PENGARUH VARIASI METODE EKSTRAKSI SECARA
MASERASI DAN DENGAN ALAT SOXHLET TERHADAP
KANDUNGAN KURKUMINOID DAN MINYAK ATSIRI
DALAM EKSTRAK ETANOLIK RIMPANG TEMULAWAK
(Curcuma xanthorrhiza Roxb.)
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Melia Sari Dewi
NIM : 068114085
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2010
ii
PENGARUH VARIASI METODE EKSTRAKSI SECARA
MASERASI DAN DENGAN ALAT SOXHLET TERHADAP
KANDUNGAN KURKUMINOID DAN MINYAK ATSIRI
DALAM EKSTRAK ETANOLIK RIMPANG TEMULAWAK
(Curcuma xanthorrhiza Roxb.)
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Melia Sari Dewi
NIM : 068114085
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2010
iii
iv
v
HALAMAN PERSEMBAHAN
Semua ini ku persembahkan untuk :
Orang tua
Saudara-saudara
Sahabat-sahabat
Fakultas dan Almamaterku
vi
vii
PRAKATA
Puji dan syukur kepada Allah Yang Maha Pengasih atas berkat dan kasihNya
sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Pengaruh Variasi
Metode Ekstrasi Secara Maserasi dan Dengan alat Soxhlet Terhadap Kandungan
Kurkuminoid Dan Minyak Atsiri Dalam Ekstrak Etanolik Rimpang Temulawak
(Curcuma Xanthorrhiza Roxb.)”. Skripsi ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk
memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm) program studi Farmasi Universitas
Sanata Dharma.
Tersusunnya skripsi ini dapat terwujud berkat bimbingan dan pengarahan
serta bantuan dari banyak pihak, maka pada kesempatan ini penulis mengucapkan
banyak terimakasih kepada :
1. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Univarsitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
2. Ibu Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt. selaku Dosen Pembimbing yang telah
memberikan bimbingan dan arahan selama penelitian maupun penyusunan
skripsi.
3. Dr. C. J Soegihardjo, Apt. selaku Dosen Penguji yang telah memberikan kritik
dan saran untuk lebih menyempurnakan penelitian ini.
4. Lucia Wiwid Wijayanti, M. Si selaku Dosen Penguji yang telah memberikan
kritik dan saran untuk lebih menyempurnakan penelitian ini.
5. Prof. Dr. Sudibyo Martono, M. Si., Apt. yang telah berkenan memberikan
standar kurkumin untuk penelitian ini dan berkenan berdiskusi mengenai
kurkumin.
6. Para laboran di laboratorium Kimia Organik dan Laboratorium Kimia
Instrumental, Laboratorium Farmakognosi Fitokimia, dan Kebun Obat
viii
7.
ix
INTISARI
Sejak tahun 2003 Temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) merupakansatu dari Sembilan tanaman obat unggulan Indonesia. Pada tanggal 14 Juli 2005 diKeraton Yogyakarta telah dilakukan pencanangan “Gerakan Nasional MinumTemulawak” yang sudah diresmikan oleh Menteri Pertanian Republik Indonesiabersama dengan kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia.
Kurkuminoid dan minyak atsiri merupakan kandungan kimia utama di dalamrimpang temulawak. Pada penelitian ini bertujuan untuk melihat bagaimanapengaruh dari variasi metode ekstraksi yang digunakan untuk memperolehkandungan kurkuminoid dan minyak atsiri.
Penelitan ini termasuk penelitian quasi eksperimental dengan variasi metodeekstraksi secara maserasi dan dengan alat Soxhlet sebagai perlakuan. Dalampenelitian ini pelarut untuk ekstraksi menggunakan etanol 70%. Ekstrak yangdiperoleh kemudian diukur menggunakan spektrofotometer visibel untuk mengukurkurkuminoid dan menggunakan destilasi Stahl untuk mengisolasi minyak atsiri sertadiukur dengan menggunakan labu berskala.
Hasil yang diperoleh kadar rata-rata minyak atsiri secara maerasi yaitu18,1% v/b dan hasil dengan alat Soxhlet 19,3566% v/b. Sedangkan untuk kadar rata-rata kurkuminoid secara maserasi yaitu 26,6349 mg% b/b dan hasil dengan alatSoxhlet 53,4051 mg% b/b. Hasil penetapan kadar kurkuminoid dan minyak atsiridianalisis dengan uji statistik t-test diperoleh bahwa metode dengan alat Soxhletlebih baik dibandingkan maserasi untuk memperoleh kurkuminoid. Dan metodedengan alat Soxhlet dan maserasi sama baiknya untuk memperoleh minyak atsiri.
Kata kunci (keywords) : maserasi, alat Soxhlet, kurkuminoid, minyak atsiri,Temulawak
x
ABSTRACT
Since 2003, Javanese turmeric (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) Is one of nineeminent Indonesian medicinal plants. On July 14, 2005 in Yogyakarta Palace hadmade the declaration of "National Movement Drinking Temulawak" which wasinaugurated by the Minister of Agriculture of the Republic of Indonesia, togetherwith the head of the Food and Drug Control Agency of the Republic of Indonesia.
Curcuminoids and volatile oil is the main chemical constituents in rhizomeof ginger. In this study aims to see how the influence of variation of the extractionmethods used to obtain curcuminoids and volatile oil content.This study includes quasi experimental studies with various methods of extractionby maceration and by Soxhlet tool as treatment. In this study, solvent extractionusing 70% ethanol. Extracts obtained then measured using a visiblespectrophotometer to measure the curcuminoids and by scaled pipe to measure thevolume of volatile oil in the extracts that obtained from the extraction of bothmethods.
Results obtained an average concentration of volatile oils in maceration18.1% v/w and the results by Soxhlet tool 19.3566% v/w. While to the average levelof curcuminoids by maceration 26,6349 mg% w/w and the result by Soxhletinstrument 53,4051 mg% w/w. Assay results of curcuminoids and volatile oil wereanalyzed using statistical t-test showed that the method is better than macerationdengan alat Soxhlet to obtain curcuminoids. And by Soxhlet instrument andmaceration methods equally well to obtain the essential oil.
Key words (keywords): maceration, Soxhlet instrument, curcuminoids, essentialoils, Javanese turmeric
xi
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN SAMPUL……………………………………………………… i
HALAMAN JUDUL ……………………………………………………...... ii
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ………………………….... iii
HALAMAN PENGESAHAN …………………………………………….... iv
HALAMAN PERSEMBAHAN ……………………………………....……. v
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ……………………………………. vi
PRAKATA ……………………………………………………….................. vii
INTISARI………………………………………………………………......... ix
ABSTRACT …………………………….....……………………….................. x
DAFTAR ISI ………………………….....…………………………............... xi
DAFTAR TABEL ………………………………………………………....... xv
DAFTAR GAMBAR ……………………………………………………….. xvi
DAFTAR LAMPIRAN……………………………………………………… xvii
BAB I. PENGANTAR ……………………………………………………… 1
A. Latar Belakang …………………......………………………………... 1
1. Perumusan masalah …………………………………………… 3
2. Keaslian penelitian ……………………………………………. 3
3. Manfaat penelitian ……………………………………………. 4
B. Tujuan Penelitian …………………………………………………... 4
BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ……………………………………… 5
A. Uraian Tanaman Temulawak …………………………......…………. 5
xii
1. Klasifikasi tanaman temulawak ……………………….……… 5
2. Nama daerah…….…………………………………………….. 5
3. Rimpang temulawak..…………………………………………. 6
B. Uraian Kurkuminoid ……………………………………………….. 7
C. Uraian Minyak Atsiri ……………………………………………..... 8
D. Uraian Peyulingan Minyak Atsiri…………………………………... 9
E. Uraian Ekstraksi ……………………………………………………. 10
F. Uraian Maserasi…………………………………………………….. 12
G. Uraian Dengan alat Soxhlet………………………………………….. 13
H. Uraian Ekstrak ……………………………………………………... 14
1. Definisi ekstrak ………………………………………………… 14
2. Pengelompokan ekstrak ………………………………………… 14
3. Ekstrak temulawak…………………………………………… 15
I. Uraian Spektrofotometri …………………………………………… 15
J. Keterangan Empiris ..……………………………………..…………. 19
BAB III. METODE PENELITIAN ……………………………..………....... 20
A. Jenis dan Rancangan Penelitian .....………………………………… 20
1. Jenis penelitian.. ……………………………………………… 20
2. Tahapan penelitian …..…………………………………….…… 20
3. Variabel ……………………………………………………….. 21
B. Definisi Operasional ...……………………………………………..... 21
C. Bahan dan Alat Penelitian..................................................................... 22
1. Alat ..........................................................................................…. 22
xiii
2. Bahan ……………….…..…………............................................ 22
D. Jalannya Penelitian ……….…..…………………………………........ 22
1. Identifikasi rimpang temulawak.…………..……………………. 22
2. Pembuatan simplisia ……….…..………………………….......... 23
3. Pembuatan ekstrak rimpang temulawak …..……………………. 25
4. Pengentalan ekstrak rimpang temulawak …................................. 25
5. Penetapan kandungan minyak atsiri ……….…..…...……........... 26
6. Penetapan kandungan kurkuminoid ………...………………… 26
E. Analisa Data ......................................................................................... 29
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ……….…..………….................... 30
A. Identifikasi Rimpang Temuawak...………………………………....... 30
1. Organoleptik……….…..………………………………………... 30
2. Makroskopis……….…..………………………………………... 31
3. Mikroskopis……….…..………………………………………… 32
B. Pembuatan Simplisia ……….…..…………………………………… 34
1. Pengumpulan rimpang temulawak ……….…..………………... 34
2. Sortasi basah ……….…..……………………………………… 34
3. Pencucian rimpang temulawak ……….…..…………………… 35
4. Perajangan rimpang temulawak ……….…..…………………... 35
5. Pengeringan rimpang temulawak ……….…..………………..... 36
6. Sortasi kering ……….…..…………………………………….... 37
7. Pembuatan serbuk ……….…..………………………………… 37
C. Cara Maserasi ……….…..…………………………………………… 38
xiv
D. Cara Dengan alat Soxhlet ……….…..……………………………… 39
E. Pengentalan ekstrak rimpang temulawak ……….…..……………… 40
F. Penetapan kandungan minyak atsiri ……….…..…………………… 41
G. Penetapan kandungan kurkuminoid dengan Spektofotometri Visibel.. 44
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ……….…..……………………….. 53
A. Kesimpulan ……….…..……………………………………………... 53
B. Saran ……….…..……………………………………………………. 53
DAFTAR PUSTAKA ……….…..……………………………………........... 54
LAMPIRAN ……….…..…………………………………………………….. 57
BIOGRAFI PENULIS ……….…..………………………………………….. 81
xv
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel I. Pengamatan organoleptik rimpang temulawak….....……….. 30
Tabel II. Pengamatan makroskopis rimpang temulawak…………....... 31
Tabel III. Kadar (%v/b) minyak atsiri ERTM……………………......... 42
Tabel IV. Kadar (%v/b) minyak atsiri ERTS………………………...... 43
Tabel V. Recovery baku kurkumin….................................................... 46
Tabel VI. Coefisien Variasi (CV) baku kurkumin…………………...... 47
Tabel VII. Pengukuran absorbansi kurva baku kurkumin…………........ 50
Tabel VIII. Kadar (%b/v) kurkuminoid ERTM ………………………… 51
Tabel IX. Kadar (%b/v) kurkuminoid ERTS……………....………….. 51
Tabel X. Penimbangan bobot konstan ERTM dan volume minyak
atsiri ERTM………………………………………………..... 57
Tabel XI. Penimbangan bobot konstan ERTS dan volume minyak
atsiri ERTS………………………………………………….. 58
Tabel XII. Pengukuran absorbansi kurva baku kurkumin……………… 66
Tabel XIII. Pengukuran akurasi dan presisi baku kurkumin…................. 66
Tabel XIV. Perhitungan LOD dan LOQ baku kurkumin........................... 68
Tabel XV. Penetapan Kandungan Kurkuminoid pada ERTM………….. 77
Tabel XVI. Penetapan Kandungan Kurkuminoid pada ERTS………….. 77
Tabel XVII. Analisis t-test minyak atsiri ERTM dan ERTS……………... 78
Tabel XVIII. Analisis t-test kadar kurkuminoid ERTM dan ERTS……….. 79
xvi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Struktur Molekul Kurkuminoid ……………...…………...... 7
Gambar 2. Penampang temulawak dan irisannya ………..…………….. 32
Gambar 3. Penampang Melintang Rimpang Temulawak……………..... 32
Gambar 4. Penampang Melintang Rimpang Temulawak MMI………... 33
Gambar 5. Gugus kromofor dan auksokrom pada kurkuminoid……….. 44
Gambar 6. Grafik kurva baku kurkuminoid….......................................... 50
Gambar 7. Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 1 kadar 1,632
x 10-4%b/v…........................................................................... 61
Gambar 8. Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 1 kadar 2,856
x 10-4%b/v…..........................................................................62
Gambar 9. Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 1 kadar 4,080
x 10-4%b/v…………………………………………………... 62
Gambar 10. Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 2 kadar 1,632
x 10-4%b/v…………………………………………………... 63
Gambar 11. Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 2 kadar 2,856
x 10-4%b/v…………………………………………………... 63
Gambar 12. Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 2 kadar 4,080
x 10-4%b/v…………………………………………………... 64
Gambar 13. Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 3 kadar 1,632
x 10-4%b/v…………………………………………………... 64
Gambar 14. Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 3 kadar 2,856
x 10-4%b/v…………………………………………………...65
Gambar 15. Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 3 kadar 4,080
x 10-4%b/v…………………………………………………...65
Gambar 16. Vacuum Rotary Evaporator…….....………………………... 80
Gambar 17. Destilasi Stahl……………….……………………………… 79
Gambar 18. Ekstrak etanolik rimpang Temulawak dengan alat soxhlet… 79
Gambar 19. Ekstrak etanolik rimpang Temulawak maserasi………..…... 79
xvii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran I. Pengentalan Ekstrak Rimpang Temulawak……............... 57
Lampiran II. Penetapan Kadar Minyak Atsiri Ekstrak Rimpang
Temulawak……………………………………………… 57
Lampiran III. Surat Jaminan Keaslian Baku Kurkumin………………... 59
Lampiran IV. Pembuatan Larutan Baku Kurkumin ………...………..... 60
Lampiran V. Penetapan Panjang Gelombang Maksimum Baku
Kurkumin………………………………………………... 61
Lamapiran VI. Pembuatan Kurva Baku Kurkumin………………............ 66
Lampiran VII. Validasi Metode Baku Kurkumin……………………….. 66
Lampiran VIII. Perhitungan Orientasi Penimbangan Sampel Ekstrak
Temulawak……………………………………………… 68
lampiran VIX. Perhitungan Kadar Kurkuminoid Dalam Sampel Ektras
Temulawak……………………………………………… 70
Lampiran X. t-test Minyak Atsiri dan Kurkuminoid Ekstrak Rimpang
Temulawak……………………………………………… 77
Lampiran XI. Gambar Alat-alat dan ekstrak rimpang Temulawak…….. 80
1
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
Indonesia merupakan salah satu negara agraris yang sebagian besar
penduduknya bertumpu pada bidang pertanian. Salah satu produk pertanian yang
cukup banyak adalah Temulawak. Tanaman ini merupakan tanaman pekarangan
yang termasuk dalam salah satu tanaman apotek hidup yang mudah ditanam pada
berbagai tempat. Rimpang temulawak pada umumnya hanya digunakan untuk
keperluan dapur obat-obatan dan bahan pewarna. Rimpang ini banyak beredar di
pasar-pasar tradisional maka penelitian ini menggunakan rimpang yang diperoleh
dari pasar.
