JEFE DEL LABORATORIO DE ENTOMOLOGÍA



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Contenido

I. Introducción II. Objetivo general

Objetivos específicos Vigilancia Entomológica Determinación taxonómica Lectura de laminillas

III. Muestras entomológicas IV. Capacidad analítica V. Entomología de la Enfermedad de Chagas VI. Mosquitos de importancia médica VII. Scorpiones VIII. Otros Taxa VI. Anexos



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I. Introducción El Laboratorio de Entomología lleva acabo procedimientos encaminados al estudio de artrópodos con importancia médica en México, con el objetivo de cumplir diagnósticos adecuadamente estandarizados y con calidad en apoyo a los programas de Vigilancia Epidemiológica, dirigidos al diagnóstico, control de calidad y referencia de las muestras entomológicas que se remiten a través de la Red Nacional de Laboratorios Estatales de Salud Pública (RNLESP), además de desarrollar investigación básica y aplicada en el campo de la entomología médica, con programas de capacitación continua y la coordinación de la Red Nacional de Laboratorios Estatales de Salud Pública en el componente de Entomología.

El control de calidad de las muestras entomológicas se basa en la NOM-032-SSA2-2009,

para la Vigilancia Epidemiológica, Prevención y Control de las Enfermedades Transmitidas por Vectores, en la cual indica en el punto 7.13. [Control de calidad de las muestras entomológicas.- El control de calidad y la referencia de la identificación taxonómica de artrópodos con importancia médica se llevará a cabo por el Laboratorio de Entomología del InDRE, por lo que los Laboratorios Estatales de Salud Pública (LESP), deberán enviar el 10% de muestras positivas (artrópodos con importancia médica) y el 5% de muestras negativas (artrópodos sin importancia médica). Los ejemplares deberán enviarse de acuerdo a las indicaciones contenidas en el instructivo para envío y recepción de muestras foráneas del InDRE].

II. Objetivo General

Establecer lineamientos entomológicos para la aplicación de algoritmos de diagnóstico, control de calidad y referencia de las muestras entomológicas relacionadas a las Enfermedades Transmitidas por Vectores a través de la RNLESP, en apoyo a la Vigilancia Epidemiológica.

Objetivos específicos Diagnóstico de determinación taxonómica de artrópodos a la RNLESP Control de calidad de las muestras entomológicas de la RNLSP-Entomología Elaboración y aplicación de paneles de evaluación del desempeño a la RNLESP-Entomología Mantenimiento de la Colección de Artrópodos con Importancia Médica (CAIM) Actualización de métodos de estudio y taxonómicos de artrópodos con importancia médica Capacitación y actualización del personal en la parte de laboratorio y campo en los procedimientos, técnicas y métodos de entomología médica.



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Cultivo y mantenimiento de insectos para fines de diagnóstico, enseñanza e investigación. Vigilancia entomológica. Constituye una herramienta centinela para el monitoreo de la distribución y dispersión de las especies de artrópodos con importancia médica. Actualmente varias especies han incrementado su distribución favorecido por diferentes factores humanos (deforestación, uso de suelo, etc.) y ecológicos (p. eje. cambio climático) que han llevado al establecimiento de nuevas áreas geográficas en el país, las cuales pueden considerarse de riesgo, dada la capacidad de transmisión de diferentes enfermedades transmitidas por vectores. Por ello, es indispensable reconocer las especies de vectores, monitorear su distribución actual y conocer la capacidad vectorial para la prevención de enfermedades Determinación taxonómica. La identificación taxonómica es esencialmente referida a la experiencia del determinador, se requiere de conocimientos y experiencia con los grupos para dar un resultado confiable. Por lo tanto es necesario contar con información básica y especializada de los grupos, contar con material de referencia y con al menos un investigador reconocido en el grupo para tener confiabilidad en el resultado, así como consultas o evaluaciones externas a la identificación de la muestra.

III. MUESTRAS ENTOMOLÓGICAS DEFINICIONES.

Diagnóstico. Se considera una muestra para diagnóstico, aquella que sea remitida de un LESP mediante oficio y relación de datos al Laboratorio de Entomología del InDRE y que contenga uno o diversos ejemplares de artrópodos, sin resultado de determinación taxonómica a nivel de especie o subespecie. La muestra puede incluir artrópodos con o sin importancia médica, además puede ser una muestra de la cual no se conozca su clasificación biológica. Confirmación. Se considera una muestra para confirmación, aquella que sea remitida por el LESP mediante oficio y relación de datos al Lab. de Entomología del InDRE y que incluya un resultado de determinación taxonómica a nivel de familia, género, especie o subespecie del taxón en cuestión. El resultado emitido por el Lab. Entomología del InDRE será positivo o negativo (en aquellas muestras para búsqueda coproparasitológica) y en la determinación taxonómica el nombre del taxón específico, no incluirá ningún porcentaje de correlación, sólo se confirma el resultado del LESP. Control de calidad.



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Se considera una muestra para control de calidad, aquella que sea remitida de un LESP al Lab. de Entomología del InDRE, mediante oficio, relación de datos y resultado de la determinación taxonómica a nivel especie o subespecie, que la muestra refiera específicamente a algún artrópodo con importancia médica en México y que el determinador del LESP haya sido anteriormente capacitado en el Laboratorio de Entomología del InDRE sobre el taxón que representa la muestra. En el resultado de las muestras procesadas se indicara el porcentaje (%) de correlación o concordancia entre el resultado del InDRE y LESP. Casos especiales:

1) En el CC de la determinación taxonómica de chinches Triatominae para los estadios ninfales del primero al quinto no se pueden determinar a nivel especie, hasta que adquieren la etapa adulta, por lo cual pueden enviar el resultado a nivel genérico (Triatoma sp, con referencial al estadio de la ninfa). 2) Con relación al CC de la búsqueda coproparasitológica en las chinches Triatominae, pueden enviar ninfas y/o adultos junto con las laminilla del estudio, el resultado indica positivo o negativo a Trypanosoma cruzi.

3) Para las muestras de mosquitos en estado larval, el diagnóstico taxonómico deberá basarse exclusivamente en las larvas de cuarto estadio.

4) Con referencia a los Scorpiones, en el caso de que los resultados de las muestras

contengan ejemplares juveniles, estos podrán ser informados a nivel genérico, debido a que en esta etapa de desarrollo de los Scorpiones, los caracteres taxonómicos no son adecuados para separar las especies o subespecies.

5) En relación a las Arañas, en el caso de que los resultados de las muestras contengan ejemplares preadultos, estos podrán ser informados a nivel género, debido a que en esta etapa de desarrollo de las arañas, los caracteres taxonómicos no son adecuados para separar las especies.

Para cada resultado de control de calidad de las muestras entomológicas, se especificara el

porcentaje de correlación entre la determinación taxonómica del LESP y del Laboratorio de Entomología del InDRE, con base en lo anterior se indican los siguientes criterios para el CC.

1º Criterio. La persona de emite el resultado del LESP debió haber llevado a cabo una capacitación previa en taxonomía del grupo en cuestión.



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2º Criterio. Envió de muestras, resultado para CC mediante oficio y relación de datos de las muestras procedentes de los LESP a nivel especie o subespecie, o que cumpla con los casos especiales (p. eje. chinches Triatominae).

3º Criterio. Incluir muestras positivas (especies de artrópodos con importancia

médica) y negativas (especies de artrópodos sin importancia médica). 4º Criterio. En el caso de que el resultado de determinación taxonómica del LESP

indique cómo resultado una muestra con determinación a nivel género (indeterminada=sp) que no esté contemplada en los casos especiales, el resultado del Laboratorio de Entomología, por ende no incluye la muestra en CC y ni la evaluación del porcentaje de correlación, dicho resultado será incluido en la parte de diagnóstico.

Referencia. Se considera una muestra de referencia aquella que incluya o contenga uno o diversos ejemplares con identificación taxonómica a nivel de género, especie o subespecie, que haya sido determinada taxonómicamente por el personal del Laboratorio de Entomología del InDRE y que se encuentre registrada en el acervo de la Colección de Artrópodos con Importancia Médica (CAIM) del Lab. Entomología, InDRE. Generalmente la muestra es enviada a los LESP para fines comparativos para identificación taxonómica. Panel de eficiencia para evaluación de los LESP. Se considera una muestra de panel de eficiencia, aquella que incluya o contenga uno o diversos ejemplares que hayan sido identificados taxonómicamente por el personal del Laboratorio de Entomología del InDRE, la cual contenga una etiqueta con un código o número clave y que sea remitida a los LESP para evaluar al personal en la determinación taxonómica. La evaluación puede constar de diferentes muestras de uno o varios taxones. La evaluación del diagnóstico entomológico conlleva a establecer resultados comparativos en relación a las muestras para diagnóstico, control de calidad, confirmación, referencia y paneles de control, así como en las técnicas y procedimientos que generan los Laboratorios Estatales de Salud Pública (LESP) y el InDRE. Los procedimientos de diagnóstico, confirmación, caracterización y supervisión, constituyen elementos importantes para comparar el desempeño de los LESP con base a su capacidad técnica y al marco analítico establecido de acuerdo a sus necesidades y prioridades. Con referencia a lo anterior, los paneles de control entomológicos constituyen herramientas para estimar los resultados propios con respecto a otros laboratorios y permiten detectar los errores generados en las técnicas y procedimientos de los laboratorios. Acervo de la Colección Entomológica.



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Se considera todo aquel material biológico que se encuentra registrado en el acervo de la Colección de Artrópodos con Importancia Médica (CAIM) del InDRE, el cual quedará en resguardo, preservación y conservación con base en el reglamento Interno de la Colección de Entomología. Muestra positiva. Todas aquellas especies o subespecies de artrópodos implicadas en la transmisión de algún patógeno causante de alguna enfermedad en México, o sea causa directa o indirecta de algún daño por picadura, mordedura o cualquier otro medio considerado con importancia para la salud pública de México En el caso de la búsqueda coproparasitológica en chinches Triatominae, se considera positiva la muestra debido a la presencia del parásito Trypanosoma cruzi. Muestra negativa. Todas aquellas especies que no estén implicadas en la transmisión de algún patógeno causante de alguna enfermedad en México y no sean causa directa o indirecta de algún daño por picadura, mordedura u otro medio que no tenga importancia para la salud pública en México. En el caso de la búsqueda coproparasitológica en chinches Triatominae, se considera negativa la ausencia del parásito Trypanosma cruzi. Muestra recibida. Todas aquellas muestras que sean remitidas del LESP al Lab. de Entomología del InDRE, mediante oficio y relación de datos. Cada oficio recibido será indicado por un número de referencia del Lab. de Entomología del InDRE. Muestra procesada. Todas aquellas muestras estudiadas por el Laboratorio de Entomología del InDRE, de las cuales se emite un resultado por escrito con referencia al LESP, en el cual se incluye número de oficio, fecha del oficio, número de muestras, resultado del estudio y rubricado por el responsable del Lab. de Entomología del InDRE. Muestra indeterminada. Todas aquellas muestras que fueron procesadas por el Laboratorio de Entomología del InDRE con resultado por escrito, el cual indica un diagnóstico inespecífico de las muestras o inderterminado (= sp.). En la determinación taxonómica puede dar como resultado, una categoría taxonómica a nivel de familia o género. Con referencia a la búsqueda coproparasitológica en chinches



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Triatominae como: no se obtuvo la muestra –nom–, lo cual puede deberse a diferentes factores que son causa directa de la interacción parásito-huésped y a la ecología del parásito. Muestra inadecuada. Todas aquellas muestras que no fueron adecuadamente preservadas, empacadas o carezcan de datos de referencia o procedencia (p. eje. Scorpiones remitidos en frascos sin alcohol; frascos rotos; muestras sin datos de colecta, etc.). Muestra rechazada. Todas aquellas muestras que son remitidas del LESP al Lab. de Entomología del InDRE que no hayan sido enviadas mediante oficio y relación de datos o que no cumplan con el manual para envío de muestras del InDRE. Muestra pendiente. Todas aquellas muestras que están aplazadas para el estudio.

