Deteksi cepat minyak kelapa sawit yang terinfeksi ganoderma OLEH ekstraksi microwave ergosterol dengan HPLC dan TLC

Deteksi cepat kelapa sawit Ganoderma terinfeksi oleh microwave ekstraksi ergosterol dengan HPLC dan TLC

a b s t r a c t

Deteksi basal busuk batang oleh Ganoderma dari kelapa sawit didasarkan pada gejala daun dan produksi ofbasidiomata. Enzim-Linked Immunosorbent Assay-Antibodi Poliklonal (ELISA-PAB) dan PCR telah diusulkan sebagai metode deteksi dini untuk penyakit ini. Namun, teknik ini sangat kompleks, memakan waktu dan memiliki keterbatasan akurasi. Sebuah metode ergosterol dikembangkan yang berkorelasi dengan baik dengan tingkat infeksi pada kelapa sawit, termasuk sampel yang tumbuh di perkebunan. Namun, metode ini mampu menjadi dioptimalkan. Studi saat ini dirancang untuk mengembangkan metode, ergosterol lebih cepat dan efisien sederhana dengan utilitas di lapangan yang melibatkan penggunaan ekstraksi microwave. Prosedur dioptimalkan terlibat mengekstraksi sejumlah kecil Ganoderma, atau Ganoderma terinfeksi kelapa sawit dihentikan pada volume rendah pelarut diikuti oleh iradiasi dalam oven microwave konvensional pada 70 ° C dan daya tinggi sedang selama 30 s, sehingga ekstraksi simultan dan saponifikasi. Ergosterol dideteksi dengan kromatografi lapis tipis (KLT) dan diukur dengan menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi dengan deteksi diode array. Metode TLC adalah novel dan disediakan sederhana, metode yang tidak mahal dengan utilitas di lapangan. Metode baru itu sangat efektif dalam penggalian hasil yang tinggi dari ergosterol dari kelapa sawit terinfeksi dan memungkinkan analisis cepat dari sampel lapangan di situs, yang memungkinkan kelapa sawit yang terinfeksi untuk diperlakukan atau dimusnahkan sangat cepat. Beberapa keterbatasan metode ini dibahas di sini. Prosedur meminjamkan diri untuk mengendalikan penyakit yang lebih efektif dan memungkinkan lebih efektif menggunakan lahan yang saat ini digunakan untuk menanam kelapa sawit, sehingga mengurangi tekanan untuk mengembangkan perkebunan baru

1. introduction

Minyak kelapa sawit merupakan komoditas utama yang digunakan dalam ca. 30% dari makanan dan kosmetik. Semakin minyak digunakan sebagai biofuel dan memberikan kontribusi cukup bagi ekonomi banyak negara dan khususnya Malaysia dan Indonesia (Paterson et al., 2013). Kelapa sawit menderita kemudahan dis utama, busuk batang basal (BSR), yang disebabkan oleh jamur busuk putih Ganoderma. Menurut Idris et al. (2011), 632 dari 1.061 perkebunan (59,57%) yang menanggapi survei, melaporkan kejadian penyakit BSR. Rata-rata kejadian BSR di Malaysia adalah 3,71% dengan daerah yang terkena of59, 148 ha. Kerugian ekonomi antara $ 68 dan $ 455.000.000 setahun di Malaysia saja (Chong, 2011).

Penyakit ini saat ini terdeteksi berdasarkan perkembangan gejala daun dan produksi basidiomata di bidang matang. Namun, gejala yang terlihat menunjukkan bahwa (a) telapak tangan sudah pada tahap serius infeksi dan (b) jamur telah membunuh sekitar setengah dari jaringan basal. Metode yang lebih efektif untuk mendeteksi penyakit dinidiperlukan agar tindakan perbaikan (misalnya pemusnahan) dapat dilakukan dengan cepat untuk mencegah menyebar ke kelapa sawit yang sehat menyebabkan

penyakit bahkan lebih. Kontrol yang lebih baik dari penyakit ini dapat menciptakan manfaat ekologis dari tekanan rendah untuk membuat perkebunan baru sebagai hasil dari ladang yang meningkat.

