fakultas matematika dan ilmu pengetahuan alam universitas...

Jurusan Kimia

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Andalas

ISSN No. 2303-3401

Volume 5 Nomor 4

November, 2016

Media untuk mempublikasikan

hasil-hasil penelitian seluruh

dosen dan mahasiswa Kimia

FMIPA Unand

Tim Editorial Jurnal Kimia Unand

Emil Salim, M.Sc, M.Si

Dr. Syukri

Prof. Dr. Adlis Santoni

Prof. Dr. Rahmiana Zein

Prof. Dr. Syukri Arief

Dr. Mai Efdi

Alamat Sekretariat Jurusan Kimia FMIPA Unand

Kampus Unand Limau Manis, Padang – 25163

PO. Box 143, Telp./Fax. : (0751) 71 681

Website Jurnal Kimia Unand: www.jurnalsain-unand.com

Corresponding E-mail: [email protected]

[email protected]

http://www.jurnalsain-unand.com/mailto:[email protected]:[email protected]

Jurnal Kimia Unand (ISSN No. 2303-3401), Volume 5 Nomor 4, November 2016 www.kimia.fmipa.unand.ac.id

i

DAFTAR ISI

JUDUL ARTIKEL Halaman

1. IDENTIFIKASI SENYAWA METABOLIT SEKUNDER DAN UJI

ANTIOKSIDAN SERTA UJI TOKSISITAS EKSTRAK DAUN

KAYU ARA (Ficus aurata (Miq.) Miq.)

Adlis Santoni,, Handani Permana, Mai Efdi

1-11

2. PROFIL AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DENGAN METODE DPPH DAN TOTAL FENOLIK DARI EKSTRAK DAUN PACAR CINA Miftahul Khairah, Mai Efdi, Afrizal

12-17

3. PEMANFAATAN KERTAS KARBON SEBAGAI BAHAN ELEKTRODA PADA SUPERKAPASITOR Olly Norita Tetra, Admin Alif, Rahma Fristina

18-22

4. UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN, SITOTOKSIK DAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL BERBAGAI FRAKSI DARI EKSTRAK METANOL BUAH CIPLUKAN (Physalis minima Linn.) Nisaul Khairiyah, Bustanul Arifin, Afrizal

23-32

5. PENGARUH RASIO TITANIUM DAN STRONSIUM TERHADAP KONTROL MORFOLOGI SrTiO3 NANO KUBUS YANG DISINTESIS MELALUI METODE SOLVOTERMAL Merida Saputri, Diana Vanda Wellia, Yulia Eka Putri

33-37

6. MODIFIKASI SILIKA MESOPORI DENGAN ANILIN SEBAGAI SUPPORT KATALIS KOBAL(II); SINTESIS DAN KARAKTERISASINYA Thalabul Ilmi, Syukri, Admi

38-45

7 IDENTIFIKASI SENYAWA METABOLIT SEKUNDER TANAMAN JARAK PAGAR (Jatropha curcas L.) DAN UJI TOKSISITAS MENGGUNAKAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST Amalya Ova, Norman Ferdinal, Adlis Santoni

46-51


ii

8 ISOLASI SENYAWA KUMARIN DARI EKSTRAK ETIL ASETAT AKAR JARAK MERAH (Jatropha gossypifolia L.) DAN UJI TOKSISITAS DENGAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT) Afrizal, Hasnirwan, Aprima Reza*

52-58

9 INHIBISI KOROSI BAJA St.37 OLEH EKSTRAK THE (Camellia sinensis) DALAM MEDIUM KOROSIF HCl : EFEK SINERGIS OLEH ION IODIDA Mayesha Yusan, Yeni Stiadi*, Emriadi

59-66

10 SINTESIS SENYAWA AURIVILLIUS LAPIS EMPAT PbBi4-xLaxTi4O15 (x = 0 dan 0,5) DENGAN METODE LELEHAN GARAM MENGGUNAKAN CAMPURAN NaCl dan KCl Dhio Aulia Harrisa, Syukri Arief, Zulhadjri*

67-71


1

IDENTIFIKASI SENYAWA METABOLIT SEKUNDER DAN UJI

ANTIOKSIDAN SERTA UJI TOKSISITAS EKSTRAK DAUN KAYU ARA

(Ficus aurata (Miq.) Miq.)

Adlis Santoni,*, Handani Permana, Mai Efdi

Laboratorium Kimia Organik Bahan Alam, Jurusan Kimia FMIPA, Universitas Andalas

*E-mail: [email protected] Jurusan Kimia FMIPA Unand, Kampus Limau Manis, 25163

Abstract: Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) in the one of plant that is found in Indonesia. Leaves of Kayu

Ara were extracted with n-hexane, ethyl acetat and metanol by using maceration method. Hexane, ethyl acetate and metanol extract were obtained as much as 3,171 g; 7,884 g and 21,727 g. The result of secondary metabolite identification showed each n-hexane extract contain Phenolic and steroid, ethyl acetate extract contain phenolic, flavonoid, triterpenoid, and steroid, and methanol extract contain phenolic, flavonoids, triperpenoid, and steroid. Each extracts was investigated its antioxidant activity by using DPPH method The result showed IC50 values are 273,29 mg/L, 219,50 mg/L, and 87,60 mg/L. And then each extracts was also investigated its toxicity by using BSLT method. The result showed LC50 values are 92,04 mg/L, 67,83 mg/L, and 53,33 mg/L. The result of phenolic total assay of extracts showed phenolic totals are 212,12; 342,42; and 3584,84 (GAE/10 mg air-dried extract). Phenolic total data showed correlation with antioxidant activity assay, the higher total phenolic, the smaller the IC50 value which indicates the better ability of antioxidant activity.

Keywords :Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq), antioxidant, DPPH, toxicity, BSLT dan Phenolic total

I. Pendahuluan

Indonesia adalah negara dengan hutan tropis paling besar ketiga di dunia (setelah Brazil dan Zaire). Keanekaragaman hayati merupakan basis berbagai pengobatan dan penemuan industri farmasi dimasa mendatang. Jumlah tumbuhan berkhasiat obat di Indonesia diperkirakan sekitar 1.260 jenis tumbuhan.Tumbuhan menghasilkan metabolit sekunder yang berpotensi sebagai antioksidan, zat perwarna, penambah aroma makanan, parfum, insektisida dan obat. Ada 150.000 metabolit sekunder yang sudah diidentifikasi dan ada 4000 metabolit sekunder “baru”/tahun [1]. Dalam kehidupan sehari-hari, kita tidak dapat terbebas dari senyawa radikal bebas. Asap rokok, makanan yang digoreng, dibakar, paparan sinar matahari berlebih, asap kendaraan bermotor, obat-obat tertentu, racun dan polusi udara merupakan beberapa sumber pembentuk senyawa radikal bebas. Radikal bebas merupakan molekul yang memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan. Elektron-elektron yang tidak berpasangan ini menyebabkan radikal bebas menjadi

senyawa yang sangat reaktif terhadap sel-sel tubuh dengan cara mengikat elektron molekul sel. Reaksi ini sering disebut sebagai oksidasi [2]. Senyawa bioaktif merupakan senyawa yang terkandung dalam tubuh hewan maupun tumbuhan. Senyawa ini memiliki berbagai manfaat bagi kehidupan manusia, diantaranya dapat dijadikan sebagai sumber antioksidan, antibakteri, antiinflamasi, dan antikanker. Antioksidan adalah zat yang dapat menunda, memperlambat dan mencegah terjadinya proses oksidasi. Antioksidan sangat bermanfaat bagi kesehatan dan berperan penting untuk mempertahankan mutu produk pangan. Manfaat antioksidan bagi kesehatan dan kecantikan, misalnya untuk mencegah penyakit kanker dan tumor, penyempitan pembuluh darah, penuaan dini, dan lain-lain. Antioksidan dalam produk pangan, dapat digunakan untuk mencegah terjadinya proses oksidasi yang dapat menyebabkan kerusakan, misalnya ketengikan perubahan warna dan aroma, serta kerusakan fisik lainnya [3].


2

Banyak penelitian telah membuktikan manfaat mengkonsumi tanaman yang berkhasiat antioksidan, seperti dapat menurunkan resiko penyakit jantung, kanker, katarak dan penyakit degeneratif lain karena proses. Hal ini menjadikan antioksidan, terutama dari alam, banyak diminati di dunia saat ini. Baru-baru ini, antioksidan menjadi topik menarik. Ini merupakan minat yang besar bagi khalayak ramai, ahli obat, nutrisi, penelitian ilmu kesehatan dan makanan untuk mengetahui kapasitas dan unsur antioksidan pada makanan yang kita konsumsi begitu pula pada tumbuhan [4]. Antioksidan dapat membantu melindungi tubuh manusia melawan kerusakan yang disebabkan oleh senyawa oksigen reaktif (ROS; reactive oxygenspecies) dan radikal bebas lainnya. Akibat reaktivititas yang tinggi, radikal bebas dapat merusak berbagai sel makromolekul, termasuk protein, karbohidrat, lemak dan asam nukleat. Radikal bebas mampu merusak molekul dan menjadi penyebab dari beberapa penyakit degeneratif dan penyakit kronis. Penggunaan senyawa antioksidan semakin berkembang baik untuk makanan maupun untuk pengobatan seiring dengan bertambahnya pengetahuan tentang aktivitas radikal bebas. Stress oksidatif merupakan keadaan yang tidak seimbang antara jumlah molekul radikal bebas dan antioksidan di dalam tubuh. Senyawa antioksidan merupakan suatu inhibitor yang digunakan untuk menghambat autooksidasi. Efek antioksidan senyawa fenolik dikarenakan sifat oksidasi yang berperan dalam menetralisasi radikal bebas [4]. Kayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) tumbuh subur di daerah tropis terutama di daerah Semenanjung Malaya, Sumatera, Kalimantan dan Filiphina. Kayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) merupakan tumbuhan

yang mempunyai kandungan senyawa kimia berupa fenol, triterpenoid, flavonoid dan steroid yang merupakan sumber antioksidan. Tingginya kandungan antioksidan pada tumbuhankayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) menjadikan tumbuhan

ini diduga memiliki kemampuan toksisitas.

Karena masih sedikit sekali penelitian mengenai manfaat tumbuhan ini. Maka dilakukanlah identifikasi senyawa metabolit sekunder serta uji aktifitas antioksidan dengan metode DPPH, uji toksisitas dengan metode Brine Shrimp Lethality Test dan penentuan total fenolik [5]. II. Metodologi Penelitian 2.1. Bahan kimia, peralatan dan instrumentasi

Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah sampel daun kayu ara (Ficus aurata

(Miq.) Miq.), pelarut teknis yang telah didistilasi yaitu heksana, etil asetat, dan metanol. aluminium foil, akuades, larva udang Artemia salina Leach., dimetilsulfoksida, pereaksi Mayer untuk identifikasi alkaloid, pereaksi Liebermann-Burchard (asam asetat anhidrida dan asam

sulfat pekat) untuk identifikasi triterpenoid dan steroid, sianidin test (bubuk magnesium dan asam klorida pekat), asam sulfat pekat dan natrium hidroksida 10 % untuk identifikasi flavonoid, besi (III) klorida untuk identifikasi fenolik, plat KLT, natrium hidroksida 1 % untuk identifikasi kumarin, natrium karbonat 20 % dan

reagen Folin Ciocalteau. Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah corong, Rotary Evaporator, botol reagen, gelas piala, botol vial, neraca analitik, pipa kapiler, labu ukur 10 mL, labu ukur 100 mL, plat KLT, Lampu UV (λ 254 dan 356 nm) dan Spektrofotometer UV-VIS. 2.2. Prosedur penelitian 2.2.1 Persiapan Sampel daun kayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.)

Identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium Universitas Andalas. 5 kg daun segar kayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) dipotong-potong dan dikeringanginkan sampai rapuh (tidak lagi mengandung air), kemudian dihaluskan dengan mesin Grinder dan ditimbang. Sampel yang telah berupa bubuk 600 gram digunakan untuk penelitian. 2.2.2 Ekstraksi Tumbuhan daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.)