IV. CAPACIDAD ANALITICA. La capacidad de análisis de las muestras entomológicas se basa únicamente en artrópodos con importancia médica, debido a que las muestras consideradas como negativas pueden ser grupos aún no descritos, en los cuales se pueden desconocer aspectos de biología y taxonomía, o no se tiene información de referencia. El personal que sea considerado para procesar las muestras entomológicas deberá cumplir con los siguientes criterios:

1) Haber cumplido con una capacitación en servicio en el InDRE del grupo en cuestión. 2) Enviar muestras para control de calidad al InDRE 3) Asistir a cursos anuales del Laboratorio de Entomología del InDRE 4) Evaluación anual por medio de muestras panel de eficiencia 5) Cumplir como mínimo cinco años en la identificación del grupo en cuestión. 6) Contar con muestras de referencia del laboratorio de Entomología del InDRE

Para cada grupo de artrópodos con importancia médica se requiere de previa preparación o montaje, lo cual debe ser considerado para el tiempo de respuesta por parte del laboratorio, además del tiempo de captura de datos, informe de resultados y envío. La capacidad de análisis de las muestras puede variar por varias razones que afectan directamente al resultado, las más comunes son:

1) Ejemplar mal preservado 2) Ejemplar incompleto 3) Inadecuado método de montaje o preservación



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4) Inadecuada identificación por falta de información o material de referencia. 5) Falta de experiencia en el grupo

Con base en lo anterior podemos considerar el análisis de muestras en el siguiente cuadro por grupo artrópodos con importancia médica en México. Cuadro 1. Capacidad analítica de muestras entomológicas

ND. No disponible

Análisis de muestras Estadio Técnica de preparación para preservación y montaje

No. muestras procesadas

No. horas

Personas

Determinación taxonómica

Mosquitos larvas OH etílico al 75% 250 8 1 adultos alfiler entomológico 25 8 1

Escorpiones adultos OH etílico al 75% 50 8 1

Chinches Triatominae ninfas

adultos alfiler entomológico 50 8 1

Chinches de cama (Cimicidae) adultos Laminillas 30 8 1

Otros Taxa: Piojos adultos Laminillas 25 8 1

Pulgas adultos Laminillas 25 8 1

Garrapatas adultos OH etílico al 75% 25 8 1

Arañas adultos OH etílico al 75% 10 8 1

Moscas simúlidos (Simulium) adultos larvas

Laminillas 25 8 1

Moscas miasigenas larvas OH etílico al 75% 25 8 1

Moscas flebotóminos (Lutzomyia) adultos Laminillas 25 8 1

Mocas tábanos (Tabanidae) adultos alfiler entomológico 25 8 1

Moscas chaquistes (Ceratopogonidae) adultos Laminillas 25 8 1

Moscas establos (Muscidae, Calliphoridae) adultos larvas

alfiler entomológico laminillas

25 8 1

Otras moscas adultos Variable ND 8 1

Búsqueda coproparasitológica de Trypanosoma cruzi

parasito Laminilla 25 8 1

Xenodiagnóstico

parasito Laminilla 25 8 1



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V. ENTOMOLOGÍA DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS

En México la enfermedad de Chagas es un problema de salud pública, se estima que alrededor de 1 800 000 personas estarían infectadas y otros 70 000 000 se encuentran en riesgo constante (Ramsey et. al., 2003). En relación al vector de esta enfermedad, en el mundo existen 137 especies de chinches de la subfamilia Triatominae, distribuidas en 5 tribus y 13 géneros, en México se han reportado 7 géneros, siendo el género Triatoma el más importante con 32 especies (Lent H.& Wygoddzinsky P. 1979). El Laboratorio de Entomología del InDRE cuenta actualmente con una red de laboratorios estatales de salud pública que abarca 24 estados de la República Mexicana, de los cuales 15 han integrado el diagnóstico de entomología de la Enfermedad de Chagas (Fig.1), en este sentido el laboratorio de Entomología del InDRE apoya el diagnóstico taxonómico y parasitológico de muestras entomológicas de chinches de la subfamilia Triatominae (Figs. 2), a través del control de calidad y referencia de las mismas con base en la colección de artrópodos con Importancia médica (CAIM), con fines de apoyo para la vigilancia entomológica de la enfermedad de Chagas y otras enfermedades transmitidas por vector en coordinación con el programa de vectores del Centro Nacional de Prevención y Control de Enfermedades (CENAPRECE). Además de realizar investigación aplicada en apoyo al programa de vectores y en la participación con información para la toma de decisiones conjuntas y normas, así como en la capacitación del personal de salud relacionado a la vigilancia entomológica de la enfermedad de Chagas y en la coordinación de la Red Nacional de Laboratorios de Entomología.

Fig. 1. Red de laboratorios de entomología que integran el componente de Enfermedad de Chagas

en marco analítico de 1999 a 2010



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Fig. 1ª. Crecimiento Red de Nacional LSP-Chinches Triatominae y búsqueda coproparasitológica de

Trypanosoma cruzi.

Fig.2. Especies mas colectadas durante el periodo 1999-2010.

Se puede observar que Triatoma dimidiata ha sido la especie más procesada en el Laboratorio de Entomología del InDRE durante este periodo de tiempo.

MUESTRAS

Toma de la muestra y envío Los ejemplares se pueden obtener de manera directa en áreas silvestres, refugios y lugares de resguardo, como pueden ser gallineros, corrales, madrigueras y viviendas humanas con ciertas características y teniendo en cuenta las medidas de seguridad mínimas para evitar tener contacto con las heces u otros fluidos del insecto. Las chinches Triatominae deberán preservarse vivas para su estudio coproparasitológico, bajo las siguientes medidas:

3 4 4 6 6 6 8 9 9 14 15 15

05

101520

REDLESP

T. barberi 2%

T.dimidiata 35%

T. gerstaeckeri 5%

T. longipennis

19%

T. mexicana 19%

T. pallidipennis 12%

T. phyllosoma

3%

otros 5% Especies colectadas



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Los ejemplares deberán colocarse en frasco de plástico o vidrio, de tamaño adecuado al número de organismos. Es importante utilizar un frasco para cada colecta. En el interior del frasco se debe colocar un círculo de papel en la base y sobre éste una tira de papel plegado en forma de acordeón, el cual no debe alcanzar más de la mitad de la altura del frasco. La tapa tiene que estar perforada para facilitar la respiración de los organismos, cuidando que los orificios no sean tan grandes, para permitir la salida de los insectos. La manipulación de la chinches debe hacerse con pinzas y guantes, nunca deberá ser manipulados con las manos. Cada muestra debe contener los datos de colecta: país, estado, municipio, localidad, dirección, nombre del jefe de familia, en el caso de que se colecten en una vivienda, lugar de colecta, fecha de colecta y colector. Si los organismos a enviar ya se encuentran muertos, entonces su transportación deberá ser en “seco”. Las muestras se deberán colocar en el interior de una caja de cartón o unicel y estas a su vez pueden ser envueltas en papel, exceptuando la tapa, posteriormente se rellenaran los espacios entre cada una de las muestra, para evitar en lo posible que se muevan. También es importante considerar el tiempo de envió, para el cual no deberán pasar más de una semana con las muestras retenidas (Fig.3). Fig.3. Secuencia y condiciones mínimas de envío de muestras al Laboratorio de Entomología del InDRE.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS POR EL LABORATORIO

Diagnóstico. Se considera una muestra para diagnóstico, aquella que sea remitida de un LESP mediante oficio y relación de datos al Laboratorio de Entomología del InDRE y que contenga uno o diversos ejemplares de Chinches sin resultado taxonómico o positividad a Trypanosoma cruzi. Muestra para confirmación. Se considera una muestra para confirmación, aquella que sea remitida por el LESP mediante oficio y relación de datos al Laboratorio de Entomología del INDRE y



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que contenga el resultado de determinación taxonómica de alguna especie de importancia médica de chinches, o bien resultado positivo o negativo a Trypanosoma cruzi. El resultado emitido por el Laboratorio Entomología del InDRE no incluirá ningún porcentaje de correlación. Muestra para control de calidad. Se considera una muestra para control de calidad, aquella que sea remitida de un LESP al Laboratorio de Entomología del InDRE, mediante oficio, relación de datos y resultado de determinación taxonómica a especie del ejemplar y/o la positividad a T. cruzi que el LESP haya enviado para CC. Sobre este resultado se expresa un porcentaje de concordancia. El número de muestras remitidas al Laboratorio de Entomología del InDRE que refieran para Control de Calidad, serán estimadas con base en la Norma Oficial NOM–032–SSA2–2009, para la vigilancia epidemiológica, prevención y control de enfermedades transmitidas por vector, indica que las muestras deberán ser el 10% de las muestras positivas y el 5 % de las muestras negativas mensuales. Las muestras deberán enviarse con todos los datos anteriormente citados más los datos de diagnóstico con resultado de determinación taxonómica y/o positividad a Trypanosoma cruzi.

