laporan resmi praktikum mikrobiologi

i

STERILISASI, PEMBUATAN MEDIUM, METODE PERHITUNGAN

CAWAN, DAN PEWARNAAN GRAM

LAPORAN RESMI PRAKTIKUM

MIKROBIOLOGI

Disusun Oleh:

Kelompok VC

Bintang Adityo Nugroho 23010112140121

Sansista Mega S 23010112130131

Mohammad Ridwan Setiyono 23010112130140

Masudi 23010112130155

Wahyu Utomo 23010112130173

JURUSAN S-1 PETERNAKAN

FAKULTAS PETERNAKAN DAN PERTANIAN

UNIVERSITAS DIPONEGORO

SEMARANG

2013

http://evaluasi.dikti.go.id/epsbed/datamhs/001008/54231/23010112130155

ii

LEMBAR PENGESAHAN

Judul : STERILISASI, PEMBUATAN MEDIUM, METODE

PERHITUNGAN CAWAN, DAN PEWARNAAN

GRAM

Kelompok : Vc (LIMA C)

Program Studi : S1- PETERNAKAN

Fakultas : PETERNAKAN DAN PERTANIAN

Tanggal Pengesahan : Juni 2013

Menyetujui,

Koordinator Asisten Asisten Pembimbing

Praktikum Mikrobiologi

Primasta Adi Permana Mahadika Wisnu Saputra

NIM. 23010110110017 NIM. 23010111140242

Mengetahui,

Koordinator Umum Mikrobiologi

Dra. Turrini Yudiarti, M.Sc.

NIP. 195912021987032002

iii

RINGKASAN

KELOMPOK Vc. 2013. Laporan Resmi Praktikum Mikrobiologi. (Asisten:

Mahadika Wisnu Saputra).

Praktikum Mikrobiologi Sterilisasi dan Pembuatan Medium dilaksanakan

pada hari Jumat, tanggal 17 Mei 2013 pukul 16.00 - 19.00 WIB dan Metode

Hitungan Cawan dan Pewarnaan Gram pada hari Minggu, tanggal 19 Mei 2013

pukul 09.00 - 11.00 WIB di Laboratorium Fisiologi dan Biokimia Ternak,

Fakultas Peternakan dan Pertanian Universitas Diponegoro, Semarang. Tujuan

praktikum adalah mengetahui cara sterilisasi kering dan basah, pembuatan

medium PDA, metode hitungan cawan, pewarnaan gram positif dan gram negatif.

Materi yang digunakan dalam praktikum adalah timbangan, erlenmeyer,

tabung reaksi, gelas ukur, waterbath, beker glass, gelas ukur, pisau, kain saring,

oven, autoklaf, cawan petri, pipet hisap, penghisap, bunsen, kaca objek, loop,

mikroskop. Bahan yang digunakan adalah kentang, asam tartarat, agar, aquades,

kertas pembungkus, kapas, alkohol untuk mensterilisasi dan alumunium foil,

medium berupa susu UHT, biakan bakteri dan larutan gram A (violet kristal),

gram B (larutan lugol), gram C (aquades), gram D (safranin). Metode yang

dilakukan pembuatan medium PDA, sterilisasi kering, dengan mengeringakan alat

pada oven dengan suhu 160 ºC dan sterilisasi basah dengan memasukan pada

autoklaf dengan suhu 121 ºC, perhitungan cawan yaitu menghitung bakteri yang

tumbuh, dan pewarnaan gram.

Berdasarkan hasil praktikum pembuatan medium dan sterilisasi bahwa

sterilisasi berfungsi untuk membersihkan alat yang akan digunakan untuk

pembuatan medium sebagai tempat pertumbuhan bakteri. Berdasarkan

perhitungan cawan dan pewarnaan gram disimpulkan bakteri dihitung sesuai

dengan Standart Plate Count (SPC) diketahui jumlah bakteri pada susu UHT

adalah 3,3 x 1010

. Pewarnaan bakteri dengan memberikan gram (violet kristal,

larutan lugol, aquades, safranin) yang dibedakan menjadi gram positif berwarna

biru dan gram negative berwarna merah muda. Hasil Praktikum Mikrobiologi

Umum yaitu sterilitas pada alat dan bahan yang digunakan, perhitungan jumlah

bakteri dengan metode hitung cawan diperoleh hasil rata-rata 1,12×1010

, serta

pewarnaan gram pada pengamatan E. coli berbentuk bacill berwarna merah berarti

gram negatif. Pewarnaan gram pada Lactobacilus asidiphilus berwarna ungu

berbentuk coccus berarti gram positif.

Kata kunci : Pembuatan Medium, Sterilisasi, Pengenceran, Perhitungan Cawan,

Pewarnaan Gram.

iv

KATA PENGANTAR

Puji syukur atas kehadirat Tuhan YME yang telah melimpahkan rahmat,

taufik, dan hidayah-Nya, sehingga kami dapat menyelesaikan laporan

mikrobiologi ini dengan baik.

Penulis mengucapkan terima kasih kepada Dra. Turrini Yudiarti, M.Sc.

selaku Koordinator Umum Praktikum Mikrobiologi, Primasta Adi Permana,

selaku Koordinator Asisten Praktikum Mikrobiologi, dan Mahadika Wisnu

Saputra selaku Asisten Pembimbing yang telah membimbing dan membantu kami

selama praktikum berlangsung sampai penyusunan laporan Praktikum

Mikrobiologi ini selesai. Harapan penulis semoga laporan Praktikum

Mikrobiologi ini dapat bermanfaat bagi pembaca.

Demikian kata pengantar dari penulis, penulis menyampaikan terimakasih

atas perhatiannya dan koreksi yang membangun dari berbagai pihak.

