AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK METANOL DAUN KIRINYUH
(Chromolaena odorata (L.) R. M. King & H. Rob.) TERHADAP BAKTERI
Propionibacterium acnes
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memenuhi Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Grezelia Feronica Harsono
NIM : 168114078
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2020
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
i
AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK METANOL DAUN KIRINYUH
(Chromolaena odorata (L.) R. M. King & H. Rob.) TERHADAP BAKTERI
Propionibacterium acnes
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memenuhi Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Grezelia Feronica Harsono
NIM : 168114078
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2020
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
Skripsi ini kupersembahkan untuk:
Bapa, Yesus Kristus dan Roh Kudus yang memberikan hikmat dan kasih-Nya
Papa, Mama dan saudara-saudara yang kukasihi
Sahabat dan teman-teman yang selalu mendukung
Almamaterku Universitas Sanata Dharma
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ................................................................................................ i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................ iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................................ iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................................. v
LEMBAR PERSYARATAN PERSETUJUAN .................................................... vi
PRAKATA ............................................................................................................ vii
DAFTAR ISI .......................................................................................................... ix
DAFTAR TABEL ................................................................................................... x
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. xi
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xii
ABSTRAK ........................................................................................................... xiii
ABSTRACT ........................................................................................................... xiv
PENDAHULUAN .................................................................................................. 1
METODE PENELITIAN ........................................................................................ 3
HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................... 8
KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................................. 19
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 20
LAMPIRAN .......................................................................................................... 26
BIOGRAFI PENULIS .......................................................................................... 47
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
DAFTAR TABEL
Tabel I. Selisih OD Penentuan KHM........................................................... 13
Tabel II. Persen Penghambatan Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh................. 14
Tabel III. Hasil Uji Post Hoc Tamhane’s Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh.... 15
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Peta Microplate 96 well ....................................................................... 7
Gambar 2. Tanaman Lengkap Chromolaena odorata ......................................... 27
Gambar 3. Proses Maserasi Penambahan Pelarut Metanol ................................. 27
Gambar 4. Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh ........................................................ 27
Gambar 5. Pengujian Kelarutan Ekstrak Metanol pada DMSO .......................... 28
Gambar 6. Penetapan Kadar Air Volume Air Akhir ........................................... 28
Gambar 7. Penimbangan bobot tetap ................................................................... 29
Gambar 8. Isolat Murni Propionibacterium acnes ATCC 11827 ...................... 30
Gambar 9. Pengkondisian Anaerob dengan diberikan anaerogen dan indikator
anaerobik ............................................................................................ 32
Gambar 10. Perlakuan pada 96-Well Plate Broth Microdilution ........................ 32
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Determinasi Tanaman ........................................................... 26
Lampiran 2. Tanaman Utuh Chromolaena odorata ............................................ 27
Lampiran 3. Proses Maserasi Daun Kirinyuh ..................................................... 27
Lampiran 4. Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh ..................................................... 27
Lampiran 5. Pengujian Kelarutan Ekstrak Metanol pada DMSO ....................... 28
Lampiran 6. Penetapan Kadar Air dengan Metode Destilasi Toluena ................ 28
Lampiran 7. Bobot Tetap .................................................................................... 29
Lampiran 8. Isolat Murni Propionibacterium acnes ATCC 11827 .................... 30
Lampiran 9. Surat keterangan Propionibacterium acnes ATCC 11827 ............. 31
Lampiran 10. Pengkondisian Anaerob ................................................................ 32
Lampiran 11. Perlakuan pada 96-Well Plate Broth Microdilution ..................... 32
Lampiran 12. Pengukuran Optical Density Jam ke-0 ......................................... 33
Lampiran 13. Pengukuran Optical Density Jam ke-48 ....................................... 34
Lampiran 14. Uji Statistika ................................................................................. 35
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
ABSTRAK
Salah satu penyebab terjadinya jerawat adalah infeksi bakteri oleh
Propionibacterium acnes. Kasus infeksi bakteri semakin parah dengan
meningkatnya kasus resistensi P. acnes terhadap antibiotik dan efek samping obat
anti jerawat. Saat ini banyak pengembangan penelitian antibakteri alami berupa
ekstrak tanaman yang digunakan untuk pengobatan jerawat sebagai alternatif lain
obat anti jerawat. Tanaman Kirinyuh (Chromolaena odorata (L.) R. M. King &
H. Rob.) sering digunakan sebagai obat tradisional di Indonesia bagian Timur dan
memiliki manfaat antibakteri terhadap berbagai bakteri. Pada penelitian ini
tanaman diambil dari Yogyakarta, Indonesia. Pembuatan ekstrak metanol daun
Kirinyuh menggunakan metode maserasi. Uji aktivitas antibakteri ekstrak metanol
daun Kirinyuh terhadap bakteri P. acnes dengan metode Broth Microdilution.
Pengukuran OD menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 600
nm. Hasil nilai OD digunakan untuk mencari nilai persen penghambatan ekstrak
metanol daun Kirinyuh terhadap bakteri P. acnes. Nilai persen penghambatan
ekstrak metanol daun Kirinyuh dengan konsentrasi 0,195-6,25 mg/mL yaitu
6,906-80,966% dan nilai persen penghambatan kontrol positif sebesar 60,054%
terhadap bakteri P. acnes. MIC (Minimum Inhibitor Concentration) pada
penelitian ini adalah konsentrasi 3,125 mg/mL. Ekstrak metanol daun Kirinyuh
memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri P. acnes ATCC 11827 yang
ditunjukkan dengan uji statistik data selisih OD secara signifikan memiliki
perbedaan dengan kontrol pertumbuhan (p=0,005).
Kata kunci : Propionibacterium acnes, Chromolaena odorata (L.) R. M. King &
H. Rob., broth microdilution
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
ABSTRACT
One cause of acne disease is a bacterial infection by Propionibacterium
acnes. Cases of bacterial infection are getting worse with increasing cases of P.
acnes resistance to antibiotic and side effects of anti-acne drugs. At present there
are many developments in natural antibacterial research in plant extract, that are
used for the treatment of acne as an alternative anti-acne drugs. Kirinyuh plant
(Chromolaena odorata (L.) R. M. King & H. Rob.) is often used as traditional
medicine in eastern Indonesia and has antibacterial benefits against various
bacteria. In this study plants were taken from Yogyakarta, Indonesia. The extract
methanol of Kirinyuh leaf using maceration method. The test of antibacterial
activity of the extract against P. acnes bacteria by Broth Microdilution method.
OD measurements using a microplate reader at a wavelength of 600 nm. The
result of OD values were used to find the percent inhibitory value of extract
against P. acnes bacteria. The percent inhibition value of Kirinyuh extract with a
concentration of 0,195-6,25 mg/mL was 6,906-80,966% and the percent inhibition
valuu of clindamycin was 60,054% against P. acnes bacteria. MIC (Minimum
Inhibitor Concentration) in this study was a concentration of 3,125 mg/mL.
Kirinyuh leaf methanol extract had antibacterial activity against P. acnes ATCC
11827 as indicated by statistical test significantly had a difference with growth
control (p=0,005).
