lapres glukosa

Click here to load reader

Post on 28-Jan-2016

293 views

Category:

Documents

12 download

Embed Size (px)

DESCRIPTION

BIOKIMIA

TRANSCRIPT

Laporan biokimia I

I. Judul Percobaan : Penentuan Kadar Glukosa dalam DarahII. Tanggal Percobaan: Senin, 19 Oktober 2015III. Tujuan Percobaan : Menentukan kadar glukosa dalam darahIV. Dasar Teori :Gula darah merupakan istilah yang mengacu kepada tingkat glukosa yang ada di dalam darah. Glukosa dibentuk dari senyawa-senyawa glukogenik yang mengalami glukogenesis. Glukoneogenesis memenuhi kebutuhan akan glukosa pada saat karbohidrat tidak tersedia dalam jumlah yang cukup dalam makanan. Pasokan glukosa yang terus menerus diperlukan sebagai sumber energy, khususnya bagi sistem saraf dan eritrosit. Glukosa juga diperlukan di dalam jaringan adipose sebagai sumber gliseralida-gliserol dan glukosa juga mempunyai peran dalam mempertahankan kadar intermediet pada siklus asam sitrat di seluruh jaringan tubuh. Glukosa juga merupakan satu-satunya bahan bakar yang memasok energi bagi otot rangka pada keadaan anaerob (Murray 2006).

Gambar 1. Struktur GlukosaKadar glukosa darah yang diketahui dapat membantu memprediksi metabolismeme yang mungkin terjadi dalam sel dengan kandungan gula yang tersedia. Jika kandungan glukosa dalam tubuh sangat berlebih maka glukosa tersebut akan mengalami reaksi katabolisme secara enzimatik untuk menghasilkan energi. Namun jika kandungan glukosa tersebut dibawah batas minimum,maka asam piruvat yang dihasilkan dari proses katabolisme bisa mengalami proses enzimatik secara anabolisme melalui glukoneogenesis untuk mensintesis glukosa dan memenuhi kadar normal glukosa dalam darah ( salam serum atau plasma darah ) yaitu65-110 mg/dL (3,6-6,1 mmol/L) (Murray 2006).DeproteinasiSerum DarahDeproteinasi serum darah dilakukan untuk menghilangkan protein dalam serum darah agar tidak mengganggu uji-uji yang akan dilakukan selanjutnya. Protein adalah senyawa yang akan mengalami denaturasi dalam keadaan asam dan menggumpal bila dipanaskan, karena itulah dilakukan pemanasan dan penambahan asam asetat pada larutan serum darah dan air kemudian terjadi endapan. Endapan yang terjadi kemudian disaring dan hasil saringan (filtrat) diambil untuk digunakan pada uji selanjutnya. Protein akan mengalami koagulasi apabila dipanaskan pada suhu 500C atau lebih. Koagulasi ini akan terjadi apabila larutan protein telah mencapai titik isoelektriknya. Protein terdenaturasi pada titik isoelektriknya masih dapat larut pada pH diluar titik isoelektrik tersebut. Titik isoelektrik dalam darah ialah 4,88.Metode Penentuan Kadar Glukosa DarahMetode NelsonSomogyiMetode Nelson Somogyi digunakan untuk mengukur kadar gula reduksi dengan menggunakan pereaksi tembaga-arsenol-molibdat. Prinsip kerja Nelson Somogyi yaitu tereduksinya jumlah endapan kuprooksida yang bereaksi dengan arsenomolibdat yang tereduksi menjadi molybdine blue dan warna biru diukur absorbansinya. Reagen nelson somogyi berfungsi sebagai oksidator antara kuprooksida yang bereaksi dengan gula reduksi membentuk endapan merah bata. Dalam hal ini, pereaksi Somogyi merupakan pereaksi tembaga alkali yang mengandung Na2PO4 anhidrat dengan garam K-Na-tartrat (garam Rochelle), sedangkan pereaksi Nelson mengandung amonium molibdat H2SO4.NaHAsO4.7H2O.Denganmembandingkannyaterhadaplarutanstandar,konsentrasi gula dalam sampel dapat ditentukan. Reaksi warna yang terbentuk dapat menentukan konsentrasi gula dalam sampel dengan mengukur absorbansinya. Reaksi yang terjadi :