Semarang, Juni 2013

Penulis

v

DAFTAR ISI

Halaman

JUDUL ..................................................................................................... i

LEMBAR PENGESAHAN .................................................................... ii

RINGKASAN .......................................................................................... iii

KATA PENGANTAR ............................................................................ iv

DAFTAR ISI ............................................................................................ v

DAFTAR TABEL ................................................................................... vi

DAFTAR ILUSTRASI .......................................................................... vii

DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................... viii

BAB I PENDAHULUAN ....................................................................... 1

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................. 2

2.1 Sterilisasi ............................................................................................ 2

2.1.1. Sterilisasi Kering ..................................................................... 2

2.1.2. Sterilisasi Basah ...................................................................... 3

2.2 Pembuatan Medium dan Pengencer . ................................................. 3

2.2.1. Medium Nutrien Agar (NA). ................................................... 4

2.2.2. Medium Potato Dextrose Agar (PDA). ................................... 4

2.2.3. Medium Acidified Potato Dextrose Agar (APDA). ................. 5

2.3 Metode Hitungan Cawan ................................................................... 5

2.3.1 Pengenceran .............................................................................. 5

2.3.2 Metode Tuang ........................................................................... 5

2.4 Morfologi Bakteri .............................................................................. 7

2.4.1 Bakteri Gram Positif ................................................................. 7

2.4.2 Bakteri Gram Negatif ............................................................... 8

2.5 Pewarnaan Gram ................................................................................ 8

BAB III MATERI DAN METODE ....................................................... 10

3.1 Materi ................................................................................................. 10

3.2 Metode .............................................................................................. 10

3.2.1 Sterilisasi ................................................................................ 10

vi

3.2.2 Medium dan Larutan Pengencer ............................................ 11

3.2.3 Metode Hitungan Cawan ........................................................ 12

3.2.4 Pewarnaan Gram .................................................................... 12

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................ 14

4.1 Sterilisasi ............................................................................................ 14

4.1.1 Sterilisasi Kering .................................................................... 14

4.1.2 Sterilisasi Basah ..................................................................... 14

4.2 Medium PDA ..................................................................................... 15

4.3 Metode Hitungan Cawan ................................................................... 15

4.4 Pewarnaan Gram ................................................................................ 17

4.4.1 Lactobacillus asidiphilus........................................................ 17

4.4.2 Escherichia coli ...................................................................... 18

BAB V SIMPULAN DAN SARAN ....................................................... 20

5.1. Simpulan .......................................................................................... 20

5.2. Saran ................................................................................................ 20

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................. 21

LAMPIRAN ............................................................................................ 23

vii

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

1. Hasil Perhitungan Cawan ................................................................ 16

viii

DAFTAR ILUSTRASI

Ilustrasi Halaman

1. Gambar Pengamatan Bakteri Gram Positif Perbesaran 100X ...... 17

2. Gambar Pengamatan Bakteri Gram Negatif Perbesaran 100X ...... 18

ix

DAFTAR LAMPIRAN

Nomor Halaman

1. Gambar dan Fungsi Alat ............................................................... 23

2. Menjawab Pertanyaan .................................................................. 26

3. Perhitungan SPC (Standart Plate Count) ...................................... 32

4. Fotokopi Laporan Hasil Praktikum ............................................... 33

5. Fotokopi Literatur ......................................................................... 37

1

BAB I

PENDAHULUAN

Mikrobiologi adalah salah satu cabang biologi yang menelaah mengenai

organisme hidup berukuran mikroskopis yang meliputi virus, bakteri, archaea,

protozoa, algae, dan fungi. Mikrobiologi mempelajari tentang berbagai hal

mengenai mikroorganisme yaitu ciri-ciri, kekerabatan, serta manfaatnya.

Mikroorganisme dapat tumbuh dan berkembang biak dimana saja asalkan cukup

nutrien dan cocok mediumnya. Mikroorganisme yang bersifat menguntungkan

dapat membantu menyelesaikan masalah manusia dalam mengolah sumber daya

alam sedang mikroorganisme yang bersifat merugikan dapat merusak bahan-

bahan organik, membuat hilangnya kenikmatan makanan dan dapat menimbulkan

penyakit.

Tujuan praktikum ini adalah untuk mengetahui proses sterilisasi,

mengetahui proses pembuatan medium, mengetahui metode hitungan cawan dan

penghitungan mikroba serta pewarnaan gram. Manfaat praktikum ini adalah dapat

mengetahui dan melakukan proses sterilisasi, dapat membuat medium untuk

biakan mikroba, dapat melakukan metode hitungan cawan, dan dapat melakukan

cara pewarnaan gram.

2

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Sterilisasi

Sterilisasi medium memerlukan lebih sedikit waktunya dibandingkan

dengan sterilisasi alat-alat, yakni 15 menit, tetapi suhu dan tekanannya sama

(Hendaryono dan Ari, 1994). Bahan yang dapat disterilkan dengan autoklaf adalah

media biakan, larutan, kapas, dan peralatan laboratorium (Gunawan, 2000).

Sterilisasi adalah suatu proses yang menghancurkan semua bentuk kehidupan.

Setiap proses baik fisika, kimia, dan mekanik yang mematikan semua bentuk

hidup terutama mikroorganisme disebut dengan sterilisasi (Waluyo, 2007). Suatu

benda yang steril dipandang dari sudut mikrobiologi, artinya bebas dari

mikroorganisme hidup. Proses sterilisasi dapat dilakukan dengan uap panas,

larutan kimia, pemanasan kering atau metode gas (Adji et al., 2007).

2.1.1. Sterilisasi Kering

Sterilisasi dengan panas kering atau udara panas dianjurkan apabila

penggunaan uap bertekanan tidak yang akan disterilkan. Hal ini berlaku bagi

perabotan laboratorium seperti cawan petri, pipet, juga minyak, serbuk, serta

beberapa peralatan. Benda-benda ini disterilkan di dalam oven listrik atau gas.

Untuk mensterilkan perabotan tersebut di laboratorium, dibutuhkan suhu 160 0C

selama 2 jam (Pelczar et al., 1988). Sterilisasi alat dan media dilakukan dengan

menggunakan oven yang digunakan untuk mensterilkan cawan petri dan pipet

3

volume. Penggunaan alat ini dengan cara memasukkan alat-alat tersebut dalam

oven dan dipanaskan dengan suhu 160 sampai 170 oC selama 1 sampai 2 jam

(Kharisma dan Abdul, 2012).

2.1.2. Sterilisasi Basah

Sterilisasi basah biasanya menggunakan alat autoklaf yaitu serupa tangki

minyak yang dapat diisi dengan uap. Autoklaf biasanya digunakan untuk

menyeterilkan medium baik yang berasal dari agar maupun dari air susu. Autoklaf

adalah alat sterilisasi untuk alat dan medium kultur jaringan. Alat-alat yang

berupa glass ware maupun dissecting kit sebelum digunakan harus disterilkan

dahulu. Demikian juga medium yang sudah dimasukkan ke dalam botol medium

harus disterilkan juga (Hendaryono dan Ari, 1994). Sterilisasi alat dan media yang

dilakukan dengan menggunakan autoclaf yang untuk mensterilkan tabung reaksi

bertutup dan erlenmeyer. Penggunaan alat ini dengan memasukkan alat-alat

tersebut kedalam autoklave yang ditutup dengan rapat dan menyalakan autoklave

dengan temperatur 121 0C dan tekanan antara 15 - 17,5 psi (pound per square

inci) atau 1 atm selama 1 jam. (Kharisma dan Abdul, 2012).