Keywords : Propionibacterium acnes, Chromolaena odorata (L.) R. M. King &
H. Rob., broth microdilution
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
PENDAHULUAN
Jerawat adalah penyakit dermatologik yang sering menyerang pada
remaja karena peningkatan produksi sebum, yang menyebabkan kerusakan folikel
disertai oleh proliferasi bakteri Propionibacterium acnes dan inflamasi (Sukandar
et al., 2014). P. acnes biasanya terdapat pada kelenjar sebaceous pada wajah,
kullit kepala, dada, punggung (Achermann et al., 2014). Prevalensi penderita
jerawat yang disebabkan oleh infeksi P. acnes di Indonesia berkisar 80-85% pada
remaja dengan usia 15-18 tahun, 12% pada wanita usia > 25 tahun dan 3% pada
usia 35-44 tahun (Madelina and Sulistiyaningsih, 2018).
Jerawat bukan gangguan yang mematikan atau melemahkan, jerawat bisa
menyebabkan tekanan psikologis dan beban ekonomi berat. Tekanan psikologis
yang dimaksud adalah peningkatan kecemasan, depresi, dan keinginan bunuh diri
(Nelson et al., 2016). Selain itu dari faktor fisiologis kondisi jerawat parah dapat
menimbulkan keloid dan hypertrophic pada kulit (Ogawa, 2017).
Pengobatan untuk jerawat dapat ditemukan dalam bentuk oral dan
topikal. Obat oral jerawat yang sering digunakan adalah isotretinoin, eritromisin,
doksisiklin, sedangkan obat topikal jerawat diantaranya retinoid, benzoil
peroksida, dan klindamisin (Purath and Coyner, 2017). Namun, kejadian resistensi
P. acnes terhadap antibiotik muncul beberapa tahun terakhir, dengan dilaporkan
bahwa resistensi P. acnes terhadap antibiotik eritromisin dan klindamisin yang
terjadi di negara Perancis sebesar 52,5% (Dumont-Wallon et al., 2010). Selain itu,
beberapa obat anti jerawat memiliki efek samping obat yang dapat menyebabkan
pengeringan pada kulit, sakit kepala, mual dan lain-lain (Vora et al., 2018)
Saat ini pengembangan terapi alami banyak menggunakan ekstrak
tanaman untuk pengobatan jerawat dan mengatasi efek samping dari obat anti
jerawat (Vora et al., 2018). Chromolaena odorata (L.) R. M. King and Rob.
merupakan salah satu tanaman yang dapat ditemui di Indonesia (Rusdy, 2016).
Tanaman ini biasa digunakan sebagai obat tradisional di Indonesia untuk
mengobati luka pada kulit (Chakraborty et al., 2011). C. odorata juga diketahui
memiliki efek farmakologis yang berfungsi sebagai antiinflamasi, antipiretik,
analgesik, antimikroba, sitotoksik dan sebagainya (Vijayaraghavan et al., 2017).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
Ekstrak Kirinyuh sudah banyak diteliti sebelumnya, seperti penelitian
yang dilakukan oleh Natasha (2019), menggunakan ekstrak etanol Kirinyuh untuk
menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dengan metode Time-
Kill Assay. Pada penelitian Aviantina (2019), juga menggunakan ekstrak etanol
Kirinyuh yang dapat berperan sebagai penghambatan biofilm S. aureus. Penelitian
lain yang dilakukan oleh Hanphakphoom et al (2016), menunjukkan bahwa
ekstrak metanol daun Kirinyuh memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri P.
acnes DMST 14916. Aktivitas antibakteri yang dihasilkan dari ekstrak metanol
daun Kirinyuh, disebabkan karena adanya senyawa fitokimia fenol dan flavonoid
(Hanphakphoom et al., 2016). Ekstrak metanol daun tanaman C.odorata memiliki
kandungan senyawa fenol yaitu sebesar 455,55±4,59 µg/mg (Krishanti et al.,
2010). Fenol berperan terhadap aktivitas antimikroba dengan cara menghambat
substrat, dan mengganggu sel membran (Odutayo et al., 2017).
Berdasarkan latar belakang di atas, penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak metanol daun Kirinyuh terhadap bakteri
P. acnes ATCC 11827. Metode yang digunakan adalah Broth Microdilution. Hasil
Broth Microdilution didapatkan dari pengukuran OD menggunakan microplate
reader dengan panjang gelombang 600 nm. Hasil yang didapatkan berupa nilai
persen penghambatan ekstrak terhadap pertumbuhan bakteri (Quave et al., 2008).
Pada penelitian ini juga memiliki beberapa perbedaan dengan penelitian
sebelumnya yaitu letak geografis asal tanaman, metode yang digunakan dan
karakteristik bakteri. Perbedaan letak geografis dapat mempengaruhi komposisi
senyawa metabolit tanaman. Sebagai contoh, dalam penelitian yang dilakukan
oleh Hanphakphoom et al (2016) menggunakan tanaman C. odorata yang berasal
dari Thailand, sedangkan penelitian yang dilakukan oleh Putri dan Fatmawati
(2019), tanaman berasal dari Indonesia. Pada penelitian tersebut membuktikan
bahwa terdapat perbedaan hasil komposisi total fenolik dalam ekstrak metanol C.
odorata.
Selain itu, perbedaan dengan penelitian sebelumnya adalah karakteristik
bakteri yang digunakan. Sebagai contoh, penelitian yang dilakukan oleh
Chomnawang et al (2005), ekstrak tanaman C. odorata dapat menghambat
pertumbuhan bakteri P. acnes ATCC 6919. Sedangkan dalam penelitian ini
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
menggunakan P. acnes ATCC 11827. P. acnes ATCC 6919 termasuk kedalam
biotype BIII, yang mana memiliki tingkat perparahan jerawat lebih besar bila
dibandingkan dengan P. acnes ATCC 11827 (biotype BI) (Zhang et al., 2019).
Penelitian oleh Nair et al (2017), menyatakan bahwa perbedaan strain P. acnes,
menyebabkan perbedaan hasil KHM pada agen antimikroba.
METODE PENELITIAN
Jenis dan Rancangan Penelitian
Jenis penelitian yang dilakukan adalah eksperimental murni untuk
melihat hubungan dua kelompok perlakuan yang berbeda, terdapat randomisasi
dan pengendalian ketat pada variabel. Subjek penelitian adalah bakteri
Propionibacterium acnes dan objek penelitian adalah daun Kirinyuh (Kuntjojo,
2009). Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia dan
Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma
Yogyakarta
Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah neraca analitik (Ohaus),
platform shaker (Innova 2100), waterbath (Memmert), labu destilator (Schott
Duran), pemanas destilator (M. Topo-E103), pompa vakum (GAST KT40),
corong Buchner, rotatory evaporator (Buchi Switzerland Tipe R-210 dan R-300),
mikropipet (Gilson), blue tip, yellow tip, bunsen, vortex (Gallenkamp), microplate
flexible U-bottom PVC 96 well (Iwaki), multi-mode microplate reader (BioTex
Synergy htx) dilengkapi dengan aplikasi Gen5, jarum ose, spreader, autoklaf
(ALP KT-40), hot plate, magnetic stirrer, nephelometer, oven (Memmert),
inkubator (Memmert dan Heraeus), Biology Safety Cabinet Class II A2 (ESCO
Class II A2 Seri2016), nephelometer (BD Phoenix Spec), pengayak no mess 40,
kontainer airtight (Lion Star), anaerogen (Thermo Scientific), indikator anaerob
(Thermo Scientific), alat-alat gelas (Pyrex) yaitu tabung reaksi, labu takar, erlen
meyer, gelas beker, gelas ukur, pipet volume, cawan petri, batang pengaduk, pipet
tetes.
