kultur jaringan lab
TRANSCRIPT
kultur-jaringan.blogspot.com FASILITAS DAN BAHAN DI LABORATORIUM KULTUR JARINGAN 08.37 | Author: Sepdian Luri
1. Organisasi Dalam Laboratorium Kultur Jaringan
Di setiap laboratorium dimana teknik kultur jaringan digunakan harus mempunyai
sejumlah fasilitas yang mencakup al.:
- Ruang pencucian
- Ruang persiapan media, sterilisasi dan penyimpanan
- Ruang transfer aseptik
- Ruang kultur atau inkubator yang lingkungannya terkontrol
- Ruang pengamatan dan koleksi data Diagram laboratorium kultur jaringan dapat dilihat
pada gambar B-2.1.
a. Ruang Pencucian
Ruang pencucian harus mempunyai bak cuci, meja kerja yang terbuat dari bahan yang
tahan terhadap asam dan basa, rak pengering dan mempunyai saluran untuk air
demineralisasi atau destilasi, ruang untuk tempat oven pengering, alat/mesin pencuci dan
pengering, serta rak atau lemari penyimpanan alat.
b. Ruang Persiapan Media
Di dalam ruang persiapan media harus tersedia tempat untuk penyimpanan bahan-bahan
kimia, gelas kultur dan penutupnya, dan peralatan gelas yang diperlukan untuk
pembuatan media. Meja yang kokoh atau ”bench” untuk penyimpanan ”hot plate
magnetic stirrer”, pH meter, timbangan, dan dispenser harus tersedia. Peralatan lain yang
biasanya ada di ruang persiapan dan pembuatan media antara lain alat vaccum, distiling
unit, bunsen, refrigerator (kulkas) dan freezer untuk penyimpanan larutan stok dan bahan
kimia, mikrowave, kompor gas, oven dan autoclave untuk sterilisasi mdia, peralatan gelas
dan peralatan lain. Didalam pembuatan media kultur, bahan-bahan kimia yang digunakan
harus yang bertaraf analitik dan penimbangannya harus baik dan benar. Agar lebih
akurat, dalam pembuatan media harus dilakukan tahap demi tahap dan bahan-bahan yang
digunakan harus di ”checklist”. Air yang digunakan dalam pembuatan media harus
berkualitas tinggi yang mempunyai tingkat kemurnian yang tinggi. Air ledeng atau sumur
tidak digunakan untuk pembuatan media karena mengandung kation-kation (amonium,
kalsium, besi, magnesium natrium, dll.), anion-anion (bikarbonat, klorida, flourida,
fosfat, dll.), mikroorganisme (algae, jamur, bakteri), gas-gas (oksigen, CO2, nitrogen)
dan bahan-bahan lain (minyak, bahan organik dll.). Air yang digunakan dalam kultur
jaringan harus mempunyai standar type II (minimum) yaitu bebas pirogen, gas, dan bahan
organik dan mempunyai konduktivitas elektrik kurang dari 1.0 µmho/cm. gambar Metoda
yang paling umum untuk pemurnian air standar type II adalah dengan deionosasi yang
diikuti dengan satu atau dua destilasi gelas. Deionisasi menghilangkan dari bahan yang
bersifat ionik dan proses destilasi menghilangkan molekul-molekul organik,
mikroorganisme dan pirogen. Metode-metode lain yang dapat digunakan untuk
mendapatkan air murni type II adalah
(1) penyaringan dengan cara absorpsi, dengan menggunakan karbon aktif untuk
menghilangkan kontaminan organik dan bebas klorine;
(2) penyaringan dengan membran, yang menghilangkan bahan-bahan partikulat dan
kontaminasi oleh bakteri; dan
(3) reverse osmosis, yang menghilangkan sekitar 99% bakteri, bahan organik dan bahan
partikulat.
c. Ruang Transfer
Teknik kultur jaringan dapat berlangsung dengan sukses apabila dilakukan dibawah
kondisi laboratorium yang sangat bersih. Oleh karena itu pemindahan atau transfer biakan
dikerjakan dalam ruang transfer steril atau laminar air flow. Laminar air flow yang
digunakan dalam kultur jaringan tanaman adalah tipe horizontal dan dirancang dengan
mempunyai ruangan yang bebas dari partikel debu yang halus dan dilengkapi dengan
sinar ultra violet (UV) serta unit penyaring udara. Penyaring udara harus mempunyai
filter udara dengan efisiensi tinggi atau ”high-efficiency particulate air (HEPA filter).