Sampel berupa serbuk halus (600 g), 200 g diekstraksi dengan cara maserasi


3

(perendaman) menggunakan pelarut yang telah didestilasi metanol, 200 g dimasukkan dalam pelarut etil asetat, dan 200 g pada pelarut n-heksana. Maserasi dilakukan berulang setiap kali dilakukannya maserasi dibutuhkan 3 hari perendaman lalu diuapkan pelarutnya dengan menggunakan Rotary Evaporator. Maserasi dilakukan sampai maserat tidak lagi memberikan warna keruh. Diperoleh ekstrak dari masing-masing perendaman (ekstrak metanol, etil asetat dan n-heksana). 2.2.3 Identifikasi metabolit sekunder ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.)

1.Pengujian Alkaloid Ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) diambil dan dimasukkan ke dalam masing-masing tabung reaksi yang berbeda dan ditambahkan dengan 2 mL kloroform dan 1 mL amonia. Setelah itu, dikocok dan kemudian ditambah beberapa tetes asam sulfat 2 N dan dikocok lagi hingga memberi lapisan asam dan kloroform. Lapisan asam dimasukkan pada tabung reaksi ditambahkan 1 tetes Mayer, adanya alkaloid ditandai dengan terbentuknya endapan putih.

2. Pengujian Flavonoid Ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) diambil dan dimasukkan ke dalam masing-masing tabung reaksi yang berbeda. Kemudian ditambah kloroform dan air masing-masing sebanyak 5 mL dikocok dan didiamkan hingga terbentuk dua lapisan dan dipisahkan. Lapisan air diambil sebanyak 3 mL, kemudian dimasukkan ke dalam 3 tabung reaksi masing-masing 1 mL. Tabung reaksi pertama ditambahkan beberapa butir logam Mg dan ditambahkan 1-2 tetes asam klorida pekat. Tabung reaksi kedua ditambahkan beberapa 1-2 tetes asam sulfat pekat. Tabung reaksi ketiga ditambahkan natrium hidroksida 10 % sebanyak 1-2 tetes. Adanya flavonoid ditandai dengan adanya warna jingga sampai merah.

3. Pengujian Fenolik

Pemeriksaan fenolik dilakukan dengan pereaksi FeCl3 5%. Ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) masing-masing diambil dan dimasukkan pada tabung reaksi yang berbeda. Kemudian ditambahkan metanol 2 mL dikocok hingga homogeny dan ditambahkan pereaksi FeCl3 5%, adanya fenolik ditandai dengan terbentuknya warna hijau sampai biru kehitaman [18].

4. Pengujian Steroid, Triterpenoid dan saponin Pemeriksaan steroid dan terpenoid dilakukan dengan pereaksi Liebermann-Burchard. Ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) diambil dan dimasukkan dalam masing-masing tabung reaksi yang berbeda. Kemudian ditambah kloroform dan air masing-masing sebanyak 5 mL dikocok dan didiamkan hingga terbentuk dua lapisan (lapisan air dan kloroform) dan dipisahkan. Pemeriksaan dilakukan dengan cara mengambil lapisan kloroform diteteskan pada plat tetes, dibiarkan kering. Kemudian tambahkan satu-satu tetes asam asetat anhidrida, diaduk dan tambahkan satu tetes asam sulfat pekat. Terbentuknya warna hijau atau biru menandakan adanya steroid dan timbulnya warna jingga atau merah menandakan adanya triterpenoid, untuk pengujian reagen pada uji steroid digunakan sampel segar. Lapisan air diambil 1 mL dan dimasukkan kedalam tabung reaksi. Selanjutnya dikocok kuat-kuat dalam sebuah tabung reaksi, terbentuknya busa yang tidak hilang dengan penambahan beberapa tetes asam klorida pekat menunjukkan adanya saponin.

5. Pengujian Kumarin Ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) yang telah dilarutkan dengan masing-masing pelarutnya, kemudian ditotolkan pada batas bawah KLT dengan kapiler, dibiarkan kering pada udara terbuka. Kemudian dielusi dengan etil asetat. Noda yang dihasilkan dilihat dengan lampu UV panjang gelombang 365 nm dan terlihat


4

flurisensi warna biru, kemudian noda plat KLT tersebut disemprot dengan NaOH 1%. Dilihat kembali dengan lampu UV maka terlihat flourisensi warna biru yang semakin terang menunjukkan adanya kumarin.

2.2.3 Uji antioksidan dengan metoda DPPH ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.)

1. Pembuatan larutan DPPH Ditimbang 4 mg DPPH yang dilarutkan dalam metanol hingga volume 100 mL dan didapatkan larutan DPPH 0,1 mM.

2. Pembuatan larutan uji Sebanyak 10 mg masing-masing ekstrak dilarutkan dalam 10 mL metanol hingga didapatkan larutan sampel masing-masing ekstrak dengan konsentrasi 1000 mg/L. Larutan uji dibuat variasi konsentrasi 50, 100, 150, 200 dan 250 mg/L untuk ekstrak n-heksana dan etil asetat 50, 100, 150, 200 dan 250 mg/L untuk ekstrak metanol 10, 20, 30, 40 dan 50 mg/L dengan metode pengenceran.

3. Pengujian antioksidan Sebanyak 1,5 mL dari setiap larutan uji ditambahkan dengan 2,5 mL DPPH 0,1 mM. Kemudian diletakkan di tempat gelap selama 30 menit dan diukur absorbannya pada panjang gelombang 517 nm. Sebagai kontrol digunakan 2,5 mL larutan DPPH 0,1 mM yang ditambah dengan 1,5 mL metanol. Berdasarkan absorban yang didapatkan, dihitung % inhibisi dihitung dengan

rumus:

% x100abs

absabsinhibisi %

kontrol

sampelkontrol

Keterangan : abs adalah absorban. Setelah didapatkan nilai % inhibisi dari perhitungan, dihitung nilai IC50 dari setiap larutan uji dengan menggunakan regresi yang didapatkan dari % inhibisi sehingga didapatkan nilai IC50 dari masing-masing ekstrak.

2.2.3 Uji Toksisitas dengan metoda Brine Shrimps Lethality Test (BSLT) ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.)

1. Pembenihan Udang Hewan yang digunakan pada metoda ini adalah larva udang Artemia salina Leach. Larva ini diperoleh dengan cara menetaskan telur udang selama 48 jam dalam wadah pembiakan. Wadah ini terbagi atas 2 bagian, yaitu bagian terang dan gelap. Wadah pembiakan ini kemudian diisi dengan air laut dan telur udang yang akan ditetaskan pada bagian gelap. Setelah menetas larva akan berenang menuju bagian terang.

2. Penentuan uji toksisitas Uji toksisitas ini dilakukan pada masing-masing ekstrak n-heksana, etil asetat, dan metanol.

Disiapkan 45 vial uji untuk masing-masing ekstrak dalam pengujian ini dan 1 vial untuk larutan kontrol. Vial yang digunakan terlebih dahulu dikalibrasi pada volume tepat 5 mL. Vial uji terdiri dari 5 variasi konsentrasi yaitu 50, 100, 150, 200, dan 250 mg/L yang masing-masingnya dilakukan triplo. Larutan sampel diuapkan, setelah kering ditambahkan 50 µL larutan dimetilsulfoksida dan dicukupkan hingga 5 mL air laut. Setelah itu, ke dalam masing-masing vial dimasukkan 10 ekor larva udang. Untuk larutan kontrol hanya berisi 50 µL larutan dimetilsulfoksida dan dicukupkan hingga 5 mL air laut. Terhitung dari larva udang dimasukkan ke dalam masing-masing vial, diamati jumlah kematian larva udang pada 4

jam, 8 jam, 12 jam, 16 jam 20 jam dan 24 jam. Jumlah larva yang mati dihitung setelah 24 jam. LC50 dihitung dengan hubungan nilai logaritma konsentrasi bahan toksik uji dan nilai probit dari persentase mortalitas hewan uji merupakan fungsi linear Y = a + bx.


5

2.2.4 Uji total fenolik ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.)

1. Pembuatan larutan standar 10 mg asam galat dilarutkan dalam 10 mL metanol dan didapatkan konsentrasi 1000 μg/mL. Dipipet 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; dan 0,8 mL dari larutan standar dan dimasukkan dalam botol viaL. Setiap vial ditambahkan 0,5 mL reagen Folin-Ciocalteu. Campuran didiamkan selama menit 5 menit. Kemudian ditambahkan 1 mL natrium karbonat 20 % dan ditambahkan akuades dalam labu ukur 10 mL. Campuran didiamkan selama 120 menit. Kemudian diukur absorbannya pada panjang gelombang 765 nm. Berdasarkan absorban yang didapatkan, dibuat kurva kalibrasi dari larutan standar sehingga didapatkan regresi dari perhitungan larutan standar tersebut.

2. Pembuatan larutan uji Ditimbang ekstrak n-heksana, etilasetat dan metanol masing-masingnya 10 mg dan dilarutkan dalam 10 mL metanol sehingga didapatkan konsentrasi sebesar 1000mg/L. Diambil 0.5 mL setiap larutan uji dan dimasukkan dalam viaL. Setiap vial ditambahkan 0,5 mL reagen Follin-Ciocalteu. Campuran didiamkan selama lima menit. Kemudian ditambahkan 1 mL natrium karbonat 20% dan ditambahkan akuades dalam labu ukur 10 mL. Campuran didiamkan selama 120 menit. Kemudian diukur absorbannya pada panjang gelombang 765 nm. Konsentrasi total fenolik masing-masing larutan uji ditentukan dari persamaan regresi kurva larutan standar. Total fenolik dalam ekstrak dinyatakan dalam Gallic Acid Equivalent (GAE/10 mg

ekstrak kering).

III. Hasil dan Pembahasan 3.1. Ekstraksi Tumbuhan Kayu Ara

(Ficus aurata (Miq.) Miq.)

Hasil ekstraksi daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) dengan metoda maserasi menggunakan masing-masing pelarut n-

heksana, etil asetat dan metanol untuk masing-masing sampel sebanyak 200 gdapat dilihat pada tabel 1. Tabel 1. Hasil maserasi daun Kayu Ara

(Ficus aurata (Miq.) Miq.) dengan masing-masing pelarut n-heksana, etil asetat, dan metanol

Ekstrak Berat (g) Rendemen

(%)

n-Heksana 3,171 1,585 Etil asetat 7.884 3,942 Metanol 21,727 10,86

Hasil ekstraksi dengan metoda maserasi dalam penelitian ini menunjukkan rendeman ekstrak metanol paling banyak dengan nilai rendeman sebesar 10,86 % karena metanol merupakan suatu pelarut universal karena dapat melarutkan senyawa polar,semi polar dan non polar. 4.3. Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder pada Daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.)

Pada identifikasi metabolit sekuder ini ekstrak n-heksana, etil asetat, dan metanol daun kayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) diidentifikasi metabolit sekundernya. Hasil identifikasi metabolit sekunder dari ekstrak n-heksana, etil asetat, dan metanol daun kayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) dapat dilihat pada tabel 2. Dari table 2. dapat dilihat bahwa senyawa yang terkandung maupun tidak terkandung dalam daunkayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) dapat dijelaskan sebagai berikut. Hasil identifikasi metabolit sekunder terhadap ekstrak n-heksana pada tumbuhan tersebut diketahui mengandung senyawa fenolik dan steroid. Untuk ekstrak etil asetat diketahui tumbuhan ini mengandung senyawa fenolik, flavonoid, triterpenoid dan steroid, sedangkan ekstrak methanol terdapat senyawa fenolik, flavonoid, triterpenoid dan steroid. Senyawa-senyawa kimia yangtidak ditemukan dalam ekstrak n-heksana daun kayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) tersebut

adalah senyawa saponin, tritepenoid, kumarin dan alkaloid, sedangkan untuk ekstrak etil asetat dan metanol adalah senyawa saponin, kumarin dan alkaloid.


6

Dimana kandungan senyawa metabolit sekunder bervariasi pada setiap tumbuhan, hal ini dipengaruhi oleh perbedaan bagian tumbuhan yang digunakan, letak geografis, perubahan iklim, dan perbedaan morfologis. Tabel 2. Hasil identifikasi metabolit

sekunder dari ekstrak metanol, etil asetat, dan n-heksana daun kayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.).

Keterangan : + (positif) = ada, - (negatif) = tidak ada. 4.4. Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH

Uji antioksidan dilakukan terhadap ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dari berdasarkan nilai IC50 yang didapatkan dari pengukuran absorban.Prinsip metode uji antioksidan adalah pengukuran penangkapan radikal bebas. Pengujian aktivitas antioksidan dari sampel dilakukan secara spektrofotometri berdasarkan kemampuannya dalam

mekanisme pengambilan atom hidrogen dari senyawa antioksidan oleh radikal bebas. Senyawa 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil yang bereaksi dengan senyawa antioksidan melalui pengambilan atom hidrogen dari senyawa antioksidan untuk mendapatkan pasangan elektron akan menghasilkan bentuk tereduksi difenil pikril hidrazin dan senyawa bukan radikal yaitu DPP Hidrazin yang stabil. Adanya penurunan serapan tersebut maka aktivitas antioksidan penangkap radikal dapat ditentukan. Hasil pengukuran antioksidan dari ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol dapat dilihat pada Tabel 3 sedangkan perhitungan nilai persen inhibisi dapat dilihat pada Lampiran 8 [14]. Pada tabel 3 terlihat bahwa nilai IC50 dari masing-masing ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol sebesar 273,29 mg/L, 219,50 mg/L dan 87,60 mg/L. Hasil uji antioksidan dengan metode DPPH dilakukan terhadap beberapa variasi konsentrasi dari sampel tersebut. Berdasarkan data pengukuran nilai absorbansi maka dapat dianalisis pengaruh konsentrasi sampel dengan persentase peredaman, yaitu peningkatan aktivitas sebanding dengan bertambahnya konsentrasi. Aktivitas peredaman radikal bebas biasa nya dinyatakan sebagai persentase peredaman dari DPPH dan dapat juga dinyatakan dengan IC50. Nilai IC50 (Inhibition Concentration) merupakan konsentrasi efektif yang dibutuhkan untuk menghambat sebesar 50% dari konsentrasi radikal DPPH. Menurut Jun et.al (2003), aktivitas antioksidan digolongkan sangat aktif jika nilai IC50 kurang dari 50 mg/L, digolongkan aktif bila nilai IC50 50-100 mg/L, digolongkan sedang bila nilai IC50 101-250 mg/L, dan digolongkan lemah bila nilai IC50 250-500 mg/L, serta digolongkan tidak aktif bila nilai IC50 lebih besar dari 500 mg/L. Berdasarkan hasil uji aktivitas antioksidan diketahui bahwa ekstrak metanol bersifat paling bagus karena digolongkan aktif sedangkan pada ekstrak

Ekstrak Kandungan Senyawa

Hasil Uji

Metanol Flavonoid +

Fenolik +

Saponin - Triterpenoid +

Steroid +

Alkaloid - Kumarin -

Etil asetat Flavonoid -

Fenolik +

Saponin -

Triterpenoid +

Steroid +

Alkaloid - Kumarin -

n-Heksana Flavonoid -

Fenolik + Saponin -

Triterpenoid - Steroid + Alkaloid -

Kumarin -


7

etil asetat dan n-heksana digolongkan pada sedang dan lemah.

Tabel 3. Uji aktivitas antioksidan ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) (λ = 517 nm)

Ekstrak Konsentrasi

(mg/L) Inhibisi

(%) IC50

(mg/L)

n-Heksana

50 100 150 200 250

14,53 16,82 25,04 38,24 47,61

273,29

Etil asetat

50 100 150 200 250

18,92 22,56 35,56 43,02 59,46

219,50

Metanol

10 20 30 40 50

8,79 15,11 17,02 25,24 30,40

87,60

4.5. Uji Toksisitas dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)

Pengujian toksisitas diakukan dengan menggunakan metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) dengan larva udang Artemia salina Leach. Metode ini merupakan

metode yangtelah teruji hasilnya dengan tingkat kepercayaan 95% untuk mengamatitoksisitas suatu senyawa di dalam ekstrak kasar [9]. Larva udang memiliki kulit yang tipis danpeka terhadap lingkungannya. Zat atausenyawa asing yang ada di lingkungannyaakan terserap kedalam tubuh dengan caradifusi dan langsung mempengaruhi kehidupan larva udang tersebut. Larva udang yang sensitif ini akan mati apabila zat atausenyawa asing tersebut bersifat toksik. Metode BSLT pada penelitian ini menggunakan larva udang Artemia salima Leach. Sebanyak 10 ekor dimasukkan kedalam botol vial yang telah berisi ekstrak masing-masing pelarut. Pada penelitian ini dilakukan secara triplo dengan kosentrasi ekstrak 50, 100, 150, 200 dan 250 mg/L. Berdasarkan perhitungan dengan menggunakan analisis probit

terhadap ektrak n-heksana,etil asetat dan

metanol dari daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) diperoleh nilai LC50 (Lethal Concentration 50%) [8]. Hasil uji toksisitas sampel daun kayu Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol dapat dilihat pada tabel 4. Tabel 4. Hasil pengamatan uji toksisitas

sampel daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) ekstrak n-

heksana, etil asetat dan metanol

Ekstrak Konsent

rasi (mg/L)

Jumlah larva mati (setelah 24

jam)

Persentase Kematian Larva(%)

Heksana

50 12 40

100 15 50

150 16 56,66

200 19 63,33

250 21 70

Etil asetat

50 14 46,66

100 16 53,33 150 18 60 200 20 66,66 250 22 73,33

Metanol

50 15 50 100 18 60 150 21 70 200 22 73,33 250 24 80

Keterangan: Larva yang dimasukan ke dalam vial berjumlah 10 ekor, pengerjaan dilakukan secaratriplo Dari tabel dapat ditentukan nilai LC50 dari ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol dengan menggunakan kurva regresi antara log konsentrasi (X) dan nilai probit (Y). Cara perhitungan nilai LC50 masing-masing ekstrak dapat dilihat pada lampiran. Hasil LC50 ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol dapat dilihat pada tabel 5.

Data persen kematian serta nilai probit dapat dilihat pada lampiran dan grafik kurva kalibrasi antara log [C] dan penentuan nilai probit uji Brine Shrimp Lethality pada setiap ekstrak dapat dilihat pada lampiran 9.


8

Tabel 5. Hasil LC50 ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol daun kayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.)

No. Ekstrak LC50 (mg/L)

1 n-Heksana 92,04 2 Etil asetat 67,83 3 Metanol 53,33

Berdasarkan nilai toksisitas dalam senyawa dari tumbuhan jika LC50≤ 30 mg/L maka bersifat sangat toksik, ketika konsentrasi ekstrak 31 mg/L ≤LC50≤ 1000 mg/L bersifat toksik jika LC50>1000 mg/L maka bersifat tidak toksik. Padahasil uji menunjukkan bahwa ekstrak metanol adalah ekstrak yang paling aktif dengan nilai LC50 sebesar 53,33 mg/L, ekstraketil asetat dengan LC50 sebesar 67,83 mg/L dan ekstrakn-heksana dengan LC50 sebesar 92,04 mg/L . Berdasarkan tingkat toksisitas

bahwa ekstrak metanol, ekstrak etil asetat dan ekstrak n-heksana bersifat toksik. Ekstrak yang bersifat toksik saat diuji dengan menggunakan metode Brine shrimp Lethality test (BSLT) dapat menyebabkan kematian 50 % larva artemia dalam waktu 24 jam pada konsentrasi LC50


9

senyawa fenol tidak menjadi reaktif dan bisa dimanfaatkan menjadi antioksidan. Teori ini pun di dukung oleh data yang diperoleh pada uji aktivitas antioksidan dimana ekstrak metanol yang mempunyai total fenolik yang paling besar daripada ekstrak etil asetat dan n-heksana. Tabel 7. Hubungan Nilai IC50 Metode

DPPH dengan Total Fenolik untuk masing-masing ekstrak daun Kayu Ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.)

Ekstrak IC50 (mg/L)

Total Fenolik (GAE/10 mg

Ekstrak kering)

n-Heksana 273,29 212,12

Etil asetat 219,50 342,42

Metanol 87,60 3584,84

1 2 3

IC50 87,6 219,5 273,29

Total Fenolik 3584,84 342,42 212,12

01000200030004000

Keterangan : 1, 2 dan 3 berturut-turut adalah ekstrak metanol, etil asetat dan n-heksana

Gambar 1. Grafik yang menunjukkan hubungan antara Nilai IC50 Metode DPPH dengan Total Fenolik untuk masing-masing ekstrak

IV. Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat diperoleh kesimpulan bahwa, identifikasi metabolit sekunder terhadap masing-masing ekstrak daun kayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) menunjukkan bahwa ekstrak n-heksana mengandung fenolikdan steroid, ekstrak etil asetat mengandung fenolik, flavonoid, triterpenoid dan steroid serta ekstrak metanol mengandung fenolik, flavonoid, triterpenoid dan steroid. Semua ekstrak daun kayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.)

memiliki aktivitas antioksidan. Aktivitas

antioksidan yang aktif ditunjukkan oleh ekstrak metanol dengan nilai IC50 87,60 mg/L, sedangkan ekstraketil asetat menunjukkan aktivitas antioksidan yang sedang yaitu 219,50 mg/L dan n-heksana menunjukkan aktivitas antioksidan lemah yaitu 273,29 mg/L. Uji toksisitas dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) terhadap masing-masing ekstrak daun kayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.)

menunjukkan aktivitas tertinggi terdapat pada ekstrak metanol dengan nilai LC50 sebesar 53,33 mg/L, sedangkan ekstrak etil asetat 67,83 mg/L dan ekstrak n-heksana 92,04 mg/L. Kadar total fenolik pada masing-masing ekstrak daun kayu ara (Ficus aurata (Miq.) Miq.) menunjukkan

kadar fenolik terbanyak terdapat pada eksktrak metanol yaitu 3584,84 GAE/10 mg ekstrak kering, sedangkan untuk ekstrak etil asetat 342,42 GAE/10 mg ekstrak kering dan ekstrak n-heksana yaitu 212,12 GAE/10 mg ekstrak kering.

V. Ucapan terima kasih

Ucapan terima kasih untuk dosen pembimbing yang telah memberikan banyak masukkan sehingga penelitian dapat selesai dan juga ucapan terima kasih untuk rekan-reka, serta analis di laboratorium Kimia Organik Bahan Alam atas motivasinya. Referensi

1. Yuhernita, Juniarti, 2014, Analisis Senyawa Metabolit Sekunder Dari Ekstrak Metanol Daun Surian Yang

Berpotensi Sebagai Antioksidan, Makara Sains, 15 (1), 1.

2. F. Fiya, Tri W. A., dan Widodo F. M., 2015, Ekstraksi senyawa bioaktif sebagai antioksidan alami Spirulina platensis Segar dengan Pelarut yang Berbeda, JPHPI, 18(1), 33-34.

3. Rusyana, Yaya, 2013, Taksonomi Ficus

aurata (Miq.) Miq., Jakarta. 4. Nurhamidah, Nurdin H., Y. Manjang,

A. Dharma, dan Suryati, 2015, Phytochemical screening and antioxidant activity from fruit and leaf extracts of Ficus aurata (Miq.) Miq. Journal of Chemical and Pharmaceutical

Research, 7(11), 270.


10

5. Nurhamidah, Nurdin H., Y. Manjang, A. Dharma, dan Suryati, 2015, Phytochemical screening and antioxidant activity from fruit and leaf extracts of Ficus aurata (Miq.) Miq., Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 7(11), 272.

6. Donia, Gamal A., 2013, Chemical constituents and protective effect of Ficus ingen (Miq.) Miq. On carbon tetracloride-induced acute liver damage in male wistar albino rats, Journal of Saudi chemical society, 17(1),

125-133. 7. Indraswari A, 2008, Optimasi

Pembuatan Ekstrak Daun Dewandaru (Eugenia uniflora L.) Menggunakan Metode Maserasi dengan Parameter Kadar Total Senyawa Fenolik dan Flavonoid, Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta, 6.

8. Aksara R., Weny J.A. Musa, dan La A., 2013, Identifikasi Senyawa Alkaloid Dari Ekstrak Metanol Kulit Batang Mangga (Mangifera indica L), JURNAL ENTROPI, 8(1), 1.

9. Gamal A. S., Ahmed M. Z., dan Saleh I. A., 2013, Chemical constituents and protective effect of Ficusingens (Miq.)

Miq. on carbon tetrachloride-inducedacute liver damage in male Wistar albino rats, Journal of Saudi Chemical Society, 17, 125-133.

10. Enitome E. B, Chiew V. L., dan Edward G. R., 2013, The leaves of Ficus exasperata Vahl (Moraceae) generates uterine active chemical constituents. Journal of Ethnopharmacology, 145, 803–812.

11. Pathom S., Rutt S., dan Anumart B., 2013, New sesquiterpenes and phenolic compound from Ficus foveolata, Fitoterapia, 85,1-7.

12. Widorini O. R. Taslim E. Isolasi dan Identifikasi Senyawa 1-hidroksi 6,7 dimetoksi- (3’,3’:2,3) dimetil piranosanton Dari Ekstrak Metanol Kulit Batang Garcinia cylindrocarpa, Jurnal Sains dan Seni Pomits, 1(1), 1-2.

13. Miryanti, A., Lanny S., dan K. Budiono, 2013, Ekstraksi Antioksidan dari Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana L.), Jurnal Ilmu Pengetahuan Alam UI., 7-8.

14. Kurniawati, Maya, 2007, Penentuan Formula Antioksidan untuk Menghambat Ketengikan pada Bumbu Ayam Goreng Kalasan Selama Satu Bulan, Fakultas Teknologi Pertanian Institut Pertanian Bogor. Bogor.

15. Anggraeni, D., dan Erwin. 2015, Uji Fitokimia dan Uji Toksisitas (Brine Shrimp Lethality Test) Ekstrak Daun Kelakai (Stenochlaena palustris), Kimia FMIPA Universitas Mulawarman, 74.

16. F. Roslizawaty, dan D. Pertiwi, 2014, Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Sarang Semut Lokal Aceh (Mymercodia sp.) dengan Metode BSLT Terhadap Larva Udang Artemia salina Leach, Jurnal Medika Veterinaria, 8(1),60-61.

17. A. W. Ningdyah, Andi H. A., dan A. Jayuska, 2015, Uji Toksisitas dengan Metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) Terhadap Hasil Fraksinasi Ekstrak Kulit Buah Tampoi (Baccaurea macrocarpa). JKK, 4(1),75-83.

18. Sari A., Nora I., L. Destiarti, dan L. Arianie., 2014, Uji Aktivitas Antioksidan Daging Buah Asam Paya (Eleiodoxa conferta Burret) dengan Metode DPPH dan Tiosianat, JKK, 3(1),49-56.

19. Edi S., dan Frenly W., 2015 Aktivitas Penangkap Radikal Bebas dari Ekstrak Fenolik Daun Sukun (Artocarpus altilis F.), Jurusan Kimia Universitas Sam Ratulangi, Manado.

20. H. Handayani, F. Heppy, dan Sriherfyna, 2016, Ekstraksi Antioksidan Daun Sirsak Metode Ultrasonic Bath (Kajian Rasio Bahan : Pelarut dan Lama Ekstraksi), Jurnal Pangan dan Agroindustri, 4(1),262-272.

21. Egi A. M., I. A. R. Asih, dan Made A., 2012, Isolasi dan Uji Aktivitas Antioksidan Senyawa Flavonoid dari Ekstrak Daun Jambu Biji Putih (Psidium guajava Linn), Jurusan Kimia FMIPA Universitas Udayana, Bali.

22. Adi A. S., Nurhayati B., dan Yuszda K. S., 2013, Penentuan Kandungan Fenolik Total dan Aktivitas Antioksidan dari Rambut jagung (Zea mays l.) yang Tumbuh di Daerah Gorontalo, Kimia Universitas Negeri Gorontalo, Gorontalo.


11

23. Riza A., dan Hari S., 2012, Penetapan Kadar Fenolik Total Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella Merah (Hibiscus sabdariffa Linn) dengan Variasi Tempat Tumbuh Secara Spektrofotometri, Jurnal Ilmiah Kefarmasian, 2(1), 73-80.

24. Evi U.U., M. Amrun H., 2007, Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Buah Naga (Hylocereus undatus (Haw.) Britt. & Rose), Jurnal ILMU DASAR, 8(1), 83-90.

25. Minhatun N., Tukiran, S., dan Nurul H., 2014, Uji Skrining Fitokimia pada Ekstrak Heksan, Kloroform dan Metanol dari Tanaman Patikan Kebo (Euphorbiae hirtae), Kimia FMIPA Universitas Negeri Surabaya, Surabaya.


12

PROFIL AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DENGAN METODE DPPH DAN TOTAL FENOLIK DARI EKSTRAK DAUN PACAR CINA

Miftahul Khairah*, Mai Efdi, Afrizal

Laboratorium Kimia Bahan Alam, Jurusan Kimia FMIPA, Universitas Andalas

*E-mail: [email protected]

Jurusan Kimia FMIPA Unand, Kampus Limau Manis, 25163

Abstract: Pacar cina is one of the plants that are found in Indonesia. Phytochemical test results show that the plant tested positive for phenolic which is the active compound for antioxidant. All of tested sample is pacar cina leaves extract, the extraction methode for pacar cina leaves is maceration, extraction process using three solvent, that are hexane, ethyl acetate, and methanol. Each extract were tested antioxidant activity with 1,1-diphenyl-2-picrilhidrazyl (DPPH), and the ethyl acetate extract is the most active antioxidant with Inhibition Concentration (IC50) value is 16.46 mg/L and the highest value of the total phenolic content is 566,24 GAE/10 mg dry extract. Keywords: Pacar cina, antioxidant, phenolic total

I. Pendahuluan

Indonesia merupakan salah satu negara yang kaya akan sumber daya alam hayati yang beraneka ragam jenisnya (Biodiversity). Indonesia juga merupakan salah satu dari tujuh negara megabiodiversiti, seperti Brazilia, Australia, Kolombia, Madagaskar, Meksiko, dan Zaire. Keanekaragaman hayati hutan tropis Indonesia adalah gudang senyawa organik bahan alam yang mempunyai struktur molekul beranekaragam dengan aktivitas yang luar biasa1. Salah satu tumbuhan yang ada di Indonesia adalah keluarga Meliaceae yang dapat tumbuh di daerah tropis dan subtropics. Tanaman berkayu ini terdiri dari 50 genus dan 550 spesies, dari family Meliaceae ini telah diujikan pada beberapa aktivitas biologis, seperti aktivitas sitotoksik dari Sandoricum koetjape2, serta aktivitas antileukimia dari Toona sinensis3. Aglaia merupakan genus terbesar dari keluarga Meliaceae, yang terdiri dari 130 spesies4. Aglaia odorata salah satu spesies dari genus

Aglaia yang banyak tumbuh di Indonesia, yaitu di Sumatera, Kalimantan, Jawa, Sulawesi, Bali, dan Flores. Aglaia odorata atau yang dikenal dengan pacar cina memiliki banyak senyawa aktif untuk bioaktivitas, seperti anti insektisida5, anti bakteri6, aktifitas sitotoksik7, dan antikanker8. Tanaman ini banyak digunakan

sebagai obat-obatan, dimana daunnya digunakan sebagai obat memar, bisul, diare, stimulan jantung, dan obat peradangan, sedangkan bunganya digunakan sebagai obat batuk, pusing, sukar menelan, dan obat untuk membantu persalinan9. Melihat banyaknya tumbuhan ini ditemukan di Indonesia, serta manfaat yang diberikan, peneliti memutuskan untuk melakukan penelitian mengenai tumbuhan pacar cina. Hasil uji pendahuluan fitokimia daun pacar cina diketahui bahwa daun ini mengandung senyawa metabolit sekunder fenolik yang merupakan senyawa yang berperan dalam aktivitas antioksidan. Berdasarkan hal tersebut, maka pada penelitian ini dilakukan uji aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) serta kandungan total fenolik terhadap ekstrak serta fraksi hasil kromatografi kolom dari daun pacar cina. Tumbuhan pacar cina memiliki berbagai macam kandungan diantaranya minyak asiri, alkaloid, saponin, flavonoid, terpenoid, triterpenoid, alkaloid, tannin arilpropanoid, dimer arilpropanoid (lignan), asam sinamat, dan odorin. Genus Aglaia mengandung minyak atsiri, alkaloid, saponin, flavonoid, tanin, lignan, aminopirolidin, odorin, dan 5’-epiodorin

13

dan odorinol, serta senyawa-senyawa turunan siklopenta[b]benzopiran (thapsakin aglain, dan aglaforbesin) dan turunan benzo[b]oksepin (forbaglin dan

tapoksepin)10. II. Metodologi Penelitian 2.1. Bahan kimia, peralatan dan instrumentasi

Destilat (heksana, etil asetat, metanol), pereaksi uji fitokimia yaitu kloroform (CHCl3), akuades, besi(III)klorida (FeCl3), raksa(II) klorida (HgCl2), kalium iodide (KI), serbuk magnesium (Mg), dan asam klorida pekat (HCl), anhidrida asetat (C4H6O3), asam sulfat pekat (H2SO4), ammonia (NH3), dan natrium hidroksida (NaOH). Silika gel (0,063 – 0,200 mm), plat KLT (silika gel 60 F254). 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), asam galat , reagen Folin-Ciocalteu, natrium karbonat (Na2CO3). Peralatan Grinder, seperangkat alat distilasi, seperangkat alat Rotary Evaporator (BUCHI), Oven, Botol gelap, Kolom Kromatografi (diameter 5cm, panjang 80 cm), Pipet Mikro, Mikro plat 96 well, Spektrofotometer, Neraca Analitik, Chamber, Spatula, Pipa Kapiler, Lampu UV (λ254 nm dan 365 nm), botol vial, saringan teh, kertas saring, dan alat-alat gelas lainnya yang lazim digunakan dalam penelitian kimia organik. 2.2. Prosedur penelitian Preparasi Sampel

Sampel segar daun pacar cina sebanyak 10 kg dikering anginkan di dalam ruangan selama 3 minggu, kemudian sampel digrinder hingga didapatkan sampel dalam bentuk serbuk kering sebanyak 4,5 kg, sampel disimpan dalam botol kaca gelap. Uji profil fitokimia daun pacar cina

Sampel seberat 1 gram dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan dengan kloroform dan air suling perbandingan 1:1

sebanyak 5 mL, dilakukan pengocokan, kemudian didiamkan hingga terbentuk dua lapisan kloroform-airlapisan bawah merupakan lapisan kloroform, lapisan atas merupakan lapisan air. Dipisahkan lapisan air dengan cara dekantasi ke dalam tabung reaksi yang lain. Lapisan kloroform digunakan untuk pemeriksaan senyawa triterpenoid dan steroid. Lapisan air

digunakan untuk pemeriksaan flavonoid, saponin, dan fenolik. a. Pemeriksaan flavonoid

Sebanyak 1 mL lapisan air yang sudah dipisahkan dimasukkan kedalam tabung reaksi, ditambahkan dengan asam klorida pekat dan beberapa butir serbuk magnesium. Pewarnaan orange sampai merah menunjukkan hasil positif flavonoid.

b. Pemeriksaan fenolik

Sebanyak 1 mL larutan dimasukkan kedalam tabung reaksi. Kemudian ditambahkan sedikit larutan besi(III) klorida. Fenolik membentuk kompleks dengan besi(III) klorida menghasilkan warna biru atau ungu tua.

c. Pemeriksaan saponin

Sebanyak 1 mL lapisan air dimasukkan kedalam tabung reaksi. Kemudian dikocok kuat-kuat, apabila terbentuk busa yang tidak hilang dalam 5 menit, dan dengan penambahan beberapa tetes asam klorida pekat tetap menunjukkan adanya busa, hal ini menunjukkan positif saponin.

d. Pemeriksaan triterpenoid dan steroid

Lapisan kloroform diteteskan pada tiga lubang plat tetes. Plat 1 ditambah asam sulfat pekat, plat kedua ditambahkan asam sulfat pekat dan anhidrida asetat, plat 3 ditambahkan lapisan kloroform saja sebagai pembanding. Pewarnaan merah atau merah ungu memberikan hasil positif triterpenoid sementara warna hijau atau hijau biru memberikan hasil positif steroid.

e. Pemeriksaan alkaloid

Sampel digerus dalam lumpang bersama sedikit pasir dan 10 mL kloroform. Kemudian ditambahn 10 mL campuran kloroform-amoniak dan difiltrasi. Filtrat

yang didapatkan ditambah dengan asam sulfat 2N, didiamkan hingga membentuk dua lapisan, lapisan asam pada bagian atas dipisahkan lalu ditambahkan pereaksi Meyer. Hasil positif alkaloid ditandai dengan timbulnya kekeruhan hingga endapan bewarna putih.

14

f. Pemeriksaan kumarin

Lapisan air dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian ditambah pelarut metanol dan selanjutnya dipanaskan. Filtrat yang didapatkan, ditotolkan pada plat KLT dan selanjutnya dielusi dengan perbandingan eluen tertentu. Hasil elusi diamati dibawah sinar UV (λ= 254 nm dan 356nm). Adanya fluorisensi biru yang diberikan menandakan positif mengandung kumarin Ekstraksi Senyawa dari Daun Pacar Cina

Proses ekstraksi daun pacar cina dilakukan dengan metode maserasi. Sampel pertama kali direndam dengan pelarut heksan, proses maserasi dilakukan hingga maserat yang didapatkan telah bewarna bening. Maserat disaring untuk selanjutnya dipekatkan menggunakan rotary evaporator

hingga didapatkan ekstrak pekat heksan. Ampas yang tersisa dari hasil maserasi direndam kembali dengan pelarut etil asetat, dan dilanjutkan dengan pelarut metanol. Uji aktivitas antioksidan a. Pembuatan larutan DPPH

Sebanyak 4 mg DPPH kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL, dilarutkan dengan metanol sampai tanda batas sehingga didapatkan larutan DPPH 0,1 mM.

b. Pembuatan larutan uji

Larutan uji dibuat dengan cara melarutkan 10 mg ekstrak etil asetat dengan metanol ke dalam labu ukur 10 mL, didapatkan konsentrasi larutan induk sebesar 1000 mg/L. Selanjutnya dibuat limavariasi konsentrasi dari larutan induk dengan metode pengenceran. Variasi konsentrasi berturut-turut adalah 50, 100, 150, 200, dan 250 mg/L.

c. Pengujian aktivitas antioksidan

Masing-masing variasi konsentrasi larutan uji dipipet sebanyak 0,1 mL menggunakan pipet mikro, kemudian dimasukkan ke dalam micro plat 96 well. Setelah dimasukkan semua larutan uji, dimasukkan juga larutan DPPH 0,1mM sebanyak 0,1 mL menggunakan pipet mikro ke dalammicro

plate 96 well. Setiap larutan uji dan larutan DPPH 0,1mM diperlakukan secara triplo, campuran dibiarkan selama 30 menit setelah penambahan DPPH 0,1 mM. Pengerjaan

yang menggunakan DPPH dilakukan diruangan gelap. Larutan kontrol negatif serta blanko dimasukkan juga ke dalam microplat 96 well. Selanjutnya diukur absorban dari masing-masing larutan uji, blanko dan kontrol negatif pada panjang gelombang 517 nm. Berdasarkan absorban yang didapatkan, dihitung % inhibisi

dengan rumus berikut11 :

inhibisi= bsorban ontrol n gati bsorban samp l

bsorban ontrol n gati x

Uji kandungan total fenolik a. Pembuatan larutan standar

Larutan induk dibuat dengan melarutkan 10 mg asam galat dalam labu ukur 10 mL menggunakan pelarut metanol hingga didapatkan konsentrasi 1000 mg/L. Variasi konsentrasi dibuat dengan memipet 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; dan 0,8 mL dari larutan induk, kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 10 mL. Kedalam setiap labu ditambahkan 0,5mL reagen Folin-Ciocalteu dan didiamkan selama 5 menit. Setelah itu ditambahkan juga 1 mL larutan natrium karbonat 20%, dan diencerkan dengan akuades sampai tanda batas. Campuran didiamkan selama 120 menit. Nilai absorbannya diukur pada panjang gelombang 760 nm. Berdasarkan nilai absorban yang didapatkan, dibuat kurva kalibrasi dan didapatkan persamaan regresi dari larutan standar.

b. Pembuatan larutan uji

Sebanyak 10 mg ditimbang dari masing-masing ekstrak dan dilarutkan dalam 10 mL metanol sehingga didapatkan konsentrasi sebesar 1000mg/L. 0,5 mL larutan dimasukkan dalam labu ukur 10 mL. Ke dalam labu ukur ditambahkan 0,5 mL reagen Folin-Ciocalteu dan didiamkan selama lima menit. Kemudian ditambahkan 1 mLlarutan natrium karbonat 20% dan diencerkan dengan akuades sampai tanda batas. Campuran didiamkan selama 120 menit. Selanjutnya diukur absorbannya

15

pada panjang gelombang 765 nm. Konsentrasi total fenolik larutan uji ditentukan dari persamaan regresi kurva larutan standar. Total fenolik dalam ekstrak dinyatakan dalam Gallic Acid Equivalent (GAE). III. Hasil dan Pembahasan 3.1. Uji Profil Fitokimia

Hasil uji kandungan senyawa metabolit sekunder daun pacar cina dapat dilihat pada Tabel Hasil uji kandungan metabolit sekunder terhadap daun pacar cina. Tabel 1. Hasil uji kandungan metabolit sekunder terhadap daun pacar cina

No Kandungan Kimia

Pereaksi Hasil uji

1 Alkaloid Meyer +

2 Fenolik FeCl3 +

3 Flavonoid Sianidin test -

4 Kumarin NaOH 1% +

5 Triterpenoid LB +

6 Steroid LB +

7 Saponin H2O -

Keterangan : (+) = Ada (-) = Tidak ada Ekstraksi Senyawa dari Daun Pacar Cina

Hasil ekstrak dari daun pacar cina dapat dilihat pada Tabel Hasil ekstraksi daun pacar cina dengan pelarut Heksan, Etil asetat, dan Metanol.

Tabel 2. Hasil ekstraksi daun pacar cina dengan pelarut Heksan, Etil asetat, dan Metanol

Dari tabel diatas dapat diketahui bahwa di dalam daun pacar cina, kandungan senyawa yang bersifat semi polar paling banyak terekstrak dengan pelarut etil asetat, kemudian dilanjutkan oleh senyawa yang bersifat non polar yang diekstrak dengan pelarut heksan, dan ekstrak paling sedikit terdapat pada senyawa bersifat polar yang

diekstrak menggunakan pelarut metanol.

Uji Aktivitas Antioksidan Setiap Ekstrak

Hasil pengukuran antioksidan dari setiap ekstrak dapat dilihat pada Tabel Uji aktivitas antioksidan ekstrak heksan, etil asetat, dan metanol.

Tabel 3. Uji aktivitas antioksidan ekstrak heksan, etil asetat, dan metanol.

Ekstrak IC50 (mg GAE/mg

extrak

Heksan 43,716

Etil Asetat 16,462

Metanol 132,922

Nilai IC50 dapat ditentukan dengan membuat persamaan regresi antara konsentrasi setiap larutan uji yang merupakan sumbu X, dan nilai % inhibisi sebagai sumbu Y12. Menurut Jun, et. Al (2003), aktivitas antioksidan digolongkan sangat aktif jika nilai IC50 kurang dari 50 mg/L, digolongkan aktif apabila nilai IC50 50-100 mg/L, digolongkan sedang apabila nilai IC50 101-250 mg/L, dan digolongkan lemah apabila nilai IC50 250-500 mg/L, jika nilai IC50 besar dari 500 mg/L maka sampel dikatakan tidak aktif terhadap antioksidan13. Ekstrak etil asetat memiliki kandungan yang paling aktif terhadap aktifitas antioksidan, sehingga dapat dilanjutkan dengan proses isolasi untuk memisahkan senyawa-senyawa terdapat dalam fraksi aktif tersebut. Uji Kandungan Total Fenolik Ekstrak

Hasil pengukuran absorban seluruh larutan uji (ekstrak etil asetat, heksan, metanol) dapat dilihat pada Tabel Kandungan total fenolik dalam ekstrak etil asetat, ekstrak heksan, dan ekstrak metanol dari daun tumbuhan Aglaia odorata. (λ = 760 nm)

Tabel 4. Kandungan total fenolik dari daun tumbuhan Aglaia odorata. (λ = 760 nm)

No Sampel Kandungan Total fenolik (GAE/10mg

ekstrak kering) 1 Ekstrak

heksan 335,92

2 Ekstrak etil asetat

566,24

3 Ekstrak metanol

242,18

No Ekstrak Berat (g)

1 Heksan 131,538

2 Etil Asetat 159,632

3 Metanol 42,158

16

Berdasarkan data yang didapatkan, kandungan total fenolik dari ekstrak etil asetat lebih tinggi dibandingkan kandungan total fenolik ekstrak heksan dan metanol.

Hal ini sesuai dengan kandungan antioksidan dari ekstrak etil asetat, ekstrak heksan, dan ekstrak metanol, dimana ekstrak etil asetat memiliki nilai IC50 sebesar 16,46 mg/L, sedangkan ekstrak heksan memiliki nilai IC50 sebesar 43,716 mg/L, serta ekstrak metanol memiliki nilai IC50 sebesar 132,922 mg/L. Besarnya kandungan

fenolik dalam suatu sampel berbanding lurus dengan tingginya aktivitas antioksidan dari sampel tersebut karenakandungan fenolik yang terdapat dalam sampel sangat berpengaruh terhadap uji aktivitas antioksidan14. IV. Kesimpulan

Ekstrak heksan, etil asetat, dan metanol dari daun tumbuhan pacar cina diketahui aktif terhadap antioksidan dengan nilai IC50 secara berurut yaitu 43,76 mg/L ; 16,46 mg/L ; 132,92 mg/L. Aktivitas antioksidan paling aktif terdapat pada ekstrak etil asetat, hal ini didukung oleh nilai korelasi jumlah kandungan total fenolik dari ekstrak etil asetat (566,24 GAE/10mg ekstrak kering) yang mana nilai lebih tinggi dari ekstrak heksan (335,92 GAE/10mg ekstrak kering) dan ekstrak methanol (242,18 GAE/10mg ekstrak kering) V. Ucapan Terima Kasih

Terima kasih kepada analis laboratorium Kimia Organik Bahan Alam Ibu Mitralena yang telah membantu selama penelitian ini. Referensi

1. Hartanto, S. 2012, Isolasi dan Identifikasi Senyawa Terpen dari Ekstrak Kulit Batang Aglaia odorata Lour (Meliaceae). J. of Chemistry, 1(1)

2. Efdi, M., Masayuki, N., Erma, S., Tanaka, K., Ibrahim, S., Kunitomo, W., Mamoru, K., 2012, Sentulic Acid : A cytotoxic ring A-seco triterpenoid from Sandoricum koetjape Merr. Bioorganic & Medical Chemistry Letters, 22, 4242-4245.

3. Kakumu, A., Masayuki, N., Mai, E., Morina, A., Masahari, Y., Kaori, T., Mamoru, K., 2014, Phytochemical

Analysis and Antileukemic activity of polyphenolic constituens of Toona sinensis. Bioorganic & Medical Chemistry Letters, , 24, 4286-4290.

4. Huspa, D. 2009, Senyawa Antikanker dan Insektisida dari Genus Aglaia, UNPAD PRESS Bandung, 33-64

5. Duong, N. 2005, Isolation and Structure Elucidation of Insecticidal Secondary Metabolites from Aglaia species collected in Vietnam. Disertasi, 70-95

6. Liandi, AR. 2015, Isolasi, Karakterisasi

dan Potensi Antibakteri Senyawa Metabolit Sekunder dari Fraksi Etil Asetat Daun Tanaman Pacar Cina (Aglaia odorata), Skripsi, FMIPA, Universitas Andalas, Padang

7. Dapat, E. Jacinto, S. Efferth, T. 2013, A Phenolic Ester from Aglaia loheri Leaves Reveals Cytotoxicity Towards Sensitive and Multidrug-Resistant Cancer Cells. Journal BMC Complementary and Alternative Medicine No.13, 1-10

8. Shuai, L. Wang, H. Wen-juang, W. You-xing, Z. Xiao-na, L. Wen-li, M. Hao-fu, D. 2013, Two new rocaglamide derivatives from twigs of Aglaia odorata var. microphyllina, Phytochemistry Letters, , No.6, 5-8

9. Huspa, D. 2009, Senyawa Antikanker dan Insektisida dari Genus Aglaia, UNPAD PRESS Bandung,33-64

10. Nugroho, B.W., Edrada, R.A., Wray, V., Witte, L., Bringmann, G., Gehling, Procksch., P. 1999, An Insectisidal Rocaglamide Derivatives and Related Coumpounds from Aglaia odorata (Meliaceae). Journal Phytochemistry, 51, 367-376

11. Samiati, M. 2012, Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Garcinia Lateriflora Blume Var. Javanica Boerl dengan Metode DPPH dengan Identifikasi Senyawa Kimia dari Fraksi yang Aktif,

Universitas Indonesia Jakarta, 5 12. Brand-Williams, W., Cuvelier, M.E.,

Berset, C. 1995, Use of free radical methode to evaluate antioxidant activity. Journal of Chemistry, , 28, 25-30

13. Tjandra, O., Rusliati, T.R., Zulhipri. 2012, Uji Aktivitas Antioksidan dan

Profil Fitokimia Kulit Rambutan Rupiah

17

(Nephelium lappaceum), Skripsi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tarumanegara, Jakarta

14. Samin, Ahmad, A. 2011, Penentuan Kandungan Fenolik Total dan Aktivitas Antioksidan dari Rambut Jagung yang Tumbuh di Daerah Gorontalo. Thesis,

Fakultas MIPA, Universitas Gorontalo, Gorontalo.


18

PEMANFAATAN KERTAS KARBON SEBAGAI BAHAN ELEKTRODA PADA SUPERKAPASITOR

Admin Alif, Olly Norita T*, Rahma Fristina

Laboratorium Elektrokimia/Fotokimia FMIPA, Universitas Andalas

*E-mail: [email protected]

Jurusan Kimia FMIPA Unand, Kampus Limau Manis, 25163

Abstrak: Kertas karbon dengan berbagai ukuran dan metoda perakitan disiapkan sebagai bahan elektroda superkapasitor dengan menggunakan elektrolit hidrogel polimer yaitu polivinil alkohol sebagai separator dan asam fosfat (H3PO4) sebagai elektrolit. Superkapasitor dirakit dengan metoda penggulungan dan plat / sandwich dengan memvariasikan luas permukaan dan penambahan karbon yang berasal dari cangkang kelapa sawit dengan ukuran partikel karbon 90 µm dan suhu pembakaran 400oC. Semakin besar luas permukaan maka semakin besar nilai kapasitansi. Nilai kapasitansi optimum yang didapatkan pada metoda penggulungan adalah 1331,8 µF dengan luas permukaan 3 x 20 cm, waktu pengisian 60 menit dan konsentrasi elektrolit H3PO4 0,1 N. Sedangkan dengan metoda plat didapatkan nilai kapasitansi optimum adalah 0,099 µF dengan luas permukaan 6 x 5 cm, waktu pengisian 60 menit dan konsentrasi elektrolit 0,1 N. Kata kunci: Superkapasitor, EDLC, Kapasitansi, Elektrolit hidrogel polimer, Karbon cangkang

kelapa sawit.

I. Pendahuluan

Superkapasitor merupakan alat penyimpan

energi secara fisika dimana hanya terjadi

transfer muatan tanpa ada reaksi kimia

didalamnya, sedangkan baterai merupakan

penyimpan energi secara kimia dimana

terjadi reaksi kimia berupa reaksi redoks

untuk menimbulkan energi listrik.Secara

teknis, superkapasitor memiliki jumlah

siklus yang relatif banyak (>100000 siklus),

kerapatan energi yang tinggi, kemampuan

menyimpan energi yang besar, prinsip yang

sederhana dan konstruksi yang mudah1.

Oleh karena itu, superkapasitor menjadi

salah satu penyimpanan energi saat ini.

Sampai saat ini, beragam jenis bahan karbon

yang digunakan sebagai bahan elektroda

superkapasitor, termasuk karbon aktif,

karbon nanotube, karbon nanofiber dan grafit.

Pada penelitian sebelumnya,sumber

biomassa karbon diperoleh dari tempurung

kelapa, kayu karet dan daun teh yang akan

dijadikan bahan elektroda pada

superkapasitor2-4.

Cangkang sawit merupakan bagian yang paling keras pada komponen yang terdapat pada kelapa sawit. Ditinjau dari karakterisasi bahan baku, jika dibandingkan dengan tempurung kelapa biasa, perbedaan yang paling mencolok adalah pada kadar abu yang biasanya mempengaruhi kualitas produk yang dihasilkan oleh tempurung kelapa dan cangkang kelapa sawit5.

Karbon dari baterai tidak hanya menjadi limbah yang tidak berguna, tetapi dapat dimanfaatkan kembali menjadi material yang berguna yaitu sebagai bahan current collector pada rakitan superkapasitor, sedangkan bahan elektroda adalah kertas karbon. Dimana karbon memiliki pori pada permukaannya yang memiliki kemampuan menyimpan muatan. Bahan elektroda dari kertas karbon ini tidak perlu dilakukan preparasi atau pembuatan karbon sebelumnya, sehingga prosesnya cepat dan sederhana. Oleh karena itu, pada penelitian ini digunakan kertas karbon sebagai bahan elektroda superkapasitor.


19

Penambahan acetylene black dan graphite pada karbon dari limbah daun teh ternyata dapat meningkatkan kapasitansi dari elektroda superkapasitor2. Oleh karena itu, pada penelitian ini dilakukan penambahan karbon yang berasal dari cangkang kelapa sawit pada kertas karbon.

Penelitian ini dilakukan untuk mempelajari nilai kapasitansi dan konduktivitas dari kertas karbon sebagai elektroda dan mempelajari pengaruh penambahan karbon dari cangkang kelapa sawit pada kertas karbon terhadap nilai kapasitansi dan konduktivitas elektroda tersebut dengan menggunakan metoda penggulungan dan metoda plat tipis. II. Metodologi Penelitian 2.1. Bahan kimia, peralatan dan instrumentasi

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah kertas karbon (Munix Kangaro), cangkang kelapa sawit (Kabupaten Agam Sumatera Barat), lem stick UHU, kaleng bekas minuman Lasegar, batang karbon dari baterai ABC, ampelas, akuades, larutan H3PO4 (Merck), Polivinil Alkohol (Merck). Alat-alat yang di gunakan pada penelitian ini adalah hot plate (IKA’ C-MAG HS 4), oven, furnace, plat tembaga, kaca (4 x 4 cm), kabel buaya, neraca analitis (Mettler PM4000), dan peralatan gelas laboratorium lainnya. Peralatan instrumen yang digunakan adalah charger (Handphone Nokia 6,54 V), LCR-Meter (Tonghui Electronic TH2820-LCR), Multimeter (Heles UX-

838TR), XRD (PIXcel1D), SEM-EDX (S-3400N), FTIR (Shimadzu 8400). 2.2. Prosedur penelitian

Cangkang kelapa sawit dibersihkan, lalu di oven dengan suhu 100oC. Setelah itu direduksi ukurannya dengan grinder sampai lebih halus dan di furnace pada suhu 400oC selama 3 jam. Setelah proses karbonisasi selesai, karbon cangkang kelapa sawit diayak dengan menggunakan ayakan berukuran 90 µm. Pada metoda penggulungan, karbon cangkang kelapa sawit dengan suhu pembakaran 400oC dan ukuran 90 µm ditimbang sebanyak 0,149 gram. Kertas

karbon yang telah di timbang tersebut di beri lem dengan lem stick. Setelah itu di

taburi dengan karbon cangkang kelapa sawit pada kertas karbon ukuran 3 x 20 cm, ratakan permukaannya dan diperoleh perbandingan massa untuk elektroda 1:1. Kertas karbon tersebut digulung pada batang karbon, lalu di lem agar rekat. Dilanjutkan dengan penggulungan kedua, tapi gulungannya di balik, yaitu digulung dari kertas yang tidak ada karbonnya dan di lem agar rekat. Dilanjutkan dengan melakukan gulungan pada kaleng bekas hingga menyentuh karbon pada gulungan kedua dan dijepit dengan penjepit kertas agar lebih rekat dan rapat, sehingga diperoleh rangkaian seperti Gambar 2.1. Langkah yang sama dilakukan untuk perbandingan massa 1:2 , 1:3 , 1:4 , dan 1:5.

Gambar 2.1 Rangkaian Superkapasitor Metoda Penggulungan

Pada metoda plat/sandwich, karbon cangkang kelapa sawit dengan suhu pembakaran 400oC dan ukuran 90 µm ditimbang sebanyak 0,018 gram. Kertas karbon yang telah di timbang tersebut di beri lem dengan lem stick. Setelah itu di

taburi dengan karbon cangkang kelapa sawit pada kertas karbon ukuran 6 x 5 cm, ratakan permukaannya dan diperoleh perbandingan massa untuk elektroda 1:1. Tembaga dibersihkan dengan amplas dan juga kaca dibersihkan agar tidak ada pengotor yang menempel. Rangkaian superkapasitor plat disusun seperti Gambar 2.2 dan rangkaian di jepit dengan penjepit kertas agar rekat.

Gambar 2.2 Rangkaian Superkapasitor Metoda Plat / Sandwich.


20

Karakterisasi karbon cangkang kelapa sawit di lakukan menggunakan Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) dan X-Ray Diffraction (XRD), dan Scanning Electron Microscopy – Energy Dispersive X-Ray (SEM-

EDX). Rangkaian superkapasitor metoda penggulungan diinjeksikan larutan elektrolit H3PO4 0,1 N sebanyak 8 tetes. Setelah itu dilakukan pengisian daya (charge) selama 0, 30, 60, 90, dan 120 menit kemudian diukur sifat listriknya untuk metoda penggulungan dan plat/sandwich. Hal yang sama dilakukan untuk variasi konsentrasi larutan elektrolit 0,2 N, 0,3 N, 0,4 N dan 0,5 N. Pengukuran sifat listrik berupa nilai kapasitansi dan resistansi dari elektroda menggunakan LCR-Meter, sedangkan nilai arus dan tegangan dari superkapasitor menggunakan Multimeter. III. Hasil dan Pembahasan

3.1 Analisis hasil karakterisasi Karakterisasi XRD dilakukan untuk menentukan struktur kristal suatu material. Jenis material dapat diketahui dari karakteriasasi XRD melalu puncak hasil difraksi. Dari hasil uji XRD didapatkan pola difraksi seperti Gambar 3.1.

Gambar 3.1 Pola difraksi karakterisasi XRD karbon cangkang kelapa sawit dengan suhu pembakaran 400oC.

Dari hasil pola difraksi sinar-X diperlihatkan bahwa struktur karbon dari cangkang kelapa sawit bukan kristal tetapi amorf, karena struktur kristal biasanya memiliki banyak puncak yang periodik dan puncak-puncak energi yang tajam dan sempit bahkan satu buah garis lurus sedangkan pada grafik tidak menunjukkan ciri-ciri tersebut. Sehingga jelas dapat dikatakan

bahwa struktur dari karbon cangkang kelapa sawit adalah amorf6. Berdasarkan hasil ini maka karbon dari cangkang kelapa sawit dapat digunakan sebagai bahan elektroda pada superkapasitor.

Gambar 3.2 Hasil Karakterisasi SEM dengan perbesaran 500 kali pada karbon yang berasal dari cangkang kelapa sawit pada suhu pembakaran 400 oC.

Hasil SEM menunjukkan ukuran pori karbon cangkang kelapa sawit sebesar 100 µm. Pada Gambar 3.2 dapat dilihat bahwa karbon cangkang kelapa sawit dengan suhu pembakaran 400 oC memiliki ukuran makropori dan hampir merata pada permukaan karbon. Ukuran makropori dari karbon cangkang kelapa sawit ini memenuhi syarat untuk dijadikan sebagai bahan elektroda pada superkapasitor. Tabel 3.1 Komposisi unsur karbon dari cangkang kelapa sawit pada suhu pembakaran 400 oC dengan menggunakan EDX.

Unsur % Berat

C 78,36 O 21,07 K 0,57

Pada Tabel 3.1 menunjukkan bahwa komposisi paling banyak yang terkandung dalam karbon dari cangkang kelapa sawit adalah unsur karbon dengan persentase berat sebesar 78,36%. Unsur kalium kemungkinan berasal dari mineral lain yang terkandung dalam karbon cangkang kelapa sawit karena bahan dasar karbon berasal dari bahan alam7. Namun komposisi unsur kalium ini sangat kecil. Unsur selain karbon yaitu oksigen, yang berasal dari dari bahan baku yang tertinggal karena proses karbonisasi yang tidak sempurna8. Oleh karena itu pada Tabel 3.1 menunjukkan adanya unsur oksigen dengan persen berat 21,07% dan persen atom 16,77%. Kandungan karbon yang tinggi ini


21

merupakan syarat untuk dapat dijadikan sebagai bahan elektroda pada superkapasitor. Oleh karena itu, pada penelitian ini digunakan karbon dari cangkang kelapa sawit sebagai bahan penambah karbon pada elektroda kertas karbon.

Gambar 3.3 Spektrum FTIR dari karbon cangkang kelapa sawit ukuran 90 µm dengan suhu pembakaran 400oC.

Gambar 3.3 menunjukkan adanya serapan pada angka gelombang 3231 cm-1 yang merupakan daerah pita serapan dari gugus O-H streching dari asam karboksilat, daerah 2152,7 cm-1 merupakan daerah pita serapan gugus C=C streching, daerah 1586,15 cm-1

merupakan daerah pita serapan gugus C=C streching senyawa aromatis, daerah 641,75 cm-1 merupakan daerah pita serapan ikatan =C-H. Spektrum tersebut menunjukkan bahwa masih ada senyawa lain yang terkandung dalam karbon cangkang kelapa sawit karena karbon berasal dari bahan alam9.

3.2 Analisis hasil pengukuran sifat listrik Penambahan karbon pada elektroda karbon akan membantu meningkatkan kemampuan superkapasitor untuk menyimpan muatan2.

Gambar 3.1 Pengaruh perbandingan massa kertas karbon dengan karbon cangkang kelapa sawit terhadap nilai kapasitansi pada (a) metoda penggulungan (b) metoda plat / sandwich.

Penambahan karbon dengan variasi perbandingan massa menunjukkan nilai kapasitansi semakin meningkat hingga perbandingan massa 1:2, setelah itu nilai kapasitansi turun hingga perbandingan massa 1:5 seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3.1(a). Hal ini disebabkan karena dengan bertambahnya massa, maka ketebalan dari elektroda menjadi bertambah, dan proses penempelan karbon cangkang kelapa sawit pada kertas karbon tidak merata sehingga proses penggulungan menjadi sulit. Gambar 3.1(b) menunjukkan bahwa kapasitansi meningkat seiring dengan penambahan massa karbon cangkang kelapa sawit. Hal ini berbeda dengan metoda penggulungan karena pada metoda plat/sandwich preparasi penempelan karbon cangkang kelapa sawit pada kertas karbon lebih mudah karena ukuran kertas karbon yang digunakan lebih kecil.

Gambar 3.13 Pengaruh perbandingan massa kertas karbon dengan karbon cangkang kelapa sawit terhadap tegangan dari elektroda pada superkapasitor (a) metoda penggulungan, (b) metoda plat/sandwich.

Pada Gambar 3.13 menunjukan bahwa tegangan listrik cenderung meningkat seiring dengan meningkatnya perbandingan massa pada penambahan karbon cangkang kelapa sawit untuk metoda penggulungan dan metoda plat/sandwich. Ini terjadi karena semakin banyaknya karbon, potensial listrik yang mengalir ke elektroda akan semakin banyak.


22

Gambar 3.14 Pengaruh perbandingan massa kertas karbon dengan karbon cangkang kelapa sawit terhadap nilai arus dari elektroda pada superkapasitor (a) metoda penggulungan, (b) metoda plat/sandwich.

Gambar 3.14 menunjukkan bahwa arus listrik cenderung meningkat seiring dengan meningkatnya perbandingan massa dan tebalnya elektroda pada penambahan karbon cangkang kelapa sawit untuk metoda penggulungan. Ini terjadi karena semakin banyaknya karbon, elektron yang mengalir ke elektroda akan semakin banyak, sehingga arus listrik yang keluar pun besar. IV. Kesimpulan

Berdasarkan penelitian yang dilakukan, dapat disimpulkan bahwa kertas karbon dan karbon yang berasal dari cangkang kelapa sawit dapat digunakan sebagai bahan elektroda superkapasitor dengan menggunakan dua metoda, yaitu metoda penggulungan dan metoda plat/sandwich. Metoda penggulungan mempunyai nilai kapasitansi 13.000 lebih tinggi dibandingkan dengan plat / sandwich, yaitu 1331,8 µF pada

ukuran kertas karbon 3 x 20 cm, waktu pengisian optimum 60 menit dan konsentrasi elektrolit H3PO4 optimum adalah 0,1 N, sedangkan pada metoda plat / sandwich adalah pada ukuran kertas karbon 6 x 5 cm dengan nilai kapasitansi 0,099 µF. V. Ucapan terima kasih

Tulisan ini tidak dapat terwujud tanpa bantuan dan dukungan dari banyak pihak, terutama dosen pembimbing Olly Norita Tetra, M.Si dan Prof. Dr. Admin Alif, serta semua staf laboratorium yang membantu penulis dalam menyelesaikan penelitian ini. Referensi

1. Teguh A, Imam P, Rochmadi: Pengaruh Struktur Pori terhadap Kapasitansi Elektroda Superkapasitor yang Dibuat dari Karbon Nanopori. Jurnal Reaktor 2012, 14(1): 25-32.

2. Chao P, Xing-bin Y, Ru-tao W, Jun-wei L, Yu-jing O, Qun-ji X: Promising actived carbons derived from waste tea-leaves

and their application in high

performance supercapacitors electrodes. Electrochimica Acta 2013, 401-408.

3. Gilar S, Remigius Y, Rachimoellah M, Endah M: Pembuatan Karbon Aktif dari Arang Tempurung Kelapa dengan Aktivator ZnCl2 dan Na2CO3 sebagai Adsorben untuk Mengurangi Kadar Fenol dalam Air Limbah. Jurnal Teknik Pomits 2013, 2(1) : 116 – 120.

4. Inrizky D, Erman T, Rakhmawati F: Pembuatan Dan Karakterisasi Karbon Aktif Monolit Dari Kayu Karet Dengan Variasi Konsentrasi KOH Untuk Aplikasi Superkapasitor. JOM FMIPA 2015, 2(1) : 8 – 13.

5. Hafnida H, Usman M, Rahmi D: Pembuatan karbon aktif dari cangkang kelapa sawit dengan menggunakan H2O sebagai aktivator untuk menganalisis proksimat, bilangan iodine dan rendemen. JOM FMIPA 2014, 1(2):48 -54.

6. Malik U: Efek Suhu terhadap Pembentukan Besaran Butiran Arang Karbon Tempurung Kelapa Sawit. Jurnal Ilmiah Edu Research 2013, 2(1): 1-8.

7. Jankowski H, Swiatkowski A, and Choma J, Active Carbon, 1st ed., Ellis Horwood, London 1991, 75-77.

8. Pandolfo A G, Hollenkamp A F: Carbon Properties and Their Role in Supercapacitors. Journal of Power Source 2006, (157): 11-17.

9. Turmuzi M: Pengembangan Pori Arang Hasil Pirolisa Tempurung Kemiri. Jurnal Sistem Teknik Industri 2005, 6(3): 21-25.

10. Yantika R, Pengaruh Elektrolit H2SO4 terhadap Sifat Listrik Elektroda Campuran Zeolit dari Bottom Ash dan Resin Damar sebagai Superkapasitor, Skripsi, FMIPA, Universitas Andalas,

2014. 11. Nugroho M R, Rancang Bangun Sistem

Sumber Daya Tag Aktif RFID Berbasis Tenaga Surya dengan Superkapasitor sebagai Media Penyimpan Energi, Skripsi, Fakultas Teknik, Universitas Indonesia, 2011.

12. Rosdianty A, Alif A, Tetra O.N, Pengaruh Suhu Pembakaran terhadap Performance TiO2/C Berpendukung Keramik sebagai Elektroda Superkapasitor, Skripsi, FMIPA, Universitas Adalas, Padang, 2015.


23

UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN, SITOTOKSIK DAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL BERBAGAI FRAKSI DARI EKSTRAK METANOL BUAH

CIPLUKAN (Physalis minima Linn.)

Nisaul Khairiyah*, Bustanul Arifin, Afrizal

Laboratorium Kimia Bahan Alam, Jurusan Kimia FMIPA, Universitas Andalas

*E-mail: [email protected] Jurusan Kimia FMIPA Unand, Kampus Limau Manis, 25163

Abstract: Antioxidant activity, cytotoxic, and total phenolic contents (TPC) were determined from ciplukan

fruit (Physalis minima L.). Extraction of ciplukan fruit done by maceration method using methanol. Then the

methanol extract was fractionated using n-hexane, ethyl acetate and n-butanol. Each fraction were determined

antioxidant activity by using DPPH method, cytotoxic activity by using Brine Shrimp Lethality Test method,

and total phenolic contents by using Folin-Ciocalteu method. . The result showed that ethyl acetate fraction

was active as an antioxidant (IC50 75.95 mg/L). The highest value of total phenolic contents is in ethyl acetate

fraction (7.12 GAE/10 mg samples). The results of cytotoxic assay showed that all fractions are toxic. The most

toxic fraction are n-butanol (LC50 158.04 mg/L) and ethyl acetate (LC50 value of 159.42 mg/L), while the less

active fraction is n-hexane (LC50 value of 298.31 mg/L) and methanol (LC50 value of 659.57 mg/L). The result

also showed correlation between antioxidant activity and TPC (y = -59,584x+546,77; R2=0,918).

Keyword: Physalis minima L., antioxidant, total phenolic contents (TPC), toxicity

I. Pendahuluan

Indonesia memiliki kekayaan dan

keanekaragaman hayati yang luar biasa yaitu

lebih dari 40.000 jenis tumbuhan. Sebagian

besar dari tumbuhan tersebut digunakan

sebagai obat tradisional. Berdasarkan potensi

ini produk obat tradisional Indonesia dapat

dikembangkan secara luas1. Berbagai jenis

tumbuhan telah digunakan sebagai bahan

baku obat tradisional yang memberikan

kontribusi besar dalam penemuan obat-obat

modern. Oleh karena itu, para ahli untuk

meneliti kandungan senyawa dalam

tumbuhan yang diyakini memiliki khasiat

sebagai obat2.

Salah satu tumbuhan yang digunakan

sebagai obat tradisional yaitu ciplukan.

Ciplukan (Physalis minima Linn.) termasuk

suku terung-terungan (Solanaceae), dan satu

genus dengan Physalis angulata Linn. dan

Physalis peruviana Linn.. Beberapa penelitian

telah menjelaskan tentang manfaat dari

tumbuhan ciplukan ini. Daun ciplukan dapat

digunakan sebagai obat hipertensi dan obat

luka. Physalis angulata Linn. dapat digunakan

sebagai obat anti koagulan, anti leukemia,

anti mutagenik, anti inflamasi, analgesik, anti

septik, diuretik, imunostimulan dan anti

asma (di negara Columbia, Peru, dan

beberapa negara lainya)3. Wakhidatin (1996)

membuktikan bahwa ekstrak alkohol dari

daun ciplukan dapat menurunkan

kontraktilitas otot polos arteri terpisah tikus

yang diberi impuls listrik. Penurunan

kontraksi ini menunjukkan adanya zat aktif

yang terkandung dalam ciplukan yang

mampu menurunkan kontraksi otot polos

arteri 4.

Ciplukan (dalam bahasa Jawa), latuik-latuik

(Sumatera Barat), daun boba (Ambon), daun

kopo-kopo (Maluku), leletop (Sumatera

Timur), cecendet (Sunda), angket (Bali),


24

kopok-kopokan, padang rase, piciplukan [6].

Ciplukan merupakan terna semusim, tegak,

bercabang kuat setinggi 0,1 hingga 1,00 dan

didatangkan dari Amerika tropik. Di Jawa

tanaman ini umum tumbuh dari dataran

rendah dengan ketinggian lebih kurang 1550

m di atas permukaan laut (terutama dibawah

1200 m), di lapangan yang tidak berair, yang

ternaungi ringan atau tersinari sebagai gulma

pada ladang-ladang dan di kebun-kebun.

Tanaman ini memiliki batang berusuk tajam

dan berongga. Helaian daun berbentuk bulat

telur memanjang dengan ujung runcing,

bertepi rata atau tidak, tangkai bunga tegak,

kelopak bercelah 5, mahkota berbentuk

lonceng lebar kuning muda dengan pangkal

hijau. Buah berbentuk bulat memanjang dan

pada waktu masak berwarna kuning dan

dapat dimakan. Buah ciplukan mengandung

0,8% asam sitrat, dan kaya akan vitamin A,

serta berisi kira-kira 30 mg vitamin C dan 2,8

mg vitamin B12 dalam 100 g bagian buah

yang dapat dimakan, juga mengandung

banyak pektin5.

Ekstrak ciplukan mempunyai aktivitas yang

kuat secara in vivo dan in vitro melawan

beberapa tipe sel kanker pada manusia dan

hewan. Beberapa penelitian lain telah

membuktikan bahwa tanaman ciplukan

memiliki efek sitotoksik terhadap beberapa

sel kanker manusia yaitu HA22T (hepatoma),

Hela (kanker mulut rahim), KB (nasopharing),

Colo 205 (usus besar) dan Calu (paru). Efek

tersebut diperoleh dari ekstrak etanol

tanaman utuh (whole plant) Physalis angulata

Linn.6.

Berdasarkan latar belakang di atas, maka

perlu dilakukan penelitian tentang ekstraksi

dan fraksinasi buah ciplukan. Selain itu perlu

dilakukan uji biaoktivitas dan penentuan

kandungan fenolik total dari dari ekstrak

buah ciplukan.

I. Metodologi Penelitian

2.1 Bahan kimia, peralatan dan instrumentasi

Bahan yang digunakan selama penelitian

adalah n-heksana (C6H14) teknis (Merck), etil

asetat (C4H8O2) teknis (Merck), metanol

(C3H5OH) teknis (Merck), n-butanol

(C4H9OH) teknis (Merck), 2,2-difenil-1-

pikrilhidrazil (DPPH) (C18H12N5O6) , asam

askorbat (C6H8O6), asam galat (C7H6O5),

reagen Folin-Ciocalteu, natrium karbonat

(Na2CO3), akuades, telur udang Artemia

salina, air laut, metanol (C3H5OH) p.a.

(Merck) dan dimetilsulfoksida (DMSO)

(Merck)

Alat yang digunakan untuk uji fitokimia,

ekstraksi dan fraksinasi adalah alat distilasi,

alat maserasi, corong pisah untuk fraksinasi,

rotary evaporator (Betracher Lamag®), lampu

UV (λ = 254 nm dan 365 nm), dan plat KLT

(silika gel 60 F254). Peralatan yang digunakan

untuk uji toksisitas menggunakan metode

BSLT yaitu wadah pembiakan larva, aerator

(pembentuk gelembung udara), pipet mikro,

pipet tetes, dan vial. Peralatan yang

digunakan untuk uji aktivitas antioksidan

dan uji fenolik total adalah peralatan gelas

dan Spektrometer UV-Vis.

2.2 Prosedur penelitian

2.2.1 Persiapan dan Identifikasi Sampel Buah

Ciplukan

Buah ciplukan diperoleh dari daerah Lubuk

Minturun, Kota Padang, Provinsi Sumatera

Barat. Selanjutnya sampel buah diidentifikasi

di Herbarium Jurusan Biologi Universitas

Andalas. Sampel buah ciplukan diekstrak

dalam keadaan basah atau tanpa melalui

proses pengeringan. Massa sampel buah


25

ciplukan yang diekstrak adalah sebanyak

1200 gram.

2.2.2 Pengujian Fitokimia Sampel Buah

Ciplukan

Sampel buah ciplukan ditimbang sebanyak 2

gram, kemudian dipotong kecil, dimasukkan

ke tabung reaksi dan ditambahkan metanol.

Setelah itu ditambahkan kloroform dan

akuades dengan perbandingan 1:1 dan

dikocok dengan baik lalu dibiarkan sejenak

hingga terbentuk dua lapisan yaitu lapisan

kloroform dan lapisan air. Lapisan bawah

(kloroform) dipisahkan dengan cara

dekantasi ke dalam tabung reaksi yang lain.

Lapisan kloroform digunakan untuk

pemeriksaan senyawa triterpenoid dan

steroid. Lapisan air dibagian atasnya

digunakan untuk pemeriksaan flavonoid,

saponin, dan fenolik.

a. Uji flavonoid

Lapisan air yang sudah dipisahkan diambil

sebanyak 1 mL dimasukkan kedalam tabung

reaksi lalu ditambahkan asam klorida pekat

dan beberapa butir serbuk magnesium.

Terbentuknya larutan orange sampai merah

menandakan positif flavonoid.

b. Uji fenolik

Lapisan air diambil sebanyak 1 mL dan

dimasukkan kedalam tabung reaksi.

Selanjutnya kedalam tabung reaksi

dimasukkan larutan besi(III) klorida. Ciri

khas fenolik membentuk kompleks dengan

besi(III) klorida menimbulkan larutan warna

biru atau ungu tua

c. Uji saponin

Lapisan air diambil 1 mL dan dimasukkan ke

dalam tabung reaksi. Selanjutnya dikocok

kuat-kuat dalam sebuah tabung reaksi,

terbentuknya busa yang tidak hilang dalam 5

menit dengan penambahan beberapa tetes

asam klorida pekat menunjukkan adanya

saponin. d.

e. Uji terpenoid dan steroid

Lapisan kloroform diteteskan pada tiga

lubang plat tetes. Plat pertama ditambah

asam sulfat pekat, plat kedua ditambahkan

asam sulfat pekat dan anhidrida asetat dan

plat 3 ditambahkan lapisan kloroform saja

sebagai pembanding. Pewarnaan merah atau

merah ungu memberikan uji positif

triterpenoid sementara warna hijau atau hijau

biru memberikan positif steroid.

f. Uji kumarin

Lapisan air dimasukkan dalam tabung reaksi,

kemudian ditambah pelarut metanol dan

selanjutnya dipanaskan. Filtrat yang

didapatkan, ditotolkan pada plat KLT dan

selanjutnya dielusi dengan perbandingan

eluen tertentu. Hasil elusi diamati dibawah

sinar UV (λ= 254 nm dan 356 nm). Adanya

fluorisensi biru yang diberikan menandakan

positif mengandung kumarin.

g. Uji alkaloid

Sebanyak 2 gram sampel digerus dalam

lumpang bersama sedikit pasir dan 10 mL

kloroform. Kemudian ditambah 10 mL

campuran kloroform-amoniak dan difiltrasi.

Filtrat yang didapatkan ditambah dengan

asam sulfat 2N. Lapisan asam dipisahkan lalu

ditambahkan pereaksi Meyer. Hasil positif

mengandung alkaloid ditandai dengan

timbulnya endapan bewarna putih.

2.2.3 Ekstraksi sampel buah ciplukan

Sebanyak 1200 g sampel basah buah ciplukan

yang telah dihaluskan, diekstraksi dengan

menggunakan metoda maserasi. Pelarut yang

digunakan untuk maserasi adalah metanol.

Pelarut dimasukkan kedalam botol hingga

ketinggian permukaan pelarut lebih kurang 2


26

cm di atas permukan sampel yaitu 2000 mL.

Penggantian pelarut dilakukan setiap 3 hari

sekali. Penggantian pelarut dilakukan

sebanyak 6 kali hingga diperoleh filtrat hasil

maserasi yang tidak berwarna. Filtrat hasil

maserasi dikumpulkan dan kemudian

dipekatkan dengan rotary evaporator pada

suhu 50 oC sehingga didapatkan ekstrak

metanol pekat.

2.2.4 Fraksinasi ekstrak metanol buah ciplukan

Ekstrak pekat metanol di fraksinasi

menggunakan pelarut n-heksana, etil asetat,

dan n-butanol. Ekstrak pekat metanol

ditimbang untuk mengetahui massa ekstrak

pekat metanol yang akan difraksinasi.

Sebanyak 5,63 gram ekstrak metanol

dimasukkan ke dalam gelas piala 500 mL dan

ditambahkan pelarut n-heksana sebanyak 150

mL. Ekstrak pekat metanol yang telah

ditambahkan pelarut n-heksana dimasukkan

ke dalam corong pisah dan dilakukan

pengocokan selama 15 menit. Setelah

pengocokan, campuran didiamkan hingga

terbentuk dua lapisan yaitu lapisan fraksi n-

heksana dan lapisan air. Lapisan atas yang

merupakan lapisan fraksi n-heksana

dipisahkan dari lapisan air. Selanjutnya

dilakukan penambahan pelarut n-heksana

dengan volume yang sama dan dilakukan

kembali tahap fraksinasi sampai diperoleh

lapisan fraksi heksana yang sudah tidak

berwarna.

Setelah fraksinasi menggunakan n-

heksana selesai, dilanjutkan fraksinasi

menggunakan pelarut etil asetat dan n-

butanol. Proses pengerjaan fraksinasi

menggunakan etil asetat dan n-butanol sama

dengan pengerjaan fraksinasi menggunakan

n-heksana. Dari proses fraksinasi ini

diperoleh empat fraksi yaitu fraksi n-

heksana, fraksi etil asetat, fraksi butanol, dan

fraksi metanol. Masing-masing fraksi

diuapkan menggunakan rotary evaporator.

Setelah kering, ditimbang massa masing-

masing fraksi.

2.2.5 Uji aktivitas antioksidan fraksi n-

heksana, etil asetat, n-butanol, dan

metanol dengan metode DPPH

Untuk larutan DPPH, ditimbang 4 mg DPPH

yang dilarutkan dalam metanol hingga

volume 100 ml dan didapatkan larutan DPPH

0,1 mM. Larutan uji dibuat dengan cara

melarutkan 10 mg masing-masing fraksi

dengan metanol dalam labu ukur 10 mL

sehingga didapatkan konsentrasi dari larutan

sebesar 1000 mg/L. Selanjutnya dibuat 5

variasi konsentrasi dari larutan uji dengan

metode pengenceran. Variasi konsentrasi

berturut-turut adalah 50; 100; 150; 200; 250

mg/L. Sebagai kontrol positif digunakan

asam askorbat. Pembuatan larutan kontrol

positif sama dengan pembuatan larutan uji

yaitu 10 mg asam akorbat dilarutkan dengan

metanol dalam labu ukur 10 mL sehingga

didapatkan konsentrasi dari larutan sebesar

1000 mg/L. Selanjutnya dibuat 5 variasi

konsentrasi dari larutan kontrol positif

dengan metode pengenceran. Variasi

konsentrasi berturut-turut adalah 50; 100;

150; 200; 250 mg/L..

Untuk masing-masing larutan uji diambil

sebanyak 2 mL kemudian ditambahkan 3 mL

larutan DPPH dan didiamkan selama 30

menit serta campuran dihindarkan dari

cahaya. Sebagai kontrol negatif pada

pengujian ini adalah 2 mL metanol ditambah

3 mL larutan DPPH, sebagai kontrol positif

digunakan asam askorbat dengan cara

memipet 2 mL larutan asam askorbat dan

ditambahkan dengan 3 mL DPPH, dan

sebagai blanko yang digunakan adalah 5 mL

metanol. Selanjutnya diukur absorban dari

masing-masing konsentrasi larutan uji dan


27

kontrol pada panjang gelombang 517 nm7.

Berdasarkan absorban yang didapatkan,

dihitung % inhibisi dengan rumus berikut:

–

Setelah didapatkan nilai % inhibisi dari

perhitungan, dapat ditentukan nilai IC50 dari

setiap variasi konsentrasi larutan uji dengan

menggunakan persamaan regresi yang

didapatkan. Besarnya nilai IC50 menunjukkan

aktivitas antioksidan yang dimiliki ekstrak

etil asetat tersebut.

2.2.6 Penentuan kandungan fenolik total

Penentuan kandungan fenolik total

dilakukan dengan metoda spektrofotometri

menggunakan reagen Folin-Ciocalteu.

Masing-masing sampel (fraksi n-heksana, etil

asetat, n-butanol dan metanol) diambil 10

mg, kemudian diencerkan sampai volume 10

mL. Larutan tersebut masing-masingnya

diambil 0,5 mL, dicampur dengan 1 ml

reagent Folin-ciacalteu. Setelah 5 menit,

ditambahakan 1 mL larutan 7% natrium

karbonat dan diencerkan dengan akuades

sampai volume 10 mL, kemudian

dihomogenkan. Campuran ini didiamkan

selama 120 menit pada temperatur ruang,

ju y d u u d λ 75 .

Kandungan fenolik total ditentukan dengan

kurva kalibrasi menggunakan asam galat (10,

20, 40, 60, dan 80 µg/mL) sebagai larutan

standar. Kandungan fenolik total dinyatakan

sebagai miligram ekuivalen asam galat (GAE)

fakultas matematika dan ilmu pengetahuan alam universitas...

Documents