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah daun Kirinyuh kering
yang diambil dari Lembaga Pendampingan Usaha Buruh Tani dan Nelayan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
(LPUBTN) Yogyakarta, bakteri P. acnes ATCC 11827 (Thermo Scientific) dari
PT. Dipa Puspa Labsains, media BHI (Brain Heart Infusion) (Oxoid), media TSA
(Tryptic Soy Agar) (Oxoid), metanol, aquades, DMSO (dimetil sulfoksida) 100%,
kertas saring whatman No.1.
Preparasi Bahan Baku
Daun Kirinyuh yang digunakan diperoleh dari Lembaga Pendampingan
Usaha Buruh Tani dan Nelayan (LPUBTN), kecamatan Tanjung Sari, Gunung
Kidul, Yogyakarta dipilih sesuai dengan kriteria yaitu daun bebas dari serangga,
fragmen hewan atau kotoran hewan, tidak mengandung lendir, jamur, atau tanda-
tanda pengotor lain, dan penanaman dengan pupuk organik. Daun Kirinyuh yang
dipilih adalah daun Kirinyuh dengan ukuran panjang 5-12 cm dan lebar 3-6 cm.
Determinasi Kirinyuh dilakukan di Departemen Biologi Farmasi, Fakultas
Farmasi, Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Determinasi menggunakan
simplisia daun dan tanaman yang utuh. Daun Kirinyuh dikeringkan dengan oven
dengan suhu 60°C. Daun Kirinyuh yang sudah kering diserbuk dengan
menggunakan grinder (mesin penyerbuk). Serbuk simplisia menggunakan ayakan
dengan no mesh 40 supaya didapatkan serbuk agak kasar. Kemudian serbuk
disimpan dalam wadah tertutup rapat dan diberikan silica gel agar tidak lembab
dan berjamur.
Penetapan Kadar Air
Penetapan kadar air dilakukan dengan metode destilasi toluen. Alat
destilasi disiapkan dengan labu 500 mL yang dihubungkan dengan pendingin air
balik melalui alat penampung yang dilengkapi tabung penerima 5 mL berskala 0,1
mL. Bagian atas alat penampung sebaiknya dibungkus asbes. Tabung penerima
dan pendingin dibersihkan dengan asam pencuci lalu dibilas dengan air dan
dikeringkan. Serbuk ditimbang dengan seksama sejumlah 10 g. Sebanyak lebih
kurang 200 mL toluen p.a dimasukkan ke dalam labu. Labu dipanaskan perlahan-
lahan selama 15 menit. Setelah toluen mendidih, dilakukan penyulingan dengan
kecepatan lebih kurang 2 tetes per detik hingga sebagian besar air tersuling,
kemudian kecepatan penyulingan dinaikkan hingga 4 tetes per detik. Setelah
penyulingan, tabung penerima dibiarkan mendingin hingga suhu kamar dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
diusahakan seluruh tetesan air turun. Volume air dibaca setelah toluen dan air
terpisah sempurna. Kadar air dinyatakan dalam persen.
Kadar air olume air
erat sampel 100
Preparasi Ekstrak
Pembuatan ekstrak metanol daun Kirinyuh dilakukan dengan maserasi
menurut Badan Pengawas Obat dan Makanan RI (2012) dan jumlah serbuk yang
dimaserasi berjumlah 50 gram dan pelarut metanol sebanyak 500 ml. Tahapan
maserasi: merendam 50 gram serbuk simplisia daun Kirinyuh (10 bagian serbuk),
dimasukan ke dalam erlenmeyer, kemudian dilarutkan dalam 375 ml pelarut
metanol (70 bagian). Maserasi dilakukan selama 1x24 jam dengan bantuan
shaker. Hasil maserasi yang diperoleh disaring dengan corong Buchner yang
dilapisi kertas saring dengan bantuan pompa vakum. Serbuk hasil penyaringan
dimaserasi dengan pelarut baru sebanyak 125 ml selama 1x24 jam.
Hasil maserasi pertama dan kedua kemudian diuapkan dengan rotary
evaporator pada suhu 60°C untuk menguapkan pelarut pada ekstrak. Ekstrak
diletakkan pada cawan petri dan diuapkan kembali pada waterbath pada suhu 50-
65°C untuk menguapkan pelarut yang mungkin masih ada dalam ekstrak dan
dimasukkan dalam sampai didapatkan ekstrak kental dengan bobot tetap yang
telah dipersyaratkan. Kemudian dihitung rendemen ekstrak dengan rumus.
endemen obot ekstrak
obot simplisia 100
Penetapan bobot tetap dilakukan dengan ekstrak ditimbang sebelum
dikeringkan atau dipijarkan terlebih dahulu. Penimbangan dinyatakan bobot tetap
jika dua kali penimbangan berturut-turut setelah dikeringkan atau dipijarkan
selama 1 jam tidak lebih dari 0,25% atau perbedaan penimbangan tidak melebihi
0,5 mg dengan timbangan analitik (Kementerian Kesehatan Republik Indonesia,
2011).
Penyiapan Larutan Uji
Pembuatan larutan stok ekstrak uji dengan melarutkan 500mg ekstrak
metanol daun Kirinyuh dalam 5 ml DMSO. Larutan stok ekstrak dibuat dalam
berbagai konsentrasi yaitu 0,195; 0,391; 0,781; 1,5625; 3,125; dan 6,25 mg/mL
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
Kultur Bakteri Uji
Propionibacterium acnes dinokulasikan pada media TSA dengan metode
streak dan diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37°C. Inkubasi dilakukan dalam
kondisi anaerob. Kondisi anaerob dilakukan di dalam kontainer airtight dan diberi
anaerogen dan indikator anaerob strip. Bakteri tunggal pada media TSA
diinokulasikan ke dalam media cair BHI dan diinkubasi selama 48 jam pada suhu
37°C.
Uji Aktivitas Antibakteri
Uji aktivitas antibakteri ekstrak dan antibiotik dilakukan dengan
menggunakan metode mikrodilusi pada 96-well plate. Kultur bakteri pada media
BHI disetarakan sebesar 0,5 Mc Farland menggunakan nephelometer. Suspensi
bakteri diinkubasi dalam BHI selama 48 jam dibawah kondisi anaerob dengan
anaerogen dan disesuaikan untuk menghasilkan suspensi bakteri sebesar 1,5x108
CFU/mL. Microplate 96 well disiapkan dalam keadaan steril, 90µL dari ekstrak
tanaman dilarutkan dengan DMSO dan ditambahkan pada sumuran berisi 110 µL
dari suspensi bakteri dalam broth. Pengenceran dibuat dalam broth dalam rentang
konsentrasi 0,195; 0,391; 0,781; 1,5625; 3,125; dan 6,25 mg/mL ekstrak metanol.