LISTA DE ESPECIES (POSITIVAS) CON IMPORTANCIA MÉDICA EN MÉXICO (Chinches Triatominae)

Clase Insecta Orden Hemiptera Familia Reduviidae Subfamilia Triatominae Especies:

Belminus costaricensis Herrer, Lent & Wygodzinzki, 1954 Rhodnius prolixus Stal, 1859 Dipetalogaster maxima (Uhler, 1894) Eratyrus cuspidatus Stal, 1859 Pastrongylus geniculatus (Latreille, 1911) Pastrongylus rufotuberculatus (Champion, 1899) Paratriatoma hirsuta Barber, 1938 Triatoma barberi Usinger, 1939 Triatoma bolivari Carcavallo, Martínez & Peláez, 1984 Triatoma brailovskyi Martínez, Carcavallo & Peláez, 1984 Triatoma dimidiata (Latreille, 1811) Triatoma gerstaeckeri (Stal, 1859) Triatoma gomeznunezi Martínez, Carcavallo & Jurberg, 1994 Triatoma hegneri Mazzotti, 1940 Triatoma incrassata Usinger, 1939



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Triatoma indictiva Neiva, 1912 Triatoma lecticularia (Stal, 1859) Triatoma longipennis Usinger, 1939) Triatoma mazzotti Usinger, 1941 Triatoma mexicana (Herrich-Schaeffer, 1848) Triatoma neotomae Neiva, 1911 Triatoma nítida Usinger, 1939 Triatoma pallidipennis (Stal, 1872) Triatoma peninsularis Usinger, 1940 Triatoma phyllosoma (Burmeister, 1835) Triatoma picturata Usinger, 1939 Triatoma proctracta (Uhler, 1894) Triatoma recurva (Stal, 1869) Triatoma rubida (Uhler, 1894) Triatoma sinaloensis Ryckman, 1962 Triatoma bassolsae Alejandre-Aguilar, Nogueda-Torres, Cortez-Jiménez, Jurberg, Galvao &

Carcavallo, 1999 Triatoma sp. (ninfas de todas las especies)

CRITERIOS DE INCLUSIÓN O EXCLUSIÓN

Determinación Taxonómica. Criterios de inclusión: Todos los ejemplares que pertenecen a especies de importancia médica y que se encuentren en buen estado físico. Criterios de exclusión: Todos los ejemplares que no se encuentren bien preservados y/o dañados y sea imposible identificarlos taxonómicamente. Criterio de diagnóstico: Se considera positivo a todos los ejemplares con importancia médica y negativos a los que carecen de importancia médica. Búsqueda Coproparasitológica. Criterios de inclusión: Todos los ejemplares que lleguen al laboratorio vivos o recientemente muertos y por lo tanto que se les pueda extraer muestra para análisis de parásitos de Trypanosoma cruzi. Criterios de exclusión: Se considera una muestra inconveniente para búsqueda parasitológica cuando esta se encuentre sumergida en alcohol o algún otro conservador que pudiera intervenir en la viabilidad del parásito e interpretación del resultado. Se considera muestra no trabajada o no



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obtenida (NoM), aquella en que la chinche llegue en condiciones de deshidratación severa o por algún otro motivo no pudiera ser obtenida la muestra correspondiente. Criterio de diagnóstico: positivo/negativo. Se considera positivo o negativo de acuerdo a la presencia o ausencia de Trypanosoma cruzi en la muestra.

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD

En el caso de manipulación de fluidos o disección, así como la manipulación de triatóminos vivos, la persona que lo realiza se debe proteger con guantes, bata y careta, así mismo deberá de realizarse un control serológico con intervalo de por lo menos 6 meses para búsqueda de anticuerpos anti T. cruzi y en caso de resultar positivo se suministrara el tratamiento específico de acuerdo a la normatividad vigente.

ALGORITMOS Los algoritmos incluyen los procedimientos de para identificación taxonómica, búsqueda coproparasitológica de Trypanosoma cruzi y Xenodiagnóstico, los cuales se basan en las siguientes métodos del laboratorio.

1) ENT-M02/0. Método para la determinación taxonómica de chinches hematófagas (Reduviidae, Triatominae).

2) ENT-M01/0. Método para la búsqueda coproparasitológica de Trypanosoma cruzi en heces de chinches hematófagas (Reduviidae, Triatominae).

3) ENT-M05/0. Método para el cultivo de chinches hematófagas (Reduviidae, Triatominae) en colonias para Insectario.



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COLECCIÓN CIENTIFICA E HISTORICA. Colección de Artrópodos con Importancia Médica (CAIM). Actualmente la colección biológica del InDRE (Figs. 4 y 5) cuenta en su acervo con más de 1,000 especies de nombres nominales de diferentes taxa que representan más de 168,000 ejemplares curados, los cuales han sido catalogados, rotulados y computarizados con fines de apoyo a la red de entomología en relación a muestras de referencia, enseñanza e investigación. La incorporación a la colección de nuevo material biológico y bases de datos de colectas que incluyen nuevos datos de distribución de diversos grupos, que tienen implicaciones e importancia médica para la salud pública de México. También se pretende incorporar material fotográfico de varias especies que están representadas por la colección de tipos. El material tipo corresponde actualmente a 152 especies de diferentes taxa en su mayoría al orden Diptera, los cuales se encuentran conservados en alcohol etílico al 75%, alfiler entomológico y laminilla con Bálsamo de Canadá. Cabe mencionar que esta colección contiene material tipo y ejemplares que no se encuentran representados en otras colecciones científicas.



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Fig. 4. Colección de chinches Triatominae preservadas en alfiler entomológico.

Montaje en alfiler entomológico Se realiza con alfileres entomológicos del número 1 ó 2 de acuerdo al tamaño del ejemplar y alfileres de costura para darle una forma natural (Fig. 5).

Fig. 5. Montaje en alfiler entomológico

Posteriormente se colocan las etiquetas con los datos de colecta y taxonómicos, así como el número de referencia, y se guardan en una caja entomológica cuidando de tener cierta distancia entre ellos para evitar que se dañen, los datos son posteriormente incorporados a una base de datos.



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Para conservar los ejemplares en seco, se colocan en cajitas pastilleras (Fig. 6), se coloca una capa de algodón en ambas partes de la caja para amortiguar golpes y movimientos bruscos, así como papel cebolla para evitar que los tarsos de enreden con el algodón, las etiquetas de datos se pueden colocar en una de las tapas entre el algodón y el papel cebolla, se recomienda colocar otra etiqueta con el número de referencia en la cara externa de la caja para poder identificarla sin abrirla y evitar dañar el material.

Fig.6. Preservación en seco en caja pastillera.

Preservación En las cajas entomológicas de madera y en las cajitas pastilleras, se puede adicionar un pequeño contenedor con cristales de naftalina o paradiclorobenceno para conservarlas libres de plagas que pudieran dañarlos Fig. 7.

Fig. 7. Preservación de material en caja pastillera con naftalina



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De preferencia los ejemplares y cajas pastilleras deberán guardarse en áreas con flujo y condiciones ambientales controladas Fig. 8.

Fig. 8. Gabinetes entomológico para la conservar el material montado preservado en alfiler

entomológico.

XENODIAGNÓSTICO

Sirve para determinar la presencia de Trypanosoma cruzi en sangre de pacientes a través de la alimentación de especies de chinches Reduviidae: Triatominae de tercer o cuarto estadio ninfal libres de infección y cultivadas en el insectario del laboratorio del InDRE. Es una técnica parasitológica en la cual se puede detectar la presencia de Trypanosoma cruzi en sangre del paciente alimentando chinches Reduviidae: Triatominae y realizando preparaciones en fresco con deyecciones de chinches cultivadas en el insectario, observándolas mediante un microscopio compuesto con objetivos 10x y 40x (Fig. 8ª). Criterios de Inclusión: Cuando el paciente se sospecha está en fase aguda de la infección por T. cruzi y se requiere la demostración del agente en sangre. Criterio de exclusión: Cuando el paciente se encuentra en fase crónica o presenta entomofobia. Criterios de Diagnóstico: positivo/negativo es la presencia o ausencia del agente (T. cruzi) en sangre.



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Fig. 8ª. Colocación de frascos vial con 20 ninfas de Triatominos cada una en el antebrazo del paciente. REFERENCIAS.

Brener, Z. 1973. Biology of Trypanosoma cruzi. A.Rev. Microbiol., 27:347-382.

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VI. MOSQUITOS DE IMPORTANCIA MÉDICA

Los miembros de la familia Culicidae se conocen en México como mosquitos, zancudos o moyotes en etapa adulta, y como maromeros en estado de pupa, agujitas de agua o gusarapos en la etapa larval. Los mosquitos son insectos holometábolos que pertenecen a la orden Díptera, en la etapa adulta presentan un par de alas membranosas que se originan del mesotórax y otro par de alas modificadas en balancines que se originan del metatórax; las partes bucales son del tipo haustelado, lo que indica que se encuentran alargadas y adaptadas para la ingestión de alimento líquido. Los estados juveniles, i. e. huevecillos, larvas y pupas, son acuáticos y comunes en cuerpos de agua con poca movilidad. Los sitios de crianza adecuados para los juveniles de cada especie son seleccionados de manera natural por las hembras. Existen especies que se crían –preferentemente- en cuerpos de agua permanentes o temporales, pequeños o grandes de aguas limpias, eutroficadas y en algunos casos contaminadas, dulces o salobres, con vegetación o sin ella. Hay un gran número de especies que se especializan en explotar cuerpos de agua acumulados en ciertas plantas o en habitáculos inundados de animales, como sería en el caso de los huecos de cangrejos. Otros se encuentran comúnmente en recipientes artificiales que contienen agua, y por lo tanto hasta cierto punto son sinatrópicos.



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Las hembras de muchas especies regularmente se alimentan de sangre de vertebrados, hábito que determina la importancia sanitaria del grupo. Los daños directos son causados principalmente por sus picaduras y por los componentes salivales que provocan reacciones alérgicas que pueden manifestarse poco después de que el mosquito ha completado su alimentación y cuya duración depende de la susceptibilidad de cada individuo James & Harwood (1969). Por otra parte, los daños indirectos se asocian a su capacidad vectorial por la inoculación de organismos patógenos causantes de enfermedades como dengue, paludismo, encefalitis, fiebre amarilla, filariasis, etc. Este grupo constituye el más importante desde la perspectiva médica y veterinaria a nivel mundial por la diversas enfermedades en las que están implicadas los mosquitos. En México se reconocen cerca de 250 especies de mosquitos, de las cuales más de 70 especies están implicadas en la salud pública. La red actual de laboratorios estatales de salud pública que refieren en su marco analítico el estudio de mosquitos, se conforma por 19 estados que remiten muestras para diagnóstico y control de calidad (Fig. 9).