HEPA filter harus mempunyai pori sekitar 0.3 µm dengan efisiensi kerja berkisar 99.97 –
99.99%. Semua permukaan ruang kerja dalam laminar harus dirancang dan mempunyai
konstruksi sedemikian rupa sehingga debu dan mikroorganisme tidak dapat berakumulasi
dan permukaan tempat kerja dapat mudah dibersihkan dan diidisinfeksi.
d. Ruang Kultur
Semua jenis kultur harus disimpan dalam tempat yang terkontrol baik temperatur,
sirkulasi udara, kelmbaban maupun kualitas dan lamanya cahaya. Faktor-faktor
lingkungan tersebut akan mempengaruhi proses pertumbuhan dan diferensiasi biakan
baik secara langsung maupun tidak langsung. Kultur protoplas, suspensi sel dan kultur
anther adalah yang paling sensitif terhadap kondisi lingkungan. Suhu ruang kultur untuk
pertumbuhan umumnya berkisar antara 15o – 30oC, dengan fluktuasi kurang dari
±0.5oC; akan tetapi kisaran suhu yang lebih besar mungkin diperlukan untuk tujuan
percobaan. Ruang kultur harus mempunyai pencahayaan hingga 10.000 lux. Suhu dan
cahaya harus dapat diprogram selama 24 jam. Ventilasi udara harus baik dengan
kelembaban berkisar 20-98%.
2. Peralatan dan Bahan Dasar Dalam Laboratorium Kultur Jaringan
Peralatan yang diperlukan dari suatu laboratorium umumnya adalah sbb.:
1. Hot plate/magnetic stirrer atau kompor
2. Peralatan gelas (gelas ukur, erlenmeyer) atau stainless steel untuk memanaskan dan
melarutkan media
3. Alat sterilisasi dengan tekanan uap (autoclave)
4. pH meter
5. Timbangan (analitical dan bench top loading)
6. Gelas ukur gradual
7. Botol kultur dengan penutupnya
8. Dispenser
9. Alat diseksi (spatula, scalpel (pinset), forcep, gunting)
10. Refrigerator
11. Distiling unit atau water deionizer
12. Oven
13. Microwave
14. Mikroskop
15. Pipet ukur
16. Shaker
17. Laminar air flow
18. Disinfectant
19. Bahan kimia yang diperlukan untuk pembuatan media (Lampiran)
20. Dll.
Peralatan gelas yang digunakan di lab kultur jaringan umumnya terbuat dari Pyrex.
Erlenmeyer dari berbagai ukuran (50, 125, 250, 500, 1000 atau 2000 ml) digunakan
untuk wadah kultur dan pembuatan media. Tabung gelas, cawan petri, botol jam atau
bekas selai juga sering digunakan sebagai botol kultur. Peralatan gelas tesebut harus
tahan panas selama proses sterilisasi dengan oven atau autoclave. Peralatan gelas lain
yang biasanya digunakan adalah gelas piala, gelas ukur, pipet dan labu ukur.
3. Prosedur Dasar Laboratorium
Umumnya penggunaan operasional di lab perbanyakan tanaman dengan kultur jaringan
dapat dipelajari dengan mudah. Hal yang paling perlu diperhatikan adalah akurasi,
kebersihan dan keamanan saat bekerja dengan teknik kultur jaringan. Penimbangan Pada
saat pembuatan media, semua bahan yang ditimbang harus dilakukan dengan hati-hati
meskipun untuk pembuatan media dalam skala komersial. Setiap penggunaan timbangan
atau alat-alat lain harus memperhatikan instruksi dari pabrikannya.
Jenis timbangan yang sering digunakan di lab antara lain top-loading balance dan
analytical balance yang memungkinkan akurasi penimbangan hingga skala milligram.
Beberapa persyaratan yang harus diperhatikan agar diperoleh penimbangan yang akurat
adalah (i) timbangan harus ditempatkan pada tempat yang keras, stabil, permukaannya
rata yang bebas getaran dan kebocoran, (ii) daerah sekitar penimbangan harus terjaga
kebersihannya, (iii) yang terpenting lagi, penimbangan jangan sampai pernah overload,
(iv) penimbangan disarankan menggunakan wadah atau alas yang ringan atau kertas
daripada menempatkan bahan yang ditimbang secara langsung di atas piring timbangan.
