LAPORAN PRAKTIKUM FARMAKOLOGI & TOKSIKOLOGI III (FA 4105)

MODUL 11

RESPON IMUN SEBAGAI TANGGAPAN TUBUH TERHADAP INFEKTOR

KELOMPOK 8 SHIFT RFABU

Tanggal percobaan : 9 Oktober 2013

Tanggal penggumpulan : 16 Oktober 2013

Asisten :

Putri Ariin Wulandari (11610010)

Anggota kelompok :

Okti Alfiana 10710032 Reaksi Presipitasi Metode Ring Test

Faridatus Saidah 10710033 Imunodifusi Ganda Metode Ouchterlony

Lestari Veronika 10710039 Editor, Imunodifusi Ganda Metode Ouchterlony

Ririn Ariani Dewi 10710077 Reaksi Aglutinasi

Wina Maryana 10710079 Induksi metode in vivo

Ady Parayudha 10710088 Induksi metode in vivo, Pendahuluan, Metodologi

LABORATORIUM FARMAKOLOGI

PROGRAM STUDI SAINS DAN TEKNOLOGI FARMASI

SEKOLAH FARMASI

INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG

2013

MODUL 11

RESPON IMUN SEBAGAI TANGGAPAN TUBUH TERHADAP INFEKTOR

I. TUJUAN

1. Menentukan hasil presipitasi dari ATS (Anti Tetanus Serum) dan TT (Tetanus Toxin) dengan

metode ring test.

2. Menentukan zona ekivalen interaksi antara antigen-antibodi dengan metode presipitasi pada

medium cair.

3. Menentukan antaraksi antara antigen – antibodi in vitro dan identifikasi antibodi W, vaksin 1,

dan vaksin 2 melalui reaksi imunodifusi ganda (Metode Ouchterlony)

4. Mengidentifikasi terjadinya aglutinasi bakteri akibat interaksi antara imunosera B.pertussis dan

bakteri Bordetella pertussis

II. PRINSIP PERCOBAAN

Di dalam tubuh terdapat sistem pertahanan tubuh yang memberikan proteksi pada tubuh

terhadap pengaruh benda-benda asing atau infektor yang masuk ke dalam tubuh. Dari mekanisme

atau produk imun yang berperan di dalam respons imun tubuh, dikenal sistem imunitas humoral

Diana diproduksi molekul antibodi dalam serum untuk melawan infektor secara spesifik dan sistem

imunitas seluler. Pada dasarnya produk imun ditujukan untuk berinteraksi dengan antigen (infektor)

penginduksi kemudian mengeliminasi dan memusnahkan antigen yang bersangkutan. Akibatnya

muncullah berbagai fenomena imunologik.

Secara eksperimental, pengamatan terhadap respons imun ini dapat dilakukan in vitro melalui

interaksi produk imun dengan antigen spesisfiknya. Interaksi spesifik tersebut dapat berupa

presipitasi dan aglutinasi yang dapat dilihat secara langsung atau menggunakan mikroskop. Namun

interaksi tersebut hanya terjadi jika antibodi spesifik terhadap antigennya.

III. METODOLOGI

Reaksi Presipitasi pada Medium Cair (Metode Ring Test)

Disediakan 5 tabung reaksi kecil (no 1-5). Masing-masing tabung diisi dengan 0,1; 0,2; 0,3;

0,4; dan 0,5 ml TT. Setelah itu ditambahkan ke masing-masing tabung 0,5; 0,4; 0,3; 0,2; dan

0,1 ml larutan NaCl 0,9% lalu dikocok perlahan. Kemudian ditambahkan ke semua tabung

2

0,1 ml ATS 420 Lf. Diamati endapan yang terbentuk pada tabung dan dicatat hasil

pengamatannya.

Reaksi Imunodifusi Ganda (Metode Ouchterlony)

Lapisan gel agar dibuat dengan cara menuangkan larutan agar panas 1 % ke dalam cawan

petri dengan tebal ± 2 mm dan dibiarkan dingin. Pada lapisan agar yang telah dingin dibuat

lubang sumur dengan pola tertentu (5 sumur). Secara aseptik, masing-masing sumur diisi

dengan larutan serum anti difteri, difteri toksoid, serum anti tetanus, tetanus toksoid, vaksin

1, vaksin 2 dan diinkubasi dalam lembab pada inkubator 37oC selama 3 hari dan diamati.

