kegiatan 1 pengenalan dan sterilisasi alat tujuan...

Modul Kultur Jaringan

Prodi Agroekoteknologi Fakultas Pertanian Universitas Trunojoyo Madura

1

Kegiatan 1

PENGENALAN DAN STERILISASI ALAT

Tujuan Instruksional Umum

Setelah melakukan kegiatan ini mahasiswa dapat mengenal dan memahami fungsi alat yang digunakan

untuk kegiatan kultur jaringan

Tujuan Instruksional Khusus

1. Mengetahui nama, fungsi dan prosedur penggunaan alat untuk kegiatan kultur jaringan

2. Memahami prosedur sterilisasi alat

Dasar Teori

Teknik kultur jaringan akan berhasil dengan baik apabila syarat yang diperlukan terpenuhi. Syarat-syarat tersebut meliputi pemilihan eksplan, penggunaan medium yang cocok, keadaan yang aseptik dan pengaturan udara yang baik.(Daisy dan Ari, 1994)

Untuk mendapatkan keadaan yang aseptic, salah satunya adalah alat-alat yang digunakan dalam kegiatan kultur jaringan harus dalam keadaan steril. Alat-alat yang steril akan mampu meminimalkan kontaminan pada media dan plantlet yang dikulturkan.

Sterilisasi Alat

Semua alat yang akan digunakan di ruang penaburan (LAF) termasuk LAF itu sendiri harus dalam keadaan steril. Menurut bentuk dan fungsinya sterilisasi alat yang digunakan dalam kegiatan kultur jaringan ada beberapa macam:

1. Sterilisasi secara fisik yaitu menggunakan panas

a. Sterilisasi menggunakan panas basah dengan autoklaf

Autoklaf adalah alat sterilisasi untuk alat dan medium kultur jaringan. Alat yang berupa glassware

maupun dissecting kit sebelum digunakan harus disterilkan terlebih dahulu, begitupun juga media yang

telah dibuat dan aquadest. Dengan Pemanasan dalam autoklaf maka bakteri dan mikrobia dapat mati

akibat suhu tinggi (120o C) dan tekanan uap air yang besar (1,5 kg/cm2) selama 15 menit.

b. Sterilisasi menggunakan panas kering dengan oven

Pada kegiatan kultur jaringan lebih banyak menggunakan autoklaf daripada oven. Namun pada

hakikatnya oven juga bisa digunakan untuk mensterilkan alat-alat yang digunakan dalam kegiatan kultur

jaringan seperti glassware maupun dissecting kit.

http://eshaflora.com/



2

Alat tanam seperti pinset dan gunting dapat juga disterilkan dengan pembakaran atau dengan

pemanasan dalam bacticinerator.

2. Sterilisasi secara kimia yaitu menggunakan bahan kimia, pada umummnya yang digunakan larutan

alcohol 70 %

Ruang penabur atau Laminar Air Flow juga membutuhkan kondisi steril. Untuk membuat kondisi tersebut

selain menggunakan sinar UV, sebelum dan sesudah penggunaan LAF harus disemprot dan dibersihkan

dengan alcohol 70 %. Khusus untuk scapel, gagangnya dapat disterilkan dengan pemanasan namun

pisaunya dapat menjadi tumpul bila dipanaskan dalam temperatur tinggi. Oleh karena itu dianjurkan

cara sterilisasi dengan pencelupan dalam alkohol atau larutan kaporit.

Bahan dan Alat

Bahan:

1. Alkohol 70 %

2. Kertas Pembungkus atau aluminium foil

Alat – Alat:

1 Laminar Air Flow(Ruang Penabur)

2 Autoclave : Sterilisasi Basah

3 Glassware (petridish, beckerglass, labu ukur,elemeyer , gelas ukur, pipet ukur, botol media,

pengaduk,)

4 Pinset, scalpel, gunting :alat untu menanam

5 Timbangan analitik: Menimbang Bahan

6 Hot plate dan Stirer : Memanaskan dan mengaduk bahan/media

7 Bunsen: sterilisasi dengan panas

8 sprayer alcohol : sterilisasi secara kimia



3

Prosedur Kegiatan

A. Pengenalan Alat

Semua alat yang ada digambar/difoto disertai keterangan tentang fungsi dan cara kerja dari masing-

masing alat.

B. Sterilisasi Alat

1. Alat-alat yang akan disterilkan seperti pinset, petridish, skalpel, pinset, gunting terlebih dahulu

dicuci bersih dan dikeringkan kemudian dibungkus kertas aluminium.