Pengukuran cairan/larutan Peralatan gelas yang mempunyai ukuran seperti gelas piala,
erlenmeyer dan pipet diperlukan untuk pembuatan media. Gelas ukur kapasitas 10, 25,
100 dan 1000 ml banyak digunakan untuk mengukur volume, tetapi pengukuran yang
lebih akurat diperlukan labu ukur dan pipet. Pengukuran larutan dengan menggunakan
pipet dan labu ukur hanya akan akurat apabila bagian dasar dari cekungan antara air dan
udara berada tepat pada tanda pengukuran. Penggunaan pipet harus dibantu dengan alat
penghisap larutan (pipetor). Jangan pernah menggunakan mulut untuk memipet. Jenis-
jenis pipetor yang umum digunakan antara lain (i) tipe bola penghisap yang dilengkapi
dengan beberapa katup pengontrol, (ii) pipet penghisap yang dioperasikan menggunakan
roda kecil pada bagian atas alat penghisap, (iii) alat penghisap dengan bantuan pompa
udara secara elektrik. Cairan dihisap kedalam pipet dengan menekan tombol bagian atas
dan melepaskan cairan dengan menekan tombol bagian bawah, (iv) pipet mikro, biasanya
untuk pengambilan larutan dengan volume yang sangat kecil (mikro liter).
Membersihkan peralatan gelas Metoda konvensional pencucian peralatan gelas dilakukan
dengan merendam gelas dalam larutan asam kromat yang diikuti pembilasan dengan air
kran dan air destilasi. Karena asam kromat dapat menyebabkan korosif, maka cara ini
banyak ditinggalkan kecuali untuk peralatan gelas yang terkontaminasi tinggi. Pencucian
yang lebih aman adalah dengan air panas (>70oC) + sabun, diikuti dengan pembilasan
dengan air panas dan air destilasi. Peralatan gelas yang telah dicuci, dikeringkan dalam
oven pada suhu 150oC dibungkus dengan aluminium foil, kemudian disimpan dalam
lemari tertutup.
Sterilisasi Bagian yang sangat penting dalam teknik in vitro adalah sterilisasi bahan
tanaman dan media dan menjaga kondisi aseptik yang telah dicapai. Bakteri dan jamur
adalah dua kontaminan yang paling banyak dijumpai dalam kultur. Spora jamur sangat
ringan dan ada disekeliling lingkungan. Apabila spora jamur kontak dengan media kultur
dan kondisinya optimal untuk perkecambahan jamur, maka akan terjadi kontaminasi.
a. Sterilisasi Ruang Kultur dan Transfer
Sterilisasi ruang kultur yang paling baik adalah dilakukan dengan penggunaan sinar
ultraviolet (UV). Waktu sterilisasi bervariasi tergantung dari ukuran ruang transfer itu
sendiri dan harus dilakukan apabila tidak ada kegiatan dalam ruang tersebut. Radiasi UV
sangat berbahaya bagi mata dan kulit. Ruang transfer dapat juga disterilisasi dengan
mencuci/mengepel 1-2 kali setiap bulan dengan bahan anti jamur (fungisida) komersial.
Ruang kerja dalam laminar flow biasanya sudah dilengkapi dengan lampu UV, sehingga
sterilisasinya dilakukan dengan UV dan diikuti dengan membasuh/melap permukaan
tempat bekerja dalam laminar dengan alkohol 95% sebelum mulai bekerja. Ruang kultur
harus dibersihkan dengan sabun kemudian dilap dengan Na-hypoklorit 2% (merek
komersial seperti Sunclin, Bayclin atau pembersih lantai lain yang mengandung
disinfektan) atau alkohol 95%. Lantai ruangan dan dinding harus dibesihkan seminggu
sekali dengan bahan yang sama.
b. Sterilisasi Peralatan Gelas dan Peralatan Lain.
Peralatan yang terbuat dari metal, gelas, aluminium foil, dll., dapat disterilsasi dengan
cara pengeringan dalam oven pada suhu 130o-170oC selama 2-4 jam. Semua peralatan
tersebut harus dibungkus sebelum di oven, tetapi jangan menggunakan kertas karena akan
akan terdekomposisi pada suhu 170oC. Sterilisasi dengan menggunakan autoclave tidak
dsarankan untuk bahan yang erbuat dari metal karena akan menyebabkan karat. Untuk
peralatan diseksi yang akan digunakan pada ruang transfer atau laminar, setelah
disterilisasi dalam oven harus direndam dahulu dalam alkohol 96% kemudian dibakar di
atas lampu bunsen. Teknik ini disebut sterilisasi pembakaran (flame sterilization). Teknik
ini harus dilakukan dengan ekstra hati-hati karena alkohol sangat mudah terbakar.
Autoclave adalah metoda sterilisasi dengan menggunakan tekanan uap air. Bahan-bahan
atau alat yang dapat disterilisasi dengan cara autoclave ini antara lain kapas penutup
tabung, saringan dari nylon, pakaian lab, tutup plastik, peralatan gelas, pipet, air, dan
media kultur. Hampir semua mikroba dapat mati bila diautoclave pada suhu 121oC
dengan tekanan 15 psi selama 15-20 menit.
c. Sterilisasi Media
Ada dua metoda untuk sterilisasi media yang umum digunakan, yaitu dengan autoclave
dan filter membran. Media kultur, air destilasi dan campuran yang stabil dapat
disterilisasi dalam autoclave dengan menggunakan wadah yang ditutup dengan kapas,
aluminium foil atau plastik. Akan tetapi, larutan dari bahan-bahan yang bersifat tidak
stabil (heat-labile) harus menggunakan filter. Umumnya media diautoclave pada tekanan
15 psi dengan suhu 121oC. Untuk volume larutan per wadah yang sedikit (< 100 ml),
waktu yang dibutuhkan adalah 15-20 menit, tetapi untuk jumlah yang besar (2-4 liter)
selama 30-40 menit. Tekanan jangan melebhi dari 20 psi karena dapat mengakibatkan
dekomposisi karbohidrat dan bahan lain dalam media yang bersifat thermolabile.
Beberapa senyawa yang tergolong dalam kelompok protein, vitamin, asam amino,
ekstrak tanama, hormon dan karbohidrat ada yang bersifat thermolabile yang mungkin
akan mengakibatkan dekomposisi bila disterilisasi dengan autoclave, sehingga harus
disterilisasi dengan filter. Filter Millipore yang mempunyai porositas ± 0.2 mikron (µm)
merupakan salah satu filter yang banyak digunakan untuk sterilisasi bahan yang bersifat
thermolabile. Peralatan gelas yang akan menampung media yang disterilisasi dengan
filter harus sudah disterilisasi dahulu dengan autoclave.
Media yang sebagian mengandung komponen thermolabile, dapat dibuat dengan cara: (i)
larutan yang mengandung komponen heat-stable disterilisasi dengan autoclave, kemudian
didinginkan sampai suhu 50o-60oC pada kondisi steril (biasanya dalam laminar), (ii)
pada bagian lain dalam kondisi yang steril, larutan yang mengandung komponen besifat
thermolabile disterilisasi dengan filter, (iii) kedua larutan yang sudah disterilisasi dengan
metoda yang berbeda tersebut digabungkan dalam kondisi aseptik. d
d. Sterilisasi Bahan Tanaman
Mendapatkan bahan tanaman yang steril merupakan hal yang sulit. Meskipun bermacam
tindakan pencegahan sudah dilakukan, 95% kultur akan mengalami kontaminasi apabila
eksplan tidak didisinfeksi. Organ atau jaringan tanaman harus disterilisasi dengan larutan
disinfektan, karena sebagai bahan biologis tidak dapat dilakukan dengan cara pemanasan
yang ekstrim.
Tidak ada metoda yang baku untuk sterilisasi eksplan, sehingga waktu perendaman dalam
larutan disinfektan merupakan kisaran karena tergantung pada jenis bahan dan tanaman
yang akan disterilisasi. Larutan yang digunakan harus yang aman bagi jaringan/eksplan
tetapi bersifat dapat membunuh kontaminan baik bakteri maupun jamur. Untuk tanaman
berkayu, umbi dll. biasanya sebelum disterilisasi dengan larutan disinfektan harus
dibersihkan dahulu dengan sabun dan dibilas dengan air mengalir, tetapi tidak untuk
tanaman jenis herbaceous. Semua permukaan eksplan yang disteriliasi harus terendam
dalam sterilan, dan setelahnya harus dibilas dengan akuades steril sekurang-kurangnya
tiga kali.
Menentukan pH larutan pH larutan diukur berdasarkan konsentrasi ion hidrogen dalam
larutan. Skala pH mulai dari 0 (sangat asam) hingga 14 (sangat basa) dan skala 7 adalah
titik netral. pH dari media kultur umumnya diatur 5.7 ± 0.1 sebelum diautoclave. pH
dapat memengaruhi kelarutan ion-ion di dalam media, kemampuan agar untuk menjadi
gel dan selanjutnya mempengaruhi pertumbuhan sel-sel. Oleh karena itu akurasi pH
media menjadi faktor yang penting untk diperhatikan. Umumnya pengukuran pH media
menggunakan pH meter.
Fasilitas dan teknik untuk kultur jaringan tanaman (1)
10.1 Fasilitas
Untuk memenuhi kebutuhan kultur jaringan tanaman, laboratorium perlu tempat yang cukup untuk berbagai kegiatan. Lab harus menyediakan:
1. Fasilitas untuk persiapan media, sterilisasi, penyimpanan bahan kimia, persiapan teknik aseptik
2. Ruang transfer atau laminar air flow cabinet untuk teknik aseptik bahan tanaman3. Ruang pertumbuhan kultur4. Ruang mikroskop untuk pengujian dan evaluasi kultur, lebih baik lagi jika
dilengkapi dengan kamera
Pengaturan yang ideal adalah memisahkan ruang persiapan, ruang pengerjaan aseptik, ruang kultur dan operasional lab (gambar denah lab).
10.2 Prosedur pencucian alat
Kultur yang tidak dipakai lagi dan juga kultur yang terkontaminasi, harus diatoklaf untuk mencairkan agar dan mematikan mikroorganisme yang masih ada. Wadah kultur kemudian dibersihkan/ dikosongkan, dicuci dan direndam dalam detergen selama semalam. Alat – alat gelas kemudian digosok dengan sikat dan dicuci 3 kali dengan air mengalir lalu 3 kali dengan air destilata.Wadah atau botol kultur yang baru atau alat gelas baru lainnya yang digunakan dalam lab kultur jaringan ahrus dicuci bersih sebelum digunakan. Alat gelas sebaiknya disimpan pada tempat yang bersih setelah dikeringkan.
10.3 Persiapan media
Timbangan analitik untuk menimbang dalam jumlah yang sangat kecil (zat pengatur tumbuh, vitamin) dan juga timbangan yang lebih besar (untuk menimbang agar, karbohidrat) diperlukan untuk persiapan media. Bahan - bahan media sebaiknya diletakkan dekat timbangan. Sebuah kulkas di ruang media diperlukan untuk menyimpan larutan stok dan bahan kimia yang mudah terdegradasi pada suhu kamar. Hot plate dan magnetic stirrer diperlukan untuk melarutkan agar. pH meter diperlukan untuk mengatur pH media. Air destilata single dan dobel diperlukan pada ruan persiapan. Media sebaiknya disterilisasi dengan menggunakan autoklaf atau panci presto. Tergantung volume media dan ukuran botol kultur, waktu sterilisasi bervariasi antara 15 – 40 menit pada suhu 121oC dengan tekanan 103 K Pascal (lihat Table 10.1, diekstrak dari Biondi & Thorpe 1981).
Tabel 10.1. Waktu minimum yang diperlukan untuk mensterilisasi volume media yang berbeda dengan mengautoklaf pada suhu 120 derajat Celcius dan 103 KPa
Volume cairan dalam wadah (mL)
Waktu sterilisasi
20 – 50 15
75 20
250 - 500 25
1000 30
1500 35
2000 40
Penting dicatat bahwa zat pengatur tumbuh tertentu, vitamin dan antibiotic dipengaruhi oleh panas dan karenanya perlu sterilisasi dengan memakai filter. Sterilisasi filter atau filtrasi membrane adalah melewatkan larutan (sebaiknya dibuat dengan menggunakan air steril di dalam laminar air flow cabinet) melalui membran yang telah disterilisasi, dengan ukuran pori 0.45 uM atau 0.22uM dibawah tekanan rendah ke dalam wadah steril. Jumlah yang diinginkan dari larutan steril kemudian ditambahkan ke media kultur yang telah diautoklaf sebelumnya dan kemudian ditempatkan pada waterbath dengan suhu 40oC.
Laminar air flow cabinet biasanya disteriliasi permukaan dengan 70% alkohol (v/v). Meskipun alcohol asam (70% v/v, pH 2.0) mungkin lebih efektif sebagai desinfektan, jarang digunakan karena memiliki efek korosif pada permukaan logam. Semua alat dibenamkan pada larutan 70 – 80% (v/v) ethanol dan dipanasi dengan lampu spiritus sebelum digunakan. Agar aman, sebaiknya wadah yang mengandung alcohol untuk pemanasan (flaming) diletakkan pada suatu wadah dengan dasar yang berat. Ini mencegah jatuhnya wadah alcohol akibat tersenggol secara tidak sengaja yang dapat menyebabkan kebakaran dalam laminar. Sebagai aturan umum, buanglah alkohol yang tersisa pada beaker glass setelah melalukan pengkulturan.
Lab. Kultur JaringanLaboratorium Kultur Jaringan merupakan fasilitas pendukung untuk menunjang pengembangan teknologi di bidang pertanian (BIOTEKNOLOGI), terlebih khusus lagi membantu mahasiswa/i pertanian memperoleh ilmu pengetahuan lebih luas tentang bagaimana proses ataupun metode untuk mengisolasi bagian dari tanaman seperti sel, sekelompok sel, jaringan, dan organ sehingga bagian-bagian tersebut dapat memperbanyak diri dan beregenerasi menjadi tanaman lengkap kembali. Selain itu, mahasiswa/i pertanian juga dapat langsung melihat dan mempelajari teknik kultur jaringan yang mana dengan teknik kultur jaringan ini, produksi tanaman dalam jumlah besar dapat dilakukan dalam waktu yang singkat tentunya terutama misalnya; varietas-varietas unggul yang baru dihasilkan.Sarana penunjang yang memberikan pelatihan berupa pemahaman materi dan praktek kultur jaringan sehingga diperoleh peningkatan ilmu dan wawasan bagi mahasiswa tentang teknologi muktahir dalam perbanyakan tanaman. Laboratorim Kultur Jaringan juga diperuntukan bagi pihak luar yang berkepentingan dengan perbanyakan tanaman, seperti dalam hal pelatihan bagi kultur jaringan bagi mahasiswa dan guru biologi, serta
jasa penyediaan explant bagi stakeholder.Kegiatan praktikum materi teoritik seperti: Pembuatan Media, Sub-Culture Explant, Sterilisasi Tanaman dan Inkubasi dan Aklimatisasi.
Foto-Foto :
LABORATORIUM IDEAL1. Pengelolaan dan Personalia LaboratoriumDalam konteks laboratorium , pengelolaannya menyangkut beberapa aspek yaitu:• perencanaan, • penataan, • pengadministrasian, • pengamanan, perawatan, dan pengawasan 2. Perlengkapan Laboratorium• Perabot• Alat peraga pendidikan• Perkakas• Kotak PPPK beserta isinya• Alat pemadam kebakaran• Alat pembersih• Kumpulan buku
3. Prasarana dan Sarana Laboratoriuma. Fungsi : Sebagai tempat berlangsungnya kegiatan pembelajaran IPA secara praktek yang memerlukan peralatan khusus yang tidak mudah dihadirkan di ruang kelas.b. Kapasitas : Dapat menampung minimal 1 (satu) rombongan belajarc. Ratio : (satu) ruang laboratorium/sekolah Luas 2,4 m2 /peserta didikd. Dimensi : Luas ruang minimal 48 m2, termasuk ruang penyimpanan dan persiapan 18 m2.
Prasarana • Ruangan Laboratorium• Ruang persiapan• Ruang penyimpanan• Ruang gelap• Ruang timbang• Ruang praktikum• Kebun sekolah (rumah kaca)
SaranaSarana yang diperlukan laboratorium kimia meliputi peralatan, bahan, perkakas, perabot, dan media.
4. InstalasiInstalasi laboratorium kimia SMA meliputi instalasi listrik dan instalasi air. Instalasi listrik diperlukan untuk mengoperasikan peralatan dan penerangan pada saat kegiatan praktikum.
5. Pembuangan limbahLimbah dari laboratorium kimia umumnya hanya merupakan bahan-bahan yang habis pakai. Oleh karena itu diperlukan kotak sampah untuk pembuangan sementara limbah-limbah tersebut.
6. PPPKPPPK diperlukan untuk mengantisipasi:• Luka bakar• Mata kemasukan benda asing• Luka tergores/teriris• Bahan kimia masuk dalam mulut• Keracunan• Kejutan listrik• Membalut luka• Pingsan• Radiasi dan zat radioaktif
LABORATORIUM KULTUR JARINGAN
Laboratorium merupakan faktor terpenting dalam kultur jaringan. Menentukan lokasi yang tepat untuk laboratorium kultur jaringan, perlu memperhatikan beberapa aspek. Hal ini erat kaitannya dengan sifat dan ciri kultur jaringan yang mengharuskan kondisi aseptik dan lingkungan terkontrol. Laboratorium kultur jaringan sebaiknya tidak berlokasi di daerah berdebu, contohnya di dekat pabrik semen atau berasap kendaraan bermotor seperti tempat parkir mobil, terminal, atau statsiun kereta api. Laboratorium
sebaiknya juga tidak berlokasi di daerah yang berangin kencang, terlalu kering ( langka sumber air ), atau dekat dengan pembuangan sampah. Di tempat-tempat tersebut pengontrolan kontaminasi sulit dilakukan. Lokasi yang baik untuk laboratorium harus di lingkungan yang bersih, bebas polusi, tanpa keterbatasan air, dan yang terpenting diperlengkapi dengan prasarana transportasi utilities ( air, gas, dan listrik ) yang memadai. Ukuran dan jumlah ruangan yang diperlukan untuk sebuah laboratorium kultur jaringan dapat bervariasi, tergantung pada kebutuhannya. Beberapa hal yang sering menjadi bahan pertimbangan dalam merancang sebuah laboratorim kultur jaringan adalah besarnya kapasitas produksi planlet yang dikehendaki,besarnya modal awal yang ada, serta skala usaha yang dijalankan untuk komersial atau sekedar pemenuhan hobi memperbanyak tanaman. Fasilitas laboratorium kultur jaringan dibagi menjadi beberapa bagian yang fungsinya satu dengan yang lainnya berbeda dan persyaratannya pun berbeda pula. Laboratorium kultur jaringan harus dirancang sedemikian rupa, karena ada bagian–bagian atau ruangan harus dalam keadaan steril atau bebas mikroba. Tujuan yang utama dari kultur jaringan yaitu untuk membiakkan bagian tanaman dalam ukuran yang sekecil – kecilnya seperti sel, jaringan dan organ. Oleh karena itu, laboratorium kultur jaringan tanaman harus selalu mengutamakan dan memperhatikan tingkat sterilitas dari ruangan- ruangannya, sehingga terbebas dari kontaminasi dan mikroba yang tidak dikehendaki. Ruang-ruang dalam laboratorium kultur jaringan dikelompokkan menurut macam kegiatan yang ada di dalamnya, yaitu :
A.Ruang Tidak Steril 1.Ruang Tamu Laboratorium kultur jaringan tanaman harus dilengkapi dengan ruang tamu, karena biasanya laboratorium kultur jaringan tanaman selalu didatangi oleh tamu. Ruang tamu ini sebaiknya berada di bagian paling depan dan berhubungan langsung dengan ruang administrasi.2.Ruang Administrasi Dalam laboratorium kultur jaringan tanaman ruang administrasi digunakan sebagai tempat untuk memcatat surat tentang pembelian alat – alat laboratorium jika ada yang rusak.3.Ruang Staf Laboratorium kultur jaringan tanaman membutuhkan staf peneliti dalam jumlah banyak. Tujuannya agar dapat diadakan pembagian kerja sesuai dengan spesialisasinya maisng-masing. Di dalam ruang staf dapat pula dilaksanakan diskusi antar staf pada waktu berkumpul bersama. Di samping itu ruang staf ini dapat berfunsi sebagai tempat istirahat setelah seharian bekerja dengan tekun di dalam ruangan laboratorium.4.Kamar Mandi / Wc Laboratorium kultur jaringan tanaman harus selalu dalam suasana bersih untuk menghindari kontaminasi oleh mikroba. Bila pekerja akan memasuki ruang inokulasi, tubuh dan pakaian harus bersih, tidak berkeringat, dan tidak berdebu. Untuk inilah maka kamar mandi dan wc perlu disediakan dengan syarat harus selalu dalam keadaan bersih.5.Ruang Ganti Pakaian Untuk menghindari timbulnya kontaminasi oleh mikroba, maka karyawan di dalam laboratorium kultur jaringan tanaman harus memakai pakaian yang bersih, dalam arti baru di cuci. Oleh karena itu di dalam laboratorium kultur jaringan tanaman harus disediakan ruang untuk ganti pakaian. 6.Ruang Penyimpanan Bahan Kimia Komponen bahan kimia penyusun media kultur
jaringan tanaman sangat banyak macam jenisnya. Oleh karena itu, penyimpanannya memerlukan pengaturan khusus supaya mudah mencarinya. Penyimpanan yang tidak teratur akan memperlambat pekerjaan. Maka diperlukan tempat penyimpanan bahan kimia yang dibuat dari kayu maupun kaca.7.Ruang Penimbangan Dan Sterilisasi Dalam membuat larutan kita harus terlebih dahulu menimbang bahannya. Alat yang digunakan untuk menimbang sering kita sebut timbangan analitik digunakan dalam ruangan tersendiri yang bentuk dan konsentrasinya dibuat sedemikian rupa sehingga ruangan ini tidak terpengaruh oleh getaran-getaran dan hembusan angin yang dapat mempengaruhi hasil penimbangan.
B.Ruang Tidak Mutlak Steril 1.Ruang Planlet Dalam ruangan ini menggunakan alat pendingin (AC), maka temperatur ruangan dapat mencapai sekitar 25oC sehingga ideal bagi tumbuhan planlet. Botol-botol yang berisi planlet jumlahnya dapat mencapai ratusan bahkan ribuan. Oleh karena itu dalam ruangan ini harus disediakan rak-rak alumunium yang dasarnya berlobang-lobang untuk meletakkan botol-botol tersebut secara teraatur dan rapi.2.Ruang Inkubator Eksplan yang sudah ditanam dalam media kultur jaringan perlu dipantau pertumbuhannya setiap hari. Untuk pemantauan ini memerlukan ruangan yang khusus yang keadaannya lebih steril daripada ruangan planlet, yaitu ruangan Inkubator. Ruangan inkubator harus memiliki suhu kurang lebih 25oC dan harus dilengkapi dengan lampu-lampu neon, karena eksplan yang ditumbuhkan dalam ruangan inkubasi membutuhkan temperatur dan cahaya diatur dan disesuaikan jenis eksplannya. Untuk menghemat tempat, maka dalam ruang inkubator ini dapat dilengkapi dengan rak-rak dari kayu dengan dinding rapat tetapi alasnya berlubang-lubang supaya aerasi dapat berjalan dengan baik. Setiap kotak pada rak ini dilengkapi dengan da-light neon lamp 20 watt yang jaraknya 40-60 cm diatas permukaan tutup botol eksplan.
C.Ruang Mutlak Steril atu-satunya ruangan di dalamlaboratorium kultur jaringan tanaman yang mutlak steril adalah ruangan penanaman (Inokulasi). Ruangan ini biasanya sengaja dibuat dengan ukuran yang tidak sangat besar. Tujuannya adalah agar pelaksanaan sterilisasi ruangannya tidak membutuhkan waktu yang lama dan tidak mengalami kesulitan. Dinding ruangan penanaman (Inokulasi) dilengkapi dengan porselin, sehingga sterilisasi mudah dilakukan . alat yang digunakan untuk melakukan penanaman (Inokulasi) adalah Laminar Air Flow Cabinet (LAFC) yang biasanya diletakkan pada salah satu sisi ruangan. Letak barang-barang di dalam ruangan ini harus diatur secara rapi dan teratur agar tidak mengganggu pelaksanaan sterilisasi ruangan. Disebelah kanan Laminar Air Flow Cabinet sebaiknya terdapat meja porselin. Meja ini digunakan untuk meletakkan alat-alat yang diperlukan sebelum melakukan penanaman. Alat-alat seperti botol-botol media, skalpel, pinset, petridish, lampu spirus dan lain sebagainya diletakka di atas meja tersebut dan disemprot dengan alkohol 96% dahulu sebelum masuk ke dalam Laminar Air Flow Cabinet. Aerasol sterilisation dapat juga dilakukan dengan menggunakan lampu ultra violet (UV lamp). Lampu ini digunakan untuk sterilisasi udara, sinarnya dipilih yang kuat sesuai dengan volume ruangan lampu UV ini harus dinyalakan pada saat ruangan tidak digunakan. Dan harus dimatikan ketika akan melakukan penanaman. Dalam semua ruangan terdapat beberapa peralatan yang harus ada dalam setiap ruangan laboratorium
kultur jaringan. Setidaknya harus ada peralatan sebagai berikut: 1.Ruang Inokulasi
2.Ruang Pertumbuhan
3.Ruang Persiapan
4.Ruang Timbang
5.Ruang Dapur