The Enzyme Linked Immunosorbent Assay--Antibodi Poliklonal (ELISA-PAB) dan PCR telah diusulkan (Mohd Aswad et al., 2011), tetapi metode ini tidak berlaku untuk skala besar karena mereka sangat kompleks, memakan waktu dan memiliki keterbatasan akurasi. Sebagai contoh, PCR dapat dikenakan inhibisi (Paterson, 2007a) dan ELISA-PAB menderita reaktivitas silang (Idris dan Rafidah, 2008). Ganoderma boninense, patogen jamur penyebab BSR di kelapa sawit, colonises akar dan menyebabkan peningkatan bertahap dalam biomassa jamur selama perkembangan penyakit. Selain itu, jamur muncul untuk menjajah dari satu kelapa sawit yang lain dengan memproduksi sejumlah besar spora (Sanderson, 2005). Salah satu komponen cellmembrane umum, ergosterol, cukup spesifik (Mille-Lindblom et al, 2006.) Yang digunakan untuk mengukur jamur dalam tanah (Grant dan Barat, 1986; Frostegard dan Baath, 1996), akar (Bindler et al., 1988), biji-bijian sereal (Seitz et al., 1977), dan material tumbuhan yang membusuk (Newell et al., 1988). Senyawa ini digunakan untuk mengukur ectomycorrhizae (Salmanowicz dan Nylund, 1988; Wallander et al., 1997). Juga, ergosterol dalam jamur busuk putih Hydnum dan Polyporus berkorelasi dengan pertumbuhan jamur ini di kelapa sawit in vitro (Paterson et al., 2000). Paterson (2007b) merekomendasikan penggunaan ergosterol untuk menentukan tingkat BSR di palmtrunk minyak dan analisis terbaru dari ergosterol di Ganoderma palmtissue minyak yang terinfeksi menunjukkan korelasi yang kuat antara konsentrasi ergosterol dan tingkat keparahan penyakit, menunjukkan kemungkinan penggunaan ergosterol dalam kuantifikasi BSR di telapak tangan (Mohd Aswad et al., 2011). Dalam studi ini, rupanya sakit dan kelapa sawit sehat ditebang dan dinilai untuk penyakit, dari tidak ada menjadi tinggi, dengan metode konvensional. Gejala berkorelasi dengan baik dengan tingkat ergosterol, dan ergosterol tidak terdeteksi dalam sampel kelapa sehat. Selain itu, kelapa sawit berdiri dinilai untuk penyakit dan dibor untuk sampel: Hasil serupa diperoleh dengan kelapa sawit ditebang. Prosedur-prosedur ini mirip dengan yang akan terjadi selama manajemen perkebunan normal penyakit. Metode analisis ergosterol adalah kromatografi yang merupakan metode kimia yang melibatkan padat / pemisahan fase cair andmore kuat inheren dari biochemicalmethods, seperti PCR dan antibodi, yang melibatkan berpotensi biokimia lebih bervariasi seperti protein dan asam nukleat.

Tentu, ada keterbatasan untuk metode: Ini tidak akan membedakan antara target Ganoderma dan jamur lain yang mungkin ada. Namun, tidak ada jamur lain akan memberikan kontribusi yang signifikan terhadap konsentrasi ergosterol, seperti Ganoderma adalah satu-satunya jamur yang terlibat dalam jenis penyakit pada kelapa sawit, di mana sejumlah besar biomassa jamur diproduksi sebagai hasil infeksi (Paterson, 2007b). Layu Fusarium menyebabkan penyakit kelapa sawit dengan mekanisme yang sangat berbeda yang melibatkan produksi enzim ekstraseluler daripada peningkatan besar dalam biomassa. Menguning fatal atau mematikan tunas membusuk kelapa sawit disebabkan oleh Thielaviopsis paradoxa (teleomorph Ceratocystis paradoxa) yang menyerang jaringan non-mengalami lignifikasi. Penyakit ini jarang terjadi dan tidak akan terlibat dalam pertumbuhan yang tinggi di seluruh batang kelapa sawit atau akar seperti halnya dengan Ganoderma. Penyakit jamur yang paling penting di Kolombia tunas membusuk oleh Phytophthora palmivora. Fungusdoesnot ini causedisease oleh pertumbuhan luas di seluruh akar atau stemand dengan implikasi terbatas dalam pengaruhnya terhadap tunas (Paterson et al., 2013). Oleh karena itu, jamur ini tidak akan interferewith ergosterol analisis. Meskipun bukan pembatasan per se, masalah lain adalah konsentrasi ergosterol thatwouldmerit pemusnahan suatu kelapa sawit, yang akan memerlukan penyelidikan yang cermat untuk memastikan nilai biaya-efektif diperoleh.