2. Hubungkan stop kontak dengan listrik

3. Buka sedikit pengatur udara

4. Buka tutup Autoclave dengan memutar pegangan kebalikan arah jarum jam

5. Angkat keluar kedua keranjang

6. Isi autoclave dengan air aquades sampai batas

7. isi pembuangan udara dengan air aquades 1/3 bagian

8. masukkan alat dan atau bahan yang akan diautoclave kedalam keranjang

9. masukkan keranjang beserta alat dan atau bahan ke dalam autoclave

10. tutup autoclave dengan memutar pegangan searah jarum jam

11. Proses Autoclave dimulai dengan menekan tombol start sampai terdengar bunyi ‘teet’ 2 kali

12. Suhu dan Tekanan akan naik, tunggu sehingga terdengar bunyi mendidih pada pembuangan

udara kemudian tutup rapat pengatur udara

13. Proses Autoclave ini akan berakhir ketika alat berbunyi teet teet teet

14. tunggu sampai jarum tekanan dan suhu turun sampai batas aman

15. buka pengatur udara, kemudian buka tutup autoclave

16. keluarkan alat/bahan yang disterilisasi dan letakkan di tempat yang aman

17. setelah kegiatan selesai lepas stop kontak.

18. Setelah selesai, alat-alat yang disterilisasi diletakkan di tempat yang aman dan terlindung agar

tetap steril seperti di dalam ruang kultur.

C. Sterilisasi Laminar Air Flow

I.SEBELUM DIGUNAKAN

1. Hidupkan LAF dengan menghubungkannya dengan sumber listrik

2. Hidupkan Fan dan Light (khusus untuk LAF ESCO: jika fan hidup maka otomatis UV tidak bisa

dihidupkan begitu juga sebaliknya)

3. Bersihkan semua bagian dalam LAF dengan disemprot alkohol dan kemudian dibersihkan

dengan kertas tissue

4. Alat-alat yang akan digunakan dalam kegiatan kultur disemprot alcohol 70% terlebih dahulu

kemudian masukkan ke dalam LAF

5. Fan dan Light dimatikan

6. Hidupkan lampu UV (selama 30 menit)

7. Setelah lampu UV mati, hidupkan Fan dan Light penanaman di LAF siap dilakukan



4

II.SETELAH DIGUNAKAN

1. Jika kegiatan penanaman sudah selesai dilakukan keluarkan semua alat yang digunakan

2. Bersihkan semua bagian dalam LAF dengan disemprot alkohol dan kemudian dibersihkan

dengan kertas tissue

3. Fan dan Light dimatikan

4. Hidupkan lampu UV (selama 30 menit)

5. Setelah lampu UV mati, cabut stop kontak

Data Pengamatan

No Naman Alat Fungsi Cara kerja

Laporan Kegiatan

Laporan kegiatan ini berisi uraian tentang : latar belakang dan tujuan melakukan sterilisasi, tinjauan

pustaka tetang sterilisasi, pembahasan tentang kegiatan yang dilakukan, kesimpulan dan daftar pustaka.



5

Kegiatan 2

PEMBUATAN LARUTAN STOK


Setelah melakukan kegiatan ini mahasiswa mampu membuat larutan stok

Tujuan Instruksional khusus

Memahami prosedur pembuatan larutan stok

Dasar Teori

Penimbangan satu per satu komponen media untuk setiap pembuatan media kultur adalah tidak praktis,

dan hanya dapat dilakukan jika jumlah zatnya cukup besar untuk ditimbang. Selain itu akan

menghabiskan banyak waktu dan mengurangi ketepatan. Kadang-kadang pula timbangan yang

dibutuhkan untuk menimbang sejumlah kecil bahan tidak tersedia dalam laboratorium. Kendala ini dapat

diatasi dengan membuat larutan stok terlebih dahulu.

Larutan stok adalah larutan yang berisi satu atau lebih komponen media yang konsentrasinya lebih tinggi

daripada konsentrasi komponen yang diperlukan dalam formulasi media yang akan dibuat. Larutan stok

dalam kegiatan kultur jaringan dikelompokkan dalam: larutan stok unsur makro, larutan stok unsur

mikro, larutan stok Fe, larutan stok vitamin dan larutan stok hormon. Larutan stok bisa dibuat dengan

konsentrasi 10, 100, atau bahkan 1000 kali lebih pekat.