Kontrol positif dibuat dengan menggunakan serbuk klindamisin dari kapsul.
Kemudian serbuk klindamisin ditimbang dengan seksama dan dilarutkan ke dalam
aquadest dan didapatkan konsentrasi 0,504 µg/mL. Klindamisin 0,504 µg/mL
sebanyak 90 µL dilarutkan dalam broth dan ditambahkan ke dalam sumuran yang
berisi 110 µL suspensi dalam broth. Kontrol negatif dibuat dengan 90 µL DMSO
2% ditambahkan dalam sumuran yang berisi 110 µL suspensi dalam broth.
Replikasi 3 kali dilakukan pada setiap konsentrasi. Setelah itu, diinkubasi selama
48 jam pada suhu 37°C dibawah kondisi anaerob.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
Gambar 1. Peta Microplate 96 well
Keterangan = P1-P5 =Perlakuan ekstrak metanol Kirinyuh dengan dengan konsentrasi
0,195; 0,391; 0,781; 1,5625; 3,125; dan 6,25 mg/mL
K+ = Kontrol Positif
K- = Kontrol Negatif
KM = Kontrol Media
KP = Kontrol Pertumbuhan
Penentuan Nilai Persen Penghambatan dan KHM
Setelah 48 jam pasca inokulasi, dilakukan penentuan nilai persen
penghambatan. Efek dari warna ekstrak diperhitungkan pada pembacaan OD600nm
untuk menghitung persen penghambatan dengan menggunakan microplate reader.
Rumus persen penghambatan OD600nm digunakan untuk mengatasi adanya
gangguan warna ekstrak pada saat pembacaan. Persen rata-rata penghambatan dari
uji replikasi digunakan untuk menentukan nilai akhir KHM. KHM dilihat dari
konsentrasi terendah dari senyawa uji yang menghambat pertumbuhan P. acnes
sebesar 50%.
% inhibition = ( ( t 8- t0
gc 8- gc0))
Keterangan = ODt48 = Optical density (600 nm) dari uji pada jam ke 48 setelah inokulasi ODt0 = Optical density (600 nm) dari uji pada jam ke 0 setelah inokulasi
Odgc48 = Optical density (600 nm) dari kontrol pertumbuhan pada jam ke 48 setelah inokulasi
ODgc0 = Optical density (600 nm) dari kontrol pertumbuhan pada jam ke 0 setelah inokulasi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
Teknik Analisis Data Penelitian
Teknik analisis data untuk menentukan normalitas distribusi data
menggunakan Shapiro-Wilk. Jika p-value > 0,05 maka data terdistribusi normal
dan jika p-value < 0,05 maka data tidak terdistribusi normal. Penentuan
homogenitas data menggunakan Levene’s Test dengan tingkat kepercayaan 95%.
Kemudian data dilanjutkan dengan menggunakan uji Kruskal Wallis dengan Pos
Hoc Mann Whitney. Jika diketahui nilai p < 0,05, maka menunjukkan adanya
perbedaan signifikan pada hasil selisih OD antara konsentrasi dengan kelompok
kontrol pertumbuhan.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Tanaman yang digunakan pada penelitian ini adalah Chromolaena
odorata (L.) R. M. King & H. Rob. Spesies tanaman dibuktikan dengan surat
determinasi (Lampiran 1) yang dikeluarkan oleh Departemen Biologi Farmasi
Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, membuktikan bahwa tanaman yang
digunakan adalah tanaman Chromolaena odorata (L.) R. M. King & H. Rob.
Senyawa bioaktif tanaman biasanya terakumulasi sebagai metabolit sekunder di
semua sel tanaman, tetapi konsentrasi nya bervariasi sesuai dengan bagian
tanaman yang diambil (Maji et al., 2010). Daun merupakan salah satu bagian
tanaman yang banyak digunakan dalam penelitian, karena daun diketahui
memiliki kandungan protein, karbohidrat dan sumber yang tinggi (Omokhua et
al., 2016). Sehingga diharapkan penggunaan daun sebagai bahan penelitian dapat
menghasilkan metabolit sekunder yang cukup tinggi. Pada penelitian ini bagian
tanaman yang diambil merupakan daun Kirinyuh yang diperoleh dari Lembaga
Pendampingan Usaha Buruh Tani Nelayan (LPUBTN), kecamatan Tanjung Sari,
Gunung Kidul, Yogyakarta.
Penetapan kadar air pada serbuk simplisia daun Kirinyuh menggunakan
metode destilasi toluen (Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2009).
Menurut Kementerian Republik Indonesia (2009), kadar air yang ditetapkan tidak
lebih dari 10%. Volume air yang didapatkan adalah 0,9 mL (Lampiran 4) dengan
berat serbuk simplisia 10 gram sehingga kadar air serbuk simplisia daun Kirinyuh
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
sebesar 9 %. Hasil kadar air tidak lebih dari 10% sehingga telah memenuhi syarat
yang ditetapkan. Prosedur penetapan kadar air diberikan untuk menetapkan
kesesuaian dengan persyaratan identitas, kadar, mutu dan kemurnian yang tertera
pada Farmakope Herbal Indonesia (FHI) (Kementrian Kesehatan Republik
Indonesia, 2009).
Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi. Faktor-faktor yang dapat
mempengaruhi hasil ekstraksi adalah ukuran bahan, suhu ekstraksi dan pelarut
(Tambun et al., 2016). Prinsip maserasi melibatkan perendaman bahan tanaman
(kasar atau bubuk) dalam wadah dengan pelarut dan dibiarkan pada suhu kamar
dengan agitasi konsisten. Proses tersebut dimaksudkan untuk melunakkan dinding
sel tanaman untuk melepaskan fitokimia terlarut (Azwanida, 2015). Adanya
metode maserasi dalam proses ekstraksi, diharapkan terjadi pelepasan kandungan
fitokimia dalam ekstrak metanol daun Kirinyuh yang dibuat.