Reaksi Aglutinasi Bakterial

Kaca objek dibersihkan dengan etanol dan disekat menjadi dua dengan lilin Pada kedua

sisi kaca objek diteteskan 1 tetes suspensi hidup B.Pertussis .Imunoserum B.Pertussis di

teteskan pada sisi kiri kaca objek 1 tetes dan NaCl 0,9% diteteskan pada sisi kanan kaca.

Objek diamati di bawah mikroskop.

IV. DATA DAN PENGOLAHAN DATA

Reaksi Presipitasi pada Medium Cair (Metode Ring Test)

Metode Ring Test

Jumlah ATS 100 LF : 0,5 mlJumlah TT 250 LF hingga muncul kabut : 0,2 ml

3

1

1 1

2

2 2

3

3

3

4

4 4

ADS

ATS W

Gambar 1. Hasil reaksi Ring Test

Reaksi Presipitasi

ATS 100 LF – TT 250 LF ADS 420 LF - DT 100 LF

Gambar 2. Hasil reaksi presipitasi

Reaksi Imunodifusi Ganda (Metode Ouchterlony)

Gambar 3. Hasil pengamatan imunodifusi

4

Muncul kabut putih yang bertambah tebal dan kemudian memudar

dengan penambahan TT

Keterangan :4: ATS (Anti Tetanus Serum)5 : TT (Tetanus Toksoid)6 : ADS (Anti Difteri Serum)7 : DT (difteri toksoid)8 : Vaksin 1 9 : Vaksin 210: W (Antibodi yang belum diketahui)

Reaksi Aglutinasi Bakterial

Gambar 4. Perbesaran 100 kali B. Pertussis setelah ditambahkan NaCl 0,9% tidak terjadi penggumpalan.

Keterangan : Sel B.Pertussis terlihat menyerupai batang dan terpisah pisah tidak terjadi penggumpalan

Penggumpalan SelGambar 5. Perbesaran 100 kali B. Pertussis ditambahkan Imunoserum B.pertussis terjadi penggumpalan

5

Penggumpalan selGambar 6. Perbesaran 400 kali B. Pertussis ditambahkan Imunoserum B.pertussis terjadi penggumpalan

V. PEMBAHASAN

Aglutinasi, presipitasi, dan flokulasi merupakan uji antaraksi antigen-antibodi yang

didasarkan pada kemampuan antibodi untuk berikatan dengan antigen target. Reaksi aglutinasi

membutuhkan bentuk partikulat dari antgen target seperti sel bakteria, sel darah merah yang

diselubungi antigen, atau partikel inert dengan antigen target. Reaksi presipitasi membutuhkan

antigen target terlarut. Uji ini biasanya dilakukan di tabung atau dalam medium semisolid

seperti agar atau biasa disebut dengan metode imunodifusi ganda. Faktor yang berpengaruh

pada reaksi presipitasi antara lain :

- Afinitas : afinitas tinggi akan meningkatkan interaksi antara antigen dan antibodi

- Aviditas : reaksi yang lebih stabil akan memudahkan deteksi.

- Perbandingan antigen dan antibodi

- Bentuk fisik antigen

Reaksi presipitasi didasarkan pada terjadinya kompleks antara antibodi dan antigen yang

akan membentuk endapan atau kekeruhan sehingga dapat diamati secara kualitatif ataupun

kuantitatif. Metode yang digunakan pada percobaan ini ada dua metode yaitu metode uji reaksi

presipitasi pada medium cair dan metode ring test. Pada metode yang pertama dilakukan

pengamatan secara kualitatif dengan membandingkan jumlah endapan yang terbentuk pada

kelima tabung. Metode ring test hanya menggunakan satu tabung dan pengamatan dilakukan

dengan menambahkan antigen ke dalam serum antibodi hingga terbentuk kabut putih

berbentuk cincin seperti yang dapat dilihat pada hasil pengamatan. Antigen yang digunakan

6

pada percobaan kali ini adalah antigen TT (Tetanus Toxin) 250 LF dengan serum antibodi ATS

(Anti Tetanus Serum) 100 LF. Toksoid tetanus akan berinteraksi dengan ATS yang merupakan

antibodi spesifik antigen tersebut sehingga terbentuk kompleks mengendap karena terjadi

presipitasi. Prinsip pada kedua metode ini sama yaitu terjadinya endapan atau kompleks antara

antibodi dan antigen dengan perbandingan konsentrasi yang optimal.