Namun, extractionmethod inMohd Aswad et al. (2011) memakan waktu, dan membutuhkan sejumlah besar peralatan mahal dan volume tinggi pelarut mahal dan berpotensi berbahaya. Di

perkebunan, BSR sensus yang dilakukan secara teratur dan sebaiknya pada interval enam bulan: metode deteksi dini yang kuat, cepat dan handal sangat diinginkan untuk BSRmonitoring skala besar, yang dapat disesuaikan dengan bidang analisis. Sebuah metode sangat diinginkan akan menjadi salah satu yang bisa dilakukan di tempat (misalnya dekat dengan perkebunan kelapa sawit). Energi gelombang mikro telah terbukti sangat mempercepat berbagai awide dari (a) reaksi kimia sampai dengan asmuch 240 kali (Mingos dan Baghurst, 1991) dan (b) ekstraksi bahan kimia organik dari berbagai matriks (Ganzler et al, 1986;. Onuska dan Terry, 1993;. Lopez-Avila et al, 1994). Muda (1995) mengembangkan ekstraksi dengan bantuan gelombang mikro (MAE) teknik untuk analisis ergosterol dalam jamur dan sampel yang terkontaminasi dengan jamur. Pemulihan ergosterol lebih efisien dibandingkan dengan metode ekstraksi fluida superkritis dan klasik. Dengan demikian studi ini dilakukan untuk mengetahui kepraktisan menggunakan metode MAE infeksi BSR monitoring dalam sampel lapangan dan mewakili Q7 pertama laporan tersebut.

2. Bahan dan metode

2.1. Budaya miselium Ganoderma

Sebuah kultur murni dari G. boninense (strain UPM 13) diisolasi dari basidiomata dari batang kelapa sawit yang terinfeksi di Gua Musang Felda, Malaysia menggunakan Ganoderma media selektif (Ariffin dan Idris, 1991) dan identifikasi itu dikonfirmasi oleh para ahli berdasarkan miselium dan spora morfologi. Budaya murni dipertahankan pada ekstrak malt agar (MEA) (Merck) dan disimpan dalam koleksi budaya Institute of Bioscience (IBS), UPM, Malaysia sebagai budaya saham. Sebuah disc miselium (0,5 cm) dari budaya 14 hari dipotong dan ditanam di statis 250 mL labu Erlenmeyer yang berisi 100 mL Malt Extract Broth (MEB) (Merck) pada suhu kamar (25 ± 2 ° C). Miselium telah dihapus dari termos setelah 2 minggu, dibilas dengan air suling steril, udara kering dan disimpan pada -80 ° C sebagai inokulum untuk percobaan berikutnya.