Maserasi dilanjutkan dengan diuapkan pada rotary evaporator untuk
mendapatkan ekstrak. Suhu 60°C dipilih karena metanol memiliki titik didih
sebesar 65°C (Pubchem, 2020). Kemudian ekstrak dilakukan penimbangan untuk
mendapatkan hasil bobot tetap. Penimbangan dinyatakan sudah mencapai bobot
tetap apabila perbedaan dua kali penimbangan berturut-turut setelah dikeringkan
atau dipijarkan selama 1 jam tidak lebih dari 0,25% atau perbedaan seperti
tersebut di atas tidak melebihi 0,5 mg pada penimbangan dengan timbangan
analitik (Depkes RI, 2008). Bobot ekstrak metanol daun Kirinyuh yang didapat
sebesar 7,0912 gram. Selain itu, pada penelitian ini juga dilakukan perhitungan
rendemen. Menurut Wijaya (2018), salah satu parameter mutu ekstrak adalah
rendemen ekstrak yang dihasilkan. Rendemen adalah perbandingan antara ekstrak
yang diperoleh dengan simplisia awal dengan satuan persen (%). Semakin tinggi
nilai rendemen yang dihasilkan menandakan nilai ekstrak yang dihasilkan
semakin banyak (Wijaya et al., 2018). Hasil rendemen ekstrak metanol daun
Kirinyuh yang didapatkan sebesar 14,1824 %. Jumlah rendemen yang dihasilkan
menandakan banyaknya komponen atau kandungan yang dapat terekstraksi. Hal
tersebut membuat hasil rendemen dari berbagai pelarut berbeda (Maimulyanti et
al., 2016).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
Pada penelitian ini menggunakan bakteri Propionibacterium acnes
ATCC 11827 diperoleh dari PT Dipa Puspa Labsains. Karakteristik P. acnes
ATCC 11827 memiliki suhu optimal pertumbuhan 37°C dan waktu inkubasi 48
jam, dengan pengkondisian secara anaerobik. P. acnes ATCC 11827 biasanya
dapat ditemukan di area tangan dan punggung (ATCC, 2020). Menurut
Achermann et al (2014), pertumbuhan P. acnes pada umumnya berkisar 2-15 hari.
P. acnes banyak ditemukan di daerah konjungtiva oral, saluran pencernaan dan
saluran telinga luar. Oleh karena itu, P. acnes dapat mentolerir paparan oksigen
selama beberapa jam dan secara in vitro dapat bertahan hidup dalam kondisi
anaerob hingga 8 bulan (Portillo et al., 2013). Pada penelitian ini P. acnes
diinkubasi selama 48 jam dengan suhu inkubator 37°C. Menurut Kamei et al
(2009), inkubasi P. acnes selama 48 jam dengan kondisi anaerob pada suhu 37°C
sudah dapat terlihat pertumbuhan bakterinya (Kamei et al., 2009). Kondisi
anaerob pada penelitian dibuat dengan menggunakan kontainer airtight (Lion
Star) lalu diberi anaerogen (Thermo Scientific) dan indikator anaerob (Thermo
Scientific) (Lampiran 10). Adanya perubahan warna pink pada indikator anaerob
menandakan masih terdapat oksigen didalam ruang tersebut. Jika indikator
anaerob berwarna putih, maka sudah dalam kondisi anaerob ( Thermo Scientific,
2013).
Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode Broth Microdilution.
Broth Microdilution adalah pengujian mikrodilusi menggunakan 96-well
microtiter plates, kemudian standar plate berisi satu atau beberapa konsentrasi
dari zat antimikroba yang akan diuji (Gajdács et al., 2017). Metode Broth
Microdilution dapat memberikan aktivitas antibakteri yang dinyatakan sebagai
KHM pada saat yang sama. Selain itu, alasan Broth Microdilution banyak
digunakan dalam suatu penelitian adalah karena konsentrasi yang telah ditentukan
sebagai KHM dapat terlihat dengan cepat dan hasilnya mudah dibaca (Klančnik et
al., 2010).
Pada penelitian ini ekstrak metanol daun Kirinyuh dibuat dengan
konsentrasi 0,195; 0,391; 0,781; 1,5625; 3,125; dan 6,25 mg/mL. Pembuatan
larutan uji digunakan pelarut DMSO. Pelarut DMSO digunakan dalam penelitian
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
lain seperti Hanphakphoom et al (2016) dan Yajarla et al (2014). Hal ini karena
DMSO merupakan cairan organik yang memiliki sifat sangat polar, sehingga
secara luas digunakan sebagai pelarut kimia (Pubchem, 2019). Larutan stok
ekstrak dibuat dengan melarutkan ekstrak pada DMSO 100%, kemudian
diturunkan sampai didapatkan range konsentrasi ekstrak 0,195-6,25 mg/mL.
Sehingga pada saat pembuatan broth dalam microplate 96 well, konsentrasi
DMSO terbesar pada well yang didapatkan adalah 2%. Menurut penelitian yang
dilakukan oleh Rukayadi et al (2010), DMSO dengan konsentrasi 10% tidak
mempengaruhi efek penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri. Selain itu,
penelitian Lee et al (2017), menunjukkan tidak ada perubahan morfologi sel yang
signifikan pada penggunaan DMSO dengan konsentrasi rendah. Namun, pada
konsentrasi DMSO 3% dan 10% ada beberapa bentuk sel yang berubah/
menimbulkan efek (Lee et al., 2017). Sehingga pada penelitian ini penggunaan
DMSO 2% yang diharapkan tidak mempengaruhi perubahan morfologi sel bakteri
yang digunakan.
Penelitian ini terdapat 4 kontrol yaitu kontrol media, kontrol
pertumbuhan, kontrol negatif DMSO 2% dan kontrol positif klindamisin. Kontrol
media digunakan untuk mengetahui sterilitas pada media yang dibuat dan
keaseptisan pengerjaan. Kontrol pertumbuhan digunakan untuk mengetahui P.
acnes dapat bertumbuh pada media dengan baik dan digunakan untuk menghitung
persen penghambatan pada kelompok perlakuan (ekstrak dan antibiotik). Tujuan
dibuat kontrol negatif untuk mengetahui adanya aktivitas antibakteri pada DMSO
(sebagai pelarut ekstrak) terhadap bakteri yang digunakan.
Pada penelitian ini menggunakan kontrol positif klindamisin. Antibiotik
digunakan sebagai kontrol positif untuk memastikan nilai MIC antibiotik yang
digunakan dalam penelitian masih dalam rentang MIC yang direkomendasikan
oleh National Committee for Clinical Laboratory Standards (CLSI) (Zgoda and
Porter, 2001). Selain itu, antibiotik digunakan sebagai kontrol positif untuk
menentukan bakteri yang digunakan dalam penelitian resisten atau rentan terhadap
antibiotik (Ozkaya et al., 2019). Menurut Ginting et al (2010), kontrol positif juga
untuk pembanding aktivitas antibakteri dari agen antibakteri yang digunakan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
Klindamisin yang digunakan dalam penelitian ini merupakan terapi obat yang
biasa digunakan untuk mengatasi jerawat yang disebabkan karena bakteri P.
acnes. Klindamisin memiliki mekanisme aksi menghambat sintesis protein
dengan berikatan dengan subunit ribosom 50S pada bakteri P. acnes (Purath and
Coyner, 2017). Menurut Dogan et al (2017) yang mengutip dari CLSI, antibiotik
klindamisin dikatakan susceptible terhadap bakteri P. acnes yaitu memiliki MIC ≤
2 µg/mL. Klindamisin dikatakan resisten terhadap bakteri P. acnes yaitu memiliki
konsentrasi ≥ 8 µg/mL ( oğan et al., 2017). Pada penelitian ini konsentrasi
klindamisin yang digunakan adalah 5,04 mg/L atau setara dengan 0,504 µg/mL.