Cu2O + arsenomolibdat (Mo6+)+ 4H+ 2 Cu2++ arsenomolibdat (Mo5+) biru + H2O

Pada penambahan reagen Cu Alkalis, ion kupri (Cu+) akan direduksi oleh gula menjadi kupro (Cu2+) dan mengendap sebagai Cu2O (kuprooksida). Dengan menambahkan reagen arsenomolibdat, kuprooksida melarut lagi dan warna larutan akan berubah menjadi biru jernih. Penambahan larutan Ba(OH)2 sebelumnya juga membantu terjadinya reduksi ion Cu2+karena reaksi terjadi dalam suasana basa. Intensitas warna larutan adalah ukuran banyaknya gula yang ada di dalam filtrat (Girindra 1999).Spektrofotometri UV-Vis Spektrofotometri adalah salah satu cara yang dapat digunakan dalam penentuan kadar glukosa dalam darah. Spektrofotometri merupakan metode analisis yang didasarkan pada absorpsi radiasi elektromagnet. Cahaya terdiri dari radiasi terhadap gelombang dengan panjang berlainan akan menimbulkan cahaya yang berlainan sedangkan campuran cahaya yang berbeda panjang gelombangnya ini akan menyusun cahaya putih. Cahaya putih meliputiseluruh spektrum nampak 400-760 mm. Spektrofotometri terjadi karena adanya perpindahan elektron dari tingkat energi yang rendah ketingkat energi yang lebih tinggi. Perpindahan elektrontidak diikutioleh perubahan arah spin, hal ini dikenal dengan sebutan tereksitasi singlet.Besar penyerapan cahaya (absorbansi) dari suatu kumpulan atom/molekul dinyatakan oleh Hukum Beer-Lambert. Hukum Lambert menyatakan bahwa proporsi berkas cahaya datang yang diserap oleh suatu bahan/medium tidak bergantung pada intensitas berkas cahaya yang datang. Hukum Lambert ini tentunya hanya berlaku jika di dalam bahan/medium tersebut tidak ada reaksi kimia ataupun proses fisis yang dapat dipicu atau diimbas oleh berkas cahaya datang tersebut. Perubahan warna yang terjadi diamatidan intensitas warnanya diamatidengan spektronik-20 pada panjang gelombang 660 nm (Lehninger 1982)Dengan menggunakan Hukum Lambert-Beer konsentrasi glukosa dalam darah dapat ditentukan . hukum Lambert-Beer menyatakan : A= k C lDimana : A = absorbansi (serapan cahaya)k = koefisien ekstingsi molar larutanl = tebal kuvetC = konsentrasi sampelBerdasarkan hukum Lambert-Beer, serapan cahaya berbanding lurus dengan konsentrasinya.

Pengamatan dengan spektronik-20 menggunakan prinsip hukum Lambert Beer. Faktor yang mempengaruhi adalah konsentrasi larutan dan bentuk wadah. Bagian sinar yang diserap akan tergantung pada berapa banyak molekul yang beinteraksi dengan sinar. Jika zat warna tersebut berupa larutan pekat, maka akan diperoleh absorbansi yang sangat tinggi karena ada banyak molekul yang berinteraksi dengam sinar. Akan tetapi, dalam larutan yang sangat encer, sangat sulit untuk melihat warnanya. Absorbansinya sangat rendah. Bentuk wadah yang semakin panjang akan mempengaruhi panjang larutan sehingga sinar akan lebih banyak diserap karena sinar berinteraksi dengan lebih banyak molekul (Murray 2006).Metode LainMetode lainnya yaitu metode kondensasi dan metode enzimatik. Glukosa (dan aldosa lain) dapat berkondensasi dengan macam-macam senyawa aromatik dalam suasana asam panas membentuk produk-produk yang berwarna. Hidroksimetilfurfural terbentuk dari glukosa dalam larutan asam kuat panas. Gugus aldehida dari produk ini berkondensasi dengan suatu fenol untuk menghasilkan senyawa hijau yang dapat diukur secara spektrofotometrik. Kadar glukosa darah diukur dengan metode enzimatik (glukosa oksidase) menggunakan alat glukometer. Prinsip kerja penggunaan alat tersebut yaitu oksigen dengan bantuan enzim glukosa oksidase mengkatalis proses oksidasi glukosa menjadi asam glukonat dan hidrogen peroksida. Enzim peroksidase dalam reaksi kedua mengkatalisis reaksi oksidasi kromogen (akseptor oksigen yang tidak berwarna), kemudian oleh hidrogen peroksidase membentuk suatu produk kromogen teroksidasi berwarna biru yang diukur dengan glukometer. Tes strip pada glukometer mengandung bahan kimia glukosa oksidase kurang lebih 0,8 IU, garam naftalena, asam sulfat 42 g, dan 3-metil-2-benzothiazolin hidrazon.