2.2. Ekstraksi ergosterol menggunakan microwave dibantu ekstraksi

Ekstraksi G. boninense didasarkan pada prosedur Muda (1995) dengan modifikasi. Sebuah sampel dari 0,5 g berat segar (FW) miselium dari 2 minggu tua Ganoderma miselium tumbuh di MEB asmentioned di atas, yang dimaserasi dalam nitrogen cair menggunakan amortar dan alu menjadi bubuk, dan dipindahkan ke tabung reaksi Pyrex dengan Teflon sekrup topi. Dua mililiter metanol (Merck, Kromatografi grade) dan 0,5 mL dari 2 M natrium hidroksida ditambahkan dan tabung itu tertutup rapat. Tabung reaksi ditempatkan dalam botol kultur di pusat microwave konvensional (Sharp Jet convectional Grill, Model TTAG A437 dengan kapasitas 1,5 ft 162 3) dan mengalami berbagai tingkat microwave yang membentuk dasar dari eksperimen. Solutionswere kiri untuk mendinginkan dan dinetralkan dengan asam klorida pekat. Akhirnya, solusi yang diekstraksi tiga kali dengan 2 ml pentana (Fisher kimia, kelas reagen analitis). Menggabungkan ekstrak pentana kemudian diuapkan sampai kering dengan menggunakan rotary evaporator Buchi dan kemudian dilarutkan dalam 500 mL metanol untuk mendeteksi ergosterol menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) dan dihitung dengan menggunakan kromatografi cair peformance tinggi (HPLC) terhadap standar ergosterol (Sigma , kemurnian ≥ 95,0%).

2.2.1. Optimalisasi ekstraksi

Untuk menentukan pengaturan ekstraksi microwave optimal, temperatureswere berbeda yang digunakan sesuai dengan pengaturan suhu tersedia di microwave (40 dan 70 ° C), kekuasaan (medium, menengah tinggi dan tinggi) dan waktu paparan (10, 20 dan 30 s) dan yang diuji pada 0,5 g FWGanoderma miselium.

2.2.2. Ergosterol dari bobot yang berbeda dari Ganoderma

Baru dipanen miselium dari 2 minggu tua Ganoderma miselium tumbuh di MEB sebagaimana disebutkan di atas (0.025, 0.05, 0.10, 0.20, 0.40, 0.60, 0.80, dan 1.00 g) digunakan untuk ekstraksi ergosterol untuk menentukan linearitas respon ekstraksi.

2.2.3. Ergosterol dari bobot yang berbeda dari kelapa sawit

Jaringan yang terinfeksi dibor dari 15 pohon yang terinfeksi obtainedfromthe perkebunan GuaMusang Felda dan menunjukkan stadium 3 infeksi BSR. Tingkat infeksi ditentukan oleh penyakit kunci bergambar dikembangkan oleh Mohd Aswad et al. (2011), ditandai dengan daun tombak belum dibuka dan basidiomata dari jamur muncul di batang atau akar dekat permukaan tanah; terinfeksi jaringan dibor muncul coklat gelap dengan bau tengik fermentasi dan kuat. Bobot yang berbeda dari tiga sub-sampel dari setiap sawit (0,25, 0,50, 1,00, 1,50, 2,00, 2,50, 3,00, 3,50 dan 4,00 g) yang dimaserasi dalam nitrogen cair dan ergosterol diekstraksi berdasarkan yang telah ditentukan dioptimalkan identifikasi microwave settings.The dari ergosterolwas mencapai dengan HPLC dioda deteksi array dan TLC.

2.2.4. Perbandingan antara metode yang berbeda dari ekstraksi ergosterol

Perbandingan dilakukan antara MAE, ekstraksi non-alkaline (NAE) (Gong et al., 2001), dan ekstraksi sonikasi yang ultra (USE) metode (Yuan et al., 2007) dengan 0,5 g FWof Ganoderma miselium.

2.3. Deteksi dan kuantifikasi ergosterol

2.3.1. Kromatografi lapis tipis

Enam microlitres dari 100 μgmL-1 ergosterol standar (Sigma, kemurnian ≥ 95,0%) dan diekstraksi ergosterolwas terlihat di RP-18 Silica dilapisi pelat TLC (Merck, 20 × 20 cm) dengan amicropipetter (Eppendorf) dengan 10mmspace antara masing-masing tempat. Spotswere kemudian dikeringkan selama 5 menit sebelum pembangunan. Pelat dikembangkan dalam 25 mL n-heksan / etil asetat (75/25; v / v) selama kurang lebih 60 menit di bawah rata-rata developing chamber (CAMAG III). Lempeng dikeringkan selama 5 menit dan dilihat di bawah lampu UV pada 365 nm. Deteksi TLC dilakukan dalam rangkap dua untuk semua sampel. Identifikasi ergosterol didasarkan pada perbandingan dengan nilai Rf dengan standar ergosterol dan konsentrasi diperoleh dari analisis HPLC.

 2.3.2. Kromatografi cair kinerja tinggi

Sebuah Agilent 1100 series HPLC dilengkapi dengan Array Diode Detector (G1315B), pompa (G1311A), dan autosampler (G1313A) digunakan untuk kuantifikasi ergosterol menggunakan Ascentis mengungkapkan 2,7 μ c18 reverse-fase kolom (Supelco, USA). Kondisi operasi terdiri dari HPLC-grade metanol fase gerak isokratik dengan laju alir 1 mL menit-1. Tahap mobile gasnya selama 30 menit dalam Ultrasonikator (Cole-palmer) dengan kekuatan penuh. Deteksi UV berada di 282 Volume injeksi nmand dari 10 uL per samplewas ditetapkan untuk kuantifikasi. Waktu retensi rata-rata ergosterol adalah 7 menit. Sebuah standar ergosterol dipersiapkan untuk membangun kurva standar. Puncak ergosterol ditentukan dengan perbandingan waktu retensi dan absorbansi UV pada 282 nm terhadap standar ergosterol murni. Konsentrasi ergosterol untuk masing-masing berjalan ditentukan dengan perbandingan terhadap ergosterol kurva kalibrasi standar. Semua konsentrasi ergosterol dilaporkan pada per unit berat badan dan masing-masing sampel dianalisis dalam tiga ulangan.

3. Hasil

3.1. Ekstraksi ergosterol menggunakan microwave dibantu ekstraksi

3.1.1. Optimalisasi ekstraksi ergosterol

Tanggapan HPLC (luas puncak) diperiksa untuk linearitas dalam tingkat 50-120 mg standar ergosterol. Puncak yang berkorelasi dengan konsentrasi ergosterol, yang memberikan korelasi yang baik koefisien (R2) dari 0,9978.Ergosterol puncak standar baik diselesaikan dalam semua berjalan. Konsentrasi ergosterol untuk pengaturan microwave yang berbeda diilustrasikan pada Gambar. 1. Pengaturan medium high pada 70 ° C untuk pemaparan 30 s waktu yang paling pengerjaannya efisien, yang mengakibatkan konsentrasi tertinggi ergosterol diekstraksi dari 0,5 g berat segar Ganoderma miselium

3.1.2. Ergosterol dari bobot yang berbeda dari Ganoderma

Konsentrasi ergosterol meningkatkan biomassa proporsional dengan miselium .Terendah dan Ganoderma biomassa tertinggi 0,025 g dan 1,0 g mengakibatkan konsentrasi ergosterol terendah dan tertinggi 22,70 mg g-1 dan 64,00 mg-1 g masing-masing. Intensitas tempat ergosterol terdeteksi pada pelat TLC meningkat secara proporsional dengan peningkatan biomassa di miselium (dan karenanya ergosterol) dengan faktor retensi (Rf) 0,68.

3.1.3. Ergosterol dari bobot yang berbeda dari kelapa sawit

Untuk menentukan efisiensi ekstraksi dengan metode themicrowave pada sampel kelapa sawit yang sebenarnya, jumlah ergosterol dari bobot yang berbeda dari Ganoderma terinfeksi minyak palmand MAE ergosterol HPLC kromatografi matogram jaringan kelapa sawit yang terinfeksi diberikan pada Gambar. 3. Lowestand The biomassa tertinggi 0,25 g dan 4,00 g mengakibatkan konsentrasi ergosterol terendah dan tertinggi 2,20 mg g-1 dan 6,60 mg g-1 masing-masing.

3.1.4. Perbandingan antara metode yang berbeda dari ekstraksi ergosterol

Metode ekstraksi MAE lebih efisien dibandingkan dengan NAE dan USEmethods. Jumlah diekstraksi from0.50 g freshweight Ganoderma miselium dengan MAE (62.06 mg g-1) yang cukup signifikan lebih tinggi daripada USE (9,63 mg g-1) dan NAE (7,34 mg g-1) metode, sedangkan nilai untuk USE dan NAE tidak berbeda secara signifikan. Selain itu, analisis TLC juga menunjukkan intensitas tertinggi dari tempat diproduksi dengan MAE dan bahwa ukuran tempat sebanding dengan konsentrasi ergosterol (Gambar 4). Perbandingan pengaturan eksperimental antara MAE dan NAE menunjukkan bahwa MAE diperlukan waktu yang lebih singkat dari metode NAE dan lebih sampel dapat di ekstraksi dengan periode waktu tertentu (Tabel 1).

4. Diskusi

Ergosterol adalah sterol utama di cell membranes jamur berserabut dan tidak ada, atau hadir sebagai komponen minor, di sebagian besar tumbuhan tingkat tinggi (Madonna et al., 2001). Karya ini menunjukkan bahwa ekstraksi microwave daya tinggi media pada 70 ° C memberikan ekstraksi optimal ergosterol dari G. boninense miselium . Selain itu, hubungan langsung antara berat miselium dan konsentrasi ergosterol . Hasil ini menunjukkan bahwa metode ini cocok untuk menganalisis sampel dari kelapa sawit sebanding dengan Mohd Aswad et al. (2011) dalam laporan sebelumnya. Ada hubungan langsung antara berat sampel kelapa sawit yang terinfeksi dan konsentrasi ergosterol . Karya terbaru menunjukkan bahwa ergosterol tidak dapat dideteksi dalam kelapa sawit yang sehat

(Mohd Aswad et al, 2011;. Toh Choon et al, 2012;. Chong, 2012) dan analisis ergosterol adalah metode diagnostik valid untuk mendeteksi BSR. Metode yang digunakan untuk analisis ergosterol dalam sistem lain sering didasarkan pada Seitz et al. (1977, 1979), dan ekstraksi metanol terlibat, saponifikasi alkalin, ekstraksi pentana dan fase terbalik cair kinerja tinggi kromatografi (HPLC) pemisahan dengan ultraviolet (UV) deteksi pada 282 nm. Beberapa modifikasi dilaporkan mencakup kombinasi ekstraksi metanol dan saponifikasi (Newell et al Q13, 1988;. Zill et al, 1988;. Schwadorf dan Muller, 1989); penggunaan CO2 ekstraksi fluida superkritis (SFE), dan kromatografi fluida superkritis (Young dan Games, 1993). Muda (1995) mengembangkan ekstraksi dengan bantuan gelombang mikro (MAE) teknik untuk analisis er-gosterol dalam jamur dan sampel yang terkontaminasi oleh jamur. Pemulihan ergosterol menggunakan ekstraksi klasik dan metode ekstraksi fluida superkritis yang lebih rendah dari MAE.

Prinsip dasar dari protokol MAE adalah bahwa ergosterol dapat etracted dari membran jamur dengan efek microwave yang menguap dan menghasilkan tekanan yang besar pada dinding sel akibat pembengkakan sel (Wang andWeller, 2006). Tekanan mendorong dinding sel dari dalam, memperluas dan akhirnya melanggar itu, yang membantu pencucian keluar dari konstituen aktif dari sel pecah ke karenanya sur-pembulatan pelarut meningkatkan hasil phytoconstituents. Daya microwave dan waktu iradiasi adalah dua faktor yang mempengaruhi ekstraksi untuk sebagian besar. Dalam studi ini, pengaturan optimal untuk teknik MAE adalah 70 ° C dengan daya menengah dan tinggi 30 s waktu pemaparan (Gambar 1). A (a) lebih tinggi dan (b) microwave rendah temperatur dan kekuasaan mengakibatkan (a) bocornya pelarut dari tabung, dan (b) kurang ergosterol masing-masing. Kombinasi ormoderatepower rendah dengan pemaparan lebih lama mungkin berguna, tapi daya tinggi dengan kontak yang terlalu lama melibatkan risiko degradasi termal (Mandalet al., 2007).

Seperti disebutkan di Pendahuluan, ekstraksi akan mencakup ergosterol dari semua jamur yang hadir dalam sampel awal dan adalah keterbatasan potensial. Namun, hal itu menunjukkan bahwa ergosterol tidak terdeteksi di kelapa sawit yang sehat yang merupakan indikasi kegunaan metode dalam bahwa setiap kontaminasi kesempatan tidak akan mempengaruhi hasil. Selain itu, Ganoderma adalah satu-satunya jamur yang menyebabkan jenis diseaseand adalah jauh penyakit lazim themost kelapa sawit di Asia Tenggara. Oleh karena itu, tingkat ergosterol kemungkinan akan terkait langsung dengan jumlah busuk kelapa sawit dan tidak adanya jamur lain. Sebuah isu yang membutuhkan menangani adalah apa konsentrasi ergosterol akan keputusan untuk menyisihkan kelapa sawit terinfeksi dilakukan? Ini akan ditentukan oleh penelitian lebih lanjut di fieldwhich yang berkorelasi dengan deteksi ergosterol yang ada, parameter kemudian digunakan untuk membuat keputusan untuk menyisihkan (misalnya adanya basidiomata). Selanjutnya, samplingwould buta memberikan informasi yang berguna dalam studi masa depan sekarang bahwa korelasi antara penyakit dan ergosterol telah dibuat di koran saat ini dan sebelumnya. Sejumlah perwakilan tertentu kelapa lapangan froma minyak bisa dipilih secara acak dan dianalisis untuk ergosterol menggunakan pengeboran pohon berdiri (Mohd Aswad et al., 2011).

Telapak tangan ini kemudian dapat dimonitor untuk infeksi berikutnya untuk menentukan kemampuan prediktif metode ini.

Fakta lain yang penting tentang protokol MAE adalah bahwa hanya melibatkan penggunaan metanol menghindari berbahaya Selain solvents.In organik lainnya, hanya sampel kecil diperlukan yang studi advantageous.This juga menunjukkan korelasi yang kuat antara konsentrasi ergosterol dan G. boninense miselium biomassa atau Ganoderma terinfeksi jaringan kelapa, menunjukkan bahwa konsentrasi ergosterol meningkat secara langsung dengan peningkatan biomassa miselium. Dengan demikian, metode ergosterol seperti yang dijelaskan di sini menegaskan bahwa itu adalah kemajuan

besar dalam estimasi biomassa jamur (Mille-Lindblom et al., 2004) dan berlaku sama untuk menentukan senyawa dalam kelapa sawit. Teknik MAE adalah yang paling efisien, memberikan hasil tertinggi ergosterol, asalkan efisiensi ekstraksi yang lebih tinggi, mengambil kurang timeandwas kurang padat karya (Tabel 1). Akhirnya, penerapan TLCmeans bahwa prosedur yang efektif portabel dan dapat dilakukan di tempat (misalnya dalam amotor kendaraan terletak di dekat perkebunan) untuk hasil yang sangat cepat.

5. Kesimpulan

Kesimpulannya, sebuah protokol baru untuk ekstraksi ergosterol dari infeksi Ganoderma jaringan kelapa sawit telah dikembangkan. Metode kromatografi lebih kuat daripada metode berbasis biologis lainnya seperti PCR. Teknik ini lebih mudah daripada metode ergosterol lain dalam hal waktu untuk persiapan sampel, biaya, dan ukuran sampel karena hanya ukuran sampel yang kecil diperlukan untuk ekstraksi, lebih banyak sampel dapat diekstraksi. Hal ini akan memungkinkan analisis efisien sejumlah besar sampel lapangan selama survei BSR. Analisis TLC semikuantitatif direkomendasikan sebagai metode deteksi yang sederhana dan cepat dalam bidang mana HPLC mungkin tidak tersedia. Manajemen penyakit lebih efektif berarti bahwa perkebunan yang ada akan lebih ekonomis dan, misalnya, mengurangi tekanan pada mengkonversi minyak perkebunan kelapa dengan manfaat lingkungan yang potensial