Metode yang dapat digunakan pada uji reaksi presipitasi dibagi menjadi :

a. Metode α : jumlah antibodi konstan sedangkan jumlah antigen yang ditambah

hingga tercapai kondisi presipitasi yang ditandai dengan terbentuknya endapan.

b. Metode β : Jumlah antibodi ditambah sedangkan jumlah antigen yang dibuat

konstan.

c. Metode γ : Jumlah antibodi dan antigen dibuat sama karena yang akan diamati

adalah pengaruh faktor internal dan eksternal terhadap reaksi presipitasi.

Pada percobaan ring test digunakan metoda α dimana ditambahkan antigen secara

bertahap dengan jumlah antibodi tetap sedangkan pada uji reaksi presipitasi ditambahkan

antigen dan antibodi secara berurutan dengan jumlah yang berbeda di tiap tabungnya untuk

mengetahui perbandingan komposisi yang menghasilkan endapan paling banyak. Reaksi

presipitasi terjadi apabila konsentrasi antibodi dan antigen mencapai kondisi optimal dimana

semua bagiannya dapat berikatan.

Reaksi ini dapat digambarkan dalam kurva presipitasi sebagai berikut :

7

Gambar 7. Zona antibodi - antigen

Dapat terlihat bahwa kurva tersebut terbagi menjadi 3 zona seiring dengan penambahan

antigen. Zona pertama merupakan zona kelebihan antibodi (antibody-excess zone) dimana

jumlah antibodi masih lebih banyak dibandingkan jumlah antigen sehingga belum terjadi

kompleks penuh antara antibodi dan antigen dan belum ada endapan yang dihasilkan. Zona

kedua merupakan zona ekivalen dimana konsentrasi antibodi dan antigen berada pada

perbandingan yang optimal sehingga semua antibodi dan antigen dapat berikatan dan

membentuk kompleks yang menghasilkan endapan yang dapat diukur dan dilihat. Pada zona

kelebihan antigen ( Antigen-excess zone ) jumlah antigen terlalu banyak dan antibodi mengalami

kondisi jenuh (supernatant) sehingga kekeruhan pada ring test hilang. Suatu kompleks terbentuk

apabila satu antigen dapat berikatan dengan beberapa antibodi membentuk ikatan panjang

sehingga dapat dikatakan pada zona kelebihan antibodi belum terjadi kompleks karena jumlah

antigen terbatas sehingga presipitasi yang terjadi belum maksimal dan pada zona kelebihan

antigen, jumlah antibodi yang terbatas dan menyebabkan keadaannya menjadi jenuh.

Gambar 8. Kompleks antara antibodi - antigen

Pada percobaan ring test, TT ditambahkan ke dalam ATS secara perlahan dan melalui

dinding tabung. Tabung yang digunakan juga tidak boleh digoyang karena dapat menyebabkan

8

cincin yang terbentuk hilang. Penambahan TT yang berlebih juga dapat menghilangkan cincin

yang terbentuk sehingga percobaan ini harus dilakukan dengan hati-hati. Hasil yang didapat

adalah cincin mulai terbentuk setelah penambahan TT sebanyak 0,2 ml dan terus menebal

hingga kemudian mulai memudar di saat penambahan sebanyak 0,3 ml dan belum hilang

sehingga kesimpulan yang dapat diambil adalah zona ekivalen terjadi pada penambahan TT

sebanyak 0,2 hingga 0,3 ml.

Gambar 9. Cincin yang terbentuk pada metode Ring Test

Pada percobaan reaksi presipitasi ATS – TT, didapatkan hasil bahwa yang paling keruh

adalah tabung 5 sedangkan menurut perhitungan konsentrasi seharusya di tabung 3 merupakan

tabung dengan endapan paling banyak karena memiliki perbandingan konsentrasi antigen dan

antibodi yang lebih optimal. Pada percobaan ADS-DT kekeruhan paling banyak terjadi di tabung

3 dan 4 sedangkan pada tabung 5 sudah mulai jernih. Hal yang berbeda dengan literatur ini bisa

disebabkan oleh faktor internal dan eksternal yang berbeda pada keadaan kedua set tabung

seperti perlakuan yang berbeda dan menyebabkan endapan yang timbul juga bervariasi.