V. Alat dan Bahan : Alat alat :1. Sentrifuge2. Spektrofotometer UV-Vis3. Tabung Reksi 10 buah4. Kompor listrik 1 buah5. Gelas Ukur 10mL1 buah6. Labu ukur 25mL 1 buah7. Pipet tetes10 buah8. Gelas Kimia 400mL2 buah Bahan bahan :1. Larutan Cu Alkalis2. Larutan Ba(OH)2 0,3 N3. Larutan ZnSO4.7H2O 5%4. Larutan standart glukosa 1 mg/L5. Pereaksi Arsenomolibdat6. Aquades7. Sampel darahCara Kerja :1. Deproteinasi filtrat darah- diuji biuret- dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge- ditambahkan 3 tetes darah- dicampur- ditambahkan 1,5 mL Ba(OH)2 0,3N- diaduk hingga merata- ditambahkan 1,5 mL ZnSO4.7H2O 5%- dicampurkan dengan baik- didiamkan selama 5 menit- disentrifuge selama 30 menit- didekantasi1,9 mL aquadesFiltratHasil pengamatan

2. Penentuan kadar glukosa darah- dimasukkan ke dalam tabung reaksi- ditambahkan 1 mL reagen Cu alkalis- dimasukkan ke dalam air mendidih selama 20 menit- didinginkan dalam air dingin selama 10 menit- diaduk hingga merata- ditambahkan 1 mL reagen arsenomolibdat- diaduk sampai merata- diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis (=660 nm)1 mL darah bebas proteinAbsorbansi

3. Penentuan kurva standar1 mL glukosa 0,8 mg/mL1 mL glukosa 0,6 mg/mL1 mL glukosa 0,4 mg/mL- dimasukkan ke dalam tabung reaksi- ditambahkan 1 mL reagen Cu alkalis- dimasukkan ke dalam air mendidih- didinginkan dalam air dingin- diaduk hingga merata- ditambahkan 1 mL reagen arsenomolibdat- diaduk sampai merata- diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis (=660 nm)1 mL glukosa 0,2 mg/mLAbsorbansi

4. Larutan blanko- dimasukkan ke dalam tabung reaksi- ditambahkan 1 mL reagen Cu alkalis- dimasukkan ke dalam air mendidih- didinginkan dalam air dingin- diaduk hingga merata- ditambahkan 1 mL reagen arsenomolibdat- diaduk sampai merata- diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis (=660 nm)1 mL aquadesAbsorbansi

Laporan biokimia I|Penentuan Kadar Glukosa dalam Darah

Hasil PengamatanNo. Perc.Prosedur PercobaanHasil PengamatanDugaan / ReaksiKesimpulan

SebelumSesudah

1

Deproteinasi filtrat darah- diuji biuret- dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge- ditambahkan 3 tetes darah- dicampur- ditambahkan 1,5 mL Ba(OH)2 0,3N- diaduk hingga merata- ditambahkan 1,5 mL ZnSO4.7H2O 5%- dicampurkan dengan baik- didiamkan selama 5 menit- disentrifuge selama 30 menit- didekantasi1,9 mL aquadesFiltratBerwarna biru

Aquades: tak berwarna Sampel darah : berwarna merah Ba(OH)2 : tak berwarna ZnSO4.H2O 5% : tak berwarna Sampel 1 : Qod Sampel 2 : Azah Aquades + sampel 1 : larutan berwarna merah Aquades + sampel 2 : larutan berwarna merah Sampel 1 dan 2 + Ba(OH)2 : Larutan berwarna merah, terdapat endapan merah Sampel 1 dan 2 + ZnSO4.H2O 5%: larutan menjadi 2 fasa. Lapisan atas : berwarna merah. Bawah : tak berwarna Sampel 1 dan 2 di sentrifuge : tak berwarna, terdapat gumpalan darah di bawah tabung Sampel 1 diuji biuret : larutan berwarna biru Sampel 2 diuji biuret : larutan berwarna biru Filtrat yang diperoleh adalah filtrat darah bebas protein Fungsi dari aquades mengencerkan darah sehingga albumin yang merupakan protein dalam darah dapat larut Fungsi dari Ba(OH)2 mengendapkan albumin Fungsi ZnSO4.H2O 5% untuk mempercepat reaksi pengendapan albumin oleh Ba(OH)2Filtrat darah bebas protein

2.Penentuan kadar glukosa darah- dimasukkan ke dalam tabung reaksi- ditambahkan 1 mL reagen Cu alkalis- dimasukkan ke dalam air mendidih- didinginkan dalam air dingin- diaduk hingga merata- ditambahkan 1 mL reagen arsenomolibdat- diaduk sampai merata- diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis (=660 nm)1 mL darah bebas proteinAbsorbansi

Filtrat darah bebas protein : larutan tak berwarna Pereaksi Cu alkalis : larutan berwarna biru Pereaksi arsenomolibdat : larutan tak berwarna Filtrat I + Cu alkalis : larutan berwarna biru kehijauan Filtrat 2 + Cu alkalis : berwarna biru Filtrat I dipanaskan : larutan tak berwarna, endapan biru kehijauan Filtrat 2 dipanaskan : larutan tak berwarna, endapan berwarna biru Filtrat I dan 2 di dinginkan: larutan berwarna biru, endapan biru Filtrat I dan 2 + arseno molibdat, setelah itu dikocok: larutan berwarna biru Diukur absorbansi : Absorbansi sampel I : 0,3 Absorbansi sampel 2 : 0,223

Cu2O + arsenomolibdat (Mo6+)+ 4H+ 2 Cu2++ arsenomolibdat (Mo5+) biru + H2O

Kadar glukosa pada sampel darah :I : 85, 24 mg/100mLII : 75,73 mg/100mL

3.Penentuan kurva standar- dimasukkan ke dalam tabung reaksi- ditambahkan 1 mL reagen Cu alkalis- dimasukkan ke dalam air mendidih- didinginkan dalam air dingin- diaduk hingga merata- ditambahkan 1 mL reagen arsenomolibdat- diaduk sampai merata- diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis (=660 nm)1 mL glukosa berbagai konsentrasiAbsorbansi

Larutan glukosa : tak berwarna Pereaksi Cu alkalis : larutan berwarna biru Pereaksi arsenomolibdat : larutan tak berwarna Aquades : tak berwarna

Larutan glukosa konsentrasi 0,2 0,4 0,6 0,8 + Cu alkalis : berwarna biru Dipanaskan Larutan glukosa 0,2mg/ml: berwarna coklat Larutan glukosa 0,4 mg/ml: larutan jingga, endapan jingga (+) Larutan glukosa 0,6 mg/ml : larutan jingga, endapan jingga (++) Larutan glukosa 0,8mg/ml: larutan jingga, endapan jingga (+++) Di dinginkan :Larutan glukosa 0,2 mg/ml : berwarna coklatLarutan glukosa 0,4 mg/ml : berwarna jingga (+)Larutan glukosa 0,6 mg/ml : berwarna jingga (++)Larutan glukosa 0,8 mg/ml : berwarna jingga (+++) + pereaksiArsenomolibdat : Glukosa 0,2 mg/ml : berwarna biruGlukosa 0,4 mg/ml : berwarna biru (+)Glukosa 0,6 mg/ml : berwarna biru (++)Glukosa 0,8 mg/ml : berwarna biru (+++) Diukur absorbansi (=660nm):Glukosa 0,2 mg/ml : 0,534 nmGlukosa 0,4 mg/ml : 0,72 nmGlukosa 0,6 mg/ml : 0,917 nmGlukosa 0,8 mg/ml M : 1,008 nm

Cu2O + arsenomolibdat (Mo6+)+ 4H+ 2 Cu2++ arsenomolibdat (Mo5+) biru + H2O

Semakin besar konsentrasi maka nilai absorbansi juga semakin besar.Persamaan kurva standar yang diperoleh :Y = 0,8095x 0,39R2 = 0,9781

4.Larutan blanko- dimasukkan ke dalam tabung reaksi- ditambahkan 1 mL reagen Cu alkalis- dimasukkan ke dalam air mendidih- didinginkan dalam air dingin- diaduk hingga merata- ditambahkan 1 mL reagen arsenomolibdat- diaduk sampai merata- diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis (=660 nm)1 mL aquadesAbsorbansi

Aquades : tak berwarna Pereaksi Cu alkalis : berwarna biru Pereaksi arsenomolibdat : larutan tak berwarna

Aquades + Cu alkalis : berwarna biru Dipanaskan : berwarna biru (-) Didinginkan : berwarna biru (-) + arsenomolibdat: tak berwarna

Analisis dan Pembahasan5. Deproteinasi Filtrat DarahPada percobaan ini bertujuan untuk memperoleh sampel filtrate darah yang bebas protein. Pertama yang harus dilakukan adalah dimasukkan 3 tetes darah ke dalam tabung sentrifuge yang telah berisi 1,9 mL aquades. Terdapat 2 sampel darah yang diambil dari anggota kelompok kami. Penambahan aquades bertujuan untuk mengencerkan darah yang digunakan sehingga albumin dalam darah akan larut. Albumin adalah protein yang larut dalam air serta dapat terkoagulasi dalam darah dan terdapat dalam serum darah. Kemudian ditambahkan 1,5 mL Ba(OH)2 0,3 N tak berwarna, larutan darah berwarna merah. Fungsi penambahan Ba(OH)2 adalah sebagai pemberi suasana basa dan juga untuk mengendapkan albumin yang terlarut dalam air. Lalu ditambahkan 1,5 mL ZnSO4.7H2O 5% tak berwarna, larutan darah mulai mengendap ke bagian atas. Setelah itu larutan di diamkan selama 5 menit, dimana tujuannya agar terjadi endapan albumin secara sempurna. Penambahan ZnSO4.7H2O 5% ini berfungsi sebagai katalisator untuk mempercepat reaksi pengendapan albumin oleh Ba(OH)2 dan juga untuk mengendapkan serta mendenaturasi protein secara sempurna. Langkah yang dilakukan selanjutnya adalah sentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan 3000. Sentrifugasi dilakukan berdasarkan berat jenis protein yang lebih besar dari glukosa agar terjadi endapan albumin secara sempurna, sehingga endapan tersebut dapat dipisahkan dengan cara dekantasi. Hasil sentrifuge berupa larutan tak berwarna dan endapan merah. Bagian yang tak berwarna merupakan filtrate darah bebas protein sedangkan bagian yang mengendap merupakan albumin darah. Kemudian dilakukan dekantasi pada filtrate tersebut yang merupakan filtrate darah bebas protein. Proses pengendapan tersebut dilakukan untuk memisahkan protein dari glukosa karena akan mengganggu pengukuran. Lalu dilakukan uji biuret untuk memastikan bahwa filtrat darah telah bebas protein. Ditambahkan 1 tetes biuret pada kedua sampel filtrat darah, dan ternyata larutan berwarna biru yang menandakan bahwa filtrat tersebut telah benar benar bebas protein.

6. Penentuan Kadar Glukosa DarahPercobaan ini bertujuan untuk menentukan kadar glukosa darah pada sampel filtrat bebas protein dari percobaan pertama. 1 mL filtrat bebas protein hasil sentrifuge tak berwarna dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Selanjutnya ditambahkan 1 mL larutan Cu alkalis berwarna biru dan menghasilkan larutan berwarna biru. Selanjutnya sampel dimasukkan ke dalam air yang mendidih selama 20 menit dan terdapat endapan berwarna biru kehijauan. Pemanasan ini bertujuan untuk mempercepat laju reaksi oleh Cu alkalis. Lalu larutan dimasukkan kedalam air dingin selama 10 menit untuk menstabilkan larutan sebelum direaksikan dengan reagen arsenomolibdat sehingga menghasilkan warna biru. Kemudian ditambahkan 1 mL reagen arsenomolibdat menghasilkan larutan berwarna biru (+). Fungsi dari penambahan pereaksi Cu alkalis dan arsenomolibdat yaitu dimana glukosa darah akan mereduksi ion Cu2+ menjadi Cu+ dalam suasana basa. Pada suasana basa, bentuk enadiol pada glukosa menjadi dominan dan mereduksi ion kupri (Cu2+). Cu+ akan membentuk endapan jingga merah Cu2O. Cu+ akan bereaksi oksidasi dengan arseno molibdat menghasilkan warna biru. Hal tersebut sesuai reaksi yang terjadi :

Cu2O + arsenomolibdat (Mo6+)+ 4H+ 2 Cu2++ arsenomolibdat (Mo5+) biru + H2O

Warna biru tersebut yang nantinya diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis untuk menentukan kadar glukosa darah karena berdasarkan hukum Lambert -Beer serapan cahaya berbanding lurus dengan konsentrasi. Spektrofotometer UV-Vis adalah suatu instrumen untuk mengukur absorbs cahaya dengan energy (panjang gelombang) tertentu oleh suatu atom/molekul. Dalam percobaan ini, pengukuran absorbansi dilakukan pada panjang gelombang 660nm, karena warna biru memiliki rentang panjang gelombang pada 610-750 nm. Hasil pengukuran menunjukkan absorbansi sampel 1 sebesar 0,3 dan sampel 2 sebesar 0,223. Sehingga didapatkan kadar glukosa darah sampel 1 sebesar 85,24 mg/100mL dan sampel 2 sebesar 75,73mg/100mL (perhitungan terlampir). Sehingga kadar glukosa darah kedua praktikan termasuk kategori normal. Sesuai literatur, kadar normal glukosa dalam darah (serum atau plasma darah ) yaitu65-110 mg/dL (3,6-6,1 mmol/L) (Murray 2006).7. Pembuatan Kurva StandarPada percobaan ini bertujuan untuk membuat kurva standar yang akan diperoleh persamaan regresi untuk digunakan sebagai penentuan kadar glukosa darah pada percobaan kedua. Tahap pertama yang harus dilakukan adalah membuat larutan standart. Larutan standart dibuat dengan cara mengencerkan larutan glukosa yang memiliki konsentrasi 20mg/ml menjadi 0,2mg/ml, 0,4mg/ml, 0,6mg/ml dan 0,8mg/ml dengan menggunakan rumus pengenceran sebagai berikut : M1xV1 = M2 x V2Tahap selanjutnya diambil 1 mL tiap larutan standart yang dibuat dan dimasukkan dalam tabung reaksi. Kemudian ditambahkan 1 mL larutan Cu alkalis pada masing masing tabung reaksi dan dihasilkan larutan yang berwarna biru. Penambahan Cu alkalis mengakibatkan ion Cu2+ akan direduksi oleh glukosa menjadi Cu+ dalam suasana basa. Kemudian semua tabung reaksi tersebut dipanaskan dalam air mendidih selama 20 menit dihasilkan larutan dan endapan berwarna jingga kemerahan. Endapan tersebut merupakan Cu+ yang mengendap sebagai Cu2O. Seperti percobaan sebelumnya pemanasan ini bertujuan untuk mempercepat laju reaksi Cu alkalis. Kemudian di dinginkan dalam air dingin selama 10 menit untuk menstabilkan larutan sebelum direaksikan dengan reagen arsenomolibdat. Lalu ditambahkan 1 mL reagen arsenomolibdat menghasilkan larutan berwarna biru. Penambahan reagen arsenomolibdat bertujuan agar Cu2O melarut lagi. Reaksi yang terjadi :

Cu2O + arsenomolibdat (Mo6+)+ 4H+ 2 Cu2++ arsenomolibdat (Mo5+) biru + H2O

Warna biru semakin pekat seiring dengan bertambahnya konsentrasi glukosa. Lalu larutan diukur absorbansinya pada panjang gelombang 660 nm. Adapun absorbansi yang didapat adalah sebagai berikut :Konsentrasi mg/mlAbsorbansiWarna

0,20.534Biru

0,40.72Biru (+)

0,60.917Biru (++)

0,81.008Biru (+++)

Berdasarkan absorbansi yang didapat pada masing masing larutan standart, dapat diperoleh kurva kalibrasi sebagai berikut :

Dari kurva standar diatas diperoleh persamaan regresi yaitu : y = 0.8095x - 0.39R2 = 0,9781Berdasarkan persamaan garis tersebut dapat dihitung kadar glukosa dalam darah.

8. Larutan BlankoPembuatan larutan blanko adalah untuk mengetahui titik nol dari suatu larutan standart. Sehingga dapat digunakan sebagai perbandingan terhadap sampel yang akan diuji. Larutan blanko berpusat pada aquades yang menggantikan sampel. Pertama yang dilakukan, 1 mL aquades dimasukkan dalam tabung reaksi, ditambahkan 1 mL larutan Cu alkalis dan dihasilkan larutan berwarna biru. Kemudian tabung reaksi dipanaskan dalam air mendidih selama 20 menit untuk mempercepat laju reaksi dari Cu alkalis. Lalu tabung reaksi di dinginkan dalam air dingin selama 10 menit. Penambahan Cu alkalis pada larutan blanko tidak menimbulkan endapan setelah dipanaskan. Hal ini disebabkan dalam aquades tidak terdapat glukosa sehingga tidak ada reduksi ion Cu2+ menjadi Cu+ dan tidak terbentuk endapan Cu2O jingga kemerahan. Kemudian ditambahkan 1 mL pereaksi arsenomolibdat menghasilkan larutan tak berwarna.

KesimpulanDari percobaan yang telah kami lakukan dapat disimpulkan bahwa kadar glukosa darah pada sampel 1 sebesar 85,24 mg/100mL dan sampel 2 sebesar 75,73 mg/100mL yang ditentukan dengan pereaksi Cu alkalis dan arsenomolibdat serta menggunakan spektrofotometer UV-Vis untuk mengukur absorbansi dari warna biru yang dihasilkan pada sampel.

Daftar PustakaGirindra, A. 1999.Biokimia I.Gramedia, Jakarta.Lehninger, A. 1982.Dasar-dasar Biokimia.Terjemahan Maggy Thenawidjaya. Jakarta : Penerbit ErlanggaMurray RK, DK Granner, VW Rodwell. 2006. Harpers Illustrated Biochemistry. Amerika: The Mc Graw-Hill Companies, Inc. Ed. ke-27.Poedjiadji, Anna. 1994.Dasar-dasar Biokimia. Jakarta: UI Press.Tim Dosen. 2015. Panduan Praktikum Biokimia I. Surabaya : Unesa Press.

Jawaban Pertanyaan9. Tentukan kadar glukosa dalam mg glukosa/100 mL darah!Jawab : Absorbansi sampel 1 = 0,3y = 0.8095x - 0.390,3= 0.8095x - 0.390,3 + 0.39 = 0.8095x

x = 0,8524 mg/mLx = 85,24 mg/100mL Absorbansi sampel 2 = 0,223y = 0.8095x - 0.390,223= 0.8095x - 0.390,223 + 0.39 = 0.8095x

x = 0,7573 mg/mLx = 75,73 mg/100mL

10. Apa fungsi proses pendidihan pada percobaan diatas?Jawab :Fungsi proses pendidihan yaitu untuk mempercepat laju reaksi dengan adanya Cu-Katalis.

11. Jelaskan peranan hormon insulin dalam proses pengaturan kadar glukosa!Jawab :Hormon insulin berfungsi untuk merangsang pengubahan glukosa ke glikogen untuk disimpan dalam hati dan merangsang oksidasi glukosa untuk tujuan respirasi dalam sel. Sehingga apabila kadar glukosa terlampau rendah, kurang dari jumlah normal, sel alfa pada kelenjar Langerhans akan mensekresikan lebih banyak hormon glukagon, kadar glukosa dalam darah akan naik, proses ini akan berlanjut sehingga kadar glukosa dalam darah berada pada jumlah normal.

