PERTUMBUHAN DAN PERKEMBANGAN KALUS
BEBERAPA KULTIVAR APEL (Malus Sylvestris Mill) PADA
MEDIA MS DENGAN KOMBINASI NAA DAN BAP
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Sebagian Persyaratan
Mencapai Derajat Sarjana S1
Jurusan Agronomi
Diajukan Oleh :
ISTIQOMAH NISAK
Nim. 201310200311076
JURUSAN AGRONOMI
PROGRAM STUDI AGROTEKNOLOGI
FAKULTAS PERTANIAN PETERNAKAN
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG
MALANG
2017
i
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan pada tanggal 1 Mei 1995, sebagai
putra ketiga dari lima bersaudara. Ayahanda bernama Busri
dan Ibunda Yatimah Khomsah. Penulis menyelesaikan
pendidikan Sekolah Dasar di SDN Bayeman II Kota
Probolinggo pada tahun 2007, kemudian melanjutkan ke
jenjang Sekolah Menengah Pertama di SMP Negeri 1 Tongas Kota Probolinggo
lulus tahun 2010, dan masuk Sekolah Menengah Atas di SMA Negeri 1 Tongas
Kota Probolinggo tahun 2013.
Penulis melanjutkan pendidikan di Program Studi Agroteknologi, Jurusan
Agronomi, Fakultas Pertanian Peternakan, Universitas Muhammadiyah Malang
pada tahun 2013. Semasa perkuliahan penulis aktif sebagai asisten Laboratorium
Agronomi sejak tahun 2015/2016.
ii
PERSEMBAHAN
Alhamdulillah saya panjatkan kepada Allah SWT atas segala rahmat dan
kesempatan untuk menyelesaikan tugas akhir dengan segala kekurangan ini.
Sholawat dan salam semoga selalu terlimpahkan pada junjungan nabi besar kita
nabi Muhammad SAW.
Saya persembahkan karya sederhana ini kepada orang-orang yang sangat saya
sayangi.
Bapak dan Ibuku tercinta
Bapak Busri dan Ibu Yatimah Khomsah
orang tua hebat yang telah membesarkan dan mendidik saya dengan penuh kasih
sayang
Terima kasih atas pengorbanan, nasehat dan do’a
yang tiada hentinya beliau berdua berikan kepada saya selama
ini.
Nenek saya tercinta Emak Suhati
Mas, mbak dan adik tersayang
Mas Fitroh Jamaludin Al-Afgani & istri Mudfi Agustin beserta anak Firah
Mbak Indah Ratna Sari & suami Habibi Firman Kholik beserta anak nizar
Adekku tersayang Maulana Rizal Bisri
Adekku tersayang Qusai Ridwan Riski
Terima kasih atas dukungan serta do’a kalian, semoga Allah SWT membalas
kebaikan kalian dengan kebaikan yang berlipat-lipat.
Sebagai rasa hormat dan ucapan terima kasih kepada Pak Untung Santoso, Pak
Misbah Ruhiyat, Bu Fatimah Nursandi, Pak Syarih Husen, Pak Harun Rasyid, Pak
Sufianto, dan segenap dosen-dosen Agronomi yang telah membimbing serta
memberikan ilmu pengetahuan yang bermanfaat dengan keikhlasan dan
kesabaran.
Teruntuk Sahabat-sahabat saya Mbak Alvi, Eva, Uda, Riza,Waras, fitri yang telah
setia menemani, memotivasi, dan menghibur saya saat suka maupun duka.
Teman-teman tim Malus Dinar, Rizka, Reka, Ela, Ila, Mondi, Rubi, Imul, Alik
yang setia membantu penelitian hingga selesai. Terimakasih, hanya Allah yang
bisa mengganti kebaikan kalian dengan kebaikan yang berlipat-lipat.
Teman-teman Agronomi angkatan 2013, rekan-rekan laboratorium terimakasih
atas ilmu, semangat dan kekompakannya.
iii
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum Warahmatullohi Wabarakatuh
Syukur Alhamdulillah penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas
limpahan rahmat dan hidayahNya, sehingga penulis mampu menyelesaikan
laporan penelitian dengan judul “Pertumbuhan dan Perkembangan Beberapa
Kultivar Apel (Malus sylvestris Mill) Pada Media MS dengan Kombinasi NAA
dan BAP.
Laporan penelitian ini merupakan salah satu persyaratan untuk
menyelesaikan pendidikan tingkat Sarjana pada Jurusan Agronomi, Fakultas
Pertanian Peternakan Universitas Muhammadiyah Malang.
Pada kesempatan ini penulis menyampaikan ucapan terima kasih atas segala
bantuan baik berupa tenaga dan pikiran, kepada yang terhormat :
1. Dr. Ir. Untung Santoso, MSi. sebagai pembimbing utama yang telah bersedia
membimbing dengan sabar dan mengarahkan selama penyusunan skripsi ini
hingga selesai.
2. Ir. Misbah Ruhiyat, MSi. sebagai pembimbing pendamping yang telah
banyak membantu penulis dan dengan sabar membimbing dan mendampingi
pada proses penyusunan skripsi ini hingga selesai.
3. Dr. Ir. Syarif Husen, M.P. yang telah memberikan bimbingan skripsi
4. Dr.. Harun Rasyid, M.P. yang telah memberikan bimbingan skripsi
5. Ir. Sufianto, MM. yang telah memberikan bimbingan data skripsi penelitian.
6. Teman-teman Agronomi angkatan 2013 yang selama ini membantu dalam
pelaksanaan penelitian ini hingga selesai.
Akhir kata, penulis menyadari bahwa laporan penelitian ini masih jauh dari
kesempurnaan. Penulis mengharapkan adanya kritik dan saran yang bersifat
membangun demi sempurnanya penulisan skripsi ini. Semoga bermanfaat.
Wasalamu’alaikum Warahmatullohi Wabarakatuh
Malang, 29 Juli 2017
Penulis
iv
DAFTAR ISI
Isi Hal
KATA PENGANTAR ......................................................................................... iiii
DAFTAR ISI ........................................................................................................ iiii
DAFTAR TABEL………………………………………………………..……...vi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... vii
DAFTAR LAMPIRAN………………………………………………….…........ix
RINGKASAN…………………………………………………………………….x
ABSTRACT……………………………………………………………………...xi
I. PENDAHULUAN .......................................................................................... 1
1.1. Latar Belakang ............................................................................................. 1
1.2. Rumusan Masalah……………………………………………………….....3
1.3. Tujuan Penelitian .......................................................................................... 4
1.3. Hipotesis ....................................................................................................... 4
I. TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................. 5
2.1. Agronomi Tanaman Apel ............................................................................. 5
2.2. Perbanyakan Tanaman Apel ......................................................................... 8
2.3. Kultur Jaringan ............................................................................................. 9
2.4. Zat Pengatur Tumbuh (ZPT) ...................................................................... 11
2.4.1. NAA (Naphatelene Acetid Acid)……………………………………11
2.4.2. BAP (Benzilaminopurin)………………………………………….. 13
2.5. Pertumbuhan dan Perkembangan…………………………………………14
2.6. Induksi Embrio Somatik………………………………………………….15
III. BAHAN DAN METODE ............................................................................. 18
3.1. Tempat dan Waktu Pelaksanaan ................................................................. 18
3.2. Alat dan Bahan ........................................................................................... 18
3.2.1. Alat .................................................................................................. 18
3.2.2. Bahan............................................................................................... 18
3.3. Rancangan Penelitian ................................................................................. 18
3.4. Pelaksanaan Penelitian ............................................................................... 20
v
3.4.1. Sterilisasi Alat ......................................................................................... 20
3.4.2. Pembuatan larutan stok ........................................................................ 20
3.4.3. Pembuatan Media Murashige & Skoog (MS)...................................... 21
3.4.4. Subkultur eksplan ................................................................................ 21
3.5. Variabel Pengamatan .................................................................................. 22
3.6. Analisis dan Penyajian Data………………………………………………22
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................................... 24
4.1. Hasil .......................................................................................................... 24
4.1.1. Pertumbuhan Kalus………………..………….…………………...…25
4.1.2. Perkembangan Kalus………………………………………….......…39
4.1.3. Induksi Embrio Somatik………………………………………..…...41
4.2. Pembahasan………………………………………………………….……43
4.2.1. Pertumbuhan Kalus………………..………….…………………..…43
4.2.2. Perkembangan Kalus………………………………………….......…51
4.2.3. Induksi Embrio Somatik………………………………………..…...52
V. KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................................... 53
5.1 Kesimpulan ............................................................................................. 53
5.2 Saran ....................................................................................................... 54
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 55
LAMPIRAN……………………………………………………………………..59
vi
DAFTAR TABEL
No Teks Hal
1. Denah Percobaan Penelitian ............................................................... 20
2. Scoring warna kalus…………………................................................ 23
3. Rerata Warna Kalus ............................................................................ 28
4. Panjang kalus apel…………………………………………………… 29
5. Lebar kalus apel……………………………………………………… 31
6. Berat akhir kalus……………………………………………………... 34
vii
DAFTAR GAMBAR
No Teks Hal
1. Volume Impor Beberapa Jenis Buah-buahan Utama Indonesia,
2008- 2013 (BPS, 2013).. .................................................................. 2
2. Apel (Malus sylvestris Mill) Sumber: murnisehat.com ...................... 6
3. Struktur Molekul Naphatelene Acetid Acid (www.wuzhouchem.com
diakses 27 Januari 2016) ..................................................................... 11
4. Struktur molekul BAP (www.wuzhouchem.com diakses 28
Februari 2008)……………………………………………………… 13
5. Persentase Tekstur kalus apel (Malus sylvestris Mill) umur 0 MST
dan 12 MST dengan perlakuan kombinasi kultivar apel
dengan menggunakan komposisi NAA-BAP. (A) Kompak dan
(B) Remah. .......................................................................................... 31
6. Berat akhir kalus apel (Malus sylvestris Mill) umur 12 MST.
(A) Komposisi ZPT dan (B) Kultivar……………………………… 33
7. Pertambahan berat kalus apel (Malus sylvestris Mill) umur 12 MST
dengan perlakuan kombinasi kultivar apel dengan menggunakan
komposisi NAA-BAP………………………………………………. 36
8. Prosentase Hidup kalus apel (Malus sylvestris Mill) umur 12 MST
dengan perlakuan kombinasi kultivar apel dengan menggunakan
komposisi NAA-BAP………………………………………………. 38
9. Proses perkembangan kalus mulai umur 0 MST, 7 MST dan12 MST
pada media MS dengan beberapa kombinasi perlakuan………. 40
10. Analisis embrio endospermik sekunder histologi kalus non
Embriogenik dan kalus embriogenik…………………………. 41
11. Hasil pengamatan mikroskopis……………………………….. 42
12. (A) warna kalus hijau tua, (B) warna kalus hijau muda, (C) warna
kalus hijau keputihan, (D) warna kalus putih kehijauan, (E) warna
kalus coklat keputihan, (F) warna……………………………. 43
13. A. Pemotongaan kalus putih yang menyelimuti kalus berwarna hijau
B. Kalus browning menunjukkan media mulai menguning….. 44
viii
14. Proses perubahan warna kalus mulai umur 0 MST, 7 MST dan12 MST
pada media MS dengan penambahan 2.4D 0.5 ppm + BAP 1 ppm
Kultivar (V2) Red Del Whasinton, dan NAA 3 ppm + BAP 1 ppm
kultivar (V1) Manalagi……………………………………….. 45
15. (A) kalus berterkstur kompak, (B) kalus bertekstur remah……. 46
64
16. Eksplan kontaminasi jamur, (B) Eksplan browning 47
(berwarna coklat)………………………………………………..
ix
DAFTAR LAMPIRAN
No Teks Hal
1. Analisis Ragam Panjang Kalus Umur 2-12 MST ................................ 59
2. Analisis Ragam Lebar Kalus Umur 2-12 MST .................................... 60
3. Berat Awal Kalus ................................................................................. 61
4. Berat Akhir Kalus Umur 12 MST ........................................................ 62
5. Pertambahan Berat Kalus Umur 12 MST…………………………………... 63
6. Cara Pengamatan Histologi .................................................................. 64
7. Cara Pengamatan SEM (Scanning Electron Microscope) ................... 65
8. Komposisi Dasar Media MS (Hendaryono, 1994) ............................... 66
9. Cara Membuat Larutan Stok (disimpan di botol ukuran 100 ml) ........ 67
10. Kultivar Apel ........................................................................................ 68
11. Dokumentasi ........................................................................................ 69
DAFTAR PUSTAKA
Abidin, Z. 1993. Dasar-dasar pengetahuan tentang zat pengatur tumbuh. Angkasa.
Bandung. 85 hal.
Alcantara, G.B., R. Dibax., R.D. Oliveira., J.C.B. Filho., and E. Daros. 2014. Plant
Regeneration and Histological Study of the Somatic Embryogenesis of
Sugarcane (Saccharum spp). Cultivar RB855156 and RB72454. Acta. Sci.
Agron. 36(1):63-72.
Arditi, J. 1992. Fundamental Of Orchid Biology. John Wiley & Sons. New York.
Chichester. Brisbane. Toronto. Singapura. 691P.
Armini, N. M., G. A. Wattimena dan L. Gunawan. 1991. Bioteknologi Tanaman. Tim
Laboratorium Kultur Jaringan. Pusat Antar Universitas Bioteknologi. IPB.
Bogor. 455 hal.
Ashari, S. 1995. Hortikultura Aspek Budidaya. Universitas Indonesia Press. Jakarta.
Aslamyah, S. 2002. Peranan hormon tumbuh dalam memacu pertumbuhan algae. 9
hal. http://rudyct.tripod.com/sem1_023/siti_aslamyah.htm. 08 Februari 2005
Astutik. S. 2007. Pengaruh Kultivar Kedelai (Glycine max) terhadap
Pertumbuhan Kalus Dan Kandungan Senyawa Isoflavon (Daidzein dan
Genistein). Malang. Jurusan Biologi Lingkungan Fakultas dan Ilmu
Pengetahuan Alam Universitas Islam Malang.
Ayabe M. and Sumi S. 1998. Establishment of a Novel tissue Culture Method, Stem-
disc Culture and Its Practical Application to Micropropagation of Garlic
(Allium sativum L). Plant cell. Rep. 17:773-779. BPS, 2013. Data Ekspor-
Impor. http://bps.go.id/exim-frame.php?kat=2. Diakses tanggal 5 Oktober
2013.
Bouman H, De Klerk GJ. 2001. Measurement of the extent of somaclonal variation in
Begonia plants regenerated under various conditions comparison of three
assays. Theor Appl Genet. 102(1): 111-117.
Davies, P.J. 1995. The plant hormone their nature, occurence and function. In Davies
(ed.) Plant Hormone and Their Role in Plant Growth Development. Dordrecht
Martinus Nijhoff Publisher.
Dinas Pertanian .2008. Kondisi Apel di Kota Batu. Diakses dari
http://www.pertanian.go.id pada tanggal 20 September 2016. Dodd, B., 1993.
Plant tissue culture for horticulture. School of life Science. Queensland
University Of Technology.
Dwimahyani,I. 2007. Metode Suspensi Sel untuk Membentuk Spot Hijau pada Kultur
In-Vitro Galur Mutan Tanaman Jarak Pagar (Jatropha curcas L). A Scientific
Journal for The Applications of Isotopes and Radiation. Vol. 3 No. 2
Gaba, V.P. 2005. Plant Growth Regulator. In R.N. Trigiano and D.J. Gray (eds.)
Plant Tissue Culture and Development. CRC Press. London. p. 87-100.
Gamborg, O.L., T. Murashige, T.A. Thorpe, and I.K. Vasil. 1976. Plant tissue culture
media. In vitro 12(7): 473-378.
Gardner, F. P., R. B. Pearce, R. L. Mitchell. 1991. Fisiologi Tanaman Budidaya. UI-
Press. Jakarta. 426 hal
Gaspar, T., C. Kevers, P. DeBergh, L. Maene, M. Paques dan P. Boxus.1987.
Vitrification ; morphological, phisiological and ecological aspects. ln. J. M.
Bonga and D.J. Durjan (Eds.) ; Cell and Tissue Culture in Forestry Vol. l.:
General Priciples and Bioteknology. Martinus Nijhofi Pub. Netherlands. P.
152 - 166.
Gunasekara, D.S., E.S. Scott dan A.N. Rao. 1988. Suspension culture of the
dipterocarp Shorea roxburghii G. Don. Somatic Cell Genetic of Woody Plant.
p 137 – 141.
Gunawan, L.W.,1988. Teknik Kultur Jaringan. Laboratorium Kultur Jaringan
Tanaman. Pusat Antar Universitas (PAU). Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Hanafruits. 2013. Apel Manalagi. www.hanafruits.com/manalagi Diakses pada 3
Oktober 2016
Hendaryanto D.P.S. & A. Wijayani. 1994. Teknik kultur jaringan, pengenalan,
petunjuk perbanyakan tanaman secara vegetatif-modern. Kanisius.
Yogyakarta.
Hussey, G; Stacey, N.J. 1981. In Vitro Propagation of Potato (Solanum tuberosum L).
Annals of Botany. 48:787 -796. Yogyakarta.
Karjadi, A.K. dan A.Buchory. 2008. Pengaruh Komposisi Media Dasar, Penambahan
BAP, dan Pikloram terhadap Induksi Tunas Bawang Merah. J. Hort. Vol. 18.
Kim, J. W and W. Y. Soh. 1996. Plant Regeneration Through Somatic
Embryogenesis from Suspension Culture of Allium fistolosum L. Plant Sci.
11114:215-220.Kosmiatin M. 2013. Pembentukan Tanaman Triploid Jeruk
Siam Simadu (Citrus nobilis Lour) Melalui Kultur Endosperma. Disertasi.
Sekolah Pasca Sarjana Institut Pertanian Bogor.
Lakitan, B. 1996. Fisiologi pertumbuhan dan perkembangan tanaman. PT Raja
Grafindo Persada. Jakarta. 218 hal.Lestari, E.G. 2008. Kultur Jaringan.
AkaDemia. 60 hlm.
Lestari .G. .2011. Peranan Zat Pengatur Tumbuh dalam Perbanyakan Tanaman
Melalui Kultur Jaringan. Jurnal AgroBiogen 7(1):63-68.
Litz, R.E., R.C. Hendrix, P.A. Moon dan V.M. Chavez. 1998. Induction of
embryogenic mango cultures as affected by genotype, explanting, 2,4-D and
embryogenic nurse culture. Plant Cell Tissue and Organ Culture 53: 13 – 18.
Marlin, Y. Hermansyah. 2012. Inisiasi Kalus Embriogenik Pada Kultur
Jantung Pisang ‘Curup’ dengan Pemberian Sukrosa. BAP Dan 2,4-D. J.
Agrivigor 11(2): 276-284, Mei – Agustus 2012; ISSN 1412-2286.
Mawarni, R. I. 2016. Skripsi. Multiplikasi Kalus Beberapa Kultivar Apel pada Media
dengan Komposisi Zat Pengatur Tumbuh yang Berbeda. Universitas
Muhammadiyah Malang. Malang
Medha, B. 2012. Pengembangan Konsep Agropolitan Sebagai Potensi Wisata
Agro. Rapat Koordinasi dan Sinkronisasi Optimalisasi Pengembangan Wisata
Agro di Jawa Timur, Hotel Selecta Kota Batu. Sekretariat Daerah Propinsi
Jawa Timur.
Molina, D.M., M.E. Aponte, H. Cortina dan G. Moreno. 2002. The effect of genotype
and explant age on somatic embryogenesis of Coffee. Plant Cell Tissue and
Organ Culture 71: 117 – 125.
Nasir, M. 2002. Bioteknologi: potensi dan kebrhasilannya. Raja Grafindo Persada.
Jakarta. Hal 286.
Noerhadi, E. 1974. Kultur jaringan tumbuhan sebagai bahan penyelidikan dan
potensinya dalam pembangunan Negara. September 2013, 73 - 84 82 Pidato
pengukuhan guru besar tetap ITB. Penerbit ITB. Bandung.
Nugent, G, S.F. Chandler, P. Whitemean dan T.W. Stevenson. 2001. Somatic
embryogenesis in Eucalyptus globules. Plant Cell Tissue and Organ Culture
67: 85 – 88.
Orangepippin Ltd. 2016. Apple Varieties. https://www. orangepippin.com/apples.
Diakses 3 Oktober 2016Paul, H. M, Belaizi. B, S, Sangwan-Norreell. 1994.
Somatic Embryogenesis in Apple. Plant Physiol. Vol 143. Pp. 78-86 (1994).
Peterson, G., R. Smith. 1991. Effect of abscicic acid and callus size on regeneration
of American and international rice varieties. Plant Cell Rep 10: 35-38.
Pierik, R.L.M. 1987. In Vitro Culture of higher Plants. Martinus Nijhoff Publisher.
London. 344 p.
Purnamaningsih, R. dan E.G. Lestari. 1998. Multiplikasi tunas temu giring melalui
kultur in vitro. Buletin Plasma Nutfah 1(5):24-27.
Purnamaningsih, R., 2002, Regenerasi Tanaman melalui Embriogenesis Somatik dan
Beberapa Gen yang Mengendalikannya, Balai Penelitian Bioteknologi dan
Sumberdaya Genetik Pertanian, Buletin AgroBio 5(2):51-58.
Purnamaningsih R. 2003. Regenerasi Tanaman Melalui Embriogenesis Somatik Dan
Beberapa Gen Yang Mengendalikannya. Buletin Agrobio 5(2):51-58
Riyadi, I. 2010. Pengaruh Kinetin dan BAP Terhadap Pertumbuhan Dan
Perkembangan Embrio Somatik Tanaman Sagu (Metroxilon Sagu Rottb).
Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan Indonesia. Jurnal AgroBiogen
6(2):101-106
Sagare, AP, K.Suhasini dan KV. Krishnamurthy. 1993. Plant regeneration via
somatic embryogenesis in chick pea (Cicer arietinum L). Plant Cell Reports
12 : 652 – 655
Satyavathi, V.V., P.P. Jauhar, E.M. Elias, and M.B. Rao. 2004. Genomics, molecular
genetic and biotechnology efects of growth regulators on in vitro plant
regeneration. Crop Sci. 44:1839-1846.
Soelarso. R, B. 1996, Budidaya Apel. Kanisius. Yogyakarta.
Sukmadjaja, D. 2005. Embriogenesis Langsung Pada Tanaman Cendana.
Embriogenesis Somatik Langsung Pada Tanaman Cendana. Balai Besar
Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik
Pertanian Jurnal Bioteknologi Pertanian, Vol. 10, No. 1, pp. 1-6
Thomy, Z. 2012. Effect of Plant Growth Regulators 2,4 D and BAP on Callus Growth
of Plant Producing Gaharu (Aquilaria malaccensis Lamk). Prosiding Seminar
Nasional Biologi.
Toonen, M.A.J. and S.C. de Vries. 1996. Initiation of Somatic Embryos from Single
Cells. In: Wang, T.L, and A. Cuming (ed.). Embryogenesis the generation of
plant. Bios Scientific Publishers Limited. Oxford. 173-177
Umboh, M.I.J., S.A. Yani dan D.J. Lawalata. 1992. Proceeding of Tsukuba
Workshop. Tsukuba Science City. BIO-REFOR. p. 112
Utami. N. F. 2016. Induksi Embrio Somatik Dari Kalus Embriogenik Dan
Perkecambahan Planlet Jeruk Soe. Departemen Agronomi Dan Hortikultura,
Fakultas Pertanian Institut Pertanian Bogor.
Wattimena, G. A. 1992. Zat Pengatur Tumbuh Tanaman. Pusat Antar Universitas.
Institut Pertanian Bogor. 145 hal.
Winarto, B., N.A. Mattjik, A. Purwito, dan B. Marwoto. 2010. Pengaruh Komposisi
Media Terhadap Inisiasi Tanaman Apel (Malus sylvestris Mill). J. Agroland
16 (3) : 193 – 198
Yang, L, Y. Li dan H. Shen. 2012. Somatic embryogenesis and plant regeneration
from immature zygotic embryo cultures of mountain ash (Sorbus
pohuashanensis). Plant Cell Tissue and Organ Culture 109 : 547 – 556.
Yelnititis, E. Sapulete dan T. Herawan. 2002. Embriogenesis somatik pada S.
leprosula, S. selanica dan S. pinanga. Laporan Tahunan P3BPTH (tidak
dipublikasikan).
Young, A,, C. Miller, GA. de Mayolo, JD. Swanson, S. Phisak, S. Maximova dan M.
Guiltinan. 2003. Cacao Tissue Culture Protocol Book version 1.4. Pennstate
Collage of Agriculture Sciences. USDA. Pennsylvania State University. Jan
27th.