Pemilihan konsentrasi didasarkan pada penelitian oleh Kamei et al (2010) dan
Dinant et al (2016). Pada penelitian Dinant et al (2016), klindamisin dapat
memberikan MIC terhadap bakteri P. acnes ATCC 11827 di konsentrasi 0,063
µg/mL. Menurut Kamei et al (2010), klindamisin mulai dapat terlihat
penghambatan pertumbuhan bakteri P. acnes ATCC 11827 pada 4xMIC.
Sehingga dari kedua penelitian tersebut didapatkan konsentrasi sebesar 0,252
µg/mL. Pada penelitian ini menggunakan konsentrasi 0,504 µg/mL karena
konsentrasi tersebut dua kali lipat dari 0,252 µg/mL, sehingga diharapkan dapat
memberi aktivitas penghambatan pertumbuhan bakteri yang tinggi
Setelah 48 jam pasca inokulasi, kemudian microplate 96 well diukur pada
microplate reader. Panjang gelombang yang digunakan dalam pengukuran yaitu
600 nm. Data absorbansi yang sudah didapat kemudian dihitung selisih OD nya
(Tabel I). Persen penghambatan didapatkan dari selisih OD perlakuan yang
dibandingkan dengan selisih OD kontrol pertumbuhan (Quave et al., 2008).
Menurut Quave et al (2008), gangguan warna ekstrak Kirinyuh dapat diatasi
dengan penentuan persen penghambatan pada pembacaan OD600.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
Tabel I. Selisih Optical Density Penentuan KHM
Perlakuan Selisih OD
Rata-
rata SD Replikasi
1
Replikasi
2
Replikasi
3
EM 6,25
mg/Ml 0,289 0,153 0,338 0,260 0,096
EM 3,125
mg/Ml 0,652 0,626 0,723 0,667 0,050
EM 1,5625
mg/mL 0,861 0,829 0,830 0,840 0,018
EM 0,781
mg/mL 1,142 1,130 1,142 1,138 0,007
EM 0,391
mg/mL 1,209 1,238 1,216 1,221 0,015
EM 0,195
mg/mL 1,255 1,273 1,287 1,272 0,016
Kontrol Media 0,016 0,010 -0,008 0,006 0,012
Kontrol
pertumbuhan 1,392 1,331 1,375 1,366 0,031
CLD 0,504
µg/mL 0,543 0,557 0,537 0,546 0,010
DMSO (2%) 1,345 1,353 1,342 1,347 0,005
Keterangan: EM = Ekstrak Metanol daun Kirinyuh;CLD = Klindamisin
Pada pengujian ini, kontrol media tidak terdapat pertumbuhan bakteri dan
tidak ada kontaminasi. Data selisih OD dianalisis secara statistik (Tabel I). Data
tersebut diuji distribusi normalitasnya menggunakan uji Shapiro-Wilk dan
didapatkan data tidak terdistribusi normal (p < 0,05). Hal ini karena terdapat data
dengan nilai p= 0,000 pada EM 0,781 mg/mL. Selanjutnya, Uji Levene dilakukan
untuk melihat terdapat homogenitas dari varian data yang digunakan. Data
menunjukkan nilai p = 0,007 (p < 0,05), sehingga data tidak terdistribusi homogen
atau varian data yang digunakan berbeda. Pengujian dilanjutkan dengan
menggunakan uji Kruskal Wallis dengan Pos Hoc Mann Whitney.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
Tabel II. Hasil Uji Kruskal Wallis-Mann Whitney Ekstrak Metanol Daun
Kirinyuh
KP
EM 6,25
EM 3,125
EM 1,5625
EM 0,781
EM 0,391
EM 0,195
CLD 0,504
K
NEG
KP - BB BB BB BB BB BB BB BTB
EM
6,25
BB - BB BB BB BB BB BB BB
EM
3,125
BB BB - BB BB BB BB BB BB
EM
1,5625
BB BB BB - BB BB BB BB BB
EM
0,781
BB BB BB BB - BB BB BB BB
EM
0,391
BB BB BB BB BB - BB BB BB
EM
0,195
BB BB BB BB BB BB - BB BB
CLD
0,504
BB BB BB BB BB BB BB - BB
K NEG BTB BB BB BB BB BB BB BB -
Keterangan : BB = Berbeda Bermakna; BTB = Berbeda Tidak Bermakna; EM =
Ekstrak Metanol daun Kirinyuh (mg/mL); CLD = Klindamisin (µg/mL); K NEG
= DMSO 2%; KP = Kelompok Pertumbuhan
Hasil uji Kruskal Wallis Mann Whitney dapat dilihat pada tabel II. Jika
nilai p ≤ 0,05 , maka menunjukkan hasil berbeda bermakna (Dahlan, 2014). Dari
tabel I ditunjukkan hasil berbeda bermakna antara KP dengan EM 0,195-6,25
mg/mL. Selain itu, hasil berbeda bermakna ditunjukkan antara KP dengan CLD
0,504 µg/mL. Menurut Dahlan (2014), hasil berbeda bermakna berarti terdapat
perbedaan yang signifikan antara kelompok perlakuan dengan kontrol
pertumbuhan. Hasil tersebut menandakan perbedaan yang signifikan terjadi pada
nilai selisih OD. Sedangkan pada K NEG terdapat hasil berbeda tidak bermakna
terhadap KP. Hal ini menandakan tidak ada perbedaan signifikan yang terjadi
pada nilai selisih OD antara K NEG dengan KP. Setelah nilai selisih OD
didapatkan, maka dilakukan perhitungan nilai persen penghambatan sesuai
dengan rumus Quave et al (2008).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
Tabel III. Persen Penghambatan Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh
Perlakuan Penghambatan (%) ± SD
EM 6,25 mg/mL 80,966 ± 0,096
EM 3,125 mg/mL 50,171 ± 0,050
EM 1,5625 mg/mL 38,507 ± 0,018
EM 0,781 mg/mL 16,691 ± 0,007
EM 0,391 mg/mL 10,615 ± 0,015
EM 0,195 mg/mL 6,906 ± 0,016
CLD 0,504 µg/mL 60,054 ± 0,010
Keterangan : EM = ekstrak metanol daun kirinyuh, CLD = Clindamycin
Berdasarkan data persen penghambatan pada tabel II, ekstrak metanol
daun Kirinyuh dan klindamisin memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri P.
acnes. Hal ini dapat dilihat rentang nilai persen penghambatan ekstrak metanol
daun Kirinyuh yaitu 6,906-80,966 %. Dari nilai persen penghambatan tersebut
dapat disimpulkan, semakin besar konsentrasi yang digunakan, maka semakin
besar nilai persen penghambatan yang dihasilkan. Secara keseluruhan hasil
tersebut sesuai dengan analisis statistik yang memiliki hasil perbedaan bermakna
antara KP dengan EM 0,195-6,25 mg/mL (p≤0,05).