Sejak tahun 2003 Temulawak merupakan satu dari sembilan tanaman
obat unggulan Indonesia yang sudah mulai diteliti dan dalam proses penyelesaian
uji klinik oleh Badan Pengawas Obat dan Makanan. Pada tanggal 14 Juli 2005 di
Keraton Yogyakarta telah dilakukan pencanangan “Gerakan Nasional Minum
Temulawak” yang sudah diresmikan oleh Menteri Pertanian Republik Indonesia
bersama dengan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia
(Anonim, 2005).
Kandungan kimia rimpang Temulawak yang dapat dimanfaatkan
dalam bidang industri makanan, minuman maupun farmasi adalah pati,
kurkuminoid dan minyak atsiri. Selain pati dan kurkuminoid, temulawak juga
mengandung minyak atsiri yang dapat digunakan untuk pengobatan, bumbu,
kosmetik, dan pewangi.
2
Kurkuminoid merupakan komponen yang dapat memberi warna kuning dan zat
ini digunakan sebagai zat warna dalam industri pangan dan kosmetik. Fraksi
kurkuminoid yang terdapat pada Temulawak terdiri dari dua komponen, yaitu
kurkumin dan desmetoksikurkumin. Menurut Sidik, dkk (1993) kandungan
kurkuminoid dalam rimpang Temulawak kering berkisar 3,16 %, sedangkan kadar
kurkumin dalam kurkuminoid rimpang Temulawak sekitar 58–71% dan
desmetoksikurkumin berkisar 29–42 %.
Salah satu cara pengambilan kurkumin dari rimpangnya adalah dengan
cara ekstraksi. Ekstraksi merupakan salah satu metode pemisahan berdasarkan
perbedaan kelarutan. Secara umum ekstraksi dapat didefinisikan sebagai proses
pemisahan dan isolasi zat dari suatu zat dengan penambahan pelarut tertentu
untuk mengeluarkan komponen campuran dari zat padat atau zat cair. Dalam hal
ini fraksi padat yang diinginkan bersifat larut dalam pelarut (solvent), sedangkan
fraksi padat lainnya tidak dapat larut.
Metode ekstraksi ada beberapa macam, diantaranya yaitu maserasi dan
dengan alat Soxhlet. Metode maserasi digunakan untuk simplisia lunak, jumlah
zat aktif banyak, dan harganya murah. Sedangkan metode dengan alat Soxhlet
digunakan untuk simplisia yang keras, jumlah zat aktif rendah, dan harganya
mahal. Rimpang Temulawak termasuk simplisia yang lunak dan memiliki jumlah
zat aktif rendah, sehingga kedua metode di atas dapat digunakan untuk
memperoleh kurkuminoid dari rimpang tersebut.
3
Kurkuminoid tidak larut sempurna dalam air tetapi larut pada pelarut
organik. Salah satu pelarut organik adalah etanol, maka dalam penelitian ini
digunakan pelarut etanol karena kurkuminoid dapat terlarut dengan baik.
1. Rumusan Masalah
Dari latar belakang yang sudah ada maka masalah yang muncul
dalam penelitian ini yaitu:
a. Apakah ada pengaruh variasi metode ekstraksi secara maserasi dan dengan
alat Soxhlet terhadap kandungan kurkuminoid dalam ekstrak etanolik
rimpang Temulawak?
b. Apakah ada pengaruh variasi metode ekstraksi secara maserasi dan dengan
alat Soxhlet terhadap kandungan minyak atsiri dalam ekstrak etanolik
rimpang Temulawak?
2. Keaslian Penelitian
Untuk pengaruh suhu ekstraksi terhadap kandungan kurkuminoid dan
air serbuk Temulawak (Nugroho dkk, 2008) Pengaruh waktu, suhu dan
perbandingan bahan baku-pelarut pada ekstraksi kurkumin dari Temulawak
(Curcuma xanthorriza Roxb.) dengan pelarut aseton (Srijanto dkk, 2004); dan
optimalisasi ekstraksi kurkuminoid Temulawak (Curcuma xanthorrhiza
Roxb.) yang melihat pengaruh suhu, waktu, dan nisbah bahan baku-pelarut
terhadap kadar kurkuminoid (Dede., S., 2008).
4
Tetapi sejauh yang diketahui penulis, penelitian mengenai pengaruh
variasi metode ekstraksi secara maserasi dan dengan alat Soxhlet terhadap
kandungan kurkuminoid dan minyak atsiri belum dilakukan.
3. Manfaat Penelitian
Manfaat yang diharapkan dari penelitian ini adalah :
a. Manfaat teoritis :
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan sumbangan ilmiah
dan menambah wawasan di bidang kesehatan khususnya mengenai variasi metode
ekstraksi untuk memperoleh kandungan kurkuminoid dan minyak atsiri dalam
rimpang Temulawak.
b. Manfaat praktis :
Penelitian ini untuk mengetahui metode ekstraksi yang baik untuk
memperoleh kandungan kurkuminoid dan minyak atsiri dari rimpang Temulawak.
B. Tujuan
Penelitian ini bertujuan untuk melihat pengaruh dari variasi metode
ekstraksi secara maserasi dan dengan alat Soxhlet untuk memperoleh kandungan
kurkuminoid dan minyak atsiri dalam ekstrak etanolik rimpang Temulawak.
5
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Tanaman Temulawak
1. Klasifikasi Tanaman Temulawak
Kedudukan tanaman Temulawak dalam tata nama (sistematika)
tumbuhan termasuk ke dalam klasifikasi sebagai berikut.
Divisi : Spermatophyta
Sub divisi : Angiospermae
Kelas : Monocotyledonae
Ordo : Zingiberales
Familia : Zingiberaceae
Genus : Curcuma
Spesies : Curcuma xanthorrhiza Roxb. (Rukmana, 1995)
2. Nama Daerah
Tanaman temulawak merupakan herba yang termasuk dalam familia
Zingiberaceae. Temulawak dikenal dengan beberapa nama ;
a. Nama Indonesia : Temulawak (Anonim, 1979)
b. Sumatera : Temu lawak (Melayu)
c. Jawa : Temu lawak
d. Sunda : Koneng gede
e. Madura : Temo labak (Anonim, 1979)
6
3. Rimpang Temulawak
Rimpang Temulawak adalah rimpang Curcuma xanthorriza Robx.
Kadar minyak atsiri tidak kurang dari 6% v/b. Bau aromatik, rasa tajam dan pahit.
Makroskopik keping tipis, bentuk bundar atau jorong, ringan, keras,
rapuh, garis tengah sampai 6 cm, tebal 2 mm sampai 5 mm, permukaan luar
berkerut, warna coklat kuning sampai coklat. Bidang irisan berwarna coklat
kuning buram, melengkung tidak beraturan tidak rata, sering dengan tonjolan
melingkar pada batas antar silinder pusat dengan korteks; korteks sempit, tebal 3
mm sampai 4 mm. Bekas patahan berdebu, warna kuning jingga sampai coklat
terang.
Mikroskopik. Epidermis bergabus, terdapat sedikit rambut yang
berbentuk kerucut, bersel satu. Hipedermis agak menggambus, di bawahnya
terdapat periderm yang kurang berkembang. Korteks dan silinder pusat
parenkimatik, terdiri dari sel parenkim berdinding tipis berisi butir pati; dalam
parenkim tersebar banyak sel minyak yang berisi minyak berwarna kuning dan zat
berwarna jingga, dan juga terdapat pati berbentuk pipih, bulat panjang sampai
bulat telur memanjang, panjang butir 20 µm sampai 70 µm, lebar 5 µm sampai 30
µm, tebal 3 µm sampai 10 µm, lamela jelas, hilus di tepi. Bekas pembuluh tepi
kolatera, tersebar, tidak beraturan pada parenkim korteks dan pada silinder pusat;
berkas pembuluh di sebelah dalam endodermis tersusun dalam lingkaran dan
letaknya lebih jauh berdekatan satu dengan yang lainnya; pembuluh didampingi
oleh sel sekresi, panjang sampai 200 µm, berisi zat berbutir berwarna coklat
dengan besi (III) klorida LP menjadi lebih tua.
7
Serbuk warna kuning kecoklatan, Fragmen pengenal adalah butir pati;
fragmen parenkim dengan sel minyak, fragmen berkas pembuluh, warna kuning
intensif (Anonim, 1979).
B. Kurkuminoid
Kurkumin selain di dalam kunyit terdapat juga di dalam Temulawak (C.
xanthorrhiza Roxb.) dan temugiring (C. heyneana Val.) (Donatus, 1994).
Kurkumin merupakan komponen terbesar dari kurkuminoid sehingga sering
disebut kadar total kurkuminoid dihitung sabagai % kurkumin. Karena alasan
tersebut beberapa peneliti baik fitokimia maupun farmakologi lebih ditekankan
pada kurkumin (Sumiati, 2006).
O O
H
R2R1
OHHO
Gambar 1. Struktur Molekul Kurkuminoid (Roughly et al, 1973)
Kurkumin merupakan pigmen yang larut dalam larutan yang bersifat
lipofil seperti etanol, metanol, eseton, serta larutan asam asetat glasial, tetapi
praktis tidak larut dalam air dan eter (Windholz, 1981; Stancovic, 2004). Dalam
8
suasana pH basa atau netral, kurkumin dapat terdegradasi menjadi asam firulat
(asam 4-hidroksi-3-metoksinamat) dan dalam ferolilmentana (4-hidroksi-3-
metoksinamoil-metana). Pada range pH 1-7, larutan berwarna kuning sedangkan
pada pH >7,5 terjadi perubahan warna menjadi warna merah (Stancovic, 2004).
C. Minyak Atsiri
Minyak atsiri atau minyak menguap adalah massa yang berbau khas,
yang berasal dari tanaman, mudah menguap pada suhu kamar tanpa mengalami
penguraian. Minyak atsiri sering dikenal dengan nama volatile oil, ethereal oil,
atau essential oil dalam farmakope Indonesia dikenal dengan nama Olea volatilia.
Pada umumnya minyak atsiri dalam keadaan segar tidak berwarna atau
berwarna pucat, bila dibiarkan akan berwarna lebih gelap; berbau sesuai dengan
bau tanaman penghasilnya. Umumnya larut dalam pelarut organik dan sukar larut
dalam air.
Minyak atsiri merupakan suatu hasil proses metabolisme dalam tanaman.
Minyak atsiri terbentuk karena reaksi antara berbagai persenyawaan kimia dengan
air. Minyak tersebut disintesis dalam sel kelenjar, dan ada juga yang terbentuk
dalam pembuluh resin misalnya minyak terpentin dari tanaman pinus. Minyak
atsiri umumya terdiri dari berbagai campuran persenyawaan kimia yang terbentuk
dari unsur karbon (C), hidrogen (H), dan oksigen (O), serta beberapa
persenyawaan kimia yang mengandung unsur nitrogen (N), dan belerang (S)
(Anonim, 1985).
9
Minyak atsiri terdapat pada bagian khusus tanaman, tergantung pada
tanaman tersebut. Pada tanaman Zingiberaceae minyak atsiri terdapat dalam sel-
sel rimpang (Tyler et al., 1988). Salah satu komponen penyusun minyak atsiri
adalah sineol dan borneol yang berkhasiat sebagai counter irritant. Kelompok
Zingiberaceae mengandung banyak minyak atsiri dengan komponennya termasuk
golongan monoterpen dan seskuiterpen seperti sineol dan borneol yang
merupakan monoterpen alkohol (Hansel, 1985).
D. Penyulingan Minyak Atsiri
Minyak atsiri diperoleh antara lain melalui proses penyulingan. Penyulingan
didefinisikan sebagai pemisahan komponen suatu campuran dari dua jenis cairan
atau lebih berdasarkan perbedaan tekanan uap dan masing-masing zat. Minyak
atsiri bersifat mudah menguap terdiri dari campuran zat yang mudah menguap
dengan komposisi dan titik didih yang berbeda-beda. Setiap substansi yang dapat
menguap memiliki titik didih sangat tinggi (Anonim, 1985).
Minyak atsiri dapat diperoleh melalui tiga metode penyulingan, yaitu
1. Penyulingan dengan air
Metode penyulingan ini, terjadi kontak langsung antara bahan yang
disuling dengan air mendidih. Penyulingan cara ini sesuai untuk simplisia kering
yang tidak rusak dengan pendidihan. Penyulingan ini dapat menyebabkan
banyaknya rendemen minyak yang hilang (tidak tersuling) dan terjadi pula
penurunan minyak yang diperoleh, bisa menyebabkan terjadinya oksidasi serta
hasil yang tidak terdeteksi (Anonim, 1985).
10
2. Penyulingan dengan uap
Penyulingan ini tidak memerlukan air, uap air panas yang biasanya
bertekanan lebih dari 1 atmosfir dialirkan melalui pipa uap. Peralatan yang
digunakan tidak berbeda dengan penyulingan dengan air dan uap, hanya
diperlukan alat tambahan untuk memeriksa suhu dan tekanan (Anonim, 1985).
Penyulingan ini baik digunakan untuk membuat minyak atsiri dari biji,
akar, kayu yang umumnya mengandung komponen minyak yang bertitik didih
tinggi (Anonim, 1985).