Imunodifusi ganda metode Ouchterlony merupakan metode deteksi yang menggunakan

prinsip kesetimbangan antigen antibodi pada media agar. Pada percobaan ini, antigen dan

antobodi berdifusi secara radial satu sama lain dari sumur sehingga menimbulkan gradien

konsentrasi. Ketika titik ekivalen tercapai, akan terbentuk garis presipitasi akibat pembentukan

kompleks antigen antibodi. Presipitasi merupakan salah satu metode yang dipakai untuk

menguji aktivitas dalam imunologi secara in vitro.

Metode Ouchterlony dapat digunakan untuk mengidentifikasi pasangan antigen dengan

antibodi dan hubungan antar beberapa antigen dengan antibodi. Hal ini dapat diidentifikasi

9

melalui garis presipitasi yang terbentuk pada medium agar. Dari garis presipitasi yang terbentuk,

dapat dianalisis reaksi yang terjadi, apakah reaksi yang terjadi merupakan tipe yang identik

(khas) atau identik sebagian (identik parsial). Berikut bentuk pola garis presipitasi yang dapat

terjadi:

Gambar 10. Pola garis presipitasi identik (A), identik parsial (B), dan nonidentik (C)

Pada percobaan ini, dilakukan pengisian sumur pada media agar dalam cawan petri dengan

toksoid tetanus, toksoid difteri, vaksin 1, dan vaksin 2. Pada salah satu sumur yang berada di

tengah, untuk kelompok 8 ini diisi dengan anti difteri serum serta anti ‘w’ serum pada sumur

yang berada ditengah, lainnya. Percobaan ini bertujuan untuk mengidentifikasi W, V1, dan V2

yang diketahui melalui pengamatan terhadap adanya garis presipitasi antara antigen dan

antibodi pada medium agar tersebut.

Dari hasil pengamatan setelah inkubasi selama 48 jam pada suhu 37oC, terlihat adanya garis

presipitasi tipis diantara TT dan ATS yang merupakan pasangan antigen antibodi tetanus toksoid

dan anti tetanus serum. Selain itu, terlihat juga garis presipitasi tipis diantara DT dan ADS yang

merupakan pasangan antigen antibodi difteri toksoid dan anti difteri serum. Pada sumur yang

berisi ‘W’ pun terlihat adanya presipitasi antara DT dan W sehingga kemungkinan antibodi yang

terkandung dalam ‘W’ merupakan anti difteri. Namun pada sumur yang berisi V1 dan V2 tidak

terlihat adanya garis presipitasi. Hal ini dapat disebabkan karena vaksin 1 maupun vaksin 2

kemungkinan tidak mengandung anti difteri ataupun anti tetanus. Bila V1 dan V2 mengandung

anti difteri ataupun anti tetanus, namun presipitasi tetap tidak terjadi kemungkinan antigen dan

antibodi yang berinteraksi belum mencapai titik ekivalen sehingga garis presipitasi tidak

terbentuk atau pun karena konsentrasi antibodi yang ditambahkan terlalu kecil sehingga tidak

dapat membentuk kompleks dengan antigen. Selain itu, pengisian larutan antigen atau serum

yang melebihi kapasitas sumur juga kemungkinan menjadi penyebab tidak terbentuknya

10

presipitasi. Akibatnya vaksin V1, dan V2 tidak dapat diketahui. Berikut faktor-faktor yang dapat

mempengaruhi presipitasi, dibedakan menjadi faktor internal dan faktor eksternal :

Faktor internal: konsentrasi masing-masing antibodi dan antigen dan afinitas antara antigen-

antibodi.

Faktor eksternal : waktu dan temperatur optimum. Untuk reaksi presipitasi adalah 37° C.

Reaksi ini terjadi pada rentang suhu 37° C - 40°C.