Fig.9. Red Nacional de LESP con marco analítico para diagnóstico y control de calidad de muestras de mosquitos

MUESTRAS

Larvas. El estudio de las larvas puede llevarse a cabo con muestras preservadas en alcohol etílico o en laminillas con Bálsamo de Canadá. Estudio en alcohol etílico. Las muestras deberán preservarse en alcohol al 80%, por cada tubo o frasco se deben colocar un máximo 10 larvas, en cada tubo debe contener una etiqueta de colecta a lápiz o con impresión láser que coincida con la relación de muestras de los datos de los tubos o frascos, además debe coincidir con él número de tubos de la relación de muestras. Los datos mínimos que deben de llevar los tubos en la relación de muestras son: estado, municipio,



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localidad, dirección, fecha de colecta, colector(es), número de ejemplares, para los caso de control de calidad debe incluir el resultado de la identificación taxonómica a nivel de especie. En caso de que las larvas sean enviadas en laminilla, estas deberán estar completamente secas para evitar que la muestra de dañe en el traslado. El procedimiento más comúnmente usado para la identificación taxonómica del ejemplar en alcohol etílico, es colocar la muestra en una caja de Petri pequeña y observarla en el microscopio estereoscópico, se visualiza de menor a mayor aumento. Se puede apoyar en claves taxonómicas, o por comparación con ejemplares de referencia. Para manipular el ejemplar se utilizan agujas de disección. Una vez identificada la muestra se regresa el ejemplar al tubo que la contenía, esto se hace con la ayuda de un gotero de boca ancha y así consecutivamente hasta determinar todas las muestras del tubo. En caso de que un ejemplar está incompleto o mal preservado la muestra no se procesa, lo cual puede ser causa de rechazo. En algunos casos, es recomendable el montaje de larvas en laminillas con Bálsamo de Canadá o Euparal con el fin de hacer una identificación taxonómica con más detalle de los ejemplares para estudio. Estudio en laminilla con Bálsamo de Canadá o Euparal (Figs. 10-15). Colocar el ejemplar en un recipiente con alcohol etílico para observación al microscopio, y seleccionar al ejemplar más adecuado para el montaje permanente. Después coloque al ejemplar en KOH al 10% por 12 horas a temperatura ambiente, si su aclarado es adecuado, ponga el ejemplar en agua bidestilada caliente (no hirviendo) de 10 a 15 minutos. Posteriormente colocar el ejemplar en ácido acético al 8% durante 10 minutos, después en alcohol etílico graduales de 70%, 80%, 96% y absoluto, en cada paso de 10 a 15 minutos. Pase el ejemplar a una solución de esencia de clavo con alcohol isopropílico en proporción 1:1 de 10 a 15 minutos, después coloque el ejemplar en esencia de clavo de 15 a 20 minutos, cabe mencionar que en este paso puede permanecer varios días. Finalmente coloque una pequeña gota de Bálsamo de Canadá en un portaobjetos y coloque al ejemplar en posición dorsal, realizando un corte transversal entre el sexto y séptimo segmento abdominal, y disponga la parte terminal del lado derecho a la altura de la cabeza en posición lateral. Coloque la laminilla en una charola porta laminillas e introduzca la charola en el horno o estufa a 37° de secado durante 24 horas. Después retire la laminilla y observe el ejemplar al microscopio, si continua en la posición optima agregue otra gota de Bálsamo de Canadá y coloque el cubreobjetos, el cual debe estar previamente cortado al tamaño de ejemplar, en caso de que las estructuras no se observen en la perspectiva adecuada, deberá agregar una pequeña gota de xilol para diluir el preservador, y posteriormente deberá colocar nuevamente el ejemplar en forma adecuada. Se regresa la laminilla a la estufa para que se seque completamente por unas dos semanas, posteriormente se etiquetan los ejemplares con los datos de colecta. Una vez identificada la muestra se coloca la etiqueta de determinación taxonómica.



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Figs. 10-15. Secuencia de pasos para preparación de ejemplares en laminillas.

Adultos. Las muestras de adultos pueden remitirse en seco o montados en alfiler entomológico. Estudio con preservación en seco. Los mosquitos adultos estos se envían en seco pueden colocarse en una caja pastillera o caja de Petri que deberá contener un máximo 10 ejemplares, la cual debe contener una capa de algodón, papel cebolla, y las muestras de mosquitos, en la otra tapa se coloca el papel cebolla y algodón. Cada caja debe contener su etiqueta de colecta a lápiz o con impresión láser, se anexa una relación de las muestras que coincida con los datos de caja pastillera o caja de Petri, además debe coincidir con el número de ejemplares con la relación de muestras. Los datos mínimos que deben de llevar son: estado, municipio, localidad, dirección, fecha de colecta, colector(es), número de ejemplares, para los caso de control de calidad debe incluir el resultado de la determinación taxonómica a nivel de especie. Estudio en alfiler entomológico (Figs. 16-23). Para el montaje de mosquitos coloque el ejemplar en una caja Petri de vidrio y con unas pinzas entomológicas manipule los menos posible el ejemplar, ya que entre mayor sea manipulado el ejemplar, este se puede dañar. Coloque una gota de Resistol blanco en un triángulo de papel opalina, este es perforado por el alfiler entomológico, antes de que se seque la gota pegue el ejemplar del lado derecho con las patas dirigidas en dirección del alfiler entomológico. Con una escalera entomológica acomode las etiquetas de la



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forma siguiente, la primera etiqueta con datos de la identificación taxonómica del ejemplar, la segunda etiqueta los datos de colecta y la tercera etiqueta los datos del registro. Por último el ejemplar se guarda en una caja de madera entomológica. Una vez que los ejemplares de mosquitos hayan sido montados se pueden estudiar taxonómicamente con apoyo del microscopio estereoscópico. Figs. 16-23. Secuencia de pasos para el montaje entomológico.



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OVITRAMPAS Se instalan para ovipostura con ciclos de 7 días en el peri o intra-domicilio de las viviendas seleccionadas. Todos los huevos colectados deberán ser cultivados en el Insectario (Delia López Solís

A., Cuauhtémoc Villarreal, Francisco Solís Santoyo, Patricia Penilla Navarro, Felipe Dzul Manzanilla, Azael Ché Mendoza, Américo D. Rodríguez. Manual para la colecta, cría e instalación de insectario para Aedes aegypti. Secretaria

de Salud) hasta su etapa de larva o de adulto. Las muestras se etiquetaron con los datos de colecta y datos asociados a la vivienda para su posterior referencia. Pueden enviarse para diagnóstico o control de calidad.

Recipiente cilíndrico de plástico en color negro de un litro de capacidad

Ovitrampa.

Fuente: CENAPRECE. Guía para la vigilancia entomológica con Ovitrampas. CENAPRECE, Programas Preventivos. Dengue. Secretaría de Salud.

Pellón F-1600

Agua

Bote

Etiqueta



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INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS POR EL LABORATORIO

Diagnóstico. Se considera una muestra para diagnóstico, aquella que sea remitida de un LESP mediante oficio y relación de datos al Laboratorio de Entomología del InDRE y que contenga uno o diversos ejemplares de mosquitos (larva o adultos) sin resultado taxonómico. Muestra para confirmación. Se considera una muestra para confirmación, aquella que sea remitida por el LESP mediante oficio y relación de datos al Laboratorio de Entomología del INDRE y que contenga el resultado de determinación taxonómica de alguna especie de importancia médica de mosquito. El resultado emitido por el Laboratorio Entomología del InDRE no incluirá ningún porcentaje de correlación. Muestra para control de calidad. Se considera una muestra para control de calidad, aquella que sea remitida de un LESP al Laboratorio de Entomología del InDRE, mediante oficio, relación de datos y resultado de determinación taxonómica a nivel de especie. Sobre este resultado se expresa un porcentaje de concordancia o correlación. El número de muestras remitidas al Laboratorio de Entomología del InDRE que refieran para Control de Calidad, serán estimadas con base en la Norma Oficial NOM–032–SSA2–20010, para la vigilancia epidemiológica, prevención y control de enfermedades transmitidas por vector, indica que las muestras deberán ser el 10% de las muestras positivas y el 5 % de las muestras negativas mensuales. Las muestras deberán enviarse con todos los datos anteriormente citados. Criterios 1. Solo estamos considerando para control de calidad las muestras (+) debido a que son las de importancia médica, no consideramos las negativas para obtener la concordancia, porque la diversidad de especies negativas es mucho mayor que las positivas, y la mayoría de los LESP no están entrenados para identificarlas; si se consideraran las muestras negativas muchos LESP bajarían considerablemente sus porcentajes de concordancia. Criterio 2. Cuando en las muestras para control de calidad que envía el LESP no identifican el total de especies positivas, esto puede repercutir en el porcentaje de concordancia para el control de calidad. Criterio 3. Cuando en las muestras para control de calidad que envía el LESP no coincide el total de muestras positivas por especie entre el LESP e InDRE, esto puede repercutir en el porcentaje de concordancia para el control de calidad. Criterio 4. Se consideran únicamente para control de calidad larvas de 4° estadio, si se incluyen en un tubo muestras de la misma especie o de otras especies y con diferentes estadios solo consideramos las larvas de 4° estadio por especie para la concordancia. Criterio 5. NORMA Oficial Mexicana NOM-032-SSA2-2010, Para la vigilancia epidemiológica, prevención y control de las enfermedades transmitidas por vector. Indica lo siguiente en el punto



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6.5.9. El control de calidad de muestras entomológicas y la identificación taxonómica de los artrópodos con importancia médica se debe llevar a cabo por el Laboratorio de Entomología de la DGE, por lo que los LESP, deben enviar el 10% de muestras positivas (artrópodos con importancia médica) y el 5% de muestras negativas (artrópodos sin importancia médica). Los ejemplares deben enviarse de acuerdo a las indicaciones contenidas en el instructivo para envío y recepción de muestras foráneas de la DGE, disponible en www.cenaprece.salud.gob.mx/indre

Criterio 6. Las muestras deben ser remitidas de acuerdo al instructivo para envío de muestras foráneas, y cumplir con lo indicado, si no se cumple es causa de rechazo de muestras.

