isolasi dan identifikasi cendawan

agustin I Seta -2004

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI

CENDAWAN


ISOLASI KAPANG

RUANG ISOLASI PERSIAPAN ALAT DAN BAHAN SPESIMEN PROSEDUR KEAMANAN DI LAB


RUANG ISOLASI RUANG ISOLASI DALAM KEADAAN

TERTUTUP PERTUKARAN UDARA DIBUAT

SEMINIMAL MUNGKIN ALKOHOL DAN LAMPU BUNSEN SELALU

TERSEDIA SERING DILAKUKAN PEMBERSIHAN

DEBU DENGAN ALAT PENYEMPROT AC DIMATIKAN DAN JENDELA TERTUTUP.


ALAT DAN MEDIA BIAKAN KEBANYAKKAN ALAT UNTUK BAKTERIOLOGI

SAMA DENGAN ALAT UNTUK ISOLASI KAPANG SEPERTI AUTOCLAVE, ALAT GELAS, TIMBANGAN DAN SPATULA, CAWAN PETRI UKURAN 6 ATAU 9 Cm

HOMOGENIZER ( MIKOLOGI PANGAN --- STOMACHER HOMOGENIZER )

BLENDER ---- ISOLASI SECARA KUALITATIF MIKROSKOP DAN ASESORINYA ALAT ISOLASI ( OSE, JARUM BERTANGKAI

DAN TEASING NEEDLE )


MEDIA BIAKAN KAYA KARBOHIDRAT, pH SEDIKIT ASAM KADANG PEPTON TIDAK DIBUTUHKAN CORNMEAL AGAR, CZAPEK’S AGAR,

INFUSION AGAR, MALT EXTRACT AGAR,OATMEAL AGAR, POTATO DEXTROSE AGAR

BACTERIAL INHIBITOR (KONDISI ASAM DAN ANTIBIOTIKA ) DAN GROWTH RETARDANTS ( DICHLORAN, OXGALL, SODIUM DEOXYCHOLATE dll )


SPESIMEN

SPECIMEN SELECTION SPESIMEN COLLECTION SPESIMEN PROCESSING


PROSEDUR KEAMANAN LABORATORIUM MIKOLOGI

SESUAI DENGAN STANDAR YANG BERLAKU DILAB MIKROBIOLOGI

MELAKUKAN TINDAKAN UNTUK MENCEGAH SEGALA KEMUNGKINAN DI LINGKUNGAN KERJA

MELAKUKAN RESPON APABILA TERJADI KECELAKAAN KERJA


TEKNIK DASAR ISOLASI

METODE ISOLASI LANGSUNG METODE TIDAK LANGSUNG

SOIL DILUTION METHOD SELECTIVE ISOLATION METHOD

BAITING METHOD ( DERMATOFIT ) PENAMBAHAN SUPLEMEN DAN KONDISI

KHUSUS SPORE FALL METHOD


ISOLASI LANGSUNG

KAPANG DAPAT DIISOLASI LANGSUNG DARI SPORA ATAUPUN JARINGAN TUBUH BUAH/ FRUITING BODIES ( Basidiomycetes ) D AN DIPINDAHKAN KEMEDIA BIAKAN SEGAR

DIPINDAHKAN LANGSUNG DENGAN JARUM HALUS ( SPORA, HIFA, SPORA ISTIRAHAT )

ENDOPHIT ---- ISOLASI PERMUKAAN DAUN DGN AGAR TUANG, PENEMPELAN LANGSUNG, SWAB PERMUKAAN DAN CELLOPANE TAPE.

MICROMANIPULATOR


ISOLASI TIDAK LANGSUNG STERILISASI PERMUKAAN ---- BIJI2AN SOIL DILUTION METHOD SELECTIVE ISOLATING METHOD ( baiting

method, penambahan suplemen, suhu, pH dll )

SPORA FALL METHOD ( agar blok, cellopane tape )

UNTUK MISELIUM ---- sterilisasi permukaan, homogenisasi dan pour platting


METODE PEMERIKSAAN

LANGSUNG PEWARNAAN

KULTUR AGAR MIRING AGAR PELAT SLIDE CULTURE ( RIDDEL METHOD )


IDENTIFIKASI KAPANG

MAKROSKOPIK

MIKROSKOPIK


MAKROSKOPIK BENTUK KOLONI

Bulat Oval

TEKSTUR KOLONI Globrous Velvety Yeast like Cottony Granuler/powdery

TOPOGRAFI KOLONI Flat Folded Rugose Crateriform Veruccose cerebriform


WARNA KOLONI Putih, cream, coklat sampai hitam

TIPE PERTUMBUHAN Cepat Sedang Lambat


Bentuk bulat, tekstur cottony, topografi flat , warna putih dan kuning keemasan bagian pinggir


Bentuk bulat tidak rata, tekstur globrous, topografi crateriform, warna putih


Tekstur granuler, topografi folded, warna cream kecoklatan


Tekstur glabrous, topografi rugose, warna putih


Tekstur velvety,topografi folded, warna putih bagian tengah dan hijau kebiruan


MIKROSKOPIK PEWARNAAN LANGSUNG

KOH 10 – 20% PEWARNAAN NATIF

Lugol,Lactophenol,Lactophenol Cotton Blue,Calcoflour White

PEWARNAAN NEGATIF Tinta india, negrosin, tinta cina dll

HISTOPATOLOGI HE, Giemsa, Gommori, Methenamine silver

dll,


MIKROSKOPIK

HIFA Bersepta ( uninukleat, multinukleat ) Tak bersepta/ soenositik

CONIDIA Bentuk, ukuran, isi sel, warna,

permukaan CONIDIOGENOUS CELL

Thallic ( holothalic , enterothalic ) Blastic ( holoblastic, enteroblastic )


KONIDIOFOR

CONIDIOGENOUS CELL

CONIDIA


IDENTIFIKASI KAPANG ARTHROSPORA Kebanyakkan kapang kontaminan Yeast like Warna putih sampai krem ( Scytalidium

dimidiatum ) Coccidioides immitis Arthrospora berdinding tebal Barrel shape Ukuran 2.5 – 4.5 um x 3 – 8 um Tumbuh dari hifa terminal , percabangan

terjadi pada pertumpuan cabang utama dan berganti lepas dari spora yang berdekatan


Scytalidium dimidiatum


Coccidioides immitis


BENTUK KONIDIA BENTUK SEDERHANA

Globose, subglobose, ellip, reniform dll SCOLECOSPORE

Ratio panjang/lebar 15 :1 DICTYOSPORE

TERBAGI MENJADI BEBERAPA SEPTA HELICOSPORE STAUROSPORE


Konidia bulat menempel langsung pada fialid, hifa bersepta


IDENTIFIKASI KAPANG ALEURIOSPORA

DERMATOFITA ( Epidermophyton, Microsporum dan Trichophyton )

Histoplasma capsulatum dll

Dermatofita



ALEURIOSPORA


HISTOPLASMA CAPSULATUM


HOLOBLASTIK KONIDIA

Koloni biasanya berwarna coklat sampai hitam

Spora diproduksi melalui pertunasan Dinding sel tebal Konidia diproduksi pada bagian

terminal hifa, berkelompok disisi hifa dan ada yang berbentuk rossetes


KONIDIA HOLOBLASTIK


KONIDIA ENTEROBLASTIK

Bentuk karakteristik, konidia terbentuk dari dinding dalam conidiogenous cell

Konidia tumbuh pada fialid atau anelid Spora mudah lepas dan gampang

terbawa udara Bentuk,warna, permukaan spora

bervariasi Aspergillus sp dan Penicillium sp


KONIDIA ENTEROBLASTIK


Aspergillus sp


Foot cell pada Aspergillus sp


Penicillium sp


TIPE PERCABANGAN Penicillium sp


IDENTIFIKASI ZYGOMYCETES

SPORANGIUM SPORANGIOSPORA HIFA TAK BERSEPTA RHIZOID Absidia sp, Mucor sp dan Rhizopus

sp


ISOLASI DAN IDENTIFIKASI KHAMIR PROSEDUR ISOLASI KHAMIR SECARA UMUM HAMPIR

SAMA DENGAN KAPANG.

KOLEKSI SPESIMEN MAUPUN PENANGANAN TIDAK MEMBUTUHKAN PROSEDUR SPESIAL,PENGIRIMAN SECARA CEPAT TIDAK DIPERLUKAN.

SUMBER SPESIMEN BERASAL DARI BERMACAM – MACAM BAIK SPESIMEN KLINIK, BAHAN PAKAN, BAHAN MAKANAN, TANAH, AIR ,INSEKTA dll

SPECIMEN TANAH DAPAT SECARA LANGSUNG DIBIAKKAN PADA MEDIA BIAKAN DENGAN Ph 3.7.