Reaksi Aglutinasi merupakan suatu reaksi penggumpalan yang terjadi antara aglutinin dan aglutinogen. Aglutinasi tersebut terjadi karena adanya reaksi imunologi antara antigen dan antibodi. Aglutinin merupakan istilah bagi antibodi yang dapat menyebabkan aglutinasi sedangkan aglutinogen merupakan istilah bagi antigen yang teraglutinasi. Pada percobaan kali ini antigen yang digunakan yaitu antigen dari suspense hidup bakteri Bordetella pertussis.

Bordetella pertussis merupakan bakteri penyebab penyakit menular akut yang menyerang pernafasan alias batuk rejan. Bakteri gram negatif, aerob, berbentuk bacillus atau batang, dapat berganti bentuk non hemolitik dan tidak virulen. Pada Bordetella pertussis fili berperan dalam pelekatan bakteri pada sel manusia. Bakteri tersebut berkembang cepat di epitel bronkus dan mengahmbat kerja silia. Bakteri menghasilkan toksin dan zat pengiritasi permukaan sel serta menyebabkan limfositosis dan batuk. Imunitas akan timbul setelah sembuh dari Bordetella pertussis. Infeksi sekunder biasa timbul tapi hanya tingan.

Pada umumnya, uji aglutinasi dilakukan dalam tiga metode yaitu aglutinasi mikrotiter, aglutinasi tabung, dan aglutinasi pelat. Aglutinasi mikrotiter dilakukan pada suatu pelat yang memiliki banyak ”sumur”, aglutinasi tabung dilakukan dalam suatu tabung reaksi kecil, sedangkan aglutinasi pelat dilakukan dalam suatu kaca objek.

Dari ketiga metode ini, metode aglutinasi tabung lebih efektif karena memungkinkan antisera (imunoserum) sebagai antibodi untuk berinteraksi lebih lama dan intens dengan antigen bakteri. Akan tetapi penggunaan aglutinasi mikrotiter dan pelat mebih murah dan mudah karena hanya membutuhkan larutan suspensi bakteri dan imunosera dala jumlah relatif sedikit. Pada aglutinasi pelat (kaca objek), uji tidak dapat dilaksanakan bila suspensi bakteri bersifat granular, autoaglutinasi, atau lengket.

Beberapa faktor yang mempengaruhi terjadinya proses aglutinasi secara in vitro antara lain :1. Jumlah sisi aktif antigenSemakin banyak sisi aktif (epitop) pada antigen yang dapat berikatan dengan antibodi, semakin mudah antibodi terikat dan membentuk ikatan silang dengan antibodi. Ikatan ini akan menyebabkan terjadinya aglutinasi.2. Ukuran dan struktur antibodiUkuran antibodi yang semakin besar menyebabkan semakin besarnya jangkauan dalam berikatan dengan sisi aktif beberapa antigen sekaligus. IgM merupakan antibodi dengan

11

ukuran besar yang memiliki kemampuan untuk berikatan dengan lima jenis antigen yang berbeda (multivalen) sehingga dapat menghasilkan reaksi aglutinasi yang lebih kuat.3. Jarak antarselAdanya jarak antarsel (ataupun antar antigen) disebabkan oleh adanya zeta potensial yang terdapat di sekeliling sel akibat adanya muatan. Semakin kuat gaya tolak menolak yang terjadi maka jarak antarsel akan semakin jauh dan semakin sulit terjadi aglutinasi.

Dari hasil percobaan, setelah penetesan antibodi imunoserum Bordetella pertussis pada sisi kanan kaca objek yang ditetesi suspensi hidup bakteri Bordetella pertussis terjadi penggumpalan yang terlihat keruh pada kaca objek. Kemudian setelah ditutup dengan cover dan diamati di bawah mikroskop terlihat perbedaan antara suspense bakteri Bordetella pertussis yang ditetesi NaCl dengan imunoserum. Pada sisi yang ditetesi dengan NaCl hanya terlihat bintik bintik sel bakteri yang berbentuk batang seperti jarum, tidak terbentuk koloni. Sedangkan pada sisi kaca objek yang ditetesi dengan imunoserum terlihat adanya kompleks koloni sel bakteri Bordetella pertussis yang mengalami penggumpalan. Hal ini membuktikan adanya reaksi imunologi berupa aglutinasi/penggumpalan antara antigen dan antibodi.