LISTA DE ESPECIES (POSITIVAS) CON IMPORTANCIA MÉDICA EN MÉXICO (Mosquitos)

Clase Insecta Orden Diptera Familia Culicidae Especies:

Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) Aedes albopictus (Skuse, 1894) Aedes vexans Meigen, 1830 Anopheles albimanus Wiedemann, 1820 Anopheles bradleyi King, 1939 Anopheles crucians Wiedemann, 1828 Anopheles darlingi Root, 1926 Anopheles franciscanus McCracken, 1904 Anopheles freeborni Aitken, 1939 Anopheles psudopunctipennis Theobald, 1901 Anopheles punctimacula Dyar & Knab, 1906 Anopheles punctipennis Say, 1823 Anopheles quadrimaculatus Say, 1824 Anopheles walkeri Theobald, 1901 Coquillettidia perturbans (Walker, 1856) Coquillettidia venezuelensis (Theobald, 1912) Culex corniger Thebald, 1903 Culex coronator Dyar & Knab, 1906 Culex declarator Dyar & Knab, 1906 Culex erithrothorax Dyar, 1907 Culex erraticus (Dyar & Knab, 1906) Culex iolambdis Dyar, 1918

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Culex nigripalpus Theobald, 1901 Culex opisthopus Komp, 1926 Culex pedroi Sirivanakarn & Belkin, 1980 Culex pipiens Linnaeus, 1758 Culex quinquefasciatus (Say, 1823) Culex restuans Theobald, 1901 Culex salinarius Coquillett, 1904 Culex spissipes (Theobald, 1903) Culex stigmatosoma (Dyar, 1907) Culex tarsalis Coquillett, 1896 Culex territans Walker, 1856 Culex thriambus Dyar, 1921 Culiseta impatiens (Walker, 1948) Culiseta incidens Thomson, 1868 Culiseta inornata (Wililiston, 1893) Deinocerites cancer Theobald, 1901 Deinocerites pseudes Dyar & Knab, 1909 Haemagogus equinus Theobald, 1903 Haemagogus mesodentatus Komp & Kumm, 1938 Johnbelkinia leucopus (Dyar & Knab, 1906) Johnbelkinia longipes (Fabricius, 1805) Limatus durhamii Theobald, 1901 Mansonia indubitans Dyar & Shannon, 1925 Mansonia titillans (Walker, 1848) Ochlerotatus angustivittatus Dyar & Knab, 1907 Ochlerotatus condolescens Dyar & Knab 1907 Ochlerotatus dosalis (Meigen, 1830) Ochlerotatus dupreei (Coquillett, 1904) Ochlerotatus fulvus (Wiedemann, 1828) Ochlerotatus infirmatus Dyar & Knab, 1906 Ochlerotatus nigromaculis (Ludlow, 1906) Ochlerotatus scapularis (Rondani, 1848) Ochlerotatus serratus (Theobald, 1901) Ochlerotatus sexlineatus (Theobald, 1901) Ochlerotatus sollicitans (Walker, 1856) Ochlerotatus squamiger (Coquillett, 1902) Ochlerotatus taeniorhynchus (Wiedemann 1821) Ochlerotatus tormentor Dyar & Knab, 1906 Ochlerotatus triseriatus (Say, 1823) Ochlerotatus trivittatus (Coquillett, 1902)



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Orthopodomyia signifera (Coquillett, 1896) Psorophora albipes (Theobald, 1907) Psorophora ciliata (Fabricius, 1794) Psorophora columbiae (Dyar & Knab, 1906) Psorophora confinnis (Lynch-Arribalzaga, 1891) Psorophora cyanescens (Coquillet, 1902) Psorophora discolor (Coquillett, 1903) Psorophora ferox (Von Humboldt, 1819) Psorophora howardii Coquillett, 1901 Psorophora lutzii (Theobald, 1901) Sabethes chloropterus (Von Humboldt, 1819) Trichoprosopon digitatum (Rondani, 1848) Uranotaenia sapphirina (Osten Sacker, 1868) Wyeomyia aporonoma Dyar & Knab, 1906 Wyeomyia mitchelli (Theobald, 1905)


Determinación Taxonómica. Criterios de inclusión: Todos los ejemplares que pertenecen a especies de importancia médica y que se encuentren en buen estado físico. Criterios de exclusión: Todos los ejemplares que no se encuentren bien preservados y/o dañados y sea imposible identificarlos taxonómicamente. Criterio de diagnóstico: Se considera positivo a todos los ejemplares de mosquitos con importancia médica y negativos a los que carecen de importancia médica en México.

MEDIDAS DE SEGURIDAD En el caso del montaje de larvas tener cuidado con la manipulación de reactivos, como es el caso del Xilol, ya que tiene riesgo para la salud humana. La preservación de mosquitos con p-diclorobenceno debe hacer en lugar ventilado.

PANEL DE EFICIENCIA PARA EVALUACIÓN DE LA RED DE ENTOMOLOGIA LABORATORIOS ESTATALES DE SALUD PÚBLICA

Se llevan a cabo dos evaluaciones anuales a la red de entomología, las cuales se remiten mediante paneles de eficiencia dirigidos a la evaluación del desempeño de los LESP. De la colección de entomología se escogen diferentes laminillas (larvas) que contiene especies con importancia médica en México, y se les asigna una clave numérica con etiqueta a los cinco ejemplares de evaluación para cada LESP. Posteriormente se les envían las muestras junto con el oficio e



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instructivo. La evaluación es en base a la identificación taxonómica a nivel de especie, el tiempo estimado de respuesta es de 10 días hábiles a partir de que reciben las muestras. La calificación es con base en rangos de valores establecidos por el laboratorio de entomología del InDRE.

ALGORITMOS Los algoritmos incluyen los procedimientos de para identificación taxonómica los cuales se basan en las siguientes métodos de laboratorio.

1) ENT-M012/0. Método para el estudio de larvas de mosquitos (Diptera: Culicidae). 2) ENT-M0/0. Método para el estudio de adultos de mosquitos (Diptera: Culicidae).



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Colección. Es la colección de referencia más importante en México por el número de especies en su acervo y por la colección de material tipo. Alberga muestras de mosquitos en todas sus etapas de desarrollo como son laminillas, alcohol etílico y alfiler entomológico de diversas especies de México y de muchos otros países. REFERENCIAS. Darsie R. F. & R.A. Ward. 1981. Identification and geographical distribution of the mosquitoes of North America, North of Mexico. Mosq. Syst. Supplement 1: 1-313. Carpenter S. J. & W. J. LaCasse. 1955. Mosquitoes of North America (North of Mexico).University of California Press. 360 pp. + 127 lams.



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Lane, J. 1953. Neotropical Culicidae. Vol. 1 Univ. Sao Paulo, Brasil. 1-548 pp. Lane, J. 1953. Neotropical Culicidae. Vol. 2 Univ. Sao Paulo, Brasil. 553-1112 pp. Ibáñez-Bernal S & Martínez Campos, C. 1994. Claves para la identificación de mosquitos comunes en las áreas urbanas y suburbanas de la República Mexicana (Diptera: Culicidae) Folia Entomológica Mexicana. 92: 43-73. Walter ReedByosistematics Units. Systematic Catalog of Culicidae: WEB: http://www.mosquitocatalog.org/

VII. SCORPIONES Los Scorpiones o alacranes están representados en todos los continentes excepto en la Antártida, pero son más abundantes y diversos en regiones tropicales y subtropicales. El género Centruroides Marx 1890 de la familia Buthidae (Fig. 24), es el de mayor importancia médica en el país y principalmente se le ha estudiado desde el punto de vista toxicológico y epidemiológico.

Fig. 24 Centruroides infamatus (C.L. Koch, 1844)

El género Centruroides es el más común y diverso de la familia en México, contiene 71 especies en el Nuevo Mundo. Para México se han registrado 32 especies y cinco de ellas con taxones subespecíficos (Rein, 2010). Los alacranes como grupo se consideran animales de amplia distribución, sin embargo, en el nivel específico es relativamente común encontrar distribuciones restringidas, incluso a escalas locales (Polis, 1990). El género Centruroides como muchos otros bútidos son exclusivamente de hábitos lapidícolas que viven bajo piedras y generalmente también

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bajo cortezas. Algunas especies pueden llegar a encontrarse en las partes altas de los árboles y palmeras (Polis 1990).

Los alacranes se distribuyen en todo el país pero sólo en algunos estados se tiene la presencia de especies que por su grado de intoxicación se consideran de importancia médica (Fig. 25) ya que según el boletín de vigilancia epidemiológica (semana 6, 2011) los estados con mayor número de casos fueron Colima (751),Guanajuato (1,243) Guerrero (2,825), Jalisco (2,906), Michoacán (1,536), Morelos (1,564), Nayarit, (591), y Puebla (861), con un total de 12,227 casos por intoxicación por picadura de alacrán. Aunado a estos factores, las condiciones de la vivienda en áreas rurales, tratamientos caseros, el riesgo en áreas de trabajo en el campo y a los asentamientos irregulares donde el hombre invade el territorio natural de estos arácnidos, propicia el encuentro con el humano ocasionando que la intoxicación por picadura de alacrán sea un gran problema de salud pública en México.

Fig. 25. Porcentaje de especies de importancia médica recibidas en el Laboratorio de Entomología

en 2010. En la gráfica se muestra que la subespecie y especie de alacranes que tuvieron mayor representación a través de la red fueron Centruroides infamatus ornatus y Centruroides limpidus en 2010. La red actual de este grupo se puede ver en la Fig. 26.

6% 8%

13%

45%

25% 2% 1%

Especies de Scorpiones de Importancia Médica

2010

Centruroides balsasensis

Centruroides elegans

Centruroides infamatusinfamatusCentruroides infamatus ornatus

Centruroides limpidus

Centruroides meisei

Centruroides tecomanus



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Fig. 26. LESP con marco analítico para Scorpiones MUESTRA El Laboratorio de Entomología tiene como objetivo principal el realizar el diagnóstico y control de calidad de las muestras que provienen de la RED-LESP, por lo que uno de sus programas prioritarios es el Alacranismo. En el Laboratorio de Entomología del InDRE se estudian las muestras de alacranes ya sea de importancia médica o sin importancia médica, por medio de claves taxonómicas o a través de la experiencia del determinador que estudia el grupo (Fig. 27), también a través de artículos científicos y con el apoyo de material biológico de referencia de la colección de artrópodos con importancia médica (CAIM) o de otras colecciones científicas de diferentes instituciones. Se utiliza un microscopio estereoscópico con lámpara integrada o externa, caja de Petri, aguja y pinzas. Los ejemplares se colocan en la caja de Petri con alcohol al 70% y también se puede colocar arena de mar en la caja para colocar al ejemplar en cualquier posición en el caso que se le tenga que revisar alguna estructura de observar por su ubicación. Los puntos críticos que deben de considerarse en este método son en primer lugar la observación del patrón de coloración, identificación morfológica del ejemplar y comparación morfológica con otros ejemplares de la colección.



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Fig.27 Identificación al microscopio estereoscópico Los ejemplares deben ser depositados en frascos de plástico de boca ancha en alcohol etílico al 70%, con su etiqueta de datos de colecta (a lápiz) en el interior del frasco (Fig. 28) incluyendo: estado, municipio, localidad, dirección, fecha de colecta, sitio de colecta y colector.

Fig. 28 Frasco de plástico de boca ancha con etiqueta de datos de colecta a lápiz

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS POR EL LABORATORIO Muestra Positiva Todos los ejemplares que pertenecen a las especies de importancia médica. Muestra Negativa Todos los ejemplares que pertenecen a las especies sin importancia médica. Muestras Indeterminadas Los ejemplares adultos cuyo resultado quede a nivel de género o sean juveniles y crías.



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MUESTRAS PARA DIAGNOSTICO Los ejemplares que se envíen para identificación taxonómica. MUESTRAS PARA CONTROL DE CALIDAD Los ejemplares que se envíen para de la identificación taxonómica con resultado del LESP a nivel de especie MUESTRAS RECHAZADAS Las muestras serán rechazadas si contienen agua, en seco, sin etiqueta de datos de colecta, con datos de colecta a tinta, y si los ejemplares están mal preservados. INTERFERENCIAS Ejemplares mal preservados que impide que se observe adecuadamente el patrón de coloración que es importante para la determinación taxonómica y control de calidad de los mismos. Microscopio con poca resolución. Luz tenue o no concentrada para observar un carácter específico del ejemplar. Diferente tipo de luz.