CLD 0,504 µg/mL memiliki persen penghambatan sebesar 60,054 %,
sehingga klindamisin yang digunakan termasuk susceptible terhadap bakteri P.
acnes ( oğan et al., 2017). Hasil tersebut didukung dengan analisis statistika yang
menunjukkan hasil berbeda bermakna antara KP dengan CLD 0,504 µg/mL (p=
0,050). Beberapa penelitian sebelumnya telah menguji aktivitas antibakteri dari
klindamisin terhadap bakteri P. acnes. Seperti penelitian yang dilakukan oleh
Dinant et al (2016), klindamisin sudah dapat menghambat pertumbuhan bakteri
pada konsentrasi 0,063 µg/mL terhadap bakteri P. acnes ATCC 11827. Selain itu,
penelitian oleh Kamei et al (2009), klindamisin dapat memberikan MIC pada
konsentrasi 0,03 µg/mL dan baru dapat terlihat hasil bakteriostatik pada 4x MIC
terhadap bakteri P. acnes ATCC 11827. Penelitian lain yang juga dilakukan oleh
Zhang et al (2019), klindamisin memiliki MIC50 pada konsentrasi 0,5 µg/mL
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
terhadap bakteri P. acnes. Jika dilihat dari penelitian sebelumnya, maka
klindamisin 0,504 µg/mL yang digunakan pada penelitian ini masih dapat
dikatakan memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri P. acnes ATCC 11827.
KHM merupakan konsentrasi terendah dari suatu agen antibakteri yang
dapat menghambat pertumbuhan bakteri (Khanafer et al., 2018). Menurut
Turnidge (2006), dalam menganalisis kerentanan suatu agen antimikroba metode
konvensional yang digunakan adalah determinasi KHM. Penentuan nilai KHM
berdasarkan persen penghambatan terhadap beberapa agen antimikroba yang akan
diuji yaitu > 50%. Nilai MIC (Minimum Inhibitor Concentration) merupakan
konsentrasi minimal yang mewakili 50% agen antimikroba yang dapat
menghambat pertumbuhan bakteri (Schwarz et al., 2010). Dari data tabel II dapat
ditetapkan aktivitas penghambatan pertumbuhan bakteri P. acnes sebesar 50%
mulai terjadi pada konsentrasi 3,125 mg/mL sebesar 50,171%.
Pada penelitian ini ekstrak metanol daun Kirinyuh dapat menghambat
pertumbuhan bakteri P. acnes. Hal ini dikarenakan C. odorata memiliki berbagai
macam kandungan fitokimia. Salah satu senyawa fitokimia yang terdapat dalam
C. odorata adalah fenolik (Putri and Fatmawati, 2019). Kandungan fenolik yang
memiliki berbagai mekanisme dalam menghambat pertumbuhan bakteri. Senyawa
fenolik berinteraksi dengan komponen dinding sel bakteri. Di konsentrasi tinggi,
senyawa fenolik dapat merusak membran sel sitoplasma dan mengendapkan
protein sel. Senyawa fenol berinteraksi dengan komponen dinding sel bakteri
yang menyebabkan permeabilitas sel bakteri yang lebih tinggi. Sehingga fenolik
juga berdifusi ke dalam sel untuk memperlambat dan bahkan menghentikan
pertumbuhan bakteri (Harlina et al., 2013). Pada penelitian ini tidak menguji
kandungan fitokimia seperti yang dilakukan oleh Putri dan Fatmawati (2019),
sehingga pada penelitian ini belum tentu terdapat kandungan fenolik dan berdasar
pada literatur sebelumnya memungkinkan adanya kandungan fitokimia yang
berbeda pula.
Nilai KHM yang didapatkan pada penelitian ini berbeda dengan nilai
KHM Hanphakphoom et al (2016) yang memiliki nilai KHM 12,5 mg/mL dan
Chomnawang et al (2005) yang memiliki nilai KHM 0,625 mg/mL, yang mungkin
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
disebabkan oleh perbedaan lokasi tanaman di tanam. Seperti penelitian yang
dilakukan oleh Chomnawang et al (2005), ekstrak berbagai tanaman yang diambil
dari Thailand seperti Eupatorium odoratum atau C. odorata, memiliki aktivitas
antibakteri terhadap bakteri P. acnes ATCC 6919 (Chomnawang et al., 2005).
Sedangkan pada penelitian ini menggunakan ekstrak tanaman yang diambil dari
Indonesia yaitu C. odorata, sehingga perbedaan letak geografis tanaman yang
diambil dapat mempengaruhi hasil aktivitas antibakteri yang ditimbulkan.
Beberapa penelitian telah menguji adanya kandungan fenolik tanaman C.
odorata dari berbagai letak geografis yang berbeda. Seperti penelitian yang
dilakukan oleh Krishanti et al (2016), ekstrak metanol daun C. odorata yang
diambil dari Malaysia diketahui memiliki kandungan fitokimia total fenolik yang
tinggi yaitu sebesar 455,55±4,59 µg/mg. Hasil total fenolik tanaman C. odorata
dari Malaysia berbeda dengan penelitian lain yang dilakukan di Indonesia.
Penelitian oleh Putri dan Fatmawati (2019), menguji kandungan fitokimia ekstrak
metanol daun Kirinyuh yang diambil dari Maluku, Indonesia. Preparasi sampel
menggunakan Folin Ciocalteu Reagent (FCR) dan determinasi total fenolik dibaca
absorbansi sampel menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang
gelombang 750 nm. Dalam penelitian tersebut, ekstrak metanol daun Kirinyuh
memiliki total fenolik yaitu sebesar 57,11 µg/mg (Putri and Fatmawati, 2019).
Pada penelitian ini menggunakan metode Broth Microdilution,
sedangkan penelitian yang dilakukan oleh Hanphakphoom et al (2016)
menggunakan difusi sumuran dan Broth Macrodilution. Sehingga perbedaan
metode yang digunakan ini dapat mempengaruhi KHM yang dihasilkan. Metode
Broth Microdilution efisien dalam memberikan hasil KHM dalam satu waktu
dengan berbagai konsentrasi dari agen antibakteri yang digunakan (Klancnik et
al., 2010). Selain itu, Broth Microdilution merupakan metode yang reproducible
dalam menentukan MIC (Mayrhofer et al., 2008). Meskipun dalam penelitian
Chomnawang et al (2005) menggunakan metode yang sama dengan penelitian ini
yaitu Broth Microdilution, tetapi penentuan hasil KHM yang digunakan dalam
penelitian Chomnawang et al (2005) berbeda yaitu konsentrasi terkecil agen
antibakteri yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri (Chomnawang et al.,
2005). Sedangkan penelitian ini pengertian hasil KHM merupakan konsentrasi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
minimal yang mewakili 50% agen antimikroba yang dapat menghambat
pertumbuhan bakteri (Schwarz et al., 2010).
Selain itu, perbedaan karakteristik bakteri yang digunakan dalam
penelitian ini dengan penelitian sebelumnya, dapat mempengaruhi hasil KHM.