DIBUTUHKAN MEDIA SELEKTIF UNTUK KHAMIR – KHAMIR TERTENTU Kluyveromyces marxianus

membutuhkan laktosa sebagai sumber karbon

Brettanomyces membutuhkan glukosa, kalsium karbonat dan tiamin dll

MEDIA ISOLASI Sabauraud’s Dextrose agar (SDA), Blood

agar,SABHI, BHI agar.


IDENTIFIKASI KHAMIR

MEDIA BIAKAN Sabauraud’s Glucose Peptone Agar Potato Dextrose Agar Corn Meal Agar Gorodkowa Agar Czapek Dox plus Tween 80 Agar Christensen’s Urea Agar ANTIBIOTIKA


METODE PEMERIKSAAN

METODE LANGSUNG KOH 10 – 20 % Untuk sputum

atau jaringan Pewarnaan untuk spesimen cair/

eksudat ( Lactophenol, Lugol dll ) KULTUR

Media biakan


IDENTIFIKASI KHAMIR

MORFOLOGI MAKROSKOPIK MIKROSKOPIK

BIOKIMIA ASIMILASI FERMENTASI


MORFOLOGI

MAKROSKOPIKBENTUK KOLONI ( bulat, oval )TEPI KOLONI ( kasar, halus)PERMUKAAN KOLONI ( cembung,

cekung)KONSISTENSI (padat, berlendir )WARNA ( putih-krem, berwarna )


Cryptococcus neoformans


Candida sp


Rhodotorula sp


MIKROSKOPIK

BENTUK SEL UKURAN SEL ADA TIDAKNYA KAPSUL ADA TIDAKNYA PSEUDOHIFA, HIFA

DAN BLASTOSPORA ADA TIDAKNYA KLAMIDOSPORA PRODUKSI ASKOSPORA


GERM TUBE TEST METODE IDENTIFIKASI SECARA

SEDERHANA MEMBUTUHKAN KULTUR MURNI DIBIAKKAN DALAM MEDIA YANG

MENGANDUNG SERUM ( KUDA, MANUSIA DLL )

DIGUNAKAN MEDIA PENGGANTI YAITU PUTIH TELUR BEBEK

DIINKUBASI PADA SUHU 370 C SELAMA 2.5 – 3 JAM

Germ tube



KLAMIDOSPORA TERBENTUK DARI BAGIAN HIFA YANG

MEMBESAR DAN MEMBENTUK DINDING SEL YANG TEBAL

SEL TUNGGAL TERMINAL KLAMIDOSPORA DAN

INTERKALAR KLAMIDOSPORA MENGGUNAKAN MEDIA CORN MEAL

AGAR+ TWEEN 80 (CMT) METODE CUT STREAK ( GORES

POTONG )


CUT STREAK METHODS

Candida dalam jaringan



MEDIUM GORODKOWA

MERUPAKAN SALAH SATU MEDIUM YANG DIGUNAKAN UNTUK MENGIDENTIFIKASI ADANYA ASKOSPORA

ASKOSPORA MERUPAKAN SPORA SEKSUAL

Saccharomyces cerevisae


ASKOSPORA


UREASE TEST PENTING UNTUK KHAMIR Cryptococcus

neoformans KHARAKTERISTIK KARENA KHAMIR INI MAMPU

MEMPRODUKSI ENZIM UREASE MEDIA YANG DIGUNAKAN ADALAH cristensen’s

urea DIINKUBASI DALAM SUHU 300C SELAMA 4 HARI HASIL POSITIF APABILA TERJADI PERUBAHAN

WARNA DARI AMBER KE PINK Rhodotorula dan Trichosporon PERLU DIWASPADAI TERHADAP BAKTERI

PENGHASIL UREASE


BENTUK SEL


UKURAN

BERVARIASI Panjang 1 - 50 um Lebar 1 – 10 um


KAPSUL

Digunakan pewarnaan negatif dengan menggunakan tinta

cina, tinta india ataupun pewarna negrosin


UJI BIOKIMIA

ASIMILASI

FERMENTASI Menurut Kluyver ketentuan dasar dalam fermentasi khamir adalah : 1. apabila khamir tidak memfermentasi glukosa maka khamir tersebut tidak terfermentasi, 2.

glukosa terfermentasi maka fruktosa dan manosa terfermentasi tidak selalu untuk galaktosa, 3. maltosa

terfermentasi maka laktosa tidak atau sebaliknya kecuali Brettanomyces claussenii


TERIMA KASIHTERIMA KASIH

isolasi dan identifikasi cendawan

Documents