LISTA DE ESPECIES (POSITIVAS) CON IMPORTANCIA MÉDICA EN MÉXICO (Scorpiones)

Clase Arachnida Orden Scorpiones Especies:

Centruroides balsasensis Ponce & Francke, 2004 Centruroides elegans (Thorell, 1876) Centruroides infamatus (C. L. Koch, 1844) Centruroides limpidus (Karsch, 1879) Centruroides meisei Hoffmann, 1938 Centruroides noxius Hoffmann, 1932 Centruroides sculpturatus Ewing, 1928 Centruroides suffusus Pocock, 1932 Centruroides tecomanus Hoffmann, 1932


Determinación Taxonómica. Criterios de inclusión: Todos los ejemplares que pertenecen a especies de importancia médica y que se encuentren en buen estado físico.



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Criterios de exclusión: Todos los ejemplares que no se encuentren bien preservados y/o dañados y sea imposible identificarlos taxonómicamente. Criterio de diagnóstico: Se considera positivo a todos los ejemplares de Scorpiones con importancia médica y negativos a los que carecen de importancia médica en México.

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD Para la identificación taxonómica el procesador debe de protegerse con bata blanca y si se expone a varias horas inhalando el alcohol que maneja para las muestras se deberá proteger con una mascarilla.

PANEL DE EFICIENCIA PARA EVALUACIÓN DE LA RED DE ENTOMOLOGIA

LABORATORIOS ESTATALES DE SALUD PÚBLICA

Se llevan a cabo dos evaluaciones anuales a la red de entomología, las cuales se remiten mediante paneles de eficiencia dirigidos a la evaluación del desempeño de los LESP. De la colección de entomología se escogen diferentes especies de Scorpiones con importancia médica en México, y se les asigna una clave numérica con etiqueta a las cinco muestras con ejemplares de evaluación para cada LESP. Posteriormente se les envían las muestras junto con el oficio e instructivo. La evaluación es en base a la identificación taxonómica a nivel de especie, el tiempo estimado de respuesta es de 10 días hábiles a partir de que reciben las muestras. La calificación es con base en rangos de valores establecidos por el laboratorio de entomología del InDRE.


1) ENT-M09/0. Método para la identificación taxonómica de Scorpiones (Arachnida) 2) ENT-M010/0. Método para la identificación taxonómica de Solifugae, Uropygidae y

Amblypygi (Arachnida).



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PRESERVACION Los ejemplares de Scorpiones son preservados en frascos estándar de plástico con capacidad de 180 ml (Fig. 29) y deben de llevar las siguientes etiquetas: etiqueta de datos de colecta y etiqueta de identificación taxonómica, para este grupo se agrega otra etiqueta, que lleva el No. De oficio, la fecha y el número de muestra de la relación enviada por el LESP para poderla localizar en base de datos de Excel. (Fig. 30).



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Fig. 29. Frascos de poliestireno con empaque para colección de Scorpiones

Fig.30. Etiquetas con datos de colecta, determinación taxonómica y No. De oficio contenidas en recipiente de plástico para colección de Scorpiones.

Por otra parte, los ejemplares se registran en una base de datos con el sistema de información Biótica, el cual tiene como objetivo la captura de información de Instituciones que albergan colecciones biológicas científicas. Cada recipiente conteniendo una etiqueta con un número de clave CAIM (Colección de Artrópodos con Importancia Médica). ALMACENAMIENTO Se almacenan en cajones de madera (Fig. 31) teniendo cada cajón etiquetas mencionando la especie que se encuentra en cada uno de ellos, estos cajones a su vez se encuentran dentro de gavetas de metal diseñadas sólo para este grupo de artrópodos.

Centruroides infamatus ornatus 1♀, 11♂♂ V. Vidal A. Det. 27-mayo-2008

MÉXICO, JALISCO San Martín Hidalgo San Martín Hidalgo Libertad 77 13-mayo-08 Patio Sin dato

Oficio: 263 Fecha:15-mayo-2008 Muestra: 3/8



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Fig. 31. Almacenamiento de alacranes en gavetas dentro de la colección CAIM

BIBLIOGRAFIA. Armas, L. F. de y E. Martín-Frías.1998. Presencia del género Tityopsis en México y descripción de una especie nueva (Scorpiones: Buthidae). Anales de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, Instituto Politécnico Nacional, México, D.F. 43:45-49. Armas, L. F. de, E. Martín-Frías y J. Estévez-Ramírez. 2003. Lista anotada de las especies mexicanas del género Centruroides Marx, 1890 (Scorpiones, Buthidae). Revista Ibérica de Aracnología 8:93-98. Armas, L. F. de y E. Martín-Frías. 2008. El género Centruroides Marx, 1890 (Scorpiones: Buthidae) en el estado de Veracruz, México. Boletín de la Sociedad Entomológica Aragonesa 43:7-22. Beutelspacher, B. C. R., 2000. Catálogo de los alacranes de México. Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo, Morelia, Michoacán. 175 p. Fet, V., W. D. Sissom, G. Lowe y M. E. Braunwalder. 2000. Catalog of the scorpions of the world (1758- 1998). The New York Entomological Society. New York. 690 p. González-Santillán, E. 2001. Catálogo de escorpiones de la Colección Nacional de Arácnidos (CNAN). Tesis, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional Autónoma de México, México, D.F. 148 p. Hoffmann, C. C. 1931. Monografías para la entomología médica de México. Monografía No. 2, Los escorpiones de México (primera parte): Diplocentridae, Chactidae, Vejovidae. Anales del Instituto de Biología, Universidad Nacional Autónoma de México, Serie Zoología 2:291-408. 474.



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Hoffmann, C. C. 1932. Monografías para la entomología médica de México. Monografía No. 2, Los escorpiones de México (segunda parte): Buthidae. Anales del Instituto de Biología, Universidad Nacional Autónoma de México, Serie Zoología 3:243-361. Lourenço, W. R. y W. D. Sissom. 2000. Scorpiones. In Biodiversidad, taxonomía y biogeografía de artrópodos de México: hacia una síntesis de su conocimiento, volumen II., J. Llorente Bousquets, E. González Soriano y N. Papavero (eds.). Facultad de Ciencias, UNAM, CONABIO y BAYER. México. p. 115-135. Ponce, S. J. y O. F. Francke. 2004. Una nueva especie de alacrán del género Centruroides Marx (1890) (Scorpiones: Buthidae) de la depresión del Balsas, México. Acta Zoológica Mexicana (n. s.) 20:221-232. Ponce, S. J. y O. F. Francke. 2009. Descripción de una especie nueva de alacrán con importancia médica del género Centruroides (Scorpiones: Buthidae) del estado de Colima, México. Revista Mexicana de Biodiversidad 80:647- 658. Ponce, S. J. y R. J. Moreno-Barajas. 2005. El género Centruroides Marx 1890 (Scorpiones: Buthidae) en México. Biológicas 7:42-51. Ponce, S. J., O. F. Francke, H. Cano-Camacho y E. Hernández-Calderón. 2009. Evidencias morfológicas y moleculares que validan como especie a Centruroides tecomanus (Scorpiones, Buthidae). Revista Mexicana de Biodiversidad 80:71-84. Santibáñez-López, C. E. y J. Ponce S. 2009. A new species of Centruroides (Scorpiones: Buthidae) from the northern mountain range of Oaxaca, Mexico. Revista Mexicana de Biodiversidad 80:321-331.

VIII. OTROS TAXA

ARAÑAS DE IMPORTANCIA MÉDICA

En el mundo existen más de 30,000 especies de arañas, de las cuales, la gran mayoría produce

veneno, tóxico y mortal para sus presas invertebrados y en el menor de los casos, para algunos

vertebrados pequeños, pero sólo un 0.66% (aproximadamente) tiene un veneno con estructura

tal, que puede llegar a ser muy tóxico para el hombre (Díaz, 2004), provocando lesiones muy

graves como, dermonecrósis, toxicidad sistémica e incluso la muerte. La Organización Mundial de

la Salud (OMS) considera a cuatro géneros como de gran importancia en salud pública, debido a la

composición química de gran toxicidad de sus veneno, que provocan en el hombre graves

manifestaciones clínicas, los cuales son: Latrodectus, Loxosceles, Phoneutria y Atrax. Dos géneros



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se distribuyen en México, Latrodectus (L. mactans y L. geometricus) y Loxosceles (38 especies). El

veneno de las especies de Latrodectus es neurotóxico, afectando principalmente al sistema

nervioso central. Por otro lado, el de las especies de Loxosceles, es de tipo citotóxico ocasionando

necrosis en algunos tejidos (Fig. 32).

Fig. 32. Arañas de importancia médica. Izquerda Latrodectus, derecha Loxosceles sp.

En nuestro país se tiene registrado que la tasa por mordedura de araña ha sido de 3,000 a 5,000

por año (Tay-Zavala et al., 2004); ésta ha sido subestimada. En el boletín de epidemiología de la

Secretaría de Salud, se registra el número de casos de intoxicación por animales venenosos, sin

especificar qué tipo de animal es el que lo provoca.



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La red actual de otros taxa incluye varios LESP que envían diferentes tipos de artrópodos Fig. 33

Fig. 33. Red de otros taxa

MUESTRAS

El estudio taxonómico de las arañas con importancia médica, se basa en la preparación de los

ejemplares para la observación de las características morfológicas de los adultos (hembras y

machos). Los ejemplares deberán ser preservados en frascos de plástico con tapa de rosca

conteniendo alcohol etílico al 70%. La determinación taxonómica del material se realiza mediante

el uso de claves taxonómicas, o por medio de la comparación de ejemplares de referencia

depositados en la Colección de Artrópodos con Importancia Médica (CAIM) del Lab. de

Entomología del InDRE y de diferentes colecciones científicas entomológicas y descripciones

taxonómicas.

Si el ejemplar se encuentra vivo, este se coloca dentro de un recipiente con agua caliente por

unos 15 minutos, posteriormente se coloca en un frasco con tapa y se guarda en el refrigerador

por aproximadamente una hora y después se pasa a un frasco con etanol al 70% (Fig. 34, 35). La

etiqueta deberá contener los datos siguientes: estado, municipio, localidad, forma de colecta,

lugar específico de colecta, fecha de colecta y colectores. Otra etiqueta con los datos de la

determinación taxonómica, especie, sexo, autor, fecha de determinación y nombre del

determinador, en caso de que sea una muestra para control de calidad.



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Fig. 34. Ejemplares preservados en frascos de plástico con alcohol etílico al 70%

Muchas de las características taxonómicas para la determinación específica, se encuentran en los

órganos copuladores del macho o en las espermatecas de las hembras (Fig. 36), las que contienen

dentro los epiginios, por lo que se deberá proceder a su disección. Los epiginios se localizan

ventralmente en la parte anterior del opistosoma de la hembra, por debajo del surco epigástrico y

los pulmones. Con la ayuda de pinzas entomológicas y agujas de disección se corta el epiginio con

mucho cuidado de no romper o maltratar las espermatecas que se encuentran por debajo de él.