Sebagai contoh, penelitian Hanphakphoom et al (2016) menggunakan bakteri P.
acnes DMST 14916 yang memiliki perbedaan karakteristik pertumbuhan dengan
bakteri P. acnes ATCC 11827. P. acnes DMST 14916 menggunakan media
Nutrient Broth (NB) sebagai tempat pertumbuhan bakteri dan waktu inkubasi
sekitar 16-18 jam (Techaoei et al., 2017). Sedangkan P. acnes ATCC 11827
memiliki waktu inkubasi yaitu 48 jam (ATCC, 2020). Adanya perbedaan
karakteristik pertumbuhan bakteri dapat menentukan besar aktivitas
bakteriostatik-bakteriosidal dari suatu agen antibakteri (Kanayama et al., 2017).
Saat ini banyak penggunaan obat sintetik maupun antibiotik dalam terapi
obat antijerawat contohnya isotretinoin, eritromisin, klindamisin, benzoil
peroksida dan sebagainya (Purath and Coyner, 2017). Menurut Walsh et al (2016),
klindamisin merupakan salah satu antibiotik oral yang paling sering diresepkan.
Hal ini karena klindamisin memiliki efek samping yang minor (Walsh et al.,
2016). Meskipun klindamisin memiliki efek samping yang minor, klindamisin
memiliki kemungkinan efek samping yang dapat terjadi pada beberapa orang,
seperti iritasi pada kulit, dan pseudomembranous colitis (Purath and Coyner,
2017). Selain itu, menurut European guidelines therapy menyatakan bahwa
klindamisin oral secara umum tidak dianjurkan untuk firstline therapy jerawat.
Hal ini karena klindamisin merupakan antibiotik bakteriostatik sehingga
memperlambat pertumbuhan bakteri dan berpotensi untuk terjadinya resistensi
jika tidak digunakan dengan benar (Walsh et al., 2016).
Oleh karena itu, pengembangan terapi alami dari ekstrak tanaman dapat
digunakan sebagai alternatif terapi untuk jerawat dan mengurangi potensi
terjadinya resistensi terhadap antibiotik (Vora et al., 2018). Menurut Katno
(2008), kelebihan tanaman obat dan obat tradisional yaitu memiliki efek samping
yang relatif kecil jika digunakan secara tepat. Komponen yang terkandung dalam
satu bahan memiliki efek saling mendukung (Katno, 2008). Menurut Zaid et al
(2010), bahwa produk berbasis alam secara inheren lebih baik ditoleransi dalam
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
tubuh daripada bahan kimia sintetis. Hal ini dapat menjadi peluang tinggi untuk
pengembangan obat baru dari bahan alami.
KESIMPULAN DAN SARAN
Ekstrak metanol daun Kirinyuh memiliki aktivitas antibakteri terhadap
bakteri P. acnes ATCC 11827, yang dibuktikan dengan uji statistik data selisih
OD memiliki perbedaan bermakna antara ekstrak terhadap kontrol pertumbuhan
(p=0,005). Rentang nilai persen penghambatan ekstrak metanol daun Kirinyuh
yaitu 6,906-80,966 %. Nilai MIC ekstrak metanol daun Kirinyuh terhadap bakteri
P. acnes ATCC 11827 yaitu konsentrasi 3,125 mg/mL (50,171%).
Saran bagi penelitian selanjutnya adalah melanjutkan metode Broth
Microdilution dengan uji kandungan fitokimia untuk mengetahui kandungan
fitokimia dalam ekstrak yang dapat diperkirakan memiliki aktivitas antibakteri
ekstrak. Penelitian selanjutnya dapat mengembangkan kembali metode pengujian
lain yang berbeda, seperti metode Time-kill assay, Checkerboard dan sebagainya.
Sehingga tidak hanya berhenti pada hasil KHM saja, tetapi dapat melihat
kemampuan bakteriostatik-bakteriosidal dari agen yang digunakan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
DAFTAR PUSTAKA
Achermann, Y., Goldstein, E.J.C., Coenye, T., Shirtliffa, M.E., 2014.
Propionibacterium acnes: from Commensal to Opportunistic Biofilm-
Associated Implant Pathogen. Clinical Microbiology Reviews, 27(3), 419–
440.
ATCC, 2020. Propionibacterium acnes ATCC 11827. http://www.atcc.org/
produsts/all/11827.aspx diakses pada tanggal 9 Januari 2020.
Azwanida, N., 2015. A Review on The Extraction Methods Use in Medicinal
Plants, Principle, Strength and Limitation. Medicinal & Aromatic Plants,
04(03), 3–8.
Chakraborty, A.K., Rambhade, S., Patil, U., 2011. Chromolaena odorata ( L .) :
An Overview. Journal of Pharmacy Research, 4(3), 573–576.
Chomnawang, M.T., Surassmo, S., Nukoolkarn, V.S., Gritsanapan, W., 2005.
Antimicrobial Effects of Thai Medicinal Plants against Acne-Inducing
Bacteria. Journal of Ethnopharmacology, 101(1–3), 330–333.
Dahlan, M.S., 2014. Statistik untuk Kedokteran dan Kesehatan.
Depkes RI, 2008. Farmakope Herbal Indonesia.
oğan, ., ektöre*, ., Karabacak, E., Özyurt, M., 2017. İstanbul ’ da akne
lezyonlarından izole edilen Gram-pozitif bakterilerin antibiyotiklere direnç
durumu. Turk Arch Dermatol Venereology, 32–36.
Dumont-Wallon, G., Moyse, D., Blouin, E., Dréno, B., 2010. Bacterial Resistance
in French Acne Patients. International Journal of Dermatology, 49(3), 283–
288.
Gajdács, M., Spengler, G., Urbán, E., 2017. Identification and Antimicrobial
Susceptibility Testing of Anaerobic acteria: ubik’s Cube of Clinical
Microbiology? MDPI, 6(25), 1–29.
Ghasemzadeh, A., Jaafar, H.Z.E., Rahmat, A., 2015. Phytochemical Constituents
and Biological Activities of Different Extracts of Strobilanthes crispus (L.)
Bremek Leaves Grown in Different Locations of Malaysia. BMC
Complementary and Alternative Medicine, 15(1), 1–10.
Hanphakphoom, S., Thophon, S., Waranusantigul, P., Kangwanrangsan, N.,
Krajangsang, S., 2016. Antimicrobial Activity of Chromolaena odorata
Extracts against Bacterial Human Skin Infections. Modern Applied Science,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
10(2), 159.
Harlan, J., 2018. Analisis Regresi Linear, Penerbit Gunadharma. Penerbit
Gunadharma.
Harlina, H., Prajitno, A., Suprayitno, E., Nursyam, H., 2013. The Identification of
Chemical Compound and Antibacterial Activity Test of Kopasanda
(Chromolaena Odorata L.) Leaf Extract Against Vibriosis-Causing Vibrio
harveyi (MR 275 Rif) on Tiger Shrimp. Aquatic Science and Technology,
1(2), 15–29.
Kamei, Y., Sueyoshi, M., Hayashi, K.I., Terada, R., Nozaki, H., 2009. The novel
anti-Propionibacterium acnes Compound, Sargafuran, Found in The Marine
Brown Alga Sargassum macrocarpum. Journal of Antibiotics, 62(5), 259–
263.
Kanayama, S., Okamoto, