laprak di print

23
5. Ada bera pa macam tek nik Isola si? Sebu tkan dan Je laskan masing-masing teknik terseb ut. 6. Bagaimana cara transfe r kultu r dari medium cair ke a gar teg ak ? Jelaskan. 7. Fakto r apa saaka ! "ang per lu diper !atikan d alam pro ses kulti#asi mikroba? Jelaskan. $etode %iringan &oresan 'streak-plate met!od( $edi um di cai rkan lal u di di nginkan !i ngga pada t. )emudi an goreskan ose "ang berisi mikroorganisme ke permukaan agar. Jika goresan sempurna maka bakteri indi#idual akan terpisa!* kemudian koloni tunggal dipisa!kan 'Sumbali* +,,(. $etode piring tuang ' pour met!od( ampuran antara agar cair dan inokulasi dituangkan ke ca/an petri dibiarkan padat* kemudian koloni tunggal dapat diperole! 'Sumbali* +,,(. $etode permukaan 'spread met!od( $a sukk an inok ul asi pa da pe rmuk aa n ca/a n pe tr i ke mu di an dipadatkan dengan med ia agar . Ino kul asi diseba r atau dir atakan den gan spre ade r* "ang pad a ak! irn"a semua mik rob a ber ada dia tas per muk aan 'Sumbali* +,,(. 0a bung "ang berisi medium ag ar penu! dibiarkan memadat dalam keadaan tegak. )emudian dengan menggunakan ose "ang suda! disterilisasi dimasukkan kedalam tabung brot! "ang berisi kultur. Setela! itu ose "ang suda! memiliki mikroba dimasukkan ketenga!-tenga! agar tegak. Semua prosedur dari a/al !ingga ak!ir !arus dilakukan secara aseptis 'Sumbali* +,,(.  Faktor-faktor "ang mempengaru!i adala! '1ee* +,,6(. 2  3. Sifatsetiapenismikroba "ang akandiisolasi.  +. 0e mpat!idupasalmikroba.  4. $edium pertumbu!an "ang sesuai. 0e mperatur 2 enim akan menalankan peranann"a !an"a pada temperatur tertentu 'temperatur optimal(. )onsentrasinutrisi 2 menentukan kecepatan transfer nutrient ke dalam sel. Jika konsentrasi nutriren dan makan sedikit maka ketersediaan nutrisi di dalam sel akan sedikit.  p 2 transfer enim dan nutrient di dalam sel mikroba sangat peka ter!adap p. 0e kanan osmosis 2berpengaru! pada keterse diaan air bagi sel mikroba. ksigen 2 mempengaru!i perkembangan mikroba "ang bersifat aerob maupun anaerob. )elembapan 2 mikroba !an"a dapat tumbu! pada lingkungan "ang memiliki kadar air8kelembapan "ang tinggi 9 9.ara menginkubasi mikroba.  5. ara menginokulasi mikroba. 6 6. ar a mengu i ba! /a mik rob a "an g diisol asi adala! kul tur murni dan sesuai den gan "ang dimaksud.  7.ara memeli!ara agar mikroba "ang tela! diisolasi merupakan kultur murni.

Upload: ricky-kurniawan

Post on 08-Jan-2016

252 views

Category:

Documents


1 download

DESCRIPTION

sadasdasda

TRANSCRIPT

Page 1: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 1/23

5. Ada berapa macam teknik Isolasi? Sebutkan dan Jelaskan masing-masing teknik tersebut.

6. Bagaimana cara transfer kultur dari medium cair ke agar tegak ? Jelaskan.

7. Faktor apa saaka! "ang perlu diper!atikan dalam proses kulti#asi mikroba? Jelaskan.

• $etode %iringan &oresan 'streak-plate met!od(

$edium dicairkan lalu di dinginkan !ingga padat. )emudian

goreskan ose "ang berisi mikroorganisme ke permukaan agar. Jika goresan

sempurna maka bakteri indi#idual akan terpisa!* kemudian koloni tunggal

dipisa!kan 'Sumbali* +,,(.• $etode piring tuang ' pour met!od(

ampuran antara agar cair dan inokulasi dituangkan ke ca/an petri

dibiarkan padat* kemudian koloni tunggal dapat diperole! 'Sumbali* +,,(.

• $etode permukaan 'spread met!od(

$asukkan inokulasi pada permukaan ca/an petri kemudian

dipadatkan dengan media agar. Inokulasi disebar atau diratakan dengan

spreader* "ang pada ak!irn"a semua mikroba berada diatas permukaan

'Sumbali* +,,(.

0abung "ang berisi medium agar penu! dibiarkan memadat dalam keadaan

tegak. )emudian dengan menggunakan ose "ang suda! disterilisasi dimasukkan

kedalam tabung brot! "ang berisi kultur. Setela! itu ose "ang suda! memiliki

mikroba dimasukkan ketenga!-tenga! agar tegak. Semua prosedur dari a/al !ingga

ak!ir !arus dilakukan secara aseptis 'Sumbali* +,,(.

  Faktor-faktor "ang mempengaru!i adala! '1ee* +,,6(. 2

  3. Sifatsetiapenismikroba "ang akandiisolasi.

  +. 0empat!idupasalmikroba.

  4. $edium pertumbu!an "ang sesuai.

• 0emperatur 2 enim akan menalankan peranann"a !an"a pada temperatur tertentu

'temperatur optimal(.

• )onsentrasinutrisi 2 menentukan kecepatan transfer nutrient ke dalam sel. Jika konsentrasi

nutriren dan makan sedikit maka ketersediaan nutrisi di dalam sel akan sedikit.

•  p 2 transfer enim dan nutrient di dalam sel mikroba sangat peka ter!adap p.

• 0ekanan osmosis 2berpengaru! pada ketersediaan air bagi sel mikroba.

• ksigen 2 mempengaru!i perkembangan mikroba "ang bersifat aerob maupun anaerob.

• )elembapan 2 mikroba !an"a dapat tumbu! pada lingkungan "ang memiliki kadar

air8kelembapan "ang tinggi

9 9.ara menginkubasi mikroba.

  5. ara menginokulasi mikroba.

6 6. ara mengui ba!/a mikroba "ang diisolasi adala! kultur murni dan sesuai dengan

"ang dimaksud.

  7.ara memeli!ara agar mikroba "ang tela! diisolasi merupakan kultur murni.

Page 2: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 2/23

DIAGRAM ALIR

:. Sebutkan dan elaskan teknik-teknik preser#asi mikroba "ang digunakan dalam

 pembuatan stok kultur;

METODE STREAK PLATE GORESAN KUADRAN

• 0ransfer periodik media segar 2 media kultur mikroba disimpan pada tabung

dalam inter#al /aktu. Seperti pen"impanan bakteri !eterotropis dapat

 berta!an sekitar beberapa minggu atau bulan pada medium segar 'Sarker*

+,,6(..

• )ultur dengan min"ak mineral 2 mempreser#asi mikroba dengan cara

menutupi agar miring dengan min"ak mineral steril. 0eknik ini bisa

men"impan mikroba 35 sampai +, ta!un 'Sarker* +,,6(..

• 1"op!iliation 2 teknik "ang paling efektif untuk men"impan kultur* dengan

cara membekukan sel dan sel "ang beku tersebut dimasukkan kebotol kecil

kemudian direndam di dalam campuran es batu dan alko!ol. 0eknik ini dapat

membuat kultur berta!an lebi! dari +, ta!un 'Sarker* +,,6(.

Page 3: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 3/23

  <ibuat pembagian sektor menadi 9 kuadran

  se dipiarkan

  <iambil 3 ose kultur dari agar miring 'secaraaseptis(

  <igoreskan pada permukaan agar sektor 3 secara ig-ag

  <ibuat goresan secara ig-ag dari sektor + ke 4 dan 4 ke 9

  <iberi label pada ca/an petri

  <iinokulasi pada su!u 4,oselama 9: am

a/an petri berisi media

asil

METODE SPREAD PLATE

  <iencerkan

  <iambil suspensi sampel ,*3ml

  <iinokulasi pada ca/an petri

  <iratakan dengan spreader 

  <iberi label pada ca/an petri

  <iinkubasi pada su!u 4,o selama 9: am

Page 4: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 4/23

Sampel

asil

METODE POUR PLATE

  <iambil suspensi sampel 3ml

  <iinokulasi pada ca/an petri

  <ituang dalam medium agar steril bersu!u 9,o-5,o

  <iputar mengukuti pola angka :

  <iinkubasi pada su!u 4,o selama 9: am

Page 5: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 5/23

Sampel

asil

TRANSFER KULTUR DARI TABUNG REAKSI KE TABUNG REAKSI

A. MEDIUM AGAR MIRING KE MEDIUM AGAR MIRING

  se dipiarkan

  <iambil 3 ose kultur dari tabung berisi media agar miring 'secaraaseptis(

  <iinokulasi pada tabung berisi media agar miring secara ig-sa dari ba/a! ke atas

  <iinkubasi pada su!u 4,o selama 9: am

Page 6: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 6/23

Sampel

asil

Sampel

TRANSFER KULTUR DARI TABUNG REAKSI KE TABUNG REAKSI

B. MEDIUM AGAR MIRING KE MEDIUM AGAR TEGAK 

  se dipiarkan

  <iambil 3 ose kultur dari tabung berisi media agar miring 'secaraaseptis(

  <iinokulasi pada tabung berisi media agar tegak dengan menusuk tepat = bagian dasar media

  <iinkubasi pada su!u 4,o selama 9: am

Page 7: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 7/23

asil

TRANSFER KULTUR DARI TABUNG REAKSI KE TABUNG REAKSI

C. MEDIUM AGAR MIRING KE MEDIUM BROTH

  se dipiarkan

  <iambil 3 ose kultur dari tabung berisi media agar miring 'secaraaseptis(

  <iinokulasi pada tabung berisi media brot!

  <iinkubasi pada su!u 4,o selama 9: am

Page 8: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 8/23

Sampel

asil

TEKNIK PRESERVASI KRIOGENIK 

  <ibuat larutan stok gliserol dengan konsetrasi 6,>

  <imasukkan ,*5 kultur dan ,*5ml gliserol ke dalam tube steril

  <i#orte

  <ibekukan pada su!u -:,o

Page 9: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 9/23

DAFTAR PUSTAKA

Alat dan ba!an

asil

Page 10: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 10/23

</idoseputro* <. +,,5. Dasar-dasar Mikrobioligi.Jakarta 2<ambatan

&andar* Indra/ati. +,,6. Mikologi Dasar dan Terapan.Jakarta 2@a"asanbor Indonesia

endar"ono* <. +,,6. Teknik Kultur Jaringan. @og"akarta2 %enerbit)anisius

1ee*@uan ). +,,6. Microbial Biotechnology : Principles and Aplication. Singapore 2 B J

nterprise

Sarker* Sat"ait. +,,6. Natural Products Isolation. 0oto/a 'Ce/ Jerse"( 2 uman %ress IncSumbali* &reeta. +,,. Principles o Microbiology. Ce/ <el!i 2 0ata $c&ra/ ill

Suria/iria* D. +,,5. Mikrobiologi Dasar . Jakarta 2 %apas SinarSinanti

DAFTAR PUSTAKA TAMBAHAN

Page 11: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 11/23

DATA HASIL PENGAMATAN

Baird* Eosamund. +,34+. !andbook o "ulture Media or #ood and $ater Microbiology.

1ondon 2 Eo"al Societ" of !emistr"

ampbell* Cell. +,,7. Biology : Jilid %. Jakarta 2 %0 &elora Aksara %ratama

$ac!mud* $. +,,:. Teknik Penyi&panan dan Pe&eliharaan Mikroba'Bogor 2 Balai

%enelitian Bioteknologi 0anaman %angan.

%elcar* $ic!ael. +,,:. Dasar-Dasar Mikrobiologi .Jakarta 2 Dni#ersitas Indonesia.S!arma* %.<. +,,7. Microbiology. Ce/ <el!i 2 Eastogi %ublications

Sil#a* Ceusel". +,34. Microbilogical ()a&ination Methods o #ood and $ater : A

 *aboratory Manual . as!ington <. 2 0a"lor Francis &roup

ild* <a#id. +,,5. 0!e Immunoassa" andbook. 1ondon 2 lse#ier 

Page 12: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 12/23

3. $edium Agar $iring ke $edium Agar $iring ;

Asal Isolat 2 S. Aureus Asal Isolat 2 .oli)eterangan 2)eterangan 2

+. $edium Agar $iring ke $edium Agar 0egak ;

Asal Isolat 2 S. Aureus Asal Isolat 2 .oli

)eterangan 2 )eterangan 2

4. $edium Agar $iring ke $edium Brot! ;

SpreadingSpreading

0idak ada kontaminan8

inokulasi dari medium agar 

miring ke agar miring

2 0idak ada kontaminan8

inokulasi dari medium agar

miring ke agar miring

BeadedBeaded

0idak ada kontaminan8inokulasi dari medium agar 

miring ke agar tegak 

0idak ada kontaminan8inokulasi dari medium agar 

miring ke agar tegak 

Page 13: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 13/23

Asal Isolat 2 S. Aureus Asal Isolat 2 .oli

)eterangan 2 )eterangan 2

9. Cama $ikroorganisme 2 S.Aureus

0ipe media "ang

digunakan

 Cama $edia %ertumbu!an

'G( atau '-(

)ontaminasi

'G( atau '-(

Agar 0egak CA G -

Agar $iring CA G -

Brot! CB G -

 Cama $ikroorganisme 2 .oli

0ipe media "ang

digunakan

 Cama $edia %ertumbu!an

'G( atau '-(

)ontaminasi

'G( atau '-(

Agar 0egak CA G -

Agar $iring CA G -

Brot! CB G -

5. Ba!as data "ang anda perole! pada ketiga media "ang digunakan;

0umbu!0umbu!

0idak ada kontaminan8

inokulasi dari medium agar 

miring ke medium brot!

0idak ada kontaminan8

inokulasi dari medium agar 

miring ke medium brot!

• $edium Agar $iring ke $edium Agar $iring

a. S. Aureus%ada medium agar miring ke medium agar miring mikroba "ang diamati berupa

S.Aureus dapat tumbu! dengan baik sesuai dengan pola goresan ose "ang digoreskan

 pada bagian pinggir dari agar dengan karakteristik pertumbu!an "aitu spreading.

%ada medium agar uga tidak terdapat kontaminasi mikroba lain.

 b. .oli

Begitu pula dengan bakteri .oli* pada medium agar miring ke medium agar 

miring bakteri .oli dapat tumbu! dengan baik sesuai dengan pola goresan ose "ang

digoreskan pada bagian tenga!-tenga! dari agar dengan karakteristik pertumbu!an

"aitu spreading. %ada medium agar uga tidak terdapat kontaminasi mikroba lain.

• $edium Agar $iring ke $edium Agar 0egak 

a. S.Aureus

%ada medium agar miring ke medium agar tegak mikroba "ang diamati berupa

S.Aureus tidak dapat tumbu! dengan baik pada alur masukn"a ose. an"a tumbu!

satu koloni saa "ang dapat diamati pada alur dimasukkann"a ose. al ini

dikarenakan baketri S.Aureus merupakan bakteri aerob "ang membutu!kan oksigen

untuk pertumbu!ann"a* sedangkan medium agar tegak untuk pertumbu!an bakteri

anaerob. %ada medium agar tegak* bakteri S.Aureus !an"a mendapatkan sedikit

oksigen dari alur masukn"a ose dan tidak dapat tumbu! men"ebar ke bagian agar 

lainn"a. )arakteristik pertumbu!an S.Aureus pada agar tegak "aitu beaded. %ada

medium agar uga tidak terdapat kontaminasi mikroba lain.

 b. .oli

%ada medium agar miring ke medium agar tegak mikroba "ang diamati berupa

.oli tidak dapat tumbu! dengan baik pada alur masukn"a ose. an"a tumbu!

satu koloni saa "ang dapat diamati pada alur dimasukkann"a ose. al inidikarenakan baketri .oli merupakan bakteri aerob "ang membutu!kan oksigen

untuk pertumbu!ann"a* sedangkan medium agar tegak untuk pertumbu!an bakteri

anaerob. %ada medium agar tegak* bakteri .oli !an"a mendapatkan sedikit

oksigen dari alur masukn"a ose dan tidak dapat tumbu! men"ebar ke bagian agar 

lainn"a. )arakteristik pertumbu!an .oli pada agar tegak "aitu beaded. %ada

medium agar uga tidak terdapat kontaminasi mikroba lain.

• $edium Agar $iring ke $edium Brot!

a. S.Aureus

%ada medium brot! bakteri S.Aureus dapat tumbu! dan kolonin"a berkumpul

 pada bagian dasar tabung reaksi dan sebagian "ang men"ebar se!inggamen"ebabkan air pada medium brot! menadi keru!. %ada medium brot! bakteri

S.Aureus masi! dapat mendapatkan oksigen se!ingga dapat memicu

 pertumbu!ann"a dengan cukup baik. )oloni bakteri "ang ada pada medium brot!

tidak seban"ak pada medium miring dikarenakan pada medium miring bakteri

S.Aureus sebagai bakteri aerob mendapatkan oksigen secara optimal tanpa ada "ang

menutupin"a untuk bernapas. %ada medium brot! tidak terdapat kontaminasi

mikroba lain.

 b. .oli

%ada medium brot! bakteri .oli dapat tumbu! dan kolonin"a berkumpul pada

 bagian dasar tabung reaksi dan sebagian "ang men"ebar se!ingga men"ebabkan air 

 pada medium brot! menadi keru!. %ada medium brot! bakteri .oli masi! dapatmendapatkan oksigen se!ingga dapat memicu pertumbu!ann"a dengan cukup baik.

)oloni bakteri "ang ada pada medium brot! tidak seban"ak pada medium miring

dikarenakan pada medium miring bakteri .oli sebagai bakteri aerob mendapatkan

oksigen secara optimal tanpa ada "ang menutupin"a untuk bernapas. %ada medium

 brot! tidak terdapat kontaminasi mikroba lain.

Page 14: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 14/23

 

6. $etode Streak %late

Page 15: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 15/23

Asal Isolat 2 S. Aureus Asal Isolat 2 .oli

)eterangan 2 )eterangan 2

7. Cama $ikroorganisme 2 S.Aureus

Bentuk %ertumbu!an )oloni )eterangan

Bentuk $edium 0ak ada kontaminasi

le#asi Irregular 0ak ada kontaminasi

%ermukaan )asar 0ak ada kontaminasi

$argin 1obate 0ak ada kontaminasi

 Cama $ikroorganisme 2 .oli

Bentuk %ertumbu!an )oloni )eterangan

Bentuk %oint 'titik( 0ak ada kontaminasi

le#asi Spindle 0ak ada kontaminasi

%ermukaan )asar 0ak ada kontaminasi

$argin 1obate 0ak ada kontaminasi

:. Ba!as data "ang anda perole! dili!at dari bentuk pertumbu!an kolonin"a.

0idak ada kontaminasi0idak ada kontaminasi

• S.Aureus

%ada bakteri S.Aureus* pada kuadran I masi! tumbu! dengan baik dan terdapat

 ban"ak sekali koloni "ang polan"a mengikuti pola ig-ag goresan ose. 0etapi

 pertumbu!ann"a !an"a sampai kuadran II saa. Sedangakan pada kuadran III dan

IH suda! tidak ada lagi koloni besar maupun koloni kecil dari bakteri S.Aureus. al

ini dapat disebabkan ole! beberapa faktor. %ertama* "aitu karena pembakaran ose*

dimungkinkan saat pembakaran ose "ang ketiga kalin"a saat ingin melanutkan

 penggoresan ke kuadran III terdapat ban"ak bekteri S.Aureus "ang mati akibat

 panas. )edua* saat melanutkan penggoresan ke kuadran III tidak sesuai dengan

 penggoresan ak!ir dari kuadran II* se!ingga tidak ada mikroba "ang terikut padaose saat digorekan pada kuadran selanutn"a. 0etapi seau! ini tidak ada

kontaminasi mikroba "ang lain. )arakteristik pertumbu!an kolonin"a memiliki

 bentuk medium* memiliki enis ele#asi irregular* enis permukaann"a kasar* dan

memiliki margin "aitu lobate.

• .oli

%ada bakteri .oli* pada kuadran I masi! tumbu! dengan baik dan terdapat

 ban"ak sekali koloni "ang polan"a mengikuti pola ig-ag goresan ose. 0etapi

 pertumbu!ann"a !an"a mencapi sedikit bagian dari kuadran II. Sedangakan pada

kuadran III dan IH suda! tidak ada lagi koloni besar maupun koloni kecil dari

 bakteri .oli. al ini dapat disebabkan ole! beberapa faktor. %ertama* "aitu karena pembakaran ose* dimungkinkan saat pembakaran ose "ang kedua kalin"a saat ingin

melanutkan penggoresan ke kuadran II terdapat ban"ak bekteri .oli "ang mati

dan !an"a men"isakan sedikit sekali bakteri .oli. 0etapi seau! ini tidak ada

kontaminasi mikroba "ang lain. )arakteristik pertumbu!an kolonin"a memiliki

 bentuk point 'titik(* memiliki enis ele#asi spindle* enis permukaann"a kasar* dan

memiliki margin "aitu lobate.

Page 16: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 16/23

. )esimpulan apaka! "ang dapat ditarik dari praktikum ini ?

Analisa Prosedr

Me!ode S!rea" Pla!e Goresan Kadran

Isolasi mikroba "aitu memisa!kan mikroba dari lingkungann"a di alam dan

menumbu!kann"a sebagai biakan murni pada medium buatan. <alam mempertumbu!an

mikroorganisme dapat menggunakan tiga macam enis media* "aitu medium agar 

miring* medium agar tegak* dan medium brot!. Setiap medium memiliki peranann"a

sendiri-sendiri ter!adap pertumbu!an mikroba "ang ingin diamati. %ada medium agar 

miring bakteri aerob seperti S.Aureus dan .oli dapat tumbu! dengan subur karena

mandapatkan oksigen "ang ban"ak* sedangakan pada medium agar tegak !an"a

mendapatkan sedikit sekali oksigen dan meng!asilkan koloni "ang dapat tumbu! !an"a

sedikit. %ada medium brot! kedua enis bakteri ini dapat tumbu! akan tetapi tidak 

seban"ak dan seoptimal pada medium agar miring. $etode kedua "ang dilakukan pada

 praktikum ini dalam menumbu!kan kultur dengan metode streak plate "ang

meng!asilkan pertumbu!an mikroba !an"a mencapai kuadran II saa. @ang disebabkan

ole! beberapa faktor seperti pembakaran ose.

%ada teknik isolasi*kulti#asi* dan preser#asi kultur semua prosedur !arus melalui

teknik aseptis dan sterilisasi agar tidak teradi kontaminasi pada mikroorganisme "ang

ditumbu!kan dan didapatkan kultur murni. Setela! peminda!an kultur* semua media

"ang suda! berisi kultur dilakukan pen"impanan dalam inkubator selama + !ari* setela!

itu baru dapat diketa!ui !asiln"a.

Page 17: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 17/23

%ertama-tama siapkan alat dan ba!an "ang akan digunakan. Alat "ang digunakan

antara lain 3 bunsen* 3 ose* 3 rak tabung reaksi* + beaker glass +5,ml85,,ml* 3 tabung berisi

auades* 3 tabung reaksi berisi alko!ol* 3 ca/an petri kosong* 3 erlenme"er* tissue* kertas

label* semprotan "ang berisi alko!ol. Sedangkan ba!an "ang akan digunakan adala! kultur 

 bakteri S.Aureus. 1angka! a/al "ang !arus dilakukan adala! aseptis diri dan lingkungan.

$en"emprotkan alko!ol ke mea tempat dilakukann"a praktikum dan kemudianmen"emprotkann"a ke tangan "ang disapukan ke seluru! bagian tangan. Setela! itu* ambil

ca/an petri "ang suda! berisi media agar dan bagi menadi empat kuadran menggunakan

spidol !itam "ang ditulis pada bagian belakang ca/an petri. <an angan lupa memberi label

 pada ca/an petri tersebut ba!/a digunakan untuk metode streak plate. %iarkan ose pada

 bunsen !ingga kemera!an dan celupkan ke dalam alko!ol. Dlangi langka! tersebut seban"ak 

tiga kali. %ada pemiaran ose terak!ir* masukkan ose ke dalam tabung reaksi "ang berisi kultur 

 bakteri S.Aureus secara aseptis "ang selalu berada di dekat api bunsen. Buka kapas penutup

tabung "ang berisi kultur dengan cari kelingking dan ari manis* kemudian masukkan ose

"ang suda! dipiarkan perla!an-la!an dan goreskan dari ba/a! !ingga atas untuk mengambil

 bakteri S.Aureus. Setela! itu panaskan mulut tabung reaksi dan tutup kembali dengan kapas

 penutup.

%anaskan pinggiran ca/an petri kemudian buka tutupn"a* goreskan ose "ang berisi

kultur pada kuadran I mengikuti pola ig-iag* tutup ca/an petri dan panaskan kembali

 beserta osen"a* buka kembali tutup ca/an petri dan lanutkan penggoresan dari uung kuadran

I menuu kuadran II. Dlangi langka!-langka! tersebut !ingga ke kuadran IH. Jika suda!

selesai penggoresan !ingga kuadran IH* panaskan pinggiran ca/an petri dan ose. se "ang

suda! dipiarkan dimasukkan ke dalam tabung reaksi berisi alko!ol. )emudian bungkus

ca/an petri dengan kertas pa"ung dan lakukan inokulasi selama + !ari pada su!u 4, ,  .

Setela! + !ari baru bisa diketa!ui !asil pertumbu!an dari bakteri S.Aureus.

Pen#en$eran %&'% (in##a %&')

%ertama-tama siapkan alat dan ba!an "ang akan digunakan. Alat "ang digunakan

antara lain 3 bunsen* 3 ose* mikro pipet beserta tipn"a* 3 rak tabung reaksi* + beaker glass

+5,ml85,,ml* 3 tabung berisi auades* 3 tabung reaksi berisi alko!ol* 3 ca/an petri kosong* 3

erlenme"er* tissue* kertas label* semprotan "ang berisi alko!ol. Sedangkan ba!an "ang akan

digunakan adala! kultur bakteri S.Aureus. Siapkan terlebi! da!ulu enam tabung reaksi dan

diberi label 3,-3  !ingga 3,-6. 1angka! a/al "ang !arus dilakukan adala! aseptis diri dan

lingkungan. $en"emprotkan alko!ol ke mea tempat dilakukann"a praktikum dan kemudian

men"emprotkann"a ke tangan "ang disapukan ke seluru! bagian tangan. Setela! itu semprot

mikropipet dengan alko!ol kemudian dilap dengan tissue. Ambil uung mikro tip perla!an-

la!an dalam beaker glass "ang berisi mikro tip. Jika mikro tip suda! terpasang secara benar*

tekan 0!umb )nob 'tekanan pertama(* angan ditekan terlalu dalam untuk mengambil kultur 

seban"ak 3ml "ang berada dalam tabung rekasi secara aseptis berdada di dekat api. 0a!an

 pipet dalam posisi #ertikal kemudian lepaskan tekanan dari t!umb knob secara perla!an-

la!an* maka cairan akan masuk kedalam tip. Siapkan tabung reaksi "ang suda! diberi label 3, -

3* tekan t!umb knob 'tekanan kedua( semaksimal secara perla!an !ingga semua cairan keluar 

dari uung tip. Jika ingin melepas tip* tekan tombol "ang bearada disamping mikro pipet* tip

akan terdorong keluar dengan sendirin"a. %anaskan mulut tabung reaksi dan tutup kembali

dengan kapas penutup. omogenkan larutan dengan cara di#orte !igga tercampur sempurna.

Page 18: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 18/23

Dlangi langka!-langka! tersebut !ingga didapatkan tabung reaksi ke enam dengan label

 pengenceran 3,-6.

Me!ode S*read Pla!e

%ertama-tama siapkan alat dan ba!an "ang akan digunakan. Alat "ang digunakan

antara lain 3 bunsen* 3 ose* mikro pipet beserta tipn"a* 3 rak tabung reaksi* + beaker glass

+5,ml85,,ml* 3 tabung berisi auades* 3 tabung reaksi berisi alko!ol* 3 ca/an petri kosong* 3

erlenme"er* tissue* kertas label* semprotan "ang berisi alko!ol. Sedangkan ba!an "ang akan

digunakan adala! kultur bakteri S.Aureus. 1angka! a/al "ang !arus dilakukan adala! aseptis

diri dan lingkungan. $en"emprotkan alko!ol ke mea tempat dilakukann"a praktikum dan

kemudian men"emprotkann"a ke tangan "ang disapukan ke seluru! bagian tangan. Siapkan 4

ca/an petri "ang berisi agar dan diberi label 3, -9  sampai 3,-6. Siapkan mikro pipet* ambil

cairan "ang berisi pada tabung dengan label 3, -9 seban"ak ,*3ml. a/an petri pertama "ang

memiki label 3,-9 dipanaskan pinggirann"a dan dengan perla!an-la!an masukkan cairan "ang

ada pada mikro pipet ke dalamn"a. Eatakan cairan tersebut dengan spreader "ang suda!

dipanaskan terlebi! da!ulu* ketika spreader suda! tidak membara baru masukkan ke dalam

ca/an petri dan ratakan cairan ke seluru! bagiat atas agar. 0utup ca/an petri dan panaskan

kembali pinggirann"a. Dlangi langka!-langka! tersebut untuk ca/an petri dengan label 3, -5

dan 3,-6 dengan isi "ang disesuaikan pula dengan tabung reaksi dengan label "ang sama.

%elabelan ini didasarkan ole! pengenceran keempat*kelima dan keenam. Inokulasi ketiga

ca/an petri selama + !ari pada su!u 4,,.

Me!ode Por Pla!e

%ertama-tama siapkan alat dan ba!an "ang akan digunakan. Alat "ang digunakan

antara lain 3 bunsen* 3 ose* mikro pipet beserta tipn"a* 3 rak tabung reaksi* + beaker glass+5,ml85,,ml* 3 tabung berisi auades* 3 tabung reaksi berisi alko!ol* 3 ca/an petri kosong* 3

erlenme"er* tissue* kertas label* semprotan "ang berisi alko!ol. Sedangkan ba!an "ang akan

digunakan adala! kultur bakteri S.Aureus. 1angka! a/al "ang !arus dilakukan adala! aseptis

diri dan lingkungan. $en"emprotkan alko!ol ke mea tempat dilakukann"a praktikum dan

kemudian men"emprotkann"a ke tangan "ang disapukan ke seluru! bagian tangan. Siapkan 4

ca/an petri kosong dan diberi label 3, -9 sampai 3,-6. Siapkan mikro pipet* ambil cairan "ang

 berisi pada tabung dengan label 3,-9 seban"ak ,*3ml. a/an petri pertama "ang memiki label

3,-9 dipanaskan pinggirann"a dan dengan perla!an-la!an masukkan cairan "ang ada pada

mikro pipet ke dalamn"a. )emudian tuang agar "ang steril "ang suda! tidak panas ke dalam

ca/an petri perla!an-la!an !ingga menutupi seluru! bagian dari alas ca/an petri. 0utup

ca/an petri dan panaskan kembali pinggirann"a. %utar ca/an petri di atas mea mengikuti

 pola angka : !ingga sekiran"a suda! tercampur rata. Dlangi langka!-langka! tersebut untuk 

ca/an petri dengan label 3,-5 dan 3,-6 dengan isi "ang disesuaikan pula dengan tabung reaksi

dengan label "ang sama. %elabelan ini didasarkan ole! pengenceran keempat*kelima dan

keenam. Inokulasi ketiga ca/an petri selama + !ari pada su!u 4,,.

Trans+er Kl!r dari Ta,n# Rea"si "e Ta,n# Rea"si

a. Medi- A#ar Mirin# "e Medi- A#ar Mirin#

,. Medi- A#ar Mirin# "e Medi- A#ar Te#a" $. Medi- A#ar Mirin# "e Medi- Bro!(

Page 19: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 19/23

PEMBAHASAN

Te"ni" Preserasi Krio#eni" 

Page 20: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 20/23

3. %ada teknik isolasi* apa perbedaan koloni mikroba "ang tumbu! pada masing-masing

kuadran ? $engapa demikian ? Jelaskan.

+. Apa "ang dimaksud dengan sele$!ie -edia ? $engapa media tersebut digunakan

dalam teknik isolasi ? Jelaskan. Sebutkan conto! sele$!ie -edia/ seban"ak +.

4. Apaka! koloni "ang terpisa! pada teknik isolasi merupakan pertumbu!an dari satu sel

mikroba ? Apaka! koloni tersebut dapat dikatakan sebagai kultur murni ? Jelaskan.

9. Apa keunggulan metode  Streak Plate dan  Spread Plate  pada teknik isolasi mikroba?

Jelaskan pula tentang Loop Dilution.

%erbedaan pada masing masing kuadran '&andar*+,,6( 2

• )uadran I 2 0erdapat ban"ak sekali koloni "ang tampak. )oloni berumla!

ribuan atau lebi! "ang saling bertumpukan se!ingga sulit untuk dapat

di!itung dan sulit untuk dipisa!kan.• )uadran II 2 Jumla! koloni dari mikroba terli!at mulai berkurang 'tak

seban"ak di kuadran I(. Camun masi! terli!at koloni "ang bertumpukan dan

masi! sulit untuk dilakukan per!itungan.

• )uadran III 2Jumla! koloni mulai ban"ak berkurang dan suda! terli!at tidak

 ban"ak "ang bertumpukan* se!ingga bisa dimulain"a per!itungan.

• )uadran IH 2 0erdapat Indi#idual sel "ang mulai terpisa!dari kolonin"a. <an

disinala! per!itungan bisa dilakukan ter!adap koloni tunggal.

%erbedaan umla! koloni pada masing-masing kuadran disebabkan ole!

adan"a goresan ose dan pembakaran ose "ang memungkinkan terbunu!n"asebagian mikroba se!ingga semakin ke kuadran III dan IH semakin ban"ak

koloni "ang berkurang dan didapatkann"a sel tunggal 'Sil#a* +,34(.

$edia selektif 2 adala! media untuk men"eleksi mikroba* se!ingga sala!

satu enis mikroba akan terbunu!* dan !an"a men"isakan mikroba "ang diinginkan

saa. 0erbunu!n"a sala! satu mikroba dikarenakan dalam media tersebut terdapat

suatu at kimia tertentu se!ingga dapat menekan pertumbu!an mikroba lain dan

merangsang pertumbu!an mikroba "ang diinginkan. onto!n"a 2 mannitol salt agar 

atau disingkat $SA 'agar garam manitol ( untuk identifikasi stap!"lococcus aureus*

SSA* $BA dan HEBA '%elcar* +,,:(.

$edia selektif digunakan dalam teknik isolasi bertuuan untuk mengisolasi

mikroorganisme tertentu untuk mendapatkan mikroorganisme "ang diinginkan*

conto!n"a untuk mengisolasi S. Aureus.$edia "ang digunakan mengandung at-at

tertentu "ang dibutu!kan S.Aureus untuk tumbu! tetapi meng!ambat pertumbu!an

mikroorganisme "ang lainn"a 'Baird* +,3+(.

Bukan* koloni "ang terpisa! bukanla! merupakan pertumbu!an dari satu sel

mikroba. al ini dikarenakan kultur "ang terdapat di kuadran terak!ir atau kuadran

IH merupakan koloni* bukanla! sel tunggal dari mikroba. )oloni dapat dili!at

dengan mata telanang sedangkan satu sel tunggal tidak dapat dili!at dengan mata

telanang* diakibatkan ukurann"a "ang sangat kecil. Jika penggoresan atau teknik 

isolasi dilakukan secara tepat dan aseptis* maka koloni tersebut merupakan kultur 

murni karena terdiri dari kumpulan mikroba seenis 'ampbell* +,,7(.

Page 21: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 21/23

5. Apa kegunaan penamba!an gliserol pada proses preser#asi kultur? Jelaskan.

Kesi-*lan

• Streak %late 2 pembagian berdasakan goresan kuadran se!ingga akan

meng!asilkan koloni tunggal. )oloni "ang di!asilkan !an"a dari 3 enis

saa. )euntungan lainn"a adala! kontaminan "ang muda! dibedakan.

)arena dalam metode streak plate ose digoreskan dengan pola tertentu

seperti pola ig-ag* maka koloni "ang tumbu! diluar pola tersebut dapatdin"atakan sebagai kontaminan 'S!arma* +,,7(.

• Spread %late 2 dapat memisa!kan atau membedakan antara mikroba aerob

dengan mikroba anerob atau mikroba lainn"a. Selama inokulasi mikroba

akan tersebar pada permukaan agar dan akan tampak ba!/a "ang

diuntungkan adala! bakteri aerob "ang dapat tumbu! pada permukaan agar 

'S!arma* +,,7(.

• 1oop <ilution 2 teknik isolasi dengan cara mengencerkan dan mengisolasi

mikroba. %engenceran bertuuan untuk meng!asilkan mikroba dengan

koloni tunggal "ang terpisa! dengan koloni-koloni lainn"a. %rinsipn"aadala! menggunakan satu seri tabung reaksi "ang diisi media cair dan

seumla! sel mikroba tertentu* enis mikroba "ang akan diamati dilepaskan

atau dilarutkan dari substratn"a ke dalam air. 0uuan dari teknik ini adala!

untuk meng!itung umla! sel mikroba 'ild* +,,5(.

%reser#asi kultur dilakukan untuk menga/etkan bakteri. Sala! satu

teknikn"a adala! pembekuan. Berbagai enis bakteri dapat dibekukan secara

langsung dalam media tumbu!n"a. %enamba!an gliserol berfungsi untuk 

mengurangi dampak negatif dari pembekuan* seperti mencega! kerusakan dinding

sel dari kristalisasi saat preser#asi berlangsung '$ac!mud* +,,:(.

Page 22: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 22/23

Isolasi mikroba "aitu memisa!kan mikroba dari lingkungann"a di alam dan

menumbu!kann"a sebagai biakan murni pada medium buatan. <alam mempertumbu!an

mikroorganisme dapat menggunakan tiga macam enis media* "aitu medium agar miring*

medium agar tegak* dan medium brot!. Setiap medium memiliki peranann"a sendiri-sendiri

ter!adap pertumbu!an mikroba "ang ingin diamati. %ada medium agar miring bakteri aerob

seperti S.Aureus dan .oli dapat tumbu! dengan subur karena mandapatkan oksigen "ang ban"ak* sedangakan pada medium agar tegak !an"a mendapatkan sedikit sekali oksigen dan

meng!asilkan koloni "ang dapat tumbu! !an"a sedikit. %ada medium brot! kedua enis

 bakteri ini dapat tumbu! akan tetapi tidak seban"ak dan seoptimal pada medium agar miring.

$etode kedua "ang dilakukan pada praktikum ini dalam menumbu!kan kultur dengan metode

streak plate "ang meng!asilkan pertumbu!an mikroba !an"a mencapai kuadran II saa. @ang

disebabkan ole! beberapa faktor seperti pembakaran ose.

%ada teknik isolasi*kulti#asi* dan preser#asi kultur semua prosedur !arus melalui

teknik aseptis dan sterilisasi agar tidak teradi kontaminasi pada mikroorganisme "ang

ditumbu!kan dan didapatkan kultur murni. Setela! peminda!an kultur* semua media "ang

suda! berisi kultur dilakukan pen"impanan dalam inkubator selama + !ari* setela! itu baru

dapat diketa!ui !asiln"a.

Ko-*onen Penilaian LKP0

1enis Penilaian Nilai Nilai 2an#

Page 23: Laprak Di Print

7/17/2019 Laprak Di Print

http://slidepdf.com/reader/full/laprak-di-print 23/23

Ma"si-al di*erole(

%re lab dan <iagram Alir  %&

1og Book  %&

<ata asil %engamatan dan %emba!asan 3&

Akti#itas di laboratorium %&

TOTAL %&&

Ko-*e!ensi Ma(asis4a dan Nilai Ma"si-al Tia* Ko-*e!ensi

No Ko-*e!ensi Bisa Tida"  

3. $ampu melakukan teknik isolasi pada media agar 

ke brot! dan sebailkn"a secara aseptis dan benar 2

• Aseptis ose dan mulut tabung 8 ca/an

• $embuka sumbatan tabung 8 erlenme"er 

secara aseptis dan benar 

• $enggores agar dengan teknik "ang benar 

+. $ampu melakukan transfer kultur dengan goresan

kuadran 2

• $enggambar kuadran pada ca/an

• Aseptis ose dan mulut tabung 8 ca/an

• $empiarkan ose setiap kali berpinda! kuadran

4. $ampu melakukan teknik preser#asi untuk  

membuat stok kultur 

• $eng!itung kebutu!an gliserol dan kultur 

• $enggunakan &icrotube  secara aseptis dan

 benar 

• $enggunakan pipet mikro secara aseptis dan

 benar 

• $enentukan kondisi pen"impanan kultur 

dengan tepat

TOTAL %&