VI. KESIMPULAN

1. Hasil presipitasi dari ADS (Anti Diphtheria Serum) dan DT (Diphtheria Toxin) dengan metode

ring test menghasilkan cincin berawan pada lapisan intermuka larutan (di tengah-tengah

larutan).

2. W merupakan anti difteri sedangkan V1 dan V2 tidak dapat ditentukan karena tidak

terbentuknya garis presipitasi pada medium agar.

3. Terjadi reaksi aglutinasi antara imunosera B.pertussis dan bakteri Bordetella pertussis

4. Terjadi presipitasi maksimum pada konsentrasi yang sama antara antibodi dan antigen yang

ditambahkan.

VII. DAFTAR PUSTAKA

Roitt, Ivan M. dan Peter J. Delves. 2001. Essential Immunology. 10th edition. USA: Blackwell

Publishing Company. p. 109-110.

R.G.O’Gorman, Maurice & Albert D. Donnenberg.2008. Handbook of Human Immunology, 2nd

edition. CRC Press. p.378-379, 425-426.

http://immuneweb.xxmu.edu.cn/monoclonal/introduction.html diakses tanggal 14 Oktober

2013 pukul 09.05

www.evaluations-standards.org.uk. National Standard Method : Agglutination Test. Standards Unit, Evaluations and Standards Laboratory. United Kingdom.

http://id.m.wikipedia.org/wiki/Bordetella_pertussis diakses 11 oktober 2013 jam 21.00

12

VIII. LAMPIRAN

Menjawab pertanyaan halaman 126 - 127 :

1. Kemukakan dan jelaskan keempat reaksi hipersensitivitas sehingga jelas perbedaannya!

Hipersensitivitas merupakan imunopatologik yang gejalanya disebabkan oleh akivasi

berlebihan antigen atau terjadinya gangguan mekanisme pertahanan tubuh baik secara

humoral maupun selular. Ada empat jenis hipersensitivitas:

1) Hipersensitivitas tipe I

Merupakan respon jaringan yang terjadi secara cepat setelah terjadi interaksi antara

antigen dengan antibodi IgE yang sebelumnya berikatan pada permukaan sel mast

dan basofil pada penyaji. Reaksi ini biasa disebut dengan syok anafilaktik. Awalnya,

antibodi IgE ini bersifat spesifik dengan antigen tertentu. Saat terjadi infeksi inang

oleh antigen yang sesuai, akan terjadi ikatan dengan antibodi IgE pada basofil/sel

mast tersebut. Selanjutnya akan terjadi induksi degranulasi sel mast/basofil sehingga

melepaskan histamin dan mediator infeksi lain seperti bradikinin, prostalglandin,

leukotrien, dll. Hal inilah yang memicu reaksi anafilaksis.

2) Hipersensitivitas tipe II

Istilah lainnya adalah Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity(ADCC), yang

melibatkan IgG atau IgM. Hal ini terjadi karena epitop self dianggap sebagai non-self

dalam tubuh (terbentuk antibodi IgG dan IgM yang berikatan dengan sel inang).

Akibatnya, sel-sel fagosit seperti neutrofil dan makrofag berinteraksi pada IgG dan

IgM pada permukaan sel inang tersebut. Sel fagosit pun melepaskan lisozim dan

membunuh sel inang. Natural killer (NK) pun dapat berinteraksi dengan IgG atau IgM

yang terikat pada permukaan sel inang dan membunuh sel tersebut dengan sekresi

perforin dan enzim proteolitik granzim

3) Hipersensitivitas tipe III

Reaksi ini dimediasi oleh kompleks antigen-antibodi. Masuknya antigen ke dalam

tubuh akan membuat antibodi IgG dan IgM berinteraksi dengan antigen tersebut dan

membentuk kompleks yang larut air. Saat jumlahnya masih normal, akan terjadi

eliminasi oleh makrofag. Namun, kompleks antigen-antibodi yang terbentuk tidaklah

dapat dieleminasi oleh sistem fagositik sehingga terbemntuk endapan dan terjadi

13

deposisi imun kompleks. Tempat akumulasinya adalah di antara sel epitel pembuluh

darah dan basal membrane. Hal ini mengakibatkan sel komplemen dan efektor

termediasi mengalami kerusakan (inflamasi dan akumulasi neutrofil).

4) Hipersensitivitas tipe IV

Disebut juga sebagai delayed hypersensitivity reaction. Reaksi ini bedasarkan pada

interaksi antigen dengan T-sel prime dan menyebabkan kerusakan jaringan dari reaksi

imun yang dimediasi inappropriate-cell. Sitokin dilepaskan (seperti IFNγ) yang

mengaktifkan makrofag dan menyebabkan respon hipersensitivitas diperlambat

seperti Mantouxreaction di tuberkulin yang mencapai waktu maksimum sekitar 24-48

jam. Reaksi ini hanya melibatkan sel-sel limfosit dan tidak melibatkan antibodi

2. Bagaimana mendiagnosa keadaan alergi seseorang?

Uji alergi adalah uji untuk melihat bagaimana seseorang (obyek) bereaksi terhadap alergen

spesifik, seperti serbuk sari, kotoran binatang, makanan, obat, dan lain lain, ketika alergen

tersebut masuk ke dalam tubuh. Keadaan alergi seseorang dapat didiagnosa dengan dua cara,

yaitu uji pada kulit dan uji pada darah.

Pemeriksaan alergi yang direkomendasikan adalah tes kulit alergi, karena telah terbukti secara

ilmiah sensitivitasnya. Terdapat beberapa jenis uji kulit untuk mengetahui penyebab dan

keadaan alergi seseorang, di antaranya adalah : uji tusuk, uji gores dan uji tempel.

Pemeriksaan yang sering dilakukan adalah pemeriksaan uji tusuk. Banyak disukai oleh

penderita adalah uji tempel, karena tidak terlalu menyakitkan dan praktis.

Uji kulit merupakan uji yang paling terpercaya untuk respon alergi. Uji ini dilakukan dengan

cara meneteskan larutan yang mengandung alergen pada kulit dan menusuk atau menggores

kulit tersebut dengan suatu jarum. Jika hasil tes positif, akan terjadi reaksi alergi yang dapat

dilihat sebagai benjolan merah pada kulit. Kontrol positif yang digunakan adalah histamin dan

kontrol negatif adalah larutan garam fisiologis.

3. Ceritakan kespesifikasi antaraksi antigen dan antibodi secara eksperimental!

Secara eksperimental, kespesifikasi antaraksi antara antigen dan antibodi dapat diamati

melalui percobaan secara in vivo dan in vitro. Secara in vivo, antaraksi spesifik antigen dan

antibodi akan teramati dalam bentuk manifestasi klinik pada hewan percobaan berupa reaksi

syok anafilaktik. Sedangkan secara in vitro, spesifisitas antara antigen dan antibodi dapat

14

diamati dengan pengamatan terhadap interaksi produk imun/antibodi dengan antigen

spesifiknya. Perubahan fisik terjadi dalam larutan akibat antaraksi spesifik antara antigen dan

antibodi yang dicampurkan secara in vitro (reaksi presipitasi, reaksi imunodifusi ganda, dan

reaksi aglutinasi bakteri).

4. Jelaskan keunggulan reaksi imunodifusi Ouchterlony!

Keunggulan reaksi imunodifusi Ouchterlony yaitu dapat digunakan untuk mengidentifikasi

bebrapa antigen sekaligus di dalam satu cawan petri berisi media agar. Metode ini dapat

diaplikasikan dalam penentuan antigen penyebab penyakit tertentu juga dapat digunakan

untuk menentukan immunoglobulin kelas tertentu.

5. Jelaskan yang dimaksud dengan RIA, ELISA, dan RAST!

o ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay) : merupakan uji serologis yang umum

digunakan di berbagai laboratorium imunologi untuk mengetahui kadar antigen atau

antibodi. Pada ELISA digunakan enzim sebagai label.

o RIA (Radioimmunoassay) : merupakan uji serologis yang digunakan untuk menghitung

jumlah antigen dengan antibodi. Perbedaan dengan ELISA ialah senyawa yang digunakan

sebagai label merupakan senyawa radioaktif dan yang diukur adalah sinyal radioaktif.

o RAST (radioallergosorbent) : merupakan suatu te darah yang digunakan untuk

menentukan bahan apa yang menyebabkan alergi pada seseorang.

15