Una vez extraído el epiginio, se coloca en un tubo eppendorf de 0.1 ml con etanol al 70% y se tapa

con una pequeña torunda de algodón y a su vez, el tubo se introduce en el frasco donde se

encuentra el ejemplar adulto.

Fig. 35. Observación de los ejemplares en un microscopio estereoscópico



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Finalmente una vez concluida la identificación de la muestra, cada frasco es integrado a la

colección científica (CAIM) del laboratorio de Entomología del InDRE, con la finalidad de

incrementar el registro del acervo. Los datos de colecta y de taxonomía, se capturan en una base

de datos de Biótica y se le asigna a cada ejemplar un número de registro.

Fig. 36. a) pedipalpo del macho; b) epiginio con espermatecas de la hembra

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS POR EL LABORATORIO Muestra Positiva Todos los ejemplares que pertenecen a las especies de importancia médica. Muestra Negativa Todos los ejemplares que pertenecen a las especies sin importancia médica. Muestras Indeterminadas Los ejemplares adultos cuyo resultado quede a nivel de género o sean preadultos y crías. MUESTRAS PARA DIAGNOSTICO Los ejemplares que se envíen para identificación taxonómica. MUESTRAS PARA CONTROL DE CALIDAD Los ejemplares que se envíen para de la identificación taxonómica con resultado del LESP a nivel de especie



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MUESTRAS RECHAZADAS Las muestras serán rechazadas si contienen agua, en seco, sin etiqueta de datos de colecta, con datos de colecta a tinta, y si los ejemplares están mal preservados.

LISTA DE ESPECIES (POSITIVAS) CON IMPORTANCIA MÉDICA EN MÉXICO (Arañas)

Clase Arachnida Orden Araneae Especies: Latrodectus geometricus Koch, 1841

Latrodectus mactans (Fabricius, 1775)

Loxosceles alagoni Berea, Binford & Estevez, 2007 Loxosceles alamosa Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles apachea Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles aranea Gertsch, 1973 Loxosceles arizonica Gertsch & Mulaik, 1940 Loxosceles aurea Gertsch, 1973 Loxosceles baja Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles barbara Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles belli Gertsch, 1973 Loxosceles boneti Gertsch, 1958 Loxosceles candela Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles carmena Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles chinateca Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles colima Gertsch, 1958 Loxosceles coyote Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles deserta Gertsch, 1973 Loxosceles devia Gertsch & Mulaik, 1940 Loxosceles francisca Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles greta Berea & Estévez, 2008 Loxosceles huasteca Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles insula Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles jaca Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles luteola Gertsch, 1973 Loxosceles manuela Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles misteca Gertsch, 1958 Loxosceles mulege Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles nahuana Gertsch, 1958 Loxosceles palma Gertsch & Ennik, 1983



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Loxosceles reclusa Gertsch & Mulaik, 1940 Loxosceles rothi Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles seri Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles sonora Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles tehuana Gertsch, 1958 Loxosceles tenango Gertsch, 1973 Loxosceles teresa Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles tlacolula Gertsch & Ennik, 1983 Loxosceles valdosa Gertsch, 1973 Loxosceles yucatana Chamberlin & Ivie, 1938 Loxosceles zapoteca Gertsch, 1958

CRITERIOS DE INCLUSIÓN O EXCLUSIÓN Determinación Taxonómica. Criterios de inclusión: Todos los ejemplares que pertenecen a especies de importancia médica y que se encuentren en buen estado físico. Criterios de exclusión: Todos los ejemplares que no se encuentren bien preservados y/o dañados y sea imposible identificarlos taxonómicamente. Criterio de diagnóstico: Se considera positivo a todos los ejemplares de arañas con importancia médica y negativos a los que carecen de importancia médica en México.

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD Para la identificación taxonómica el procesador debe de protegerse con bata blanca y si se expone a varias horas inhalando el alcohol que maneja para las muestras se deberá proteger con una mascarilla.

PANEL DE EFICIENCIA PARA EVALUACIÓN DE LA RED DE ENTOMOLOGIA LABORATORIOS ESTATALES DE SALUD PÚBLICA

De este grupo todavía no se han remitido muestras para evaluación del desempeño de los LESP. Se tiene programada las evaluaciones para este año, en tres estados que han remitido muestras para control de calidad. Se escogen diferentes especies de arañas con importancia médica en México, y se les asigna una clave numérica con etiqueta a las tres muestras con ejemplares de evaluación para cada LESP. Posteriormente se les envían las muestras junto con el oficio e instructivo. La evaluación es en base a la identificación taxonómica a nivel de especie, el tiempo estimado de respuesta es de 10 días hábiles a partir de que reciben las muestras. La calificación es con base en rangos de valores establecidos por el laboratorio de entomología del InDRE.



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ALGORITMOS

Los algoritmos incluyen los procedimientos de para identificación taxonómica los cuales se basan en las siguientes métodos de laboratorio.

1) ENT-M09/0. Método de estudio para la determinación taxonómica de especies de arañas (Arachnida: Araneae) con importancia médica

Por otra parte, los ejemplares se registran en una base de datos con el sistema de información Biótica, el cual tiene como objetivo la captura de información de Instituciones que albergan colecciones biológicas científicas. Cada recipiente conteniendo una etiqueta con un número de clave CAIM (Colección de Artrópodos con Importancia Médica). ALMACENAMIENTO Se almacenan en anaqueles o gavetas de metal adecuados para este grupo de artrópodos.



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ECTOPARÁSITOS DE IMPORTANCIA PARA LA SALUD PÚBLICA

Los ectoparásitos son artrópodos que se alimentan de sangre de un huésped vertebrado,

los cuales pueden estar relacionados a la transmisión de agentes patógenos que causan

enfermedades en el hombre. Los piojos y las pulgas son insectos ectoparásitos que han

modificado algunas características morfológicas para su adaptación a este tipo de vida.

Fig. 37. Pediculus humanus. A. Hembra vista dorsal, b. cabeza, parte anterior, c. segmentos

terminales de las patas.

Las especies que se alimentan del hombre y que por lo tanto pueden causar algún daño

mecánico o que son capaces de transmitirle algún patógeno son: Pediculus humanus,

Anthropopthirus capitis (Pediculidae), Phthirus pubis (Pthiridae). Las enfermedades

transmitidas por los piojos son el tifo epidémico.

Las pulgas (Siphonaptera), son ectoparásitos que también pertenecen al grupo de los

insectos (Fig. 38).



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Fig. 38. Xenopsilla cheopis, a. hembra, vista lateral, b. parte anterior de la cabeza.

En el abdomen se encuentran los órganos copuladores que son de gran importancia para la

determinación taxonómica a nivel de especie, y en las hembras las espermatecas (Fig. 39),

que tienen diferentes formas y tamaños; y los órganos copuladores del macho (Fig. 40),

cuyas características son utilizadas invariablemente para determinar a nivel de especie.

Fig. 39. Espermateca. Fig. 40. Aspecto de la genitalia masculina



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La importancia médica de este grupo radica en su gran capacidad vectorial, tal es el caso de

la especie Xenopsylla cheopis, la cual es la especie transmisora más importante de la peste

bubónica, enfermedad que a través de la historia ha matado a miles de personas en el

mundo. Así como el principal vector de la Rickettsia causante del tifo murino.

Otro grupo de artrópodos ectoparásitos de importancia en salud pública son las garrapatas

(Fig. 41, 42), las cuales pueden ocasionar daños directos como consecuencia de sus hábitos

hematófagos, así como la transmisión de un gran número de patógenos que también

afectan al hombre.

Fig. 41. Ixodidae, vista dorsal 42. Garrapata. Vista ventral

Las diversas especies de garrapatas son de importancia médica por el daño mecánico o directo

que pueden causar al hombre, pero sólo algunas de ellas son capaces de transmitir bacterias,

virus y Rickettsia, tal es el caso de la Fiebre Manchada, ocasionada por Rickettsia rickettsii,

llevada por la garrapata café del perro Rhipicephalus sanguineus. Esta enfermedad en nuestro

país ha causado grandes focos infecciosos en los estados del norte.

Por lo anterior, es necesario estudiar adecuadamente las especies de ectoparásitos de

importancia médica, inicialmente con la identificar taxonómicamente las especies que se

distribuyen en nuestro país y conocer su grado de capacidad vectorial.

MUESTRAS

El método de estudio de laboratorio se basa en la preparación de la muestra, con montaje

permanente en laminillas para su identificación taxonómica con los pasos siguientes:

maceración, deshidratación, aclaración y montaje permanente del ejemplar, colocando en una



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laminilla. La determinación taxonómica permite distinguir morfológicamente a los ejemplares

procesados mediante el uso de claves taxonómicas, comparación con material de referencia

depositado en diferentes colecciones científicas entomológicas y descripciones taxonómicas.

La muestra corresponde al ejemplar adulto de pulga, piojo o garrapata.

Preservación en etanol.

Se puede llevar a cabo una preservación temporal de los ejemplares de ectoparásitos, los

cuales se deben colocar en frascos o en viales para microcentrífuga de 1.5 ml (polipropileno

No. 1012-00-0) con alcohol etílico al 70%; Adicionalmente, se colocan dentro de frascos

grandes llenos de Etanol al 75%, para así conservarse por largos períodos de tiempo (Fig. 43).

Los ejemplares de garrapatas por ser individuos de tamaño grande, la mejor manera es

dejarlos en este paso y pueden conservarse por mucho tiempo (Fig. 44).

Fig. 43. Frasco con viales para preservar muestras en alcohol al 70%

Laminilla. (Bálsamo de Canadá o Euparal).

Para los ejemplares de piojos y pulgas, la mejor manera de preservarlos para su estudio

taxonómico es el montaje permanente, donde la preparación de los ejemplares puede llevarse a

cabo mediante lotes o individualmente mediante los siguientes pasos (Fig. 44):

Coloque los ejemplares de una misma colecta en un godete o vidrio de reloj con KOH al 10% en

frío durante 24 a 36 horas, para llevar a cabo su aclaración y limpieza interna. Si se requiere

acelerar el proceso, los ejemplares se introducen en un vial para centrífuga (máximo diez en un



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vial, dependiendo del tamaño de los ejemplares) de 1.5 ml (polipropileno No. 1012-00-0); se

colocan con KOH dentro de un vaso de precipitados pequeño parcialmente lleno con agua (baño

María), calentando a temperatura constante antes del punto de ebullición; el tiempo de

aclaración se reduce a tan solo 30 minutos aproximadamente. Se colocan después en agua

destilada durante 10 a 15 minutos, después en ácido acético glacial. Posteriormente se colocan

en un vidrio de reloj o godete con alcohol isopropílico durante 5-10 minutos.

Fig. 44. Material para preparación de laminillas

Después se sumergen en una solución 1:1 de alcohol isopropílico-esencia de clavo de 10-15

minutos, se pasan a esencia de clavo durante 10-15 minutos para dar maleabilidad a los escleritos

y terminar de aclarar sus estructuras. Se coloca una pequeña gota de Bálsamo del Canadá sobre

el portaobjetos y coloque el ejemplar en la gota; en el caso de los piojos, coloque el ejemplar con

la parte dorsal hacia arriba y la cabeza dirigida a la parte superior, las patas estiradas lo más que

se pueda a los lados. Las pulgas se colocan lateralmente, la cabeza hacia el lado derecho y las

patas estiradas hacia arriba, procurando dejar visible el lado izquierdo (Fig. 45).



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Fig. 45. Montaje en Bálsamo de Canadá

Coloque la lámina en la estufa de secado. Luego de 24 horas, se saca para colocar el

cubreobjetos (previamente cortado al tamaño proporcional del ejemplar), con unas gotas

de Bálsamo del Canadá, agregando hasta que éste se cubra completamente, de manera que

no se dañe. Coloque de nuevo la lámina en el horno de secado. Revise las burbujas de aire

durante los próximos días y agregue el bálsamo del Canadá si es necesario. Una vez seco el

ejemplar, ya puede ser observado al microscopio compuesto y llevar a cabo su

determinación taxonómica.

La laminilla es etiquetada de la siguiente forma: del lado izquierdo se colocan los datos de

colecta del ejemplar (país, estado, municipio, localidad, tipo de trampa, lugar específico de

colecta, fecha de colecta y colectores) y del lado derecho los datos de la determinación

taxonómica (especie, sexo, autor, fecha de determinación y nombre del determinador así

como la técnica empleada).

Finalmente, los datos de colecta y de taxonomía se capturan en una base de datos de

Biótica, y se le asigna un número de colección. La laminilla es integrada a la colección

científica del Laboratorio. La lámina se coloca en la caja entomológica de portaláminas por

lo que hay que mantener la caja en posición vertical, para que permanezcan en posición

horizontal (Fig. 46).



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Fig. 46. Procedimiento de identificación taxonómica.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS POR EL LABORATORIO Muestra Positiva Todos los ejemplares que pertenecen a las especies de importancia médica. Muestra Negativa Todos los ejemplares que pertenecen a las especies sin importancia médica. MUESTRAS INDETERMINADAS Los ejemplares adultos cuyo resultado quede a nivel de género o ninfa. MUESTRAS PARA DIAGNOSTICO Los ejemplares que se envíen para identificación taxonómica. MUESTRAS PARA CONTROL DE CALIDAD Los ejemplares que se envíen para de la identificación taxonómica con resultado del LESP a nivel de especie MUESTRAS RECHAZADAS



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Las muestras serán rechazadas si contienen agua, en seco, sin etiqueta de datos de colecta, con datos de colecta a tinta, y si los ejemplares están mal preservados.

LISTA DE ESPECIES (POSITIVAS) CON IMPORTANCIA MÉDICA EN MÉXICO (Ectoparásitos)

Clase Insecta Orden Siphonaptera Especies:

Ctenocephalides felis felis (Bouché, 1835

Leptopsylla segnis (Schönherr, 1811)

Pulex irritans Linnaeus, 1758

Pulex simulans Baker, 1895

Tunga penetrans (Linnaeus, 1758)

Xenopsylla cheopis (Rothschild, 1903)

Clase Insecta Orden Phtipthraptera Especies:

Pediculus humanus capitis (De Geer, 1778) (referida también como: Anthropopthirus capitis).

Pediculus humanus humanus Linnaeus, 1758

Pthirus pubis Linnaeus, 1758

Clase Acari Orden Ixodidae Especies:

Amblyomma americanum Linnaeus, 1758

Amblyomma cajennense (Fabricius, 1787)

Amblyomma cajennense Fabricius, 1787

Anocentor nitens Neuman, 1897

Dermacentor albipictus Packard, 1869

Haemaphysalis leporispalustris (Packard, 1869)

Ornithodorus nicollei Mooser, 1932

Othobius lagophilus Cooley & Kohls, 1940

Othobius megnini (Dugés, 1884)

Rhipicephalus sanguineus (Latreillus, 1806)



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CRITERIOS DE INCLUSIÓN O EXCLUSIÓN Determinación Taxonómica. Criterios de inclusión: Todos los ejemplares que pertenecen a especies de importancia médica y que se encuentren en buen estado físico. Criterios de exclusión: Todos los ejemplares que no se encuentren bien preservados y/o dañados y sea imposible identificarlos taxonómicamente. Criterio de diagnóstico: Se considera positivo a todos los ejemplares de ectoparásitos con importancia médica y negativos a los que carecen de importancia médica en México.

MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD Para la identificación taxonómica el procesador debe de protegerse con bata blanca y si se expone a varias horas inhalando el alcohol que maneja para las muestras se deberá proteger con una mascarilla. Cuando se lleve a cabo el montaje de laminillas, tener cuidado con el Xilol

PANEL DE EFICIENCIA PARA EVALUACIÓN DE LA RED DE ENTOMOLOGIA

LABORATORIOS ESTATALES DE SALUD PÚBLICA

Del grupo de pulgas se han remitido muestras para evaluación del desempeño de los LESP. Se escogen diferentes especies con importancia médica en México, y se les asigna una clave numérica con etiqueta a las tres muestras con ejemplares de evaluación para cada LESP. Posteriormente se les envían las muestras junto con el oficio e instructivo. La evaluación es en base a la identificación taxonómica a nivel de especie, el tiempo estimado de respuesta es de 10 días hábiles a partir de que reciben las muestras. La calificación es con base en rangos de valores establecidos por el laboratorio de entomología del InDRE.


1) ENT-M05/0. Método de estudio de especies de pulgas con importancia médica (Insecta: Siphonaptera)

2) ENT-M06/0. Método de estudio para piojos de importancia médica en salud pública (Phtiraphtera: Anoplura, Pediculidae)

3) ENT-M07/0. Método de estudio de garrapatas con importancia médica (Acari: Ixodidae)



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REFERENCIAS.

Hastriter, M. & Whiting M. Siphonaptera (Fleas), pp. 1040-1044. In: Resh V. & R. Carde.

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Kim K. Ch., Pratt H. D. & Stojanovich C. J. 1985. The sucking lice of North America. An illustrated

Manual for identification. The Pennsylvania State University Press. London. 241 pp.

Ponce-Ulloa, H. & Llorente-Bousquets J., 1993. Distribución de Siphonaptera (Arthropoda, Insecta)

en la Sierra de Atoyac de Álvarez, Guerrero, México. Instituto de Biología, UNAM, publicaciones

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Salceda-Sánchez, B. 2004. Clave para la identificación de adultos de las especies de pulgas

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Mexicana 43(1): 27-41.

Wirth, W. W. & N. Marston. 1968. A method for mounting small insects on microscope slides in

Canada Balsam. Annals of the Entomology Society of America. 61:783-784.



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ANEXO.

Cronograma de actividades.

Actividad Bimestre 2012

1 2 3 4 5 6

Diagnóstico Referencia Control de Calidad

Paneles de eficiencia a la RNLSP

Mantenimiento y actualización de la colección de referencia

Desarrollo de procedimientos pruebas de referencia e investigación

Capacitación en servicio, asesoría

Curso Anual a la RNLSP

Cultivo de las colonias de insectos en el insectario



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ANEXO.

Capacidad Analítica. Número de muestras totales procesadas por grupo taxonómico

2008-2011 a la RNLSP.

GRUPO

TAXONOMICO 2008 2009 2010 2011

DX CC DX CC DX CC DX CC

SCORPIONES

108 1289 68 858 136 859 56 725

TRIATOMINAE

985 350 575 368 101 380 27 594

CULICIDAE

2688 17467 7203 11735 1055 13027 8091

12561

OTROS TAXA

104 50 202 41 4387 57 7541 49

BÚSQUEDA

PARASITOLÓGICA

Trypanosoma cruzi 917 305 557 224 96 307 18 447

TOTAL DE MUESTRAS

4802 19461 8605 13226 5775 14630 15733 14376



Tel. 53411101, 53964416



ANEXO.

COLECCIÓN DE ARTRÓPODOS CON IMPORTANCIA MÉDICA- Referencia para paneles de

evaluación del desempeño ala RNLSP.

Elaboración de etiquetas de colecta y taxonómicas para cada ejemplar

Ejemplares con /sin importancia médica provenientes de las muestras realizadas en los métodos (ENTO-M-02, ENTO-M-07 al 10)

Labores curatoriales de las muestras para los ejemplares preservados y conservados en la Colección (CAIM): -Alfiler entomológico -Alcohol etílico al 70% -En seco -En laminillas Métodos validados: De acuerdo al taxa se preservan y se conservan de manera diferente (ENTO-M-02, ENTO-M-07 al 10)

Preparación y montaje, según los métodos correspondientes a cada grupo

Se integran a la Base de datos de la colección

Mantenimiento Anual: Preservación de ejemplares

Llenado del formato ENTO-F-10 para registro de muestras para la Colección de Artrópodos con Importancia Médica



Tel. 53411101, 53964416



Anexo. Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública-Entomología. 2012 RNLSP Mosquitos Scorpiones Chinches

Triatominae Búsqueda coproparasitológica de

Trypanosoma cruzi Otros Taxa*

Dx. CC.

PANEL Dx. CC. PANEL Dx. CC. PANEL Dx. CC. PANEL Dx. CC. PANEL

Aguascalientes X X P X X P X P X

BCN

BCS X X

Campeche X X P X X P X X P X

Chiapas X P X P X P P

Chihuahua X

Coahuila P P

Colima

Distrito Federal X X

Durango P P P

Edo. de México X X X X

Guanajuato X X P X X P X X P X P X X P

Guerrero X P X X P

Hidalgo X X P X X P X P X X

Jalisco X P X X P X X P X P X X P

Michoacán X P X X X X P X

Morelos X X P P X P X P

Nayarit X X

Nuevo León X P X P X X P

Oaxaca X P X X P X P X X P X X P

Puebla X P X X

Querétaro X P X P X X X X P

Q. Roo X X P X P X P P

San Luis Potosí X P X

Sinaloa X X X X X

Sonora X

Tabasco X P X X P X P X X

Tamaulipas X P X P X X P X X P

Tlaxcala P

Veracruz X

Yucatán X X P X P X

Zacatecas

Dx. Diagnóstico, CC. Control de Calidad, P. Panel de Evaluación. * Incluye varios grupos garrapatas, piojos, pulgas, arañas, abejas, otras moscas, etc.

lineamientos para la vigilancia por laboratorio de ... · entomología del indre, mediante oficio,...

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