3. Peyulingan dengan uap dan air
Penyulingan ini dilakukan pada simplisia basah atau kering yang dapat
rusak oleh pendidihan. Pada metode ini, bahan yang akan disuling diletakkan pada
rak-rak atau saringn berlubang. Ketel suling diisi air sampai permukaan air sedikit
di bawah saringan atau rak terbawah, kemudian air dipanaskan sampai mendidih.
Ciri khas dari metode ini adalah : (1) uap selalu dalam keadaan basah, januh, dan
tidak terlalu panas, (2) bahan yang akan disuling hanya berhubungan dengan uap
dan tidak dengan air mendidih (Guenther, 1987).
E. Ekstraksi
Penyarian (ekstraksi) adalah kegiatan penarikan zat yang dapat larut dari
bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Pemilihan cairan penyari dan
cara penyarian didasarkan pada zat aktif yang terkandung pada bahan tersebut.
Secara umum, penyarian dapat dibedakan menjadi: (a) maserasi, yaitu cara
penyarian untuk simplisia yang mengandung zat aktif yang mudah larut dalam
11
cairan penyari. Dilakukan dengan merendam serbuk simplisia atau bahan dalam
cairan penyari; (b) infundasi, yaitu proses penyarian yang umumnya digunakan
untuk menyari zat kandungan aktif yang larut dalam air dari bahan-bahan nabati.
Penyarian dengan cara ini menghasilkan sari yang tidak stabil dan mudah
tercemar oleh kuman dan kapang. Oleh sebab itu sari yang diperoleh dengan cara
ini tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam; (c) perkolasi, cara penyarian yang
dilakukan dengan mengalirkan cairan penyari melalui serbuk simplisia yang telah
dibasahi. Serbuk simplisia ditempatkan dalam suatu bejana silinder, yang bagian
bawahnya diberi sekat berpori. Cairan penyari dialirkan dari atas ke bawah
melalui serbuk tersebut, cairan penyari akan melarutkan zat aktif sel-sel yang
dilalui sampai keadaan jenuh. Gerak ke bawah disebabkan oleh kekuatan gaya
beratnya sendiri dan cairan di atasnya, dikurangi dengan daya kapiler yang
cenderung untuk menahan; (d) penyarian berkesinambungan, Dandang dipisahkan
menjadi 2 bagian, dibawah tempat cairan penyari di atas tempat serbuk simplisia
antara 2 ruangan tersebut dihubungkan dengan pipa sehingga larutan sari dapat
turun melalui pipa tersebut. Cairan penyari dipanaskan dengan pipa pemanas atau
cara lain yang cocok. Cairan penyari menguap dan oleh pendingin didinginkan
dan mengembun. Embunan disemprotkan oleh alat penyemprot ke serbuk
simplisia. (Anonim,1986).
Menurut Voigt (1994), ekstrak cair yang memiliki konsistensi cair dan
kandungan pelarutnya yang masih tinggi dapat diubah menjadi bentuk ekstrak
kental. Proses pengentalan ini dapat dilakukan melalui penguapan dengan
menggunakan alat Vacuum Rotary Evaporator. Cara kerjanya yaitu perputaran
12
labu dalam sebuah pemanas pada temperatur dan kecepatan putar tertentu, akan
menguapkan cairan yang terkandung dalam ekstrak. Pengaturan dalamnya
pencelupan ke dalam penangas air, suhu penangas, hampa udara dan suhu
pendingin membuat kondisi optimal dapat terpenuhi sehingga proses pengentalan
ekstrak dapat berlangsung cepat (Voigt, 1994).
F. Maserasi
Maserasi merupakan cara penyarian yang sederhana. Maserasi dilakukan
dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari
akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat
aktif, zat aktif akan larut dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan
zat aktif di dalam sel dengan yang di luar sel, maka larutan yang terpekat didesak
keluar. Peristiwa tersebut berulang sehingga terjadi keseimbangan konsentrasi
antara larutan di luar sel dan di dalam sel.
Maserasi digunakan untuk penyarian simplisia yang mengandung zat aktif
yang mudah larut dalam cairan penyari, tidak mengandung zat yang mudah
mengembang dalam cairan penyari, tidak mengandung benzoin, stirak dan lain-
lain.
Keuntungan cara penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan dan
peralatan yang digunakan sederhana dan mudah diusahakan. Kerugian cara
maserasi adalah pengerjaannya lama dan penyariannya kurang sempurna
(Anonim,1986).
13
G. Dengan alat Soxhlet
Cairan penyari diisikan pada labu, serbuk simplisia diisikan pada tabung
dari kertas saring atau tabung yang berlubang-lubang dari gelas baja tahan karat
atau bahan lain yang cocok. Cairan penyari dipanaskan hingga mendidih. Uap
penyari akan naik ke atas melalui serbuk simplisia. Uap penyari mengembun
karena didinginkan oleh pendingin balik. Embun turun melalui serbuk simplisia
sambil melarutkan zat aktifnya dan kembali ke labu. Cairan akan menguap
kembali berualng proses seperti diatas sampai serbuk simplisia tersari sempurna.
Keuntungan
1) Cairan penyari yang diperlukan lebih sedikit, dan secara langsung diperoleh
hasil yagn lebih pekat.
2) Serbuk simplisia disari oleh cairan penyari yang murni, sehingga dapat
menyari zat aktif lebih banyak.
3) Penyarian dapat diteruskan sesuai dengan keperluan, tanpa menambah volume
cairan penyari.
Kerugian
1) Larutan dipanaskan terus menerus, sehingga zat aktif yagn tidak tahan
pemanasan kurang cocok. Ini dapat diperbaiki dengan menambah peralatan untuk
mengurangi tekanan udara.
2) Cairan penyari dididihkan terus menerus, sehingga cairan penyari yang baik
harus murni atau campuran azeotrop (Anonim, 1986).
14
H. Ekstrak
1. Definisi ekstrak
Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan
mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani
menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua
pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian
sehingga memenuhi standar baku yang telah ditetapkan (Anonim, 2000).
2. Pengelompokan ekstrak
Ekstrak berdasarkan sifatnya dapat dikelompokkan menjadi : (a)
ekstrak encer (extractum tenue), (b) ekstrak kental (extractum spissum), (c)
ekstrak kering (extractum siccum), (d) Ekstrak cair (extractum fluidum),
memiliki konsistensi cair dan mudah dituang (Voigt, 1994).
Ekstrak cair adalah sediaan dari simplisia nabati yang
mengandung etanol sebagai pelarut atau sebagai pengawet. Jika tidak
dinyatakan lain pada masing-masing monografi tiap ml ekstrak mengandung
senyawa aktif dari 1 g simplisia yang memenuhi syarat.
Ekstrak kental adalah ekstrak cair dimana sebagian besar pelarut
diuapkan sehingga kandungan pelarutnya tinggal 10%. Ekstrak kering adalah
ekstrak dimana semua pelarutnya diuapkan sampai semua pelarut menguap
semua (Sumaryono, 2004).
15
3. Ekstrak Temulawak
Ekstrak kental Temulawak adalah ekstrak yang dibuat dari
rimpang tumbuhan Curcuma xanthorrhiza Roxb., suku Zingiberaceae,
mengandung minyak atsiri tidak kurang dari 4,6 % dan kurkuminoid tidak
kurang dari 14,2%.
Pemerian. Bentuk kental, warna kuning kecoklatan, bau khas, rasa
pahit. Kandungan kimia yaitu kurkumin, desmetoksikurkumin, minyak atsiri
dengan komponen utama xantorizol, dan oleoresin (Anonim, 2004).
I. Spektrofotometri
Prinsip kerja spektrofotometri adalah berdasarkan atas interaksi antara
radiasi elektromagnetik dengan materi. Materi dapat berupa atom, ion, atau
moleku, sedang variasi elektromagnetik merupakan salah satu jenis energi yang
ditransmisikan dalam ruang dengan kecepatan tinggi. Interaksi antara molekul
yang mempunyai gugus kromofor dan radiasi elektromagnetik pada daerah
ulntraviolet (200nm-400nm) dan sinar tampak (400nm-800nm)akan menghasilkan
spektra serapan elektronik, spektra serapan ini dapat digunakan untuk
menganalisis kuantitatif karena jumlah radiasi elektromagnetik yang diserap ada
hubungannya dengan jumlah molekul penyerap (Skoog, 1985).
Penyimpangan hukum Beer mungkin disebabkan oleh perubahan kimia
atau alat. Hukum Beer mungkin tidak cocok disebabkan oleh adanya perubahan
kadar zat yang dilarutkan, karena adanya asosiasi antar molekul zat atau antara
molekul zat dengan molekul pelarut. Penyimpangan lain mungkin disebabkan
16
oleh sinar polikromatik, lebar cerah atau sinar menyimpang. Larutan yang
mengandung 1 mg zat tiap 100 ml dalam 1 cm sering mempunyai serapan 0,2
sampai 0,8. Pada pengukuran serapan suatu larutan selalu diperlukan suatu larutan
blanko. Maksud dari larutan blanko adalah untuk mengatur spektrofotometer
hingga pada panjang gelombang yang digunakan mempunyai serapan nol
(Anonim, 1974).
Validasi metoda analisis adalah suatu tindakan penilaian terhadap
parameter tertentu, berdasarkan percobaan laboratorium, untuk membuktikan
bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk penggunaannya. Beberapa
parameter analisis yang harus dipertimbangkan dalam validasi metode analisis
diuraikan dan didefinisikan sebagaimana cara penentuannya.
1. Kecermatan (accuracy)
Kecermatan adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan hasil
analis dengan kadar analit yang sebenarnya. Kecermatan dinyatakan sebagai
persen perolehan kembali (recovery) analit yang ditambahkan. Kecermatan
ditentukan dengan dua cara yaitu metode simulasi (spiked-placebo recovery) atau
metode penambahan baku (standard addition method).
2. Keseksamaan (precision)
Keseksamaan adalah ukuran yang menunjukkan derajat kesesuaian
antara hasil uji individual, diukur melalui penyebaran hasil individual dari rata-
rata jika prosedur diterapkan secara berulang pada sampel-sampel yang diambil
dari campuran yang homogen.
17
Keseksamaan diukur sebagai simpangan baku atau simpangan baku
relatif (koefisien variasi). Keseksamaan dapat dinyatakan sebagai keterulangan
(repeatability) atau ketertiruan (reproducibility). Keterulangan adalah
keseksamaan metode jika dilakukan berulang kali oleh analis yang sama pada
kondisi sama dan dalam interval waktu yang pendek. Ketertiruan adalah
keseksamaan metode jika dikerjakan pada kondisi yang berbeda. Biasanya
analisis dilakukan dalam laboratorium-laboratorium yang berbeda
menggunakan peralatan, pereaksi, pelarut, dan analis yang berbeda pula.
3. Selektivitas (Spesifisitas)
Selektivitas atau spesifisitas suatu metode adalah kemampuannya yang
hanya mengukur zat tertentu saja secara cermat dan seksama dengan adanya
komponen lain yang mungkin ada dalam matriks sampel. Selektivitas seringkali
dapat dinyatakan sebagai derajat penyimpangan (degree of bias) metode yang
dilakukan terhadap sampel yang mengandung bahan yang ditambahkan berupa
cemaran, hasil urai, senyawa sejenis, senyawa asing lainnya, dan dibandingkan
terhadap hasil analisis sampel yang tidak mengandung bahan lain yang
ditambahkan.
Selektivitas metode ditentukan dengan membandingkan hasil analisis
sampel yang mengandung cemaran, hasil urai, senyawa sejenis, senyawa asing
lainnya atau pembawa plasebo dengan hasil analisis sampel
4. Linearitas dan rentang
Linearitas adalah kemampuan metode analisis yang memberikan respon
yang secara langsung atau dengan bantuan transformasi matematematik yang
18
baik, proporsional terhadap konsentrasi analit dalam sampel. Rentang metode
adalah pernyataan batas terendah dan tertinggi analit yang sudah ditunjukkan
dapat ditetapkan dengan kecermatan, keseksamaan, dan linearitas yang dapat
diterima.
Linearitas biasanya dinyatakan dalam istilah variansi sekitar arah garis
regresi yang dihitung berdasarkan persamaan matematik data yang diperoleh dari
hasil uji analit dalam sampel dengan berbagai konsentrasi analit. Perlakuan
matematik dalam pengujian linearitas adalah melalui persamaan garis lurus
dengan metode kuadrat terkecil antara hasil analisis terhadap konsentrasi analit.
5. Batas deteksi dan batas kuantitasi
Batas deteksi adalah jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat
dideteksi yang masih memberikan respon signifikan dibandingkan dengan
blangko. Batas deteksi merupakan parameter uji batas. Batas kuantitasi
merupakan parameter pada analisis renik dan diartikan sebagai kuantitas terkecil
analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama.
Penentuan batas deteksi suatu metode berbeda-beda tergantung pada metode
analisis itu menggunakan instrumen atau tidak (Harmita, 2004).
J. Keterangan Empiris
Rimpang Temulawak mempunyai kandungan kimia utama kurkuminoid
yang dapat digunakan untuk pengobatan antiinflamasi. Kurkuminoid larut dalam
alkohol dan asam asetat glasial, tetapi tidak larut dalam air dan eter. Kurkuminoid
dapat diperoleh dengan penyarian secara maserasi dan dengan alat Soxhlet. Hal
19
ini karena penyarian menggunakan cairan penyari etanol karena memiliki
kepolaran yang mirip.
Pada rimpang Temulawak juga memiliki kandungan minyak atsiri berupa
cairan berwarna kuning atau kuning jingga, mempunyai rasa yang tajam, bau khas
aromatik, mempunyai indeks bias 1,5130 (240C), bobot jenis 0,9423 dan rotasi
optis –140 pada 240C. Rimpang Temulawak merupakan salah satu tumbuhan yang
rimpangnya mengandung minyak atsiri dalam kadar yang cukup besar, yaitu
tidak kurang dari 3,2% (Anonim, 2004).
Keterangan empiris yang diharapkan dari penelitian ini adalah dapat
mengetahui perbedaan kandungan kurkuminoid dan minyak atsiri dalam ekstrak
Temulawak dengan variasi metode, yaitu ekstraksi maseasi dan dengan alat
Soxhlet.
20
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
1. Jenis Penelitian
Penelitian ini termasuk penelitian quasi eksperimental yaitu
membandingkan perbedaan kandungan kurkuminoid dan minyak atsiri dalam
Temulawak dengan variasi metode secara maserasi dan dengan alat Soxhlet
sebagai perlakuan. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi
Fitokimia dan Laboratorium Analisis Instrumental Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma Yogyakarta.