Larutan stok sebaiknya disimpan dalam ruang gelap dan bersuhu rendah, karena ada beberapa bahan

yang tidak tahan cahaya dan suhu tinggi. Larutan stok vitamin tidak dapat disimpan terlalu lama, bisa

dibuat untuk digunakan dalam 1 – 2 minggu, larutan stok hormon dapat disimpan antara 2 – 4 minggu,

sedangkan larutan stok unsur hara dapat disimpan 4 – 3 minggu. Larutan stok yang sudah tersimpan

lama biasanya mengendap dan ditumbuhi mikroorganisme. Larutan yang sudah terkontaminasi

mikroorganisme ini tidak dapat digunakan lagi. Oleh sebab itu kondisi tempat simpan dan wadah larutan

harus diusahakan sesteril mungkin. Dengan adanya larutan stok ini maka pembuatan media kultur

selanjutnya dilakukan hanya dengan teknik pengenceran dan pencampuran saja.

Jika seluruh larutan stok yang dibutuhkan sudah dibuat, gula dan pemadat medianya ditimbang sesuai

kebutuhan, setelah itu kita dapat meramu dan membuat media sesuai dengan yang kita inginkan. Secara



6

umum media yang cocok untuk semua jenis tanaman terutama herba adalah medi MS (Murashige and

Skoog) sedangkan untuk tanaman anggrek adalah media VW (Vacin and Went)

Tabel 1. Tabel larutan stok untuk Media Murashige and Skoog

No Makronutrient

Konsentrasi larutan

(mg/liter)

1 NH4NO3 1650

2 KNO3 1900

3 CaCL2.2H2O 440

4 MgSO4.7H2O 370

5 KH2PO4 170

Mikronutrient

6 MnSO4.4H2O 22,3

7 ZnSO4.7H2O 8,6

8 H3BO3 6,2

9 KI 0,83

10 CuSO4.5H2SO4 0,025

11 NaMoO4.2H2O 0,25

12 CoCl2.6H2O 0,025

13 FeSO4.7H2O 27,8

14 NaEDTA.2H2O 37,3

Vitamin

15 Mio-Inositol 100

16 Thiamin HCl 0,1

17 Nikotinic Acid 0,5

18 Peridoksin HCl 0,5

19 Glysin 2

Bahan Tambahan

20 IAA 1,0 – 3,0

21 Kinetin 0,04 – 10

22 Sukrosa 30000

23 Agar 7000



7

T/abel 2. Bahan yang diperlukan untuk media Vacin and Went untuk tanaman anggrek

No Nama bahan

kebutuhan per 6 liter

media

1 Ca3PO4 0,20 g

2 KNO3 0,25 g

3 KH2PO4 0,25 g

4 MgSO4 0,25 g

5 FeSO4 2,8 g

6 MnSO4 0,8 g

7 NH4SO4 0,25 g

8 Na2 EDTA 3,8 g

9 Air kelapa muda 11 ml

10 Pisang 900 g

11 Kentang 5 g

12 Agar-agar 55 g

13 Gula 120 g

14 Bayfolan 5 ml

15 Fish Emulsion 25 ml

16 Vitamin B-1 25 ml

17 Atonik 5 ml

18 Arang Aktif 100 g



8

Bahan dan Alat

1. Bahan kimia : seperti pada tabel 1 atau tabel 2, aquadest steril

2. Alat : labu ukur, gelas ukur, becker glass, pipet ukur, timbangan analitik, scapel, corong

Prosedur Kerja

Skema Pembuatan Media Kultur

Larutan stok komponen media MS dengan volume 100x

Masing-masing dikali 10 ml

Ditambah 100 mg mio inositol

Ditambah 30 gr sukrosa

Ditambah air suling sampai + ¾ volume akhir

pH diatur 5,6 – 5,7 dengan NaOH 0,1 N atau HCl 0,1 N

ditambah agar 7 g dan ditambah air suling sampai volume akhir

panaskan sampai larut

masukkan botol



9

autoklaf selama 20 menit, 121 C

simpan di ruang yang bersuhu 25 C

Laporan Kegiatan



10

Kegiatan 3

PEMBUATAN MEDIA


Memahami pentingnya meramu media kultur jaringan


Setelah melakukan kegiatan ini mahasiswa mampu membuat media MS (Murashige and Skoog)

Dasar Teori

Media kultur in vitro adalah media buatan yang mengandung senyawa organic, anorganik dan zat

pengatur tumbuh. Media ini mempunyai 2 fungsi yaitu sebagai penyedia nutrisi dan mengarahkan

pertumbuhan melalui zat pengatur tumbuh. Oleh karena itu media yang memenuhi syarat adalah yang

mengandung unsure hara makro dan mikro dengan perbandingan tertentu, sumber energy seperti

sukrosa, vitamin dan zat pengatur tumbuh. Keseimbangan dari komponen tersebut akan tampak pada

pertumbumbuhan yang terjadi.

Berdasarkan fisik dari media dibedakan menjadi media padat dan media cair. Media ini mengandung

semua komponen kimia yang dibutuhkan oleh tanaman hanya saja untuk media padat ditambahkan zat

pemadat berupa agar-agar batangan, agar-agar bubuk, atau agar-agar kemasan kaleng yang yang

memang khusus digunakan untuk media padat kultur jaringan

Bahan dan Alat

1. Bahan yang digunakan adalah

larutan stok yang telah dibuat pada praktikum sebelumnya

sukrosa/ gula

agar-agar

aquadest steril

2. Alat yang digunakan:

timbangan analitik,

tabung erlenmeyer,

gelas ukur besar dan kecil,

pipet ukur dan pipet pump,



11

pengaduk kaca dan atau stirer,

kompor gas dan atau hot plate,

pH meter atau kertas pH ,

botol media dan plastik tahan panas penutup botol

Prosedur percobaan

1. Menyiapkan alat-alat dan bahan-bahan yang akan digunakan, yaitu :

2. Mencampurkan larutan stok hara makro, mikro, Fe-chelat, vitamin dan hormon sesuai kebutuhan

ke dalam erlenmeyer sambil digoyangkan agar larutan dapat homogen.

3. Menambahkan gula dalam larutan media tersebut kemudian menera larutan tersebut dengan

aquades steril dengan menggunakan gelas ukur sesuai volume media yang dibutuhkan kemudian

mengaduknya dengan stirer hingga semua bahan tercampur dengan sempurna

4. Melakukan pengukuran pH, (pastikan pH meter sudah dikalibrasi terlebih dahulu), kadar pH yang

dibutuhkan adalah 5,8. Apabila pH masih dibawah 5,8 maka perlu ditambahkan beberapa tetes

NaOH atau KOH sampai mencapai kadar pH 5,8. Tetapi jika kadar pH terlalu tinggi atau lebih dari

5,8 maka perlu ditambahkan beberapa tetes HCl sampai kadar pH 5,8.

5. Memasukkan pemadat media (agar-agar 7g/L) ke dalam larutan media. Setelah itu media dapat

langsung dipanaskan dengan menggunakan hotplate atau dipanaskan di atas kompor gas. Selama

pemanasan berlangsung, hendaknya larutan media tersebut diaduk terus-menerus hingga agar-

agar terlarut seluruhnya. Pemanasan dihentikan sampai larutan terlihat bening dan mulai terlihat

gelembung-gelembung udara

6. Setelah larut, menuangkan media tersebut ke dalam botol-botol media yang telah dipersiapkan

sesuai kebutuhan tergantung besar kecilnya botol. Kemudian menutup botol yang sudah terisi

media dengan menggunakan plastik tahan panas atau aluminium foil. Diusahakan supaya botol

benar-benar tertutup rapat.

7. Memasukkan botol-botol tersebut ke dalam autoclaf dan disterilisasi dengan suhu 121°C dengan

tekanan 1,5 kg/cm2 selama 20-30 menit.

8. Menyimpan media yang sudah disterilisasi di dalam ruang penyimpanan media ber-AC (suhu 24 -

26°C) selama 3 hari sebelum digunakan untuk memastikan bahwa media tersebut tidak

terkontaminasi.



12

Laporan Kegiatan



13

Kegiatan 4

PENANAMAN I DI LAMINAR AIR FLOW (SUBKULTUR )


Mahasiswa dapat memahami manfaat dari tahapan prosedur penanaman eksplant


Setelah melakukan kegiatan ini mampu melakukan penanaman di laminar air flow

Bahan dan Alat

1. Bahan : eksplat streril, media tanam, alkohol 70%,

2. Alat : Laminar air flow, Pinset, Spatula, Petridish, Bunsen, gunting

Dasar Teori

Kultur in vitro merupaka teknik budidaya (kultur) sel, jaringan maupun organ di dalam botol gelas (in

vitro) dalam lingkungan terkendali dan aseptic (bebas mikroorganisme). Kondisi yang tidak aseptic akan

mengakibatkan kontaminasi pada bahan tanam/eksplat dan media kultur yang mengakibatkan kematian

jaringan eksplant dan kerusakan komposisi media kultur.

Kultur jaringan akan lebih besar presentase keberhasilannya bila menggunakan jaringan meristem.

Jaringan meristem adalah jaringan muda, yaitu jaringan yang terdiri dari sel-sel yang selalu membelah,

dinding tipis, plasmanya penuh dan vakuolanya kecil-kecil. Teknik kultur jaringan sebenarnya sangat

sederhana, yaitu suatu sel atau irisan jaringan tanaman yang sering disebut eksplan secara aseptik

diletakkan dan dipelihara dalam medium padat atau cair yang cocok dan dalam keadaan steril. dengan

cara demikian sebagian sel pada permukaan irisan tersebut akan mengalami proliferasi dan membentuk

kalus. Apabila kalus yang terbentuk dipindahkan ke dalam medium diferensiasi yang cocok, maka akan

terbentuk tanaman kecil yang lengkap dan disebut planlet. Dengan teknik kultur jaringan ini maka

dengan hanya dari satu irisan kecil suatu jaringan tanaman dapat dihasilkan kalus yang dapat menjadi

planlet dalam jumlah yang besar.

Prosedur kerja

1. Buka pintu Laminair Air Flow .

2. Kemudian semprot semua ruangan dalam Laminair menggunakan alkohol 70 % dan dibersihkan

menggunakan tissue steril.

3. Masukkan semua alat (pinset, pisau skalpel, api bunsen, korek api, karet, petridis, botol kecil,

plastik) dan bahan ( eksplan dan media) ke dalam laminair

4. Tutup kembali pintu laminair dan nyalakan sinar UV selama 1 jam.



14

5. Setelah 1 jam, matikan sinar UV dan kemudian nyalakan blower dan lampu neon serta buka

kedua pintu laminar

6. Sebelumnya lepas semua asesoris yang dipakai(untuk mengurangi kontaminasi), kemudian

semprot tangan dengan alcohol 70% sebelum bekerja di LAF

7. Setelah itu masukkan eksplan yang akan ditanam/disubkultur kedalam laminair

8. Sebelum dan sesudah menggunakan pinset, gunting atau scalpel harus selalu di bakar diatas

Bunsen dan dicelup alcohol 70%

9. Eksplan selanjutnya diletakkan pada media tanam dengan cara membuka tutup botol media

sambil mendekatkan mulut botol ke api bunsen dan menutupnya kembali.

10. Selanjutnya dilakukan penyimpanan ke dalam rak kultur dengan penerangan lampu neon 20 watt

serta mengatur suhu pada temperature 18-21ºC.

11. Setelah semua kegiatan menanam selesai, keluarkan semua alat dan bahan dari laminair, serta

semprot dengan alkohol 70% bagian dalam laminair untuk menjaga kondisi tetap steril,

kemudian hidupkan UV kembali.

Prosedur penanaman Sub kultur anggrek

Yaitu memindahkan tanaman hasil kultur jaringan yang pada botol sebelumnya sudah terlalu

padat populasinya dan media sudah akan habis ke botol media baru.

1. Semprot alcohol botol anggrek kemudian masukkan ke LAF

2. Kegiatan didalam LAF, buka tutup botol anggrek

3. Ambil beberap tanaman anggrek kecil dengan pinset panjang kemudian letakkan di petri

steril

4. Pindahkan tanaman dari petri steril ke botol media yang sudah disiapkan dengan pinset yang

lebih kecil.

5. Tutup botol dan letakkan hasil subkultur di rak yang tersedia

6. Sebelum dan sesudah menggunakan pinset, gunting atau scalpel harus selalu di bakar diatas

Bunsen dan dicelup alcohol 70%

Laporan Kegiatan



15

Kegiatan 5

PENANAMAN I I DI LAMINAR AIR FOLOW DAN

STERILISASI BAHAN TANAM/EKSPLANT


Mahasiswa dapat memahami manfaat sterilisasi bahan tanam (eksplan)


Setelah melakukan kegiatan ini mahasiswa mampu melakukan proses sterilisasi bahan tanam (eksplan)

Bahan dan Alat

1. Bahan :

bahan Eksplant (dapat berupa biji dan atau tanaman),

aquadest steril,

Fungisida dan Bakterisida,

HgCl2,

Sodium hipoklorit atau Klorox/bayclin,

betadine

Alkohol 70 %

2. Alat :

dissecting kit (pinset, scalpel, gunting) steril,

petridish steril,

glassware berupa beckerglass , gelas ukur steril

Dasar Teori

Sterilisasi eksplan dapat dilaksanakan dengan dua acara yaitu secara mekanik dan kimia.

a. Sterilisasi eksplan secara mekanis

Cara ini digunakan untuk eksplan yang keras atau berdaging, yaitu dengan membakar eksplan

diatas lambu spirtus sebanyak 3 kali. Eksplan yang di sterilkan dengan cara ini misalkanya biji

salak, biji kapulaga, buah anggrek, buah anturium dll.

b. Sterilisasi eksplan secara kimiawi

Sterilisasi secarakimiawi digunakan untuk eksplan yang lunak (jaringan muda) seperti daun,

tangkai daun, anther dan sebagainya. Bahan-bahan kimia yang digunakan untuk sterilisasi antara

lain:



16

1. sodium hipoklorit (nama dagangnya bayclin) konsentrasi yang digunakan antara 5-10 %

tergantung kelunakan eksplan dengan waktu perendaman 5-10 menit. Pembuatan larutan

clorox missal dengan perbandingan 1:4 (25 ml Clorox ditambah aquades steril 100 ml

kemudian ditambah tween -20 1 tetes.

2. Mercuri klorit (nama dagang sublimat 0,05%) penggunaan bahan kimia ini harus hati-hati

karena bersifat racun. Cara perlakuan sterilisasi dengan sublimat sama dengan sterilisasi

dengan Clorox hanya waktunya lebih pendek. Bila sterilisasi terlalu lama dapat menyebabkan

kerusakan pada eksplan (berwarna coklat) sehingga ekplan tersebut tidak mampu tumbuh

menjadi kalus

3. Alkohol 70% penggunaan bahan ini sama dengan cara penggunaan bahan yang lain diatas.

Sterilisasi eksplan merupakan bagian yang paling rumit dalam proses produksi bibit melalui kultur

jaringan. Sterilisasi biasanya dilakukan dalam beberapa tahap yaitu eksplan dicuci dengan deterjen atau

bahan pencuci lain, selanjutnya direndam dalam bahan-bahan sterilan baik yang bersifat sistemik atau

desinfektan. Apabila kontaminan tetap ada maka konsentrasi dan lamanya perendaman dalam sterilan

dapat ditingkatkan. Bahan yang digunakan serta metode sterilisasi biasanya berbeda untuk setiap bahan

tanaman, sehingga bahan dan cara tersebut belum tentu berhasil apabila diaplikasikan pada bahan yang

berbeda serta waktu yang berlainan. Dengan demikian, setiap pekerjaan kultur jaringan, cara sterilisasi

eksplan harus dicoba beberapa kali.

Prosedur Kerja

A. Untuk eksplan dari batang daun, daun

1. Mengambil Eksplan tanaman yang sudah disiapkan

2. bahan eksplant dibersihkan dengan menggunakan air mengalir hingga kotoran yang menempel

hilang

3. Memotong bagian tanaman dan menjadikan eksplan

4. Merendam eksplan kedalam larutan antiseptic sebanyak 3-5 tetes membawa kedalam laminar air

flow cabinet

5. Bilas dengan air steril sebanyak 3 kali

6. Membuat larutan clorox 5% & 10%

7. Merendam eksplan kelarutan clorox 10 % selama 5 menit


9. Merendam eksplan kelarutan clorox 5 % selama 10 menit


11. Merendam eksplan kedalam larutan antiseptic sebanyak 3-5 tetes

12. Penanaman/ inisiasi eksplant siap dilakuakan



17

Prosedur 3 sampai 12 dilakukan di dalam Laminar Air Flow

B. Prosedur kerja Untuk bahan tanam dari Buah anggrek

1. Mengambil biji dari tanaman yang sebelumnya sudah disiapkan

2. Biji dicuci bersih dengan sabun dan air mengalir

3. Semprot alcohol 70%

4. Simpan di Petridis steril dan bawa masuk ke LAF

5. Kegiatan didalam LAF ambil buah dan bakar di Bunsen 3 x

6. Letakkan Petridis steril yang lain kemudian buka kulit buah

7. Biji anggrek yang seperti debu ambil menggunakan scalpel steril dan dikulturkan pada botol

media yang sudah disiapkan

8. Setelah selesai proses kultur, tutup botol dan letakkan hasil kultur di rak yang tersedia

Laporan Kegiatan



18

Kegiatan 6

AKLIMATISASI TANAMAN ANGGREK

Aklimatisasi adalah suatu proses yang terjadi pada suatu tanaman atau organisme hidup lain agar dapat

menyesuaikan diri dengan kondisi atau situasi lingkungan dan iklim yang baru dengan bantuan manusia.

Perbanyakan tanaman anggrek menggunakan teknik kultur jaringan yang hasilnya dikemas dalam botol.

Bibit tanaman anggrek dalam botol ini memiliki kondisi lingkungan yang aseptic dan kebutuhan

nutrisinya tersedia dengan cukup namun selama proses tumbuhnya dari biji menjadi tanaman selalu

dalam kondisi linkungan yang suhu, kelembaban dan sinar/cahayanya diatur didalam laboratorium dan

biasanya lebih rendah dari suhu lingkungan luar. Pemindahan bibit tanaman anggrek keluar dari botol

menuju lingkungan luar inilah yang disebut aklimatisasi. Oleh karena itu perlu dilakukan proses adaptasi

(aklimatisasi) agar tanaman secara perlahan mampu menyesuaikan dengan lingkungan yang baru dan

mampu memenuhi sendiri kebutuhan untuk pertumbuhannya.

TUJUAN :

Untuk mengetahui proses aklimatisasi bibit anggrek dan faktor-faktor yang mempengaruhinya

serta meningkatkan keterampilan mahasiswa dalam melakukan aklimatisasi anggrek.

ALAT :

Alat yang digunakan adalah pinset , penyemprot (hand sprayer) , bak plastic, pot plastic kecil (

fleksibel pot), koran bekas, gabus, potray

BAHAN :

Bahan yang digunakan adalah spagnum, bibit anggrek dalam botol, pupuk anggrek ‘Adaptan7’

(mengandung senyawa organic dan 0,07 % zpt) , fungisida ‘Dithane’.

Prosedur kerja :

A. Persiapan media :

1. Memotong gabus dengan ukuran potongan 1x1 cm (sesuai ukuran pot)

2. Mempersiapkan spagnum sebagai media tumbuh

B. Persiapan bibit :

1. Membuat larutan fungisida (1 g/L air)

2. Keluarkan bibit anggrek dari dalam botol dengan menggunakan pinset secara hati-hati



19

3. Bersihkan bibit anggrek dari media agar-agar dalam bak plastic yang telah diisi larutan

fungisida

4. Tiriskan bibit tersebut pada alas koran bekas, bibit yang terpilih dihitung jumlah akar dan

daunnya

C. Penanaman

1. Isilah dasar fleksibel pot dengan 2-3 potongan gabus untuk membuat media tumbuh tidak

tergenang air

2. Letakkan 1-2 bibit anggrek di atas potongan gabus kemudian tambahkan spagnum sampai

permukaan fleksibel pot

3. Letakkan fleksibel pot yang telah ditanami bibit anggrek pada tray kemudian simpan di

rumah plastic (usahakan suhu lebih rendah dari lingkungan luar untuk memberi kesempatan

tanaman beradaptasi)

4. Lakukan penyiraman dengan air secukupnya menggunakan penyemprot

D. Pemeliharaan

1. Menjaga kelembaban media dengan cara melakukan penyiraman dengan air setiap hari

2. Setelah bibit berumur 1 minggu setelah tanam (sudah keluar akar baru), lakukan pemupukan

menggunakan “Adaptan7” (1 cc/L air) setiap 4 hari sekali.



20

PETUNJUK PRAKTIKUM

KULTUR JARINGAN TANAMAN

Oleh:

Ir. Sinar Suryawati,Msi Yusy Purwaningsih, SP Yusy Purwaningsih,SP

Digunakan untuk kalangan sendiri

PRODI AGROTEKNOLOGI FAKULTAS PERTANIAN

UNIVERSITAS TRUNOJOYO MADURA

Nama Praktikan : ……………………………… NRP : ……………………………...

kegiatan 1 pengenalan dan sterilisasi alat tujuan...

Documents