LAMPIRAN DOKUMENTASINo.DokumentasiLangkah KerjaKeterangan

1.Deproteinasi Filtrat Darah

Diambil 1,9 mL aquades dan dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge.Aquades : larutan tak berwarna

Dimasukkan 3 tetes darah ke dalam tabung sentrifuge. Terdapat 2 sampel darah yang diambil.Larutan darah berwarna merah

Ditambahkan 1,5 mL Ba(OH)2.Larutan berwarna merah (+)

Diambil 1,5 mL ZnSO4.7H2O dan dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge.Larutan mengendap berwarna merah

Larutan darah tersebut di sentrifuge selama 10 menit dengan kecepatan 3000.Terdapat endapan merah dan filtrat tak berwarna

Dilakukan uji biuret pada 1 mL filtrat darah yang telah diambil dengan cara dekantasi.Larutan berwarna biru (-)Hal tersebut menandakan bahwa filtrate darah bebas protein

2.Penentuan Glukosa Darah

1 mL filtrat darah bebas protein dimasukkan dalam tabung reaksi dan ditambahkan dengan 1 mL larutan Cu alkalis. Larutan berwarna biru

Dimasukkan ke dalam air yang mendidih selama 20 menit lalu di dinginkan ke dalam air dingin selama 10 menit.Larutan berwarna biru

Ditambahkan 1 mL pereaksi arsenomolibdat pada masing masing sampel dan dikocok.Larutan berwarna biru jernih.

Kedua larutan tersebut diukur absorbansinya menggunakan alat spetronik 20 pada panjang gelombang 660 nm.Hasil absorbansi :Sampel 1(qod) : 0,3Sampel 2(azah): 0,223

3.Pembuatan kurva standar

Dilakukan pengenceran larutan glukosa dengan berbagai konsentrasi yaitu 0,2mg/mL, 0,4 mg/mL, 0,6 mg/mL, dan 0,8 mg/mLLarutan tak berwarna

Larutan glukosa yang telah diencerkan masing masing ditambahkan 1mL pereaksi Cu alkalis dalam tabung reaksi.Larutan berwarna biru muda

Semua larutan glukosa tersebut dipanaskan dalam air mendidih selama 20 menit dan di dinginkan selama 10 menit.Larutan berwarna jingga, dan terdapat endapan berwarna jingga kemerahan

Setelah ditambahkan 1 mL pereaksi arsenomolibdatLarutan berwarna biru (++)

Diukur absorbansinya menggunakan alat spetronik 20 pada panjang gelombang 660 nm.Glukosa 0,2 mg/ml : 0,534 Glukosa 0,4 mg/ml : 0,72 Glukosa 0,6 mg/ml : 0,917Glukosa 0,8 mg/ml M : 1,008

4.Larutan blanko

Dimasukkan 1 mL aquades dalam tabung reaksiLarutan tak berwarna

Ditambahkan 1 mL pereaksi Cu alkalis.Larutan berwarna biru

Larutan dipanaskan dalam air mendidih selama 20 menit dan didinginkan selama 10 menit.Larutan berwarna biru

Ditambahkan 1 mL pereaksi arenomolibdat.Larutan tak berwarna

LAMPIRAN PERHITUNGANa. Penentuan Kadar Glukosa DarahPersamaan garis yang dipeorleh dari kurva standar adalah y = 0.8095x - 0.39 dengan besar absorbansi larutan darah yaitu 0,3 dan 0,223. Absorbansi sampel 1 = 0,3y = 0.8095x - 0.390,3= 0.8095x - 0.390,3 + 0.39 = 0.8095x

x = 0,8524 mg/mLx = 85,24 mg/100mL Absorbansi sampel 2 = 0,223y = 0.8095x - 0.390,223= 0.8095x - 0.390,223 + 0.39 = 0.8095x

x = 0,7573 mg/mLx = 75,73 mg/100mLb. Kurva standart larutan glukosa Berikut data absorbansi larutan standar glukosa darah :Konsentrasi mg/mlAbsorbansi

0,20.534

0,40.72

0,60.917

0,81.008

Sehingga didapatkan persamaan garis dari kurva larutan standar glukosa darah, yaitu sebagai berikut :