2. Tahapan penelitian
Langkah-langkah penelitian, meliputi :
a. Pembuatan simplisia
b. Penyerbukan rimpang Temulawak
c. Identifikasi rimpang Temulawak secara organoleptik, makroskopik, dan
mikroskopik
d. Pembuatan ekstrak rimpang Temulawak
e. Ekstraksi dengan metode maserasi
f. Ekstraksi dengan metode dengan alat Soxhlet
g. Pengentalan ekstrak rimpang Temulawak
h. Penetapan kandungan minyak atsiri
21
i. Penetapan kandungan kurkuminoid dalam ekstrak rimpang Temulawak
3. Variabel
a. Variabel Bebas metode ekstraksi maserasi dan dengan alat Soxhlet
b. Variabel Tergantung kandungan kurkuminoid dan minyak atsiri
c. Variabel Pengacau Tidak Terkendali umur rimpang Temulawak
d. Variabel Terkendali sumber pembelian rimpang Temulawak
B. Definisi Operasional
1. Ekstrak yang digunakan adalah ekstrak kental rimpang Temulawak yang
diperoleh dari hasil ektraksi dengan metode maserasi dan dengan alat Soxhlet
yang dikentalkan dengan Vacuum Rotary Evaporator pada suhu 500C dan tekanan
72 mbar selama 1 jam 30 menit dan oven pada suhu 500C selama 20 jam 15 menit.
2. Kurkuminoid adalah senyawa polifenol berwarna kuning yang terkandung
pada rimpang Temulawak.
3. Minyak atsiri rimpang Temulawak adalah minyak yang mudah menguap dan
mengandung bau khas diperoleh dari rimpang Temulawak.
4. Isolasi minyak atsiri adalah volume minyak atsiri yang dihasilkan dari setiap
bobot penimbangan ekstrak dengan menggunakan destilasi Stahl, kemudian
minyak atsiri diukur volumenya dengan menggunakan labu berskala.
5. Penetapan kandungan kurkuminoid adalah penetapan kandungan kurkuminoid
total yang terukur oleh spektrofotometer visibel pada panjang gelombang
22
maksimum 420 nm. Dengan kadar total kurkuminoid dihitung sebagai %
kurkumin.
C. Bahan dan Alat Penelitian
1. Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah oven, Vacuum
Rotary Evaporator, spektrofotometer visibel, neraca analitik, destilasi Stahl, alat
vacuum, alat-alat gelas, labu alas bulat 1L, alat Soxhlet, seperangkat maserat.
2. Bahan
a. Bahan utama yang digunakan adalah rimpang Temulawak yang dibeli
dari pasar Bringharjo.
b. Bahan-bahan lain yang digunakan adalah aquadest, etanol, aseton p.a.
(Merck), etanol teknis, baku kurkumin, Natrium Hidroksida.
D. Jalannya Penelitian
1. Identifikasi Rimpang Temulawak
Identifikasi dilakukan secara organoleptik, makroskopik,
mikroskopik dengan cara sebagai berikut :
a. Organoleptik : pengamatan warna, bau, dan rasa rimpang
Temulawak.
b. Makroskopik : pengamatan morfologi rimpang Temulawak.
23
c. Mikroskopik : rimpang Temulawak kering direndam dalam air
panas sekitar 30 menit, lalu dibuat irisan melintang dan diamati dalam
larutan kloralhidrat. Serbuk simplisia diamati seperti pada irisan.
2. Pembuatan Simplisia (Anonim 1985) meliputi :
a. Pengumpulan bahan
Rimpang Temulawak yang digunakan sebagai bahan utama
dibeli dari pasar Bringharjo, Yogyakarta. Rimpang dibeli dari satu
pedagang sebanyak 10 kg. Rimpang yang dibeli merupakan rimpang
yang masih baik dilihat dari bentuk fisiknya.
b. Sortasi basah
Rimpang yang sudah dikumpulkan kemudian dipisahkan
dengan pengotor yang terbawa saat penyimpanan di pasar dari maupun
saat pembelian, misalnya tanah, batang, akar, serta pengotor lainnya.
c. Pencucian
Setelah disortasi, dilakukan pencucian untuk menghilangkan
tanah dan pengotor lainnya yang melekat pada bahan simplisia.
Pencucian dilakukan dengan selalu mengganti air di dalam ember setiap
air sudah sangat keruh dan banyak tanah di dasar ember. Rimpang yang
telah dicuci kemudian diangin-anginkan agar air sisa pencucian hilang.
24
d. Perajangan
Rimpang yang telah hilang sisa air pencuciannya kemudian
dirajang dengan pisau stainless steel sehingga diperoleh irisan tipis dan
dipotong dengan ukuran yang dikehendaki kira-kira 0,5 cm agar
rimpang cepat kering saat dikeringkan (dijemur).
e. Pengeringan
Irisan rimpang Temulawak kemudian dijemur di bawah
sinar matahari tidak langsung dengan ditutupi kain hitam untuk
menutupi rimpang agar tidak langsung terkena sinar matahari agar
kandungan di dalam rimpang tidak rusak, sambil dibalik-balik agar
pengeringannya merata.
f. Sortasi kering
Rimpang yang telah kering kemudian dipisahkan satu per
satu dengan tangan dari benda-benda asing seperti bagian-bagian
tanaman yang tidak diinginkan dan pengotor-pengotor lain yang masih
ada dan tertinggal.
g. Pembuatan serbuk simplisia
Simplisia Temulawak yang telah kering kemudian diserbuk
dan diayak dengan ayakan 8/14 sehingga mendapat serbuk yang
homogen.
25
3. Pembuatan ekstrak rimpang Temulawak
a. Metode maserasi
Ditimbang 100,0 g serbuk kering Temulawak dan
dimasukkan ke dalam maserator ditambah 1,0 L etanol 70 %. Ekstraksi
dilakukan selama 3 hari, setiap 24 jam pelarut diganti dengan yang baru.
Hasil ekstraksi ditampung dalam jirigen dengan disaring menggunakan
kain katun agar serbuk tidak ikut masuk dalam ekstrak.
b. Metode dengan alat Soxhlet
Ditimbang 100,0 g serbuk kering Temulawak dan
dimasukkan ke dalam sifon. Digunakan alat dengan alat Soxhlet 25
sehingga dilakukan 4 kali untuk memperoleh bobot serbuk 100,0 g.
Larutan penyari menggunakan etanol 70 % sebanyak 2 sirkulasi (±460
ml) untuk setiap penyarian. Ekstraksi dilakukan sampai semua
kandungan kimia simplisia terekstraksi ditandai dengan larutan penyari
yang kembali jernih di dalam tabung sifon.
4. Pengentalan ekstrak rimpang Temulawak
Ekstrak cair yang diperoleh dari proses ekstraksi dengan metode
maserasi dan dengan alat Soxhlet dikentalkan dengan menggunakan
Vacuum Rotary Evaporator pada suhu 500C dan tekanan 72 mbar dan
menggunakan oven pada suhu 500C. hasil yang diperoleh masih berupa
ekstrak cair tetapi sudah agak kental. Kemudain ekstrak yang sudah di
26
rotary dilanjutkan dikentalkan dengan menggunakan oven untuk diperoleh
ekstrak kental dengan suhu 400C.
5. Penetapan kandungan minyak atsiri
Labu alas bulat 1,0 L dihubungkan dengan alat destilasi Stahl.
Ditimbang 2,0 g ekstrak kental rimpang Temulawak dan dimasukkan ke
dalam labu, kemudian ditambahkan aquadest 200,0 ml. Labu dipanaskan
dengan penangas udara, sehingga penyulingan berlangsung dengan lambat
tetapi teratur selama 6 jam. Setelah selesai, dibiarkan selama tidak kurang
dari 15 menit, volume minyak atsiri pada buret dicatat. Kadar minyak atsiri
dihitung dalam % v/b (Anonim, 2000).
6. Penetapan kandungan kurkuminoid
a. Pembuatan larutan stok
Kurang lebih 20,0 mg kurkumin baku yang ditimbang
seksama dilarutkan dalam aseton menggunakan labu ukur 100,0 ml.
b. Pembuatan larutan intermediet
Larutan stok dengan kadar 20 mg% b/v diambil sebanyak 25,0
ml dan dimasukkan ke dalam labu ukur 100,0 ml, kemudian diencerkan
dengan aseton hingga tanda sehingga diperoleh larutan intermediet
kurkumin dengan kadar 5 mg% b/v.
27
c. Penetapan panjang gelombang maksimum
Larutan intermediet dengan kadar 5 mg% b/v diambil 0,8 ml;
1,4 ml; 2,0 ml dan dimasukkan ke dalam labu 25,0 ml, kemudian
diencerkan dengan aseton sampai tanda. Larutan kurkumin dengan
0,1632 mg% b/v; 0,2856 mg% b/v; 0,4080 mg% b/v ini kemudian
dibaca serapannya pada panjang gelombang sinar tampak dari 400 nm
sampai 700 nm.
d. Penetapan recovery, kesalahan sistemik dan kesalahan acak
Larutan intermediet dengan kadar 5 mg% b/v diambil 0,8 ml;
1,4 ml; 2,0 ml dan dimasukkan ke dalam labu 25,0 ml, kemudian
diencerkan dengan aseton sampai tanda. Larutan kurkumin dengan
konsentrasi 0,1632 mg% b/v; 0,2856 mg% b/v; 0,4080 mg% b/v ini
kemudian dibaca serapannya pada panjang gelombang maksimum,
kemudian dihitung kadarnya menggunakan persamaan kurva baku.
1) Penentuan recovery (perolehan kembali). Recovery dihitung dari
kadar yang terukur pada kurva baku dibandingkan dengan kadar yang
diketahui dikalikan 100%.
Perolehan kembali (P) = %100sebenarnyakadar
kurkadar terux
2) Perhitungan kesalahan sistemik.
Rumus kesalahan sistemik = 100 – P
3) Perhitungan kesalahan acak. Kesalahan acak diukur dengan cv
(coefficient variancy)
28
Kesalahan acak (cv) = %100rata-rataharga
SD)(BakuSimpanganx
e. Pembuatan kurva baku
Larutan intermediet dengan kadar 5 mg% b/v diambil 0,8 ml;
1,0 ml; 1,4 ml; 1,6 ml; 2,0 ml dan dimasukkan ke dalam labu 25,0 ml,
kemudian diencerkan dengan aseton sampai tanda. Larutan kurkumin
dengan konsentrasi 0,1632 mg% b/v; 0,2040 mg% b/v; 0,2856 mg%
b/v; 0,3264 mg% b/v; 0,4080 mg% b/v ini kemudian dibaca serapannya
pada pada panjang gelombang maksimum. Kemudian gambar kurva
hubungan antara konsentrasi larutan dengan serapan.
f. Penetapan kadar kurkuminoid dalam sampel
Kadar kurkuminoid dengan cara spektrofotometri sinar
tampak pada panjang gelombang maksimum. Ekstrak yang
mengandung 50,0 mg kurkuminoid dimasukkan ke dalam beaker glass
dan larutkan dengan menggunakan aseton. Kemudian dimasukkan ke
dalam labu ukur 50,0 ml ditambahkan aseton melalui kertas saring
hingga tanda batas. Diambil 2,0 ml dimasukkan ke dalam labu ukur
10,0 ml ditambah aseton hingga tanda. Diambil 1,0 ml dimasukkan
dalam labu ukur 25,0 ml dan ditambahkan aseton hingga tanda,
kemudian baca serapannya. Hitung dalam % b/b dengan perbandingan
kurva baku (tidak kurang dari 33,9% b/b). Lakukan replikasi hingga 3
kali (Anonim, 1993).
29
E. Analisa Data
Rencana statistik yang akan digunakan adalah metode analisis two sample
T-test. Analisis two sample T-test merupakan suatu analisis untuk menguji
perbedaan dari data dependent (sampel tergantung). Rumus dasar two sample t-
test adalah sebagai berikut :
Dimana :
t = T-test
x1 = rata-rata kadar kurkumin metode ektraksi maserasi
x2 = rata-rata kadar kurkumin metode ektraksi dengan alat Soxhlet
=
= (De Muth, 1999).
30
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Identifikasi Rimpang Temulawak
Identifikasi rimpang ini dilakukan untuk mengidentifikasi rimpang
temulawak yang digunakan apakah rimpang temulawak yang digunakan benar-
benar dari tanaman Curcuma xanthorrhiza Robx. Pada indentifikasi dilakukan
perbandingan dengan literatur Materia Medika Indonesia (MMI). Identifikasi
dilakukan dengan uji organoleptik, makroskopis, dan mikroskopis.
Identifikasi rimpang temulawak dilakukan dengan :
1. Organoleptik
Tabel I. Pengamatan organoleptik rimpang Temulawak
Pengamatan
Organoleptik
Temulawak Pasar Bringharjo Materia Medika
Indonesia
(Anonim, 1979)
Bau Khas aromatik Aromatik
Rasa Agak pahit, tajam Tajam dan pahit
Warna Kuning orange Coklat kuning
Bentuk Umbi d = 3-10 cm Umbi d = 3-10 cm
Dari tabel I. setelah dibandingkan dengan Materia Medika Indonesia
didapatkan hasil yang telah sesuai dengan Materia Medika Indonesia yakni
pemerian temulawak bau khas aromatik, rasa tajam dan pahit, warna kuning
kecoklatan.
31
2. Makroskopis
Tabel II. Pengamatan makroskopis rimpang TemulawakJenis Temulawak Pasar
Bringharjo
Materia Medika Indonesia
(Anonim, 1979)
Bentuk Kepingan bulat, lonjong,
ringan, keras tapi rapuh,
diameter 4-6 cm, tebal 1-3
mm, pinggir berkerut
Keping tipis, bentuk bundar
atau jorong, ringan, keras,
rapuh, garis tengah sampai 6
cm, tebal 2 mm sampai 5 mm,
permukaan luar berkerut,
melengkung tidak beraturan
tidak rata
Warna Orange kecoklatan, bidang
irisan berwarna lebih buram
warna coklat kuning sampai
coklat. Bidang irisan berwarna
coklat kuning buram
Dari tabel II. identifikasi rimpang Temulawak secara makroskopis
didapatkan bentuk kepingan hasil irisan Temulawak tersebut bulat, ringan, keras
namun rapuh dengan diameter irisan 4–6 cm dan dengan tebal 1–3 mm. Warna
irisan orange kecokelatan dan bidang irisan berwarna buram. Hal ini telah sesuai
dengan kriteria makroskopik Temulawak yang terdapat di dalam Materia Medika
Indonesia yaitu bentuk kepingan : keping tipis, bentuk bundar atau jorong, ringan,
keras, rapuh, garis tengah sampai 6 cm, tebal 2 mm sampai 5 mm, permukaan luar
berkerut, warna coklat kuning sampai coklat, bidang irisan berwarna coklat
kuning. Dibandingkan dengan Materia Medika Indonesia diperoleh hasil yang
sama, maka secara makroskopis rimpang Temulawak yang dibeli di pasar
Bringharjo merupakan rimpang Temulawak.