2.2. Pembuatan Medium dan Pengencer

Dasar makanan yang paling baik bagi pemiaraan bakteri ialah medium

yang mengandung zat-zat organik seperti rebusan daging, sayur-sayuran, sisa-sisa

makanan, atau ramuan-ramuan yang dibuat oleh manusia. Medium yang banyak

digunakan dalam pekerjaan rutin laboratorium ialah kaldu cair dan kaldu agar

4

(Dwidjoseputro, 2005). Pembuatan medium dapat dilakukan dengan cara

menimbang masing-masing komponen bahan kimia secara teliti, kemudian

mencampurkannya, melarutkannya di dalam air, mengatur keasaman,

memasukkan ke dalam tabung, dan mensterilkan menggunakan otoklaf pada suhu

dan waktu yang ditetapkan (Fardiaz, 1989).

2.2.1. Medium Nutrien Agar (NA)

Media padat NA dibuat dengan cara melarutkan NA sebanyak 2 gram

dalam 100 mL aquadest. Larutan dipanaskan sambil diaduk agar bubuk NA dapat

larut sempurna. Setelah larut, media ini dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan

cawan petri. Untuk tabung reaksi, mulut tabung ditutup dengan kapas berlemak

yang telah dibungkus dengan kasa steril. Media tersebut kemudian disterilkan

dengan autoclave pada 121 °C selama 15 menit. Media padat disimpan dalam

incubator sampai memadat (Buditianingsih et al., 2010). Pembuatan Medium

Nutrien Agar (NA) sebanyak 200 ml, 0,6 g Beef extract + 1 g Pepton + 3 g Agar

dimasukkan dalam erlenmeyer dan cukupkan volumenya dengan aquadest 200 ml,

kemudian dimasak dalam air mendidih selama 15 menit, lalu disterilkan dalam

autoclave (Pratiwi, 2005).

2.2.2. Medium Potato Dextrose Agar (PDA)

Jumlah fungi dalam makanan dapat dihitung dengan metode hitungan

cawan menggunakan medium Potato Dextrose Agar (PDA). Biasanya pembuatan

biakan murni menggunakan media PDA yang tersusun oleh kentang, gula dalam

5

bentuk dextrose, agar-agar dan aquades (Warisno dan Dahana, 2009). PDA

adalah suatu medium yang mengandung sumber karbohidrat dalam jumlah cukup,

yaitu terdiri dari 20% ekstrak kentang dan 2% glukosa, sehingga baik untuk

pertumbuhan fungi tetapi kurang baik untuk pertumbuhan bakteri akan tetapi

karena beberapa bakteri juga memfermentasi karbohidrat dan menggunakannya

sebagai sumber energi, maka beberapa bakteri masih mungkin tumbuh pada

Potato Dextrose Agar (PDA) (Aprintasari et al., 2012).

2.2.3. Medium Acidified Potato Dextrose Agar (APDA)

Medium padat atau solid medium, medium yang berbentuk padat dan

mengandung 1,5 - 1,8% agar misalnya terdapat pada Acidified Potato Dextrose

Agar (Fardiaz,1993). Media biakan yang digunakan untuk menumbuhkan

mikroorganisme terdapat dalam bentuk padat, setengah padat dan cair. Medium

dalam bentuk padat atau solid medium yang mengandung 1,5-2% agar, misalnya

Acidified Potato Dextrose Agar (APDA), dan sebagainya. Medium padat contoh

APDA mengandung karbohidrat kompleks dan agar-agar dari alga merah, serta

mengandung APDA tersebut mengandung molekul organik kompleksuntuk

pertumbuhan bakteri (Schlegel, 1994).

2.3. Metode Hitungan Cawan

2.3.1. Pengenceran

Dalam metode perhitungan cawan, bahan yang diperkirakan mengandung

lebih dari 300 sel mikroba per ml atau per gram atau per cm. Perlakuan

6

pengenceran sebelumnya ditumbuhkan pada medium agar di dalam cawan petri.

Setelah inkubasi, akan terbentuk koloni pada cawan petri tersebut dalam jumlah

yang dapat dihitung, dimana jumlah yang terbaik antara 30 - 300 koloni.

Pengenceran biasanya dilakukan secara desimal, yaitu 1 : 10, 1 : 100, 1 : 1000,

dan seterusnya (Waluyo, 2007). Pengenceran dilakukan dengan menambahkan

larutan, sesuatu yang berbentuk cair ke dalam medium yang akan dibiakan. Di

dalam cara perhitungan ini,kerapatan pertumbuhan koloni harus dipertimbangkan.

Jika pertumbuhan terlalu rapat, hasilnya akan sulit dipertanggungjawabkan.

Demikian juga untuk pertumbuhan yang terlalu jarang sehingga diperlukan

pemilihan cawan petri yang pertumbuhan koloni kumannya paling layak untuk

dihitung, yang biasanya diambil dari cawan petri yang pertumbuhan koloninya

berkisar 30 - 300 koloni per cawan petri (Harmita dan Radji, 2006).

2.3.2. Metode tuang

Metode piringan tuangan (pour-plate method) terdiri atas penginokulasian

biakan campuran ke dalam tabung uji yang mengandung agar mencari yang telah

didinginkan pada suhu 45 0C kemudian dituangkan ke dalam cawan petri steril

dan dibiarkan sampai menjadi padat. Kemudian, dengan kawat gelang

penginokulasi yang penuh dengan biakan campuran, goresan dilakukan di atas

permukaan agar (Volk dan Wheeler, 1993). Secara aseptik, tuangkan agar cair

(500C) dari tabung kedalam masing-masing cawan petri yang telah mengandung

yang telah diencerkan tersebut (Harmita dan Radji, 2006). Pada metode tuang,

sejumlah sampel 1ml atau 0,1ml dari pengenceran yang dikehendaki dimasukkan

7

ke dalam cawan petri, kemudian ditambah agar-agar cair steril yang telah

didinginkan dengan suhu antara 47 - 50 0C sebanyak 15 - 20 ml dan digoyangkan

supaya sampelnya menyebar (Waluyo, 2007). Untuk dapat memperoleh biakan

murni digunakan beberapa teknik biakan yaitu dengan metode agar tuang -

KOCH. Pada metode ini bakteri disebarkan di atas permukaan lempengan agar

(Lay dan Sugyo, 1992). Jumlah masing-masing mikroba dihitung berdasarkan

metode hitung cawan menggunakan pengenceran desimal dari 1:10-1

sampai

10:109

(Agustina et al., 2013).

2.4. Morfologi Bakteri

2.4.1. Bakteri Lactobacillus acidophillus

Pada bakteri gram positif, kompleks KV-I (kristal violet-yodium)

terperangkap dalam dinding sel setelah perlakuan dengan etanol. Sel bakteri

Gram-positif merupakan lapisan yang mengikat zat warna kristal violet. Dinding

sel bakteri Gram-positif mengandung lipida yang rendah, sehingga sewaktu

penambahan alkohol terjadi dehidrasi dan pengecilan lubang pori-pori. Ini

menyebabkan zat warna terikat dan sel berwarna ungu (Lay dan Sugyo, 1992).

Famili X lactobacilaceae: basil atau kokus yang bergandeng-gandengan atau

0merupakan tetrad. Gram positif, umumnya saprobe, contohnya adalah

L.acidophilus (Dwidjoseputo, 2005). Sel bakteri gram positif terlihat berwarna

ungu karena dapat membentuk ikatan komplek dengan pewarna pertama yaitu

kristal-iodium (Agustina et al., 2013). Bakteri kelompok gram positif bersifat

menguntungkan karena bisa menjadi probiotik bagi ternak ayam (Manin, 2010).

8

Lactobacillus caseii dan Lactobacillus acidophilus merupakan probiotik yang

tergolong kepada bakteri baik (Pangkalan Ide, 2008).

2.4.2. Bakteri Escherichia coli

Pada dinding sel bakteri Gram negatif mengandung lipida yang tinggi,

sehingga sewaktu pencucian dengan larutan pemucat menyebabkan pembesaran

lubang pori-pori dan peningkatan permeabilitas zat warna. Pencucian

menyebabkan kompleks zat warna pertama terlepas, dan sel akan mengambil zat

warna kedua (Lay dan Sugyo, 1992). Famili IV. Enterobacteriaceae: basil

bergerak dengan flagel yang peritrik atau tiak bergerak. Gram negatif,

menguraikan glukosa dengan menghasilkan gas. Escherichia dengan 4 spesies,

ada yang berwarna, ada yang tidak. Saproba, escherichia coli terkenal sebagai

penghuni koloni (usul tebal) (Dwidjoseputro, 2005). Salah satu bakteri gram

negatif, yaitu Escherichia coli (Ferdiaz, 1989).

2.5. Pewarnaan Gram

Sebagian besar mikroorganisme tidak berwarna, maka untuk dapat

melakukan pengamatan dibawah mikroskop cahaya diperlukan pewarnaan

mikroorganisme dengan menggunakan pewarna. Bakteri tetap berwarna ungu

digolongkan kedalam gram positif karena bakteri gram positif tidak mudah

dilarutkan oleh larutan pemucat, sedangkan bakteri yang berwarna merah

digolongkan kedalam gram negatif, bakteri Gram-negatif berdinding tipis,

sedangkan bakteri Gram-positif berdinding tebal. Bakteri Gram-positif ditemukan

senyawa Mg-ribonukleat yang akan bereaksi dengan kristal-violet dan

9

menyebabkannya tidak mudah larut oleh larutan pemucat (Lay dan Sugyo, 1992).

Salah satu alat yang paling ampuh dalam taksonomi mikroba adalah pewarnaan

gram atau gram stain, yang dapat digunakan untuk memisahkan anggota-anggota

domain bakteria kedalam dua kelompok berdasarkan perbedaan dinding sel

(Campbell et al., 2004).

10

BAB III

MATERI DAN METODE

Praktikum Mikrobiologi Umum dilaksanakan pada hari Jumat, tanggal

17 Mei 2013 pukul 16.00 - 18.30 WIB dan hari Minggu tanggal 19 Mei 2013 pada

pukul 09.00 - 11.00 WIB di Laboratorium Fisiologi dan Biokimia Ternak,

Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro, Semarang.

3.1. Materi

Alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah timbangan yang

berfungsi untuk menimbang sampel, erlenmeyer yang berfungsi sebagai tempat

menyimpan larutan, pisau yang berfungsi untuk mengupas dan memotong

kentang, kain saring yang berfungsi untuk menyaring kentang untuk diambil

filtratnya, kompor listrik yang berfungsi untuk mendidihkan air, oven dan autoklaf

yang berfungsi untuk memanaskan alat-alat praktikum, pengaduk magnetik yang

berfungsi untuk mengaduk medium, cawan petri yang berfungsi sebagai tempat

mikroba ditumbuhkan, pipet hisap yang berfungsi untuk memindahkan larutan

dalam ukuran kecil, erlenmeyer yang berfungsi sebagai tempat larutan, kaca objek

sebagai tempat yang akan diamati, bunsen yang berfungsi untuk memanaskan

kaca objek, mikroskop yang berfungsi untuk mengamati bakteri dengan

perbesaran tertentu, alat tulis dan buku panduan praktikum yang berfungsi untuk

mencatat hasil pengamatan.

11

Bahan yang digunakan adalah, kentang,, dextrose, agar, aquadest, alkohol,

susu UHT, medium, larutan gram A (ungu kristal 90 %, etanol 95 %, amonium

oksalat dan aquadest), larutan gram B (kristal iodium, kalium iodida dan

aquadest), larutan gram C (etanol 95 %), dan larutan gram D (larutan safranin dan

aquadest), dan biakan bakteri, Escherichia coli dan Lactobacillus acidophilus.

3.2. Metode

3.2.1. Sterilisasi

Menyiapkan alat dan bahan yang akan digunakan. Menutup cawan petri

dan pipet volume menggunakan kertas pembungkus secara rapi dan tertutup,

menyumbat ujung pipet volome dengan kapas. Memasukkan alat alat tersebut ke

oven selama satu jam dengan suhu 120 oC. Mengisi tabung reaksi dengan

aquadest masing- masing sebanyak 9 ml. Memasukkan tabung tersebut kedalam

autoklaf selama 15 menit dengan suhu 121 oC.

3.2.2. Medium dan Larutan Pengencer

Medium PDA dilakukan dengan cara mengupas kentang menggunakan

pisau tajam hingga bersih, kemudian bilas dengan air hingga bersih. Mengiris

kentang tersebut dengan ukuran kira-kira 1×1×1 cm. Menimbang kentag dengan

tepat sebanyak 500 gram. Memasukan kentang ke dalam beker glass, kemudian

menambahkan 1000 ml aquadest, menutup beker glass dengan alumunium foil

serapat mungkin. Memanaskan dalam waterbath hinggga mendidih selama 30

12

menit.Setelah itu didinginkan, kemudian melumat kentang hingga hancur.

Mengambil filtrat kentang dengan cara menyaringnya menggunakan kain saring/

kapas yang bersih. Setelah filtrat terkumpul, mengukur volumenya untuk

membuat medium PDA, dengan komposisi : 100 ml filtrat kentang, 20 gram

dextrose, 20 gram agar. Sedangkan metode Pengenceran dilakukan dengan

caramenyiapkan dan memberi label larutan pengencer dan cawan petri steril

sesuai dengan pengenceran yang ditetapkan, melakukan pengenceran sampai

tingkat pengenceran yang ditentukan (bahan yang busuk melakukan sampai

tingkat pengenceran 10-8

). Pengenceran dilakukan dengan menyiapkan 8 tabung

reaksi dan pipet volume dan penghisap, mengisi tabung pertama dengan sampel,

dan kedelapan tabung lain dengan aquadest. Mengambil sampel dengan pipet

volume diletakkan pada tabung pertama, mengambil larutan pada tabung pertama

diletakkan pada tabung kedua, dan seterusnya sampai dengan tabung terakhir.

Kemudian melakukan pencawanan pada tiga tingkat pengenceran yang terakhir.

3.2.3. Metode Hitung Cawan

Menyiapkan dan memberi label larutan pengencer dan cawan petri steril

sesuai dengan pengenceran dan pemupukan yang ditetapkan, melakukan

pengenceran sampai tingkat pengenceran yang ditentukan (bahan yang busuk

melakukan pengenceran sampai 10-8

), melakukan pencawanan pada 3 tingkat

pengenceran yang terakhir. Melihat ilustrasi 2 dengan jumlah pengenceran yang

sesuai dengan yang ditetapkan. Menuangkan kurang lebih 10 ml medium agar ke

dalam cawan petri dan goyangkan membentuk angka delapan supaya sampel

13

merata, setelah medium membeku, menginkubasikan dengan posisi terbalik pada

suhu ruang selama 24 - 48 jam, kemudian menghidung jumlah koloni yang

tumbuh pada cawan dan melaporkan jumlah koloni per ml menurut standart yang

ditetapkan.

3.2.4. Pewarnaan Gram

Mengambil kaca objek atau preparat lalu memberikan setetes aquades

pada kaca. Mengambil sejumlah mikroba pada ujung loop fiksasi dengan nyala

api kecil pada busen. Meneteskan violet kristal (gram A) di atas preparat diamkan

selama 1 menit. Membilas dengan aquadest lalu membuang sisa air yang

tertinggal dan menetesi dengan larutan lugol (gram B) selama 2 menit. Membilas

dengan aquadest kemudian menghilangkan warna dengan (gram C) sampai warna

biru tidak luntur lagi. Membilas kembali dengan aquadest kemudian menetesi

dengan safranin (gram D) selama 30 detik lalu membilas dengan air dan

mengeringkan dengan menggunakan tisu. Mengamati kaca objek pada mikroskop

dengan perbesaran 100 X 1,25.

14

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Sterilisasi

4.1.1. Sterilisasi Kering

Berdasarkan hasil praktikum yang telah dilakukan sterilisasi kering

digunakan untuk mematikan mikroorganisme pada alat-alat yang digunakan pada

praktikum dengan menggunakan oven selama 1 jam dengan suhu 160 0C. Hal ini

sesuai dengan pendapat Pelczar et al., (1988) bahwa cawan petri, pipet, serta

beberapa peralatan laboratorium disterilkan di dalam oven listrik dibutuhkan

waktu selama 2 jam dengan suhu 160 0C. Kharisma dan Abdul (2012)

menambahkan bahwa sterilisasi alat meliputi cawan petri dan pipet volume

dilakukan dengan menggunakan oven dengan cara memasukkan alat-alat tersebut

dalam oven dan dipanaskan dengan suhu 160 - 170 oC selama 1 sampai 2 jam.

4.1.2. Sterilisasi Basah

Sterilisasi basah menggunakan alat yang disebut autoklaf yang berfungsi

untuk mensterilkan bahan-bahan yang akan digunakan dalam praktikum. Autoklaf

biasanya digunakan untuk menyeterilkan medium baik yang berasal dari agar

maupun dari air susu. Hal ini sesuai dengan pendapat Hendaryono dan Ari (1994)

bahwa autoklaf adalah alat sterilisasi untuk alat dan medium kultur jaringan.

Ditambahkan oleh Kharisma dan Abdul (2012) bahwa sterilisasi alat dan media

15

yang dilakukan dengan menggunakan autoklave yang untuk mensterilkan tabung

reaksi bertutup dan erlenmeyer. Penggunaan alat ini dengan memasukkan alat-alat

tersebut kedalam autoklave yang ditutup dengan rapat dan menyalakan autoklave

dengan temperatur 121 0C dan tekanan 1 atm selama 1 jam.

4.2. Medium PDA

Pada pembuatan Potato Dextrose Agar (PDA) ini di butuhkan 500 ml

filtrat kentang, 20 gram dextrose dan 20 g agar ditambah dengan 0,1 ml asam

tartarat 10%. Beberapa mikroba pertumbuhannya dipengaruhi oleh ketersediaan

zat-zat nutrisi khususnya medium yang banyak mengandung karbohidrat. Hal ini

sesuai dengan pendapat Warisno dan Dahana (2009) biasanya pembuatan biakan

murni menggunakan media Potato Dextrose Agar yang tersusun oleh kentang,

gula dalam bentuk dextrose, agar-agar dan aquades. Aprintasari et al., (2012)

menambahkan bahwa PDA adalah suatu medium yang mengandung sumber

karbohidrat dalam jumlah cukup, yaitu terdiri dari 20% ekstrak kentang dan 2%

glukosa, sehingga baik untuk pertumbuhan fungi tetapi kurang baik untuk

pertumbuhan bakteri akan tetapi karena beberapa bakteri juga memfermentasi

karbohidrat dan menggunakannya sebagai sumber energi, maka beberapa bakteri

masih mungkin tumbuh pada PDA.

4.3. Metode Hitung Cawan

Berdasarkan hasil praktikum metode perhitungan cawan pada sampel Susu

UHT diperoleh data sebagai berikut:

16

Tabel 1.Hasil Perhitungan Cawan dengan Sampel Susu UHT.

Medium Pengenceran SPC

(CFU/ml) 10-6

10-7

10-8

PDA

368

330

3,7 x 108

3,3 x 109

303 3,0 x 10

10

Sumber : Data Primer Praktikum Mikrobiologi, 2013

Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan diperoleh hasil bahwa dari

metode hitungan cawan menggunakan suatu standar yang disebut dengan Standar

Plate Counts (SPC). Cawan yang dipilih dan dihitung adalah yang mengandung

jumlah koloni antara 30-300. Hal ini sesuai dengan pendapat Waluyo (2007)

bahwa akan terbentuk koloni pada cawan petri hasil pengenceran dalam jumlah

yang dapat dihitung, dimana jumlah yang terbaik antara 30 - 300 koloni. Hasil

pengamatan diketahui jumlah bakteri pada perhitungan 10-6

diproleh hasil

3,7 x 108 pada pengenceran 10

-7 sebanyak 3,3 x 10

9 dan pada pengenceran 10

-8

sebanyak 3,0 x 1010

, yang berarti bahwa jumlah koloni di dalam cawan petri

sangat banyak. Hal ini tidak sesuai dengan pendapat Harmita dan Radji (2006)

bahwa cawan petri yang digunakan untuk biakan bakteri jumlah pertumbuhan

koloninya berkisar 30 - 300 koloni per cawan petri. Penyiapan pengenceran

berseri hampir selalu dibutuhkan untuk memastikan bahwa akan didapatkan

pengenceran dengan jumlah bakteri yang dapat dihitung. Setiap koloni bakteri

yang di inkubasi akan muncul dari 1 sel bakteri, maka dengan menghitung jumlah

koloni dan memperhitungkan faktor pengenceran jumlah bakteri pada sampel

awal dapat ditentukan. Jumlah masing-masing mikroba dihitung berdasarkan

metode hitung cawan menggunakan pengenceran desimal dari 1:10-1

sampai

10:109

(Agustina et al., 2013).

17

4.4. Pewarnaan Gram

4.4.1. Lactobacillus acidophillus

Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan terhadap bakteri

Lactobacillus, diperoleh hasil sebagai berikut:

Ilustrasi 1. Penampang bakteri Lactobacillus acidiphilus perbesaran 100 kali.

Lactobacillus asidiphilus

Perbesaran 100x

Lactobacillus asidiphilus

Bentuk : Batang

Warna : Ungu

Gram : Positif

Gambar Gram Positif (+)

Bentuk : Batang

Warna : Ungu

Gram : Positif

Gambar Gram Positif (+)

Sumber: Data Primer Praktikum

Mikrobiologi, 2013.

Sumber: www.biologiconz.com

Berdasarkan hasil percobaan yang telah dilakukan, diketahui bahwa

penampang bakteri Lactobacillus acidiphilus pada perbesaran 100 kali terlihat

koloni-koloni besar berwarna ungu, bakteri tersebut digolongkan pada tipe bakteri

gram positif. Hal ini sesuai dengan pendapat Lay dan Sugyo (1992) bahwa

dinding sel bakteri Gram-positif mengandung lipida yang rendah, sehingga

sewaktu penambahan alkohol terjadi dehidrasi dan pengecilan lubang pori-pori,

yang menyebabkan zat warna tetap terikat dan sel tetap berwarna ungu. Hal ini

18

diperkuat pendapat Dwidjoseputro (2005) bahwa beberapa spesies patogen Famili

X lactobacilaceae: basil atau kokus yang bergandeng-gandengan atau merupakan

tetrad adalah Gram positif yang contohnya ialah L.acidophilus. Ditambahkan oleh

Pangkalan Ide (2008) bahwa Lactobacillus caseii dan Lactobacillus acidophilus

merupakan probiotik yang tergolong kepada bakteri baik. Sel bakteri gram positif

terlihat berwarna ungu karena dapat membentuk ikatan komplek dengan pewarna

pertama yaitu kristal-iodium (Agustina et al., 2013).

4.4.2. Escherichia coli

Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan terhadap bakteri Escherichia

coli, diperoleh hasil sebagai berikut:

Ilustrasi 2. Penampang bakteri Escherichia coli perbesaran 100 kali.

Escheria coli

Perbesaran 100X

Escheria coli

Bentuk : Batang

Warna : Merah

Gram : Negatif

Gambar Gram Negatif (-)

Bentuk : Batang

Warna : Merah

Gram : Negatif

Gambar Gram Negatif (-)

Sumber: Data Primer Praktikum

Mikrobiologi, 2013.

Sumber: www.biologicons.com

Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan, diketahui bahwa bakteri

yang diamati adalah bakteri E. Coli, pada perbesaran 100 kali bakteri E. Coli

membentuk koloni dan berwarna merah muda, bakteri tersebut digolongkan dalam

19

bakteri gram negatif karena bakteri tersebut berwarna merah muda dan memberan

selnya tipis yang menyebabkan kristal violet tidak ikut tercampur. Hal ini sesuai

dengan pendapat Lay dan Sugyo (1992) bahwa pada dinding sel bakteri gram

negatif mengandung lipida yang tinggi, sehingga sewaktu pencucian dengan

larutan pemucat menyebabkan pembesaran lubang pori-pori dan peningkatan

permeabilitas zat warna, pencucian menyebabkan kompleks zat warna pertama

terlepas, dan sel akan mengambil zat warna kedua. Hal ini diperkuat oleh

pendapat Dwidjoseputro (2005) bahwa Famili IV. Enterobacteriaceae: basil

bergerak dengan flagel yang peritrik atau tiak bergerak, contoh dari gram negatif

adalah escherichia coli. Ditambahkan oleh Ferdiaz (1989) bahwa salah satu

bakteri gram negatif, yaitu Escherichia coli.

20

BAB V

SIMPULAN DAN SARAN

5.1. Simpulan

Berdasarkan hasil praktikum dapat disimpulkan bahwa bakteri dapat hidup

pada medium yang memiliki nutrisi yang cukup, dan medium PDA merupakan

medium yang sesuai untuk pertumbuhan mikroba karena mengandung

karbohidrat. Sterilisasi merupakan metode untuk mengetahui biakan bakteri

murni. Dari hasil pembiakan diperoleh bakteri dengan jumlah pada pengenceran

10-6

diperoleh hasil jumlah koloni bakteri sebanyak 368 dengan hasil perhitungan

cawan sebesar 3,7×108, pada pengenceran 10

-7 diperoleh jumlah koloni bakteri

sebanyak 330 dengan hasil perhitungan cawan sebanyak 3,3×109, dan pada

pengenceran 10-8

diperoleh jumlah koloni bakteri sebanyak 303 dengan hasil

perhitungan cawan sebanyak 3,0×1010

. Dan pewarnaan gram untuk bakteri

Lactobacillus acidiphilus menghasilkan berwarna biru keunguan yang berarti

gram positif dan bakteri Escheria coli menghasilkan warna merah yang berarti

bakteri gram negatif.

5.2. Saran

Saran yang ada pada praktikum mikrobiologi yaitu sebaiknya semua alat

disterilkan untuk menghambat atau membunuh mikroba penghambat

pertumbuhan bakteri dan sebaiknya pada saat praktikum tidak banyak bicara agar

objek percobaan tidak terkontaminasi.

21

DAFTAR PUSTAKA

Adji, D. Zuliyanti dan Larashanty. 2007. Perbandingan Efektivitas Sterilisasi

Alkohol 70%, Inframerah, Otoklaf dan Ozon terhadap Pertumbuhan

Bakteri Bacillus subtilis. J. Sain Vet. Vol. 25 No. 1. 17:24.

Agustina, D., Yulvizar, C., dan R., Nursanty. 2013. Biospecies 6 (1) Hal. 15-19.

Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,

Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh.

Aprintasari, R, C. I. Sutrisno dan B. I. M. Tampoeboelon. 2012. Uji Total Fungi

dan Organoleptik pada Jerami Padi dan Jerami Jagung yang Difermentasi

dengan Isi Rumen Kerbau. Animal Agriculture Journal Vol. 1. No. 2,

311:321.

Buditianingsih, K. Surya R. P., Herdayanto S. P. 2010. Isolasi bakteri termofilik

dari sumber air panas di songgoriti. Prosiding Tugas Akhir Semester

Genap 2010/2011 ITS.

Campbell, Neils A., dan Jane B. Reece., Lawrence G. Mitchel. 2004. Biologi

Edisi 5 Jilid ke-2. Alih Bahasa: Rahayu Lestari. Jakarta, Erlangga.

Dwijdjoseputro, D. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Penerbit Djambatan.

Jakarta.

Fardiaz, Srikandi. 1989. Mikrobiologi Pangan. Penerbit IPB, Jakarta.

Fardiaz, Srikandi. 1993. Analisis Mikrobiologi Pangan. Raja Grafindo Persada,

Jakarta.

Gunawan, W.G. 2000. Usaha Pembibitan Jamur. PT. Penebar Swadaya, Jakarta.

Harmita., dan M. Radji. 2006. Buku Analisis Hayati Edisi 3. Buku Kedokteran

EGC, Jakarta.

Hendaryono dan Ari W.. 1994. Teknik Kultur Jaringan. Kanisius, Yogyakarta.

Kharisma dan Manan. 2012. Kelimpahan Bakteri Vibrio sp. Pada Air Pembesaran

Udang Vannamei Sebagai Deteksi Dini Serangan Penyakit Vibriosis.

Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan. Fakultas Perikanan dan Kelautan

Universitas Airlangga. Surabaya. Vol. 4. No. 2, November 2012

Lay, B.W. dan S. Hastowo 1992.Mikrobiologi. Rajawali Press. Jakarta

22

Manin, F. 2010. Potensi Lactobacillus acidophilus dan Lactobacillus fermentum

dari Saluran pencernaan ayam buras asal lahan gambut sebagai sumber

probiotik. jurnal ilmiah ilmu-ilmu peternakan. Vol. 8 : 5.

Pangkalan Ide. 2008. Health Secret of Kefir. PT. Elex Media Komputindo,

Jakarta.

Pelczsar, M. J dan Chan, E. C. S. 1988. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Universitas

Indonesia Press, Jakarta.

Pratiwi, R. 2005. Perbedaan daya hambat terhadap Strepcoccus mutans dari

beberapa pasta gigi yang mengandung herbal. Maj. Ked. Gigi Vol. 38. No.

2 April-Juni 2005 64-67.

Schlegel, H. G. 1994. General Mikrobiology. Erlangga, Jakarta.

Volk, W. A. Dan Margaret P. W. 1993. Mikrobiologi Dasar. PT. Gelora Aksara

Pratama, Jakarta.

Waluyo, Lud. 2007. Mikrobiologi Umum. UMM Press, Malang.

Warisno., dan K. Dahana. 2009. Tiram Menabur Jamur Menuai Rupiah. Penerbit

Gramedia Pustaka, Jakarta.

23

LAMPIRAN

Lampiran 1. Gambar dan Fungsi Alat

Gambar Alat Fungsi

Cawan Petri

Tempat penanaman mikroba baik bakteri

maupun jamur dengan metode agar cawan

Mikroskop

Alat untuk mengamati mikroorganisme

Api Bunsen

Untuk membakar jarum Ose supaya tetap steril

Autoklaf

Untuk mensterilkan bahan-bahan yang bersifat

cair

Timbangan

Untuk minimbang bahan-bahan

24

Lampiran 1. Gambar dan Fungsi Alat (Lanjutan)

Tabung Reaksi

Tempat penanaman mikroba baik bakteri

maupun jamur

Magnetic Stire

Untuk mengaduk cairan Nutrient Agar dan

Acidified Potato dextrose Agar

Waterbath

Untuk memanaskan larutan Nutrient Agar dan


Oven

Untuk mensterilkan medium baik itu cawan

dan tabung reaksi yang digunakan pada saat

penanaman mikroorganisme

Erlenmeyer

Untuk menampung larutan Nutrient Agar dan


25

Lampiran 1. Gambar dan Fungsi Alat (Lanjutan)

Beker glass

Untuk mengukur suatu larutan atau zat

tertentu dengan tepat

Pipet Hisap dan Penghisap

Untuk menghisap larutan Nutrient Agar dan


Jarum Ose

Untuk membiakkan mikrobia dalam medium

Labu Ukur

Untuk menghitung volume suatu cairan

dengan tepat

26

Lampiran 2. Menjawab Pertanyaan

2.1. Medium dan Larutan Pengencer

Pertanyaan:

1. Jelaskan fungsi dari masing-masing komponen di bawah ini di dalam medium!

a. Pepton c. Ekstrak sapi

b. Agar d. NaCl

2. Jelaskan perbedaan masing-masing medium di bawah ini!

a. Nutrient Agar

b. Potato Dextrose Agar

c. Lactose Broth

d. Plate Count Agar

e. Briliant Green Lactose Bile Broth

3. Sebut dan Jelaskan klasifikasi medium!

Jawab:

1. a. Sebagai protein sederhana untuk pertumbuhan mikroba

b. Sebagai media padat bernutrisi bagi mikroba

c. Sebagai proteinkompleks untuk pertumbuhan mikroba

d. Sebagai larutan buffer

2. a.Nutrient Agar digunakan untuk pertumbuhan mayoritas dari

mikroorganisme yang tidak selektif, dalam artian mikroorganisme

heterotrof, misalnya bakteri.

27

Lampiran 2. Menjawab Pertanyaan (Lanjutan)

b. PDA digunakan untuk menumbuhkan atau mengidentifikasi khamir dan

kapang.

c. Lactose broth digunakan sebagai media untuk mendeteksi kehadiran

koliform dalam air, makanan, dan produk susu, sebagai kaldu pemerkaya

(pre-enrichment broth) untuk Salmonellae dan dalam mempelajari

fermentasi laktosa oleh bakteri pada umumnya.

d. PCA digunakan sebagai medium untuk mikroba aerobik dengan inokulasi

di atas permukaan.

e. Briliant Green Lactose Bile Broth sebagai media untuk isolasi, enumerasi,

dan menumbuhkan sel khamir.