32
Gambar 2. Rimpang Temulawak dan irisannya
3. Mikroskopis
Gambar 3. Penampang Melintang Rimpang Temulawak
Gambar 3 merupakan gambar mikroskopik penampang melintang rimpang
Temulawak. Epidermis bergabus, terdapat sedikit rambut yang berbentuk kerucut,
bersel satu. Hipedermis agak menggambus, di bawahnya terdapat periderm yang
kurang berkembang. Dalam parenkim tersebar banyak sel minyak yang berisi
33
minyak dan juga terdapat pati berbentuk pipih, bulat panjang sampai bulat telur
memanjang. Bekas pembuluh tepi kolateral dan pada silinder pusat.
Gambar 4. Penampang Melintang Rimpang Temulawak MMI (Anonim, 1979)
Gambar 4 merupakan gambar mikroskopik penampang melintang rimpang
Temulawak dari Materia Medika Indonesia. Epidermis bergabus, terdapat sedikit
rambut yang berbentuk kerucut, bersel satu. Hipedermis agak menggambus, di
bawahnya terdapat periderm yang kurang berkembang. Dalam parenkim tersebar
banyak sel minyak yang berisi minyak dan juga terdapat pati berbentuk pipih,
bulat panjang sampai bulat telur memanjang. Bekas pembuluh tepi kolatera dan
pada silinder pusat.
Dari gambar 3 dibandingkan dengan gambar 4 literatur Materia Medika
Indonesia maka dapat disimpulkan bahwa rimpang yang digunakan secara
mikroskopis juga merupakan rimpang Temulawak dari tanaman Curcuma
xanthorrhiza Robx.
34
B. Pembuatan Simplisia
1. Pengumpulan rimpang Temulawak
Rimpang Temulawak (10 kg) yang digunakan dalam penelitian ini adalah
rimpang utuh yang dibeli di pasar Bringharjo (18 Mei 2009) yang dibeli dari satu
pedagang sehingga perlakuannya menjadi sama. Rimpang yang diperoleh banyak
bahan pengotor seperti tanah yang menempel pada rimpang dan bagian akar yang
masih terbawa. Temulawak dibeli disatu tempat pedagang dan dibeli rimpang
yang masih baik dilihat dari fisik rimpang yaitu tidak ada bagian yang busuk.
Banyaknya kontaminan akan berpengaruh pada kualitas dari rimpang itu sendiri,
contohnya kontaminan tanah yang menempel. Tanah merupakan media yang baik
untuk pertumbuahan mikroba sehingga bila tidak dibersihkan terlebih dahulu
dapat menyebabkan rimpang busuk sehingga mempengaruhi kualitas rimpang.
2. Sortasi basah
Pada tahap sortasi basah ini rimpang yang telah dikumpulkan selanjutnya
dipisahkan dari kotoran-kotoran yang melekat atau bahan-bahan asing yang
dimaksud antara lain tanah, kerikil, batang, daun, akar. Seperti yang telah
disebutkan di atas bahwa tanah merupakan salah satu pengotor yang harus
dipisahkan dari rimpang karena tanah mengandung bermacam-macam mikroba
dalam jumlah yang tinggi, oleh karena itu pembersihan rimpang Temulawak dari
tanah yang dapat mengurangi jumlah mikroba awal. Mikroba yang terbawa bila
digunakan untuk bahan obat sangat berbahaya karena dapat bersifat patogen bagi
manusia yang mengkonsumsinya.
35
3. Pencucian rimpang Temulawak
Pencucian rimpang Temulawak dilakukan setelah sortasi basah dengan
menampung di dalam ember yang dialiri dengan air mengalir terus-menerus agar
kotoran yang sudah terlepas dari rimpang akan terbawa air yang meluap dari
ember.. Pencucian dilakukan sebanyak dua kali agar rimpang benar-benar bersih.
Pencucian ini bertujuan untuk melepaskan kotoran-kotoran yang masih
menempel. Pencucian dilakukan dengan selalu mengganti air di dalam ember
setiap air sudah sangat keruh dengan sambil terus menerus mengalirkan air dari
kran dan banyak tanah di dasar ember. Setelah penyikatan rimpang dibilas
menggunakan air mengalir di dalam ember yang berbeda sehingga dapat
dipastikan rimpang benar-benar bersih dari pengotor yang terbawa dan dengan
penyikatan rimpang akan membantu menghilangkan kotoran yang menempel
hingga sela-sela antara tiap ruas-ruas rimpang. Rimpang yang telah dicuci
kemudian diangin-anginkan agar air sisa pencucian hilang.
Kemudian rimpang Temulawak dikeringkan dahulu dengan cara diangin-
anginkan sehingga dapat mengurangi kemungkinan jumlah pertikel yang
menempel dibandingkan dengan bila rimpang Temulawak ini dalam keaadaan
masih basah.
4. Perajangan rimpang Temulawak
Perajangan rimpang Temulawak bertujuan dilakukan untuk
mempermudah proses pengeringan, bila terlalu tebal maka proses pengeringan
menjadi lebih lama dan pengeringannya tidak merata. Maka rimpang Temulawak
36
dirajang 3-5 mm, apabila irisan semakin tipis maka semakin cepat penguapan air,
sehingga waktu pengeringan semakin cepat. Akan tetapi irisan yang terlalu tipis
juga dapat menyebabkan rimpang kering menjadi mudah hancur dan dapat
menyebabkan berkurangnya atau hilangnya zat yang mudah menguap, sehingga
dapat mempengaruhi kandungan minyak atsiri dalam rimpang.
5. Pengeringan rimpang Temulawak
Pengeringan dapat mengurangi kadar air dan menghambat reaksi
enzimatik sehingga akan mencegah penurunan mutu atau perusakan simplisia
yang berakibat perusakan terhadap kandungan aktif rimpang Temulawak yang
akan ditetapkan yaitu kurkuminoid dan minyak atsiri.
Faktor yang dapat mempengaruhi proses pengeringan antara lain yaitu :
suhu pengeringan, kelembaban udara, aliran udara, waktu pengeringan dan luas
permukaan bahan. Pengeringan rimpang dilakukan dengan menggunakan sinar
matahari secara tidak langsung dengan cara menutup irisan rimpang dengan kain
hitam, maka ada beberapa faktor di atas antara lain suhu, kelembaban dan aliran
udara tidak terkontrol dalam penelitian ini.
Rimpang Temulawak yang telah dirajang tadi kemudian dikeringkan
dengan menggunakan sinar matahari. Selama proses pengeringan berlangsung
rimpang sering dibalik posisinya sehingga pemanasan dan pengeringan merata.
Rimpang dijemur dialasi menggunakan karton dan ditutupi kain hitam agar
rimpang tidak langsung terkena sinar matahari sehingga kandungan senyawa-
senyawa di dalamnya tidak rusak, seperti kandungan kurkuminoid yang
37
mempunyai sifat fotosensitif. Akhir dari pengeringan rimpang ditandai dengan
rimpang kering dapat dipatahkan dan gemrisik jika diremas.
6. Sortasi kering
Sortasi kering bertujuan untuk memisahkan benda-benda asing seperti
bagian-bagian tanaman yang tidak diinginkan dan pengotor-pengotor lain yang
masih ada dan tertinggal pada simplisia kering. Benda asing yang ditemukan
selama proses sortasi kering ini adalah daun saat penjemuran rimpang terbawa
saat pengambilan rimpang, hal ini perlu dilakukan agar tidak mengacau pada saat
proses ekstraksi dan pengukuran kandungan kurkuminoid dan minyak atsiri.
7. Pembuatan serbuk
Rimpang Temulawak (5 kg) yang telah siap diserbuk menggunakan
mesin penyerbuk. Selanjutnya serbuk diayak dengan ayakan 8/14 sehingga
menghasilkan serbuk (2 kg) dan siap digunakan. Pengayakan dilakukan untuk
menyamakan derajat kehalusan serbuk karena penyarian dipengaruhi salah
satunya oleh derajat kehalusan dari serbuk dan setiap rimpang memiliki derajat
kehalusan serbuk yang berbeda-beda. Untuk rimpang Temulawak digunakan
ayakan 8/14 karena dengan menggunakan ukuran tersebut maka kandungan
senyawa-senyawa dapat diisolasi dan tidak terlalu halus sehingga pada proses
ekstraksi serbuk dapat tersaring sehingga tidak ikut tercampur dengan larutan
penyari dan apabila ukuran serbuk terlalu besar maka sudut kontak antara serbuk
dengan penyari menjadi kecil sehingga penyariannya tidak baik.
38
C. Cara Maserasi
Metode maserasi digunakan untuk penyarian simplisia Temulawak karena
zat aktif (kurkuminoid) mudah larut dalam cairan penyari (etanol 70%), cara
pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana dan merupakan metode yang
sering digunakan dalam metode ekstraksi oleh industri obat tradisional. Maserasi
ekstrak rimpang ini menggunakan serbuk simplisia dan penyari etanol 70%.
Digunakan etanol 70% karena zat aktif kurkuminoid mudah larut di dalam etanol
Pada penyarian sering dilakukan pengadukan karena akan meratakan
cairan penyari membasahi seluruh serbuk sehingga konsentrasi akan tetap terjaga.
Selama 3 hari dilakukan penggojokan dengan setiap 24 jam mengganti pelarut
dengan yang baru sehingga larutan penyari yang sudah jenuh kurkuminoid dapat
melarutkan sisa kurkuminoid yang tertinggal.
Tiap kali mengambil cairan ekstrak per 24 jam, dilakukan penyaringan.
Diambil cairan hasil saringan karena di dalam cairan itulah terdapat kurkuminoid
yang larut dalam etanol 70%. Penyaring yang digunakan adalah kain katun,
digunakan kain katun karena dapat menyerap dengan cepat cairan ekstrak dan
memiliki pori–pori kain kecil dibandingkan dengan ukuran butiran serbuk
rimpang Temulawak yang diekstrak, sehingga butiran serbuk tidak ikut tersaring.
Sangat penting bahwa butiran serbuk diayak dengan ukuran 8/14 agar butiran
serbuk homogen, dan juga untuk mengantisipasi agar butiran tidak ikut tersaring
ketika disaring dengan kain katun. Bila ukuran serbuk terlalu besar, maka akan
sulit diekstraksi karena ukurannya yang besar sulit untuk diekstrak secara
39
optimum oleh pelarutnya. Dilakukan 3 kali replikasi dan diperoleh rata-rata bobot
ekstrak 14,1112 gram.
D. Dengan Alat Soxhlet
Soxhlet ekstrak rimpang Temulawak juga menggunakan serbuk simplisia
yang dibungkus menggunakan kertas saring dan penyari etanol 70%. Dipilih
kertas saring untuk membungkus serbuk rimpang Temulawak karena kertas saring
dapat membungkus serbuk rimpang Temulawak dengan baik, hal ini dikarenakan
pori–pori kertas saring lebih kecil dibandingkan dengan ukuran butiran serbuk
rimpang Temulawak yang diekstraksi sehingga butiran serbuk tidak keluar dari
pembungkusnya selama proses ekstraksi.
Kertas saring juga dapat menyerap pelarut dengan baik sehingga pelarut
dapat bebas keluar masuk ke dalam pembungkus dan mengekstrak butiran serbuk
Temulawak yang berada di dalamnya berdasarkan konsentrasi kurkuminoid yang
terekstrak. Bila konsentrasi di zona kertas saring tinggi maka akan dialirkan ke
konsentrasi yang rendah di dalam tabung sifon, setiap tetesan yang jatuh
membasahi kertas saring akan beradaptasi untuk mendapatkan konsentrasi yang
sama dengan pelarut yang lebih dulu jatuh membasahi kertas saring. Larutan
tersebut kemudian akan memenuhi tabung kapiler yang berada di sebelah tabung
sifon sampai ketinggian tertentu, kemudian larutan akan mengalir dan jatuh ke
dalam labu alas bulat. Di dalam labu alas bulat inilah kurkuminoid terakumulasi.
Cairan penyari akan dialirkan dari atas ke bawah sebanyak dua sirkulasi
dan cairan penyari akan tertampung di dalam labu alas bulat. Metode soxhlet
40
dapat dikatakan lebih hemat dalam hal jumlah pelarut, karena sejumlah pelarut
yang telah menarik kurkuminoid akan tertampung di dalam labu alas bulat dan
pelarut akan menguap kembali tanpa membawa kurkuminoid untuk ikut teruap,
dan setelah pelarut menguap, pelarut akan didinginkan oleh pendingin sehingga
mengalami kondensasi kemudian menetes kembali sebagai etanol 70% yang baru
yang kemudian membasahi ulang kertas saring yang berisi serbuk rimpang
Temulawak, begitu seterusnya hingga pelarut dalam tabung sifon yang berisi
kertas saring berisi serbuk rimpang Temulawak bening secara visual. Bila larutan
penyari telah berwarna bening maka seluruh komponen serbuk rimpang
Temulawak yang terlarut etanol sudah habis terekstraksi. Ekstrak cair yang
didapatkan kemudian ditampung dalam jerigen. Serbuk sebanyak 100,0 mg
membutuhkan penyari 460 ml dan diperoleh ekstrak kental sebanyak 13,2233
gram.
E. Pengentalan Ekstrak Rimpang Temulawak
Pengentalan ekstrak cair rimpang Temulawak sebanyak 1 L dilakukan
dengan menggunakan Vacuum Rotary Evaporator pada suhu 500C dan pada
tekanan 72 mbar. Prinsip kerja dari Vacuum Rotary Evaporator adalah
memindahkan pelarut dari sampel dengan menggunakan system evaporasi.
Penggunaan Vacuum Rotary Evaporator bertujuan untuk mempercepat proses
pengentalan dan menurunkan tekanan dalam bulk cairan dan menurunkan titik
didih komponen cairan yang dipindahkan sehingga proses pemindahan komponen
cairan dapat terjadi tanpa pemanasan yang berlebih.
41
Pada penelitian ini, pelarut yang dipindahkan adalah etanol yang
mempunyai titik didih 500C pada tekanan 1 atm atau 1013,25 mbar dan dengan
adanya vakum evaporator diharapkan air dapat dipindahkan pada suhu 500C dan
tekanan 72 mbar sehingga tidak perlu menggunakan pemanasan berlebih yang
dapat menyebabkan banyak minyak atsiri yeng ikut menguap. Pengentalan ekstrak
dilakukan dengan menggunakan Vacuum Rotary Evaporator membutuhkan waktu
1 jam 30 menit. Hal ini disebabkan karena jika proses pengentalan ekstrak dengan
menggunakan Vacuum Rotary Evaporator terlalu lama akan menghasilkan ekstrak
kental yang banyak menempel di dinding labu alas bulat sehingga sulit
dikeluarkan, maka proses pengentalan dilanjutkan dengan menggunakan oven
pada suhu 400C. ekstrak kental yang diperoleh akan digunakan untuk pengukuran
kadar kurkuminoid dan minyak atsiri.
Ekstrak kental yang dihasilkan dari masing-masing ekstraksi kemudian
ditimbang, sehingga diperoleh bobot rata-rata ekstrak kental rimpang Temulawak
metode maserasi (ERTM) 3 replikasi sebanyak 14,1112 gram dan ekstrak kental
rimpang Temulawak dengan alat soxhlet (ERTS) didapatkan ekstrak kental
sebanyak 13,223 gram untuk rata–rata bobot ekstrak 3 replikasi. Kemudian
ekstrak inilah yang digunakan untuk menetapkan kandungan kurkuminoid dan
minyak atsiri.
F. Penetapan Kandungan Minyak Atsiri
Penetapan kadar minyak atsiri dilakukan untuk mengetahui jumlah
kandungan minyak atsiri yang terkandung dalam ERTM dan ERTS. Dalam
42
penelitian ini untuk isolasi minyak atsiri dari rimpang Temulawak digunakan
destilasi stahl. Pemilihan metode ini didasarkan pada beberapa pertimbangan yaitu
lebih praktis untuk penyulingan minyak atsiri dalam jumlah yang relative sedikit,
dan peralatannya sederhana. Minyak atsiri merupakan salah satu komponen dari
ekstrak rimpang Temulawak yang mempunyai efek farmakologi sehingga kadar
minyak atsiri dalam ekstrak rimpang Temulawak mempengaruhi mutu dan khasiat
obat tradisional yang mengandung ekstrak rimpang Temulawak. Kadar minyak
atsiri ini dihitung dalam % v/b yang dilakukan dengan cara destilasi Stahl selama
6 jam. Dilakukan selama 6 jam karena merupakan waktu yang optimum untuk
mengisolasi minyak atsiri (Anonim, 1995).
Tabel III. Kadar (%v/b) minyak atsiri ERTM
Replikasi
I
Replikasi
II
Replikasi
III
Replikasi
IV
Replikasi
V
Ekstrak
Temulwak2,0079 g 2,0039 g 2,0049 g 2,0082 g 2,0350 g
Volume
minyak atsiri0,40 ml 0,42 ml 0,33 ml 0,36 ml 0,31 ml
Kadar (b
v %) 19,9213 20,9591 16,4597 17,9265 15,2334
Rata-rata 18,1%
SD 2,3680
CV 13,0829%
43
Tebel IV. Kadar (%v/b) minyak atsiri ERTS
Replikasi
I
Replikasi
II
Replikasi
III
Replikasi
IV
Replikasi
V
Ekstrak
Temulwak2,1836 g 2,1441 g 2,1868 g 2,0406 g 2,0016 g
Volume
minyak atsiri0,48 ml 0,35 ml 0,48 ml 0,47 ml 0,38 ml
Kadar (b
v %) 21,9820 16,3239 16,4597 23,0324 18,9848
Rata-rata 19,36%
SD 3,0875
CV 15,9506%
Pada tabel III dan IV menunjukan kadar minyak atsiri dari ERTM
dan ERTS. Diperoleh kadar rata-rata minyak atrsiri ERTM sebesar 18,1% dan
untuk kadar rata-rata minyak atsiri ERTS diperoleh 19,36%. Hasil ini kadar
minyak atsiri dari ekstrak rimpang Temulawak ini sudah sesuai yaitu
memenuhi standar Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat Indonesia yaitu tidak
kurang dari 3,2% (Anonim, 2004). Minyak atsiri ERTS lebih besar kadarnya
bila dibandingkan dengan minyak atsiri ERTM. Hal ini dapat disebabkan
karena pada metode ekstraksi menggunakan alat Soxhlet mengalami
pemanasan yang berkesinambungan sehingga pelarut yang menguap akan
terkondensasi dan serbuk selalu terbasahi kembali oleh pelarut dari hasil
kondensasi yang digunakan untuk melarutkan minyak atsiri dari serbuk di
dalam sifon, maka diperoleh kandungan minyak yang lebih banyak
dibandingkan dengan menggunakan metode ekstrasi secara maserasi.
44
Dengan menggunakan uji statistik t-test didapatkan hasil thitung < ttabel → -
0,0536 < 1,859. Dengan demikian baik menggunakan metode ekstraksi maserasi
maupun soxhlet tetap diperoleh kadar minyak atsiri yang tidak berbeda.
G. Penetapan Kandungan Kurkuminoid Dengan Spektofotometri Visibel
Kurkuminoid merupakan pigmen yang terkandung pada rimpang
Temulawak yang berwarna kuning. Adanya gugus kromofor, menyebabkan
kurkuminoid memberi serapan pada sinar tampak. Selain adanya gugus kromofor,
dalam kurkuminoid juga terdapat gugus auksokrom merupakan gugus fungsional
yang memiliki elekron bebas yang terikat pada gugus kromofor sehingga akan
mengakibatkan pergeseran panjang gelombang dan dan menjadi lebih panjang
sehingga terjadi peningkatan intensitas warna.
Gambar 5. Gugus kromofor dan auksokrom pada kurkuminoid
Penetapan kandungan kurkuminoid digunakan pelarut aseton. Pelarut yang
digunakan adalah pelaut yang dapat melarutkan kurkuminoid dan memiliki
panjang gelombang di luar panjang gelombang maksimum kurkuminoid agar
45
pelarut yang digunakan mempunyai absorbansi maksimum pada panjang
gelombang 330 nm (Willard, 1988).
1. Penetapan panjang gelombang maksimum (λmax)
Penetapan panjang gelombang maksimum bertujuan untuk mengetahui
panjang gelombang dari suatu senyawa yang mempunyai absorbansi (serapan)
maksimum. Dalam penelitian ini pengukuran panjang gelombang maksimum
dimulai pada panjang gelombang 400 nm-700nm karena larutan yang akan
diukur memiliki panjang gelombang pada daerah visibel karena senyawa yang
diukur kurkuminoid yang memiliki warna kuning.
Dari grafik panjang gelombang yang diukur pada ke tiga konsentrasi
(0,1632 mg% b/v; 0,2856 mg% b/v; 0,4080 mg% b/v) terlihat bahwa panjang
gelombang maksimum kurkuminoid adalah 420 nm. Hal ini disebabkan
karena warna larutan kurkuminoid yang diukur berwarna kuning kehijauan
yang panjang gelombangnya berada antara 400 nm-435 nm (Day, A. JR. and
A. Lunderwood, 1958).
2. Validasi metode
Metode penetapan kadar yang baik harus memenuhi berbagai kriteria
yang nilai perolehan kembali (recovery), kesalahan sistemik, dan kesalahan
acak. Ketiga hal tersebut merupakan parameter validitas metode untuk
menunjukkan apakah suatu metode sudah optimal untuk digunakan dalam
penetapan kadar suatu zat dalam sampel.
46
Berikut adalah hasil dari pengujian validasi metode analisis :
a. Akurasi
Akurasi dimaksudkan untuk mengetahui seberapa dekat antara
hasil yang diukur menggunakan suatu metode analisis dengan hasil yang
sebenarnya. Semakin sedikit selisih antara keduanya maka akurasi
metode analisis semakin baik. Akurasi metode analisis dinyatakan dalam
recovery. Menurut Harmita, akurasi yang baik dengan kadar 0,1 ppm–1
ppm dinyatakan dalam recovery antara 80–110 %. Dari hasil percobaan
yang telah dilakukan didapatkan pengukuran akurasi :
Tabel V. Recovery baku kurkumin
Kadar teoritis(mg% b/v)
Kadar I(mg% b/v)
Kadar II(mg% b/v)
Kadar III(mg% b/v)
Recovery(% b/v)
0,1632 0,1638 0,1604 0,1627 99,44850,2856 0,2861 0,2793 0,2896 99,78990,4080 0,4067 0,3993 0,4130 99,9183
Rata-rata recovery 99,7189
Rentang recovery yang diperoleh adalah 99,79%-99,92%. Hasil ini
masuk dalam range 80–110% (Harmita, 2004) sehingga dapat dikatakan
bahwa metode analisis dalam penetapan kadar kurkuminoid pada sampel
ekstrak rimpang Temulawak memenuhi persyaratan akurasi.
b. Presisi
Presisi menunjukkan keterulangan dan ketertiruan hasil yang
diperoleh. Presisi dinyatakan dalam Coefisien Variasi (CV). Menurut
Harmita, Presisi suatu metode analisis untuk kadar 0,1 ppm–1 ppm
47
dikatakan baik jika 6,8%. Semakin kecil CV yang diperoleh maka
semakin baik presisi metode yang digunakan. Berdasarkan pengukuran
yang dilakukan diperoleh CV.
Tabel VI. Coefisien Variasi (CV) baku kurkumin
Kadar (mg% b/v ) CV (%)
0,1632 1,06890,2856 1,83770,4080 1,6821Rata – rata CV 1,5296
Hasil ini menunjukkan bahwa metode yang digunakan memiliki
presisi yang baik meskipun ada satu replikasi yang melebihi syarat CV
yaitu pada konsentrasi 1, Namun secara keseluruhan sudah memiliki
presisi yang baik untuk menetapkan kadar kurkuminoid pada sampel
ekstrak rimpang Temulawak dengan metode kolorimetri. Hal ini dapat
dilihat dari rata–rata CVnya, yaitu 1,5296% yang berada di bawah 5,8%.
c. Linearitas
Linearitas menyatakan hubungan korelasi antara kadar dan
absorbansi. Linearitas dinyatakan dari nilai r yang diperoleh dari kurva
baku. Semakin baik nilai r maka linearitas semakin baik, dimana dengan
adanya peningkatan kadar maka akan terjadi peningkatan absorbansi
yang proporsional pula. Metode dikatakan memiliki linearitas yang baik
jika r>0,99 atau r2 ≥ 0,997. Dari hasil yang diperoleh nilai r = 0,9997,
jadi metode yang dipakai memiliki linearitas yang tinggi.
48
d. Spesifisitas
Spesifisitas menunjukkan kemampuan suatu metode untuk
mengukur senyawa tertentu saja secara akurat dan presisi dalam sampel
yang terdiri dari banyak senyawa lain. Menurut Harmita (2004),
spesifisitas dapat ditunjukkan dengan membandingkan hasil yang
diperoleh dari sampel dengan hasil yang diperoleh dari baku. Apabila
diperoleh hasil yang lebih kurang sama serta memiliki akurasi dan presisi
yang baik maka metode yang digunakan tersebut dapat dikatakan telah
memenuhi syarat, presisi dari metode tersebut baik.
Pada penelitian penetapan kandungan kurkuminoid pada ekstrak
Temulawak ini memiliki spesifisitas yang tinggi. Hal ini dapat dilihat
dari hasil akurasi, recovery hasil penelitian 99,79%-99,92%. Hasil ini
masuk dalam range 80–110% (Harmita, 2004) sehingga memiliki akurasi
yang baik. Dan dari presisi, didapat CV penelitian sebesar 1,5296% yang
berada di bawah 5,8% sehingga metode ini memiliki presisi yang baik
juga. Hal ini dapat membuktikan bahwa metode penetapan kandungan
kurkuminoid dalam ekstrak rimpang Temulawak memiliki spesifisitas
yang tinggi.
e. LOD dan LOQ
LOD menunjukkan batas kadar terkecil yang mampu dideteksi oleh
metode analisis. Berdasarkan hasil pengukuran dan perhitungan, LOD
yang diperoleh sebesar 6,4669 x 10-3 mg% b/v. Jadi kadar kurkuminoid
49
agar masih dapat terdeteksi oleh metode harus ≥ 6,4669 x 10-3 mg% b/v.
LOQ menyatakan batas kadar terkecil yang mampu dikuantifikasi oleh
metode analisis. Berdasarkan hasil pengukuran dan perhitungan dan
perhitungan nilai LOQ yang diperoleh 2,1556 x 10-2 mg% b/v.
Bila dalam penelitian diperoleh angka-angka LOD dan LOQ
seperti di atas, maka metode ini dapat dikatakan baik karena metode ini
masih dapat mengukur kadar yang ada di atas kadar LOD dan LOQ yang
juga masih dapat terukur oleh metode. Maka bila kadar dapat terukur,
dapat dikatakan metode ini valid, sehingga memperlengkapi persyaratan–
persyaratan validitas dari suatu metode.
3. Kurva baku
Baku kurkumin yang digunakan berasal dari hasil sintesis kurkumin.
Dalam pembuatan kurva baku diperlukan satu seri larutan kurkumin murni
dengan kadar yang berbeda. Seri larutan kurkuminoid ini selanjutnya diukur
absorbansinya pada panjang gelombang maksimum yaitu sebesar 420nm, dan
dibuat kurva baku hubungan antara konsentrasi dengan absorbansi.
50
Tabel VII. Pengukuran absorbansi kurva baku kurkumin
Replikasi I Replikasi II Replikasi IIIC (mg% b/v) Absor
bansiC (mg% b/v) Absor
bansiC (mg% b/v) Absor
bansi0,1632 0,286 0,1632 0,285 0,1632 0,3220,2040 0,350 0,2040 0,352 0,2040 0,3500,2856 0,499 0,2856 0,543 0,2856 0,5460,3264 0,575 0,3264 0,582 0,3264 0,5930,4080 0,709 0,4080 0,700 0,4080 0,715
A = -0,0017B = 1,7498R = 0,9997
A = 0,0106B = 1,7365R = 0,9915
A = 0,034807B =1,69547R = 0,991247
Dari ketiga replikasi kurva baku kurkumin pada tabel VII memiliki
nilai koefisien korelasi (r) yang lebih besar dari nilai r tabel dengan taraf
kepercayaan 99% (0,959 dengan df 3) sehingga untuk persamaan kurva baku
dipilih r yang paling mendekati 1, yaitu persamaan kurva baku replikasi I
yaitu persamaan kurva baku replikasi I dengan persamaan Y = 1,7498x –
0,0017 dengan nilai r = 0,9997.
Gambar 6. Grafik kurva baku kurkumin
Kurva Baku
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45
Konsentrasi (mg%)
Ab
so
rban
si
51
4. Penetapan kandungan kurkuminoid dalam sampel
Kadar kurkuminoid total dalam sampel ekstrak kental rimpang
Temulawak yang diukur dengan menggunakan spektrofotometer visibel
dengan panjang gelombang 420 nm.
Tabel VIII. Kandungan kurkuminoid ERTM (%b/b)Replikasi
IReplikasi
IIReplikasi
IIIRepikasi
IVReplikas
i VBobot ekstrak
awal (mg)102,85 103,54 104,02 105,00 103,21
Bobotkurkuminoiddalam ekstrak
(mg)
24,0527 30,4106 29,1962 29,6248 24,9091
Kadarkurkuminoid
(%b/b)23,3862 29,3709 28,0679 28,2141 24,1352
Rata-rata kadarkurkuminoid
26,6349 %
SD 2,6849CV 10,0804 %
Tabel IX. Kandungan kurkuminoid ERTS (%b/b)
ReplikasiI
ReplikasiII
ReplikasiIII
RepikasiIV
ReplikasiV
Bobot ekstrakawal (g)
0,1017 0,1010 0,1003 0,1008 0,1008
Bobotkurkuminoiddalam ekstrak
(g)
0,0548 0,0561 0,0522 0,0543 0,0505
Kadarkurkuminoid
(%b/b)54,4553 55,5234 52,0983 53,8451 50,1036
Rata-rata kadarkurkuminoid
53,2051 %
SD 2,1326CV 4,0083 %
52
Dengan menggunakan uji statistik t-test didapatkan hasil thitung > ttabel
→ -17,2908 > 1,859. Dengan demikian kandungan kurkuminoid dipengaruhi
oleh metode ekstraksi yang digunakan, yaitu ekstraksi menggunakan alat
soxhlet lebih baik untuk memperoleh kurkuminoid secara maksimal
dibandingkan dengan metode maserasi. Hal ini dapat disebabkan karena pada
metode ekstraksi menggunakan alat soxhlet mengalami pemanasan yang
berkesinambungan sehingga pelarut yang menguap akan terkondensasi dan
serbuk selalu terbasahi kembali oleh pelarut dari hasil kondensasi yang
digunakan untuk melarutkan kurkuminoid dari serbuk di dalam sifon, maka
diperoleh kandungan kurkuminoid yang lebih banyak dibandingkan dengan
menggunakan metode ekstrasi secara maserasi.
53
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Dari hasil penelitian di atas dapat disimpulkan bahwa :
1. Ada pengaruh variasi metode ekstraksi secara maserasi dan dengan alat
Soxhlet terhadap kandungan kurkuminoid pada ekstrak etanolik rimpang
Temulawak, dimana dengan alat Soxhlet lebih baik dibandingkan secara
maserasi.
2. Tidak ada pengaruh variasi metode ekstraksi secara maserasi dan dengan alat
Soxhlet terhadap kandungan minyak atsiri pada ekstrak etanolik rimpang
Temulawak, dimana baik dengan maserasi atau dengan alat Soxhlet diperoleh
kandungan minyak atsiri yang sama.
B. Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui pengaruh
metode ekstraksi terhadap kandungan minyak atsiri dalam rimpang
Temulawak dengan menggunakan metode destilasi Stahl dan dilakukan
validasi metodenya.
54
DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 1974, Ekstra Farmakope Indonesia, C1092-1093, Departemen
Kesehatan RI, Jakarta
Anonim, 1979, Materia Medika Indonesia Jilid III, 63, Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, Jakarta
Anonim, 1985, Cara Pembuatan Simplisia, 105-125, Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, Jakarta
Anonim, 1986, Sediaan Galenik, Departemen Kesehatan Republik Indonesia,
Jakarta.
Anonim, 1993, Standard of ASEAN Herbal Medicine Vol 1, Aksara Buana
Printing, Jakarta
Anonim, 2000, Parameter Strandar Umum Ekstrak Tanaman Obat, cetakan
pertama, 16, Departemen Kesehatan RI, Jakarta
Anonim, 2005, Gerakan Nasional Minum Temulawak,
http://pancasetyawatiutami.blogspot.com/2005/14/GNMT.html, diakses
pada tanggal 5 Juni 2010
Bombardelli, E., 1991, Technologies for Processing of Medicinal Plants in the
Medicinal Plant industry, 85 – 89, CRC Press, Florida, USA
Day, A. JR. dan A. Lunderwood, 1958, Quantitative Analysis , Prentice Hall, New
Jersey
De Muth, J.E., 1999, Basic Statistics And Pharmaceutical Statistical Applicaions,
179, Marcel Dekker, Inc., New York
Gritter, R., J., Bobit, J., M., dan Schwarting, A., E., 1991, Pengantar
Kromatografi, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, Edisi II, 107-
1555, Penerbit ITB, Bandung
55
Guenther, 1987, The Essential Oil, Volume V, van Norstrand, Reinhold
Company, New York
Hansel, R., 1985, Pharmazeutische Biologie, Springer-Verlag Berlin Heidelberg,
New York
Harbone, 1984, Phytochemical Methods, terbitan kedua, diterjemahkan oleh
Padmawinata, K. & Soediro, I., 14-15, 147-156, Penerbit ITB, Bandung
Harmita, 2004, Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara
Perhitungannya, Majalah Ilmu Kefarmasian, I, 117–135,
http://jurnal.farmasi.ui.ac.id/pdf/2004/v01n03/Harmits010301.pdf, diakses
pada tanggal 12 Desember 2009
Jacob, M. B., 1985, The Chemistry and Technology of Food and Food Products.
Vol. I, Interscience Publication Inc., New York
Rukmana, R., 1995, Temulawak Tanaman Rempah dan Obat, 14, 17, Kanisius,
Yogyakarta
Roughly, P. J., dan Whiting, D. A., 1973, Experiments In The Biosynthesis of
Curcumin, 2379 – 2388, J. C. S., Perkin
Sidik, Moelyono M.W. dan Ahmad Muhtadi, 1995, Temulawak (Curcuma
xanthorriza), 200, Yayasan Pengembangan Obat Bahan Alam Phyto
Medica
Sinambela, James, 1985, Fitoterapi, Fitostandar dari Temulawak Prosiding
Symposium Nasional Temulawak, 238, Universitas Pajajaran. Bandung
Skoog, D., A., 1985, Principles of Instrumental Analysis, Third edition, 183,
Saundees College Publishing, New York
56
Stahl, E., 1985, Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi, 3-5, ITB,
Bandung
Stancovic, 2004, Chemical and Technical Assesment of Curcumin, 61stJECFA,
1(8)-5(8) ftp://ftp.fao.org/es/ens/jefca/cta/CTA_61_Curcumin.pdf, diakses
tanggal 30 September 2009
Sumaryono, W., 2004, Strategi Pengembangan Teknologi Formulasi dan
Manufaktur Obat Alami, Seminar Nasional XXV Tumbuhan Obat
Indonesia, Surakarta
Sumiati T., Adyana I. K., 2004. Kunyit, Si Kuning yang Kaya Manfaat,
http://iirc.ipb.ac.id/jspui/bitstream/123456789/26968/2/2010mnr.pdf,
diakses tanggal 30 September 2009
Tyler et all., 1988, Pharmacognosy, 9th Edition, 103-110, Lea and Febiger,
Philadelphia
Wijesekera, R.O.B., 199, Plant Derived Medicines and Their Role In Global
Health, In The Medicinal Industry, 1 - 8, CRC Press, Florida, USA
Voigt, R., 1994, Buku Pembelajaran Teknologi Farmasi, Edisi Kelima,
diterjemahkan oleh Soendani Noerono, 579–582, Gajah Mada University
Press, Yogyakarta
Windhol, M., (ed), 1981, The Merck Index : An Encyclopedia of Chemicals and
Drug, 10th edition, 2681, Merck & Co, Inc., New York
57
LAMPIRAN
Lamapiran 1. Pengentalan Ekstrak Rimpang Temulawak
1. Menggunakan Vacuum Rotary Evaporator
a. Set point : 100 mbar
b. Suhu : 500C
c. Δ P : 10 mbar
d. Tekanan : 72 mbar
e. Waktu : 1 jam 30 menit
f. Volume awal : 500 ml
2. Menggunakan Oven
a. Suhu : 400C
b. Waktu : 48 jam 50 menit
c. Volume akhir : 300 ml
Lampiran 2. Penetapan Kadar Minyak Atsiri Ekstrak Rimpang Temulawak
Tabel X. Penimbangan bobot konstan ERTM dan volume minyak atsiri ERTM
Replikasi
I
Replikasi
II
Replikasi
III
Replikasi
IV
Replikasi
V
Bobot glass
arloji14,2980 g 14,2979 g 14,2980 g 14,2981 g 14,2981 g
Bobot Gelas
Arloji + zat16,3061 g 16,3064 g 16,3040g 16,3063 g 16,3339 g
Bobot Gelas
Arloji + Sisa
Zat
14,2982 g 14,3025 g 14,2991 g 14,2981g 14,2989 g
Zat 2,0079 g 2,0039 g 2,0049 g 2,0082 g 2,0350 g
Volume minyak
atsiri0,40 ml 0,42 ml 0,33 ml 0,36 ml 0,31 ml
58
Kadar minyak atsiri %100xstilasiakYangDideBobotEkstr
iilDestilaskAtsiriHasKadarMinya
Replikasi I : Kadar minyak atsiri %9213,19%1000079,2
40,0 x
g
ml
Replikasi II : Kadar minyak atsiri %9591,20%1000039,2
42,0 x
g
ml
Replikasi III : Kadar minyak atsiri %4597,16%1000049,2
33,0 x
g
ml
Replikasi IV : Kadar minyak atsiri %9265,17%1000082,2
36,0 x
g
ml
Replikasi V : Kadar minyak atsiri %2334,15%1000350,2
31,0 x
g
ml
SD = 2,3680
cv = 13,0829%
Tabel XI. Penimbangan bobot konstan ERTS dan volume minyak atsiri ERTS
Replikasi I Replikasi IIReplikasi
IIIReplikasi
IVReplikasi V
Bobot glassarloji
14,3165 g 14,4819 g 14,4819 g 14,4806 g 14,3150 g
Bobot GelasArloji + zat
16,5730 g 16,7486 g 16,7459 g 16,5616 g 16,3434 g
Bobot GelasArloji + SisaZat
14,3894 g 14,6045 g 14,5591 g 14,5210 g 14,3418 g
Zat 2,1836 g 2,1441 g 2,1868 g 2,0406 g 2,0016 gVolumeminyak atsiri
0,48 ml 0,35 ml 0,48 ml 0,47 ml 0,38 ml
Kadar minyak atsiri %100xstilasiakYangDideBobotEkstr
iilDestilaskAtsiriHasKadarMinya
Replikasi I : Kadar minyak atsiri %9820,21%1001836,2
48,0 x
g
ml
Replikasi II : Kadar minyak atsiri %3239,16%1001441,2
35,0 x
g
ml
Replikasi III : Kadar minyak atsiri %4597,16%1001868,2
48,0 x
g
ml
Replikasi IV : Kadar minyak atsiri %0324,23%1000406,2
47,0 x
g
ml
Replikasi V : Kadar minyak atsiri %9848,18%1000016,2
38,0 x
g
ml
SD = 3,0875cv = 15,9506%
59
Lampiran 3. Surat Jaminan Keaslian Baku Kurkumin
60
Lampiran 4. Pembuatan Larutan Baku Kurkumin
1. Pembuatan Larutan Stok
Bobot kertas
kosong0,1846 g
Bobot kertas + zat 0,2050 g
Bobot kertas + sisa 0,1846 g
Zat 0,0204 g
Dilarutkan dengan aseton hingga volumenya 100 ml
Sehingga konsentrasi stok = = 20,4 mg%
2. Konsentrasi Intermediet
Diambil 25 ml dari larutan stok dan di add hingga 100 ml, sehingga diperoleh
konsentrasi :
C1 . V1 = C2 . V2
20,4 mg% . 25 ml = C2 . 100 ml
C2 = 5,1 mg%
3. Konsentrasi Kurva Baku Sebenarnya (mg % b/v)
a. Konsentrasi I
C1 . V1 = C2 . V2
5,1 mg% . 0,8 ml = C2 . 25 ml
C2 = 0,1632 mg%
b. Konsentrasi II
C1 . V1 = C2 . V2
5,1 mg% . 1,0 ml = C2 . 25 ml
C2 = 0,2040 mg%
61
c. Konsentrasi III
C1 . V1 = C2 . V2
5,1 mg% . 1,4 ml = C2 . 25 ml
C2 = 0,2856 mg%
d. Konsentrasi IV
C1 . V1 = C2 . V2
5,1 mg% . 1,6 ml = C2 . 25 ml
C2 = 0,3264 mg%
e. Konsentrasi V
C1 . V1 = C2 . V2
5,1 mg% . 2,0 ml = C2 . 25 ml
C2 = 0,4080 mg%
Lampiran 5. Penetapan Panjang Gelombang Maksimum Baku Kurkumin
Gambar 7. Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 1 kadar 1,632 x 10-4%b/v
62
Gambar 8.Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 1 kadar 2,856 x 10-4%b/v
Gambar 9.Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 1 kadar 4,080 x 10-4%b/v
63
Gambar 10.Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 2 kadar 1,632 x 10-4%b/v
Gambar 11.Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 2 kadar 2,856 x 10-4%b/v
64
Gambar 12.Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 2 kadar 4,080 x 10-4%b/v
Gambar 13.Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 3 kadar 1,632 x 10-4%b/v
65
Gambar 14.Panjang gelombang baku kurkumin replikasi 3 kadar 2,856 x 10-4%b/v
Gambar 15. Panjang gelombang replikasi 3 kadar 4,080 x 10-4%b/v
Jadi diperoleh panjang gelombang maksimum pada 420 nm.
66
Lampiran 6. Pembuatan Kurva Baku Kurkumin
Tabel XII. Pengukuran absorbansi kurva baku kurkumin
Replikasi I Replikasi II Replikasi IIIC (mg%) Absorbansi C (mg%) Absorbansi C (mg%) Absorbansi0,1632 0,286 0,1632 0,285 0,1632 0,3220,2040 0,350 0,2040 0,352 0,2040 0,3500,2856 0,499 0,2856 0,543 0,2856 0,5460,3264 0,575 0,3264 0,582 0,3264 0,5930,4080 0,709 0,4080 0,700 0,4080 0,715
A = -0,0017B = 1,7498R = 0,9997
A = 0,0106B = 1,7365R = 0,9915
A = 0,034807B =1,69547R = 0,991247
Maka persamaan yang digunakan replikasi 1, Y = 1,7498x – 0,0017
Karena yang r nya mendekati adalah replikasi 1 maka, data yang dipakai adalah
replikasi 1.
Lampiran 7. Validasi Metode Baku Kurkumin
Tabel XIII. Pengukuran akurasi dan presisi baku kurkumin
Konsentrasisebenarnya(mg% b/ v)
AbsorbansiKonsentrasi
terukur(mg% b/ v)
IIIIII
0,16320,16320,1632
0,2850,2790,283
0,16380,16040,1627
SD = 1,0631Rata-rata = 99.4485%CV = 1,0689%
IIIIII
0,28560,28560,2856
0,4990,4870,505
0,28610,27930,2896
SD = 1,8338Rata-rata = 99,7899%CV = 1,8377%
IIIIII
0,40800,40800,4080
0, 7100,6970,721
0,40670,39930,4130
SD = 1,6807Rata-rata = 99,9183%CV = 1,6821%
67
Perolehan Kembali, kesalahan sistemik, dan kesalahan acak:
a. Konsentrasi 0,1632 mg%
Replikasi I : %recovery = 100,3676 %
Replikasi II %recovery = 98,2843 %
Replikasi III %recovery = 99,6936 %
SD = 1,0631
Rata-rata = 99.4485%
CV = 1,0689%
b. Konsentrasi 0,2856 mg%
Replikasi I : %recovery = 100,1751 %
Replikasi II %recovery = 97,7941%
Replikasi III %recovery = 101,4006%
SD = 1,8338
Rata-rata = 99,7899%
CV = 1,8377%
c. Replikasi 0,4080 mg%
Replikasi I : %recovery = 99,6814 %
Replikasi II %recovery = 97,8676%
Replikasi III %recovery = 101,2255%
SD = 1,6807
Rata-rata = 99,9183%
CV = 1,6821%
68
Tabel XIV. Perhitungan LOD dan LOQ baku kurkumin
C (mg%) Absorbansi y’ y-y’ (y-y’)2
0,1632 0,286 0,2839 2,1 x 10-3 0,441 x 10-5
0,2040 0,350 0,3552 5,2 x 10-3 2,704.10-5
0,2856 0,499 0,498 1 x 10-3 0,1 x 10-5
0,3264 0,575 0,5694 5,6 x 10-3 3,136 x 10-5
0,4080 0,709 0,7122 3,2 x 10-3 1,024 x 10-5
Total 4,269 x 10-5
S ( y/x) =
= 3,7723 x 10-3
LOD =
== 6,4669 x 10-3 mg%
LOQ =
== 2,1556 x 10-2 mg%
Lampiran 8. Perhitungan Orientasi Penimbangan Sampel Ekstrak Temulawak
1. ETANOL MASERASI
Bobot glass arloji 14754,90 mg
Bobot glass arloji + ekstrak 14841,32 mg
Bobot glass arloji + sisa
ekstrak
14787,83 mg
Zat 53,49 mg
69
Y = 1,7498X – 0,0017
0,153 = 1,7498X – 0,0017
x = 0,0884 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 1,0 ml = 0,0884 mg% . 25 ml
C2 = 2,2102 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 2,0 ml = 2,2102 mg% . 10 ml
C2 = 11,0513 mg%
x
mg
mg
mg 50
50
0513,11
mg
mgx
0513,11
2500 = 226,2177 mg dilarutkan dalam 50 ml aseton
2. ETANOL SOKLETASI
Bobot glass arloji 14492,85 mg
Bobot glass arloji + ekstrak 14626,58 mg
Bobot glass arloji + sisa
ekstrak
14522,52
mg
Zat 104,06 mg
Y = 1,7498X – 0,0017
0,700 = 1,7498X – 0,0017
x = 0,4010 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 1,0 ml = 0,4010 mg% . 25 ml
C2 = 10,0254 mg%
70
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 2,0 ml = 10,0254 mg%. 10 ml
C2 = 50,1272 mg%
x
mg
mg
mg 50
50
50,1272
mg
mgx
50,1272
2500 = 49,8731 mg dilarutkan dalam 50 ml aseton
Lampiran 9. Perhitungan Kadar Kurkuminoid Dalam Sampel Ektrak Temulawak
1. ETANOL MASERASI R1
Bobot glass arloji 14492,81 mg
Bobot glass arloji + ekstrak 14618,77 mg
Bobot glass arloji + sisa ekstrak 14515,92 mg
Zat 102,85 mg
Y = 1,7498X – 0,0017
0,335 = 1,7498X – 0,0017
x = 0,1924 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 1,0 ml = 0,1924 mg% . 25 ml
C2 = 4,8105 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 2,0 ml = 4,8105 mg% . 10 ml
C2 = 24,0527 mg%
71
2. ETANOL MASERASI R2
Bobot glass arloji 14513,46 mg
Bobot glass arloji + ekstrak 14619,12 mg
Bobot glass arloji + sisa ekstrak 14515,58 mg
Zat 103,54 mg
Y = 1,7498X – 0,0017
0, 424 = 1,7498X – 0,0017
x = 0,2433 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 1,0 ml = 0,2433 mg% . 25 ml
C2 = 6,0821 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 2,0 ml = 6,0821 mg% . 10 ml
C2 = 30,4106 mg%
3. ETANOL MASERASI R3
Bobot glass arloji 15394,63 mg
Bobot glass arloji + ekstrak 15506,66 mg
Bobot glass arloji + sisa ekstrak 15402,64mg
Zat 104,02 mg
Y = 1,7498X – 0,0017
0,407 = 1,7498X – 0,0017
x = 0,2336mg%
72
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 1,0 ml = 0,2336mg% . 25 ml
C2 = 5,8392 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 2,0 ml = 5,8392 mg% . 10 ml
C2 = 29,1962mg%
4. ETANOL MASERASI R4
Bobot glass arloji 13457,14 mg
Bobot glass arloji + ekstrak 13577,43 mg
Bobot glass arloji + sisa ekstrak 13472,43 mg
Zat 105,00 mg
Y = 1,7498X – 0,0017
0,413 = 1,7498X – 0,0017
x = 0,2370 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 1,0 ml = 0,2370 mg% . 25 ml
C2 = 5,9250 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 2,0 ml = 5,9250 mg% . 10 ml
C2 = 29,6248 mg%
73
5. ETANOL MASERASI R5
Bobot glass arloji 14433,60 mg
Bobot glass arloji + ekstrak 14611,30 mg
Bobot glass arloji + sisa ekstrak 14508,09 mg
Zat 103,21 mg
Y = 1,7498X – 0,0017
0,347 = 1,7498X – 0,0017
x = 0,1993 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 1,0 ml = 0,1993 mg% . 25 ml
C2 = 4,9811 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 2,0 ml = 4,9811 mg% . 10 ml
C2 = 24,9091 mg%
6. ETANOL SOKLETASI R1
Bobot glass arloji 14836,01 mg
Bobot glass arloji + ekstrak 14952,63 mg
Bobot glass arloji + sisa ekstrak 14851,92 mg
Zat 101,71 mg
Y = 1,7498X – 0,0017
0,766 = 1,7498X – 0,0017
x = 0,4387 mg%
74
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 1,0 ml = 0,4387 mg% . 25 ml
C2 = 10,9684 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 2,0 ml = 10,9684 mg%. 10 ml
C2 = 54,8420 mg%
7. ETANOL SOKLETASI R2
Bobot glass arloji 14983,16 mg
Bobot glass arloji + ekstrak 15098,53 mg
Bobot glass arloji + sisa ekstrak 14997,57 mg
Zat 100,96 mg
Y = 1,7498X – 0,0017
0,783 = 1,7498X – 0,0017
x = 0,4484 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 1,0 ml = 0,4484 mg% . 25 ml
C2 = 11,2118 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 2,0 ml = 11,2118 mg%. 10 ml
C2 = 56,0564 mg%
75
8. ETANOL SOKLETASI R3
Bobot glass arloji 14215,96 mg
Bobot glass arloji + ekstrak 14333,29 mg
Bobot glass arloji + sisa ekstrak 14232,96 mg
Zat 100,33 mg
Y = 1,7498X – 0,0017
0,730 = 1,7498X – 0,0017
x = 0,4182 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 1,0 ml = 0,4182 mg% . 25 ml
C2 = 10,4540 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 2,0 ml = 10,4540 mg%. 10 ml
C2 = 52,2702 mg%
9. ETANOL SOKLETASI R4
Bobot glass arloji 14420,09 mg
Bobot glass arloji + ekstrak 14525,28 mg
Bobot glass arloji + sisa ekstrak 14424,49 mg
Zat 100,79 mg
Y = 1,7498X – 0,0017
0,758 = 1,7498X – 0,0017
x = 0,4342 mg%
76
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 1,0 ml = 0,4342 mg% . 25 ml
C2 = 10,8541 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 2,0 ml = 10,8541 mg%. 10 ml
C2 = 54,2705 mg%
10. ETANOL SOKLETASI R5
Bobot glass arloji 14513,09 mg
Bobot glass arloji + ekstrak 14639,49 mg
Bobot glass arloji + sisa ekstrak 14538,73 mg
Zat 100,76 mg
Y = 1,7498X – 0,0017
0,705 = 1,7498X – 0,0017
x = 0,4039 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 1,0 ml = 0,4039 mg% . 25 ml
C2 = 10,0969 mg%
C1 . V1 = C2 . V2
C1 . 2,0 ml = 10,0969 mg%. 10 ml
C2 = 50,4843 mg%
77
Tabel XV. Penetapan Kandungan Kurkuminoid pada ERTM
Replikasi
I
Replikasi
II
Replikasi
III
Replikasi
IV
Replikasi
V
Bobot ekstrak
awal (mg)102,85 103,54 104,02 105,00 103,21
Absorbansi 0,335 0,424 0,407 0,413 0,347
Kandungan
kurkuminoid
(%b/b)
23,8362 29,3709 28,0679 28,2141 24,1352
Tabel XVI. Penetapan Kandungan Kurkuminoid pada ERTS
Replikasi
I
Replikasi
II
Replikasi
III
Replikasi
IV
Replikasi
V
Bobot ekstrak
awal (mg)101,71 100,96 100,33 100,79 100,76
Absorbansi 0,766 0,783 0,730 0,758 0,705
Kandungan
kurkuminoid
(%b/b)
54,4553 55,5234 52,0983 53,8451 50,1036
78
Lampiran 10. t-test Minyak Atsiri dan Kurkuminoid Ekstrak Rimpang Temulawak
Tabel XVII. Analisis t-test minyak atsiri ERTM dan ERTS
Kadar minyak
atsiri metode
ekstraksi
maserasi
(x- )2 metode
ekstraksi maserasi
Kadar minyak
atsiri metode
ekstraksi sokletasi
(x- )2 metode
ekstraksi sokletasi
19,9213 % 2,1624 21,9820 % 11,7464
20,9591 % 6,2916 16,3239 % 4,9765
16,4597 % 3,9645 16,4597 % 4,3890
16,9872 % 2,1421 18,9848 % 0,1850
17,9265 % 0,2749 19,0232 % 0,2195
1= 18,4508% S2A = 3,7089 2= 18,5547 % S2B = 5,3791
Statistik t-test
thitung = =
ttabel = (n1+ n2) =1,859
thitung < ttabel → - 0,0536 < 1,859 maka Hnull diterima yaitu kadar minyak atsiri
dari ekstrak rimpang temulawak dengan metode ekstraksi maserasi dan matode
ekstrasksi sokletasi tidak berbeda.
79
Tabel XVIII. Analisis t-test kadar kurkuminoid ERTM dan ERTS
Kadar kurkumin
metode ekstraksi
maserasi (mg%)
(x- )2 metode
ekstraksi maserasi
(mg%)
Kadar kurkumin
metode ekstraksi
sokletasi (mg%)
(x- )2 metode
ekstraksi sokletasi
(mg%)
23,3862 10,5540 54,4553 1,1029
29,3709 7,4857 55,5234 4,4872
28,0679 2,0535 52,0983 1,7077
28,2141 2,4939 53,8451 0,1936
24,1352 6,2485 50,1036 10,8999
1= 26,6349 S2A = 7,2089 2= 53,2051 S2B = 4,5978
Statistik t-test
thitung = = = - 12,5313
ttabel = (n1+ n2) =1,859
thitung > ttabel → - 12,5313 > 1,859 maka Hnull ditolak yaitu kadar kurkumin dari
ekstrak rimpang temulawak dengan metode ekstraksi maserasi dan ekstrasksi
dengan alat sokletasi berbeda.
80
Lampiran 11. Gambar Alat-alat dan ekstrak rimpang Temulawak
Gambar 16. Vacuum Rotary Evaporator Gambar 17. Destilasi Stahl
Gambar 18. Ekstrak etanolik rimpang
temulawak dengan alat soxhlet
Gambar 19. Ekstrak etanolik rimpang
temulawak maserasi
81
BIOGRAFI PENULIS
Penulis dengan nama lengkap Melia Sari Dewi, akrab
dipanggil Melia, lahir di Cilacap pada tanggal 3 Juli
1988 anak pasangan Adhy Wirabrata dan Hartatik. Anak
ke dua dari tiga bersaudara, dengan satu kakak Adhy
Prasetya dan satu adik Melisa Puspita Sari. Lulus dari
TK Pius Cilacap pada tahun 1991, SD Pius Cilacap pada
tahun 1997, SLTP Pius Cilacap pada tahun 2000, SMA Yos Sudarso Cilacap pada
tahun 2006, kemudian menyelesaikan kuliahnya di Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma Yogyakarta 2010.