3. a. Medium berdasarkan sifat fisik

Medium padat yaitu media yang mengandung agar 15% sehingga

setelah dingin media menjadi padat..

Medium setengah padat yaitu media yang mengandung agar 0,3-0,4%

sehingga menjadi sedikit kenyal, tidak padat, tidak begitu cair.

Medium cair yaitu media yang tidak mengandung agar, contohnya

adalah NB (NutrientBroth), LB (LactoseBroth).

b. Medium berdasarkan komposisi

Medium sintesis yaitu media yang komposisi zat kimianya diketahui

jenis dan takarannya secara pasti, misalnya Glucose Agar, Mac Conkey

Agar.

28


Medium semi sintesis yaitu media yang sebagian komposisinya

diketahui secara pasti, misanya PDA (Potato Dextrose Agar).

Medium non sintesis yaitu media yang dibuat dengan komposisi yang

tidak dapat diketahui secara pasti dan biasanya langsung diekstrak dari

bahan dasarnya, misalnya Tomato Juice Agar, Brain Heart Infusion

Agar, Pancreatic Extract.

c. Medium berdasarkan tujuan

Media untuk isolasi yang mengandung semua senyawa esensial untuk

pertumbuhan mikroba, misalnya Nutrient Broth, Blood Agar.

Media selektif/penghambat yang selain mengandung nutrisi juga

ditambah suatu zat tertentu sehingga media tersebut dapat menekan

pertumbuhan mikroba lain dan merangsang pertumbuhan mikroba yang

diinginkan

Media diperkaya (enrichment) yaitu media yang mengandung

komponen dasar untuk pertumbuhan mikroba dan ditambah komponen

kompleks seperti darah, serum, kuning telur, misalnya Blood Tellurite

Agar, Bile Agar, Serum Agar, dll.

Media untuk peremajaan kultur

Media umum atau spesifik yang digunakan untuk peremajaan kultur

Media untuk menentukan kebutuhan nutrisi spesifik.

Media untuk karakterisasi ,contohnya adalah Nitrate Broth, Lactose

Broth, Arginine Agar.

29


Media diferensial untuk mengidentifikasi mikroba dari campurannya

berdasar karakter spesifik yang ditunjukkan pada media diferensial,

misalnya TSIA (Triple Sugar Iron Agar).

2.2. Sterilisasi

Pertanyaan:

1. Jelaskan perbedaan sterilisasi kering dan sterilisasi basah!

2. Jelaskan tujuan sterilisasi!

Jawab:

1. Sterilisasi kering dilakukan dengan pembakaran dan oven untuk mensterilkan

peralatan logam dan kaca, sedangkan sterilisasi basah dilakukan dengan

dengan autoklaf, uap bebas, atau air mendidih untuk mensterilkan peralatan,

medium, dan bahan-bahan yang tahan uap.

2. Sterilisasi bertujuan untuk membebaskan alat-alat atau bahan-bahan dari

segala bentuk kehidupan termasuk mikroba.

2.3. Metode Hitungan Cawan

Pertanyaan:

1. Bagaimana prosedur perhitungan total mikroba pada sampel susu bubuk

hingga pengenceran 10-5. Hitung pula kebutuhan alat dan bahan!

2. Laporkan "Standard Plate Count" dari sampel di bawah ini!

30


Jawab:

1. Alat dan bahan : 5 tabung reaksi, 5 pipet hisap, 5 cawan petri, autoklaf,

pengadu magnetik, susu bubuk, dan aquades.

Prosedur:

Memasukkan 9 ml aquades ke dalam 9 tabung reaksi sebagai larutan

pengencer lalu melakukan sterilisasi basah dalam autoklaf pada suhu 121 0C,

tekanan 2 atm selama 15 menit. Menimbang 5 g susu bubuk lalu

menambahkan 45 ml aquades, kemudian menghomogenisasi sampel tersebut

dengan pengaduk magnetik. Menyiapkan dan memberi label larutan

pengencer dan cawan petri steril, kemudian melakukan pengenceran sampai


. Sampel yang telah ditambahkan air merupakan


. Setelah itu mengambil 1 ml dari tiap tingkat

pengenceran untuk pengenceran selanjutnya dan 1 ml untuk ditempatkan pada

cawan. Satu pipet hisap hanya boleh digunakan untuk mengambil satu macam

pengenceran.

2. Standard Plate Count

Tabel 2. Satndard Plate Count

Sampel Pengenceran SPC

10-2

10-3

10-4

10-5

Kaldu daging 280

262

45

28

3

1

-

-

3,2 x 104

Susu segar TBUD

TBUD

TBUD

TBUD

708

782

158

302

7,4 x 106

Sosis TBUD 294 35 5 3,2 x 105

Dendeng 55 15 1 0 5,5 x 103

31


2.4. Pewarnaan Bakteri

Pertanyaan:

1. Sebutkan perbedaan bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif!

2. Sebutkan jenis dan bentuk koloni bakteri yang termasuk patogen!

Lampiran 2. (Lanjutan)

Jawab:

1. Dinding sel bakteri Gram positif memiliki kandungan peptidoglikan yang

lebih tinggi dibandingkan bakteri Gram negatif dan dinding sel bakteri Gram

negatif kaya akan lipid. Peptidoglikan dari dinding sel bakteri Gram positif

mengikat warna ungu violet kristal, sedangkan lipid dari dinding sel bakteri

Gram negatif telah larut oleh pencucian alkohol sehingga dipengaruhi oleh

warna merah dari safranin.

2. - Staphylococcus aureus, bentuk koloni seperti anggur

- Pseudomonas sp., bentuk koloni basil atau batang yang terpisah-pisah

- E.coli, bentuk koloni basil atau batang yang terpisah-pisah

32

Lampiran 3. Perhitungan SPC (Standar Penghitungan Cawan)

Tabel 3.Hasil Perhitungan Cawan dengan Sampel Susu UHT.

Medium Pengenceran SPC

(CFU/ml) 10-6

10-7

10-8

PDA

368

330

3,7 x 108

3,3 x 109

303 3,0 x 10

10

Sumber : Data Primer Praktikum Mikrobiologi, 2013

Perhitungan cawan 10-6

= 3,7 x


= 3,3 x


= 3,0 x

33

Lampiran 4. Fotocopy Laporan Praktikum

34

Lampiran 4. Fotocopy Laporan Praktikum (Lanjutan)

35


36


37

Lampiran 5. Fotocopy Literatur

38

Lampiran 5. Fotocopy Literatur (Lanjutan)

39


40


41


42


43


44


45


46


47


48


49


50


51


52


53


54


55


56


57


58


59


60


61


laporan resmi praktikum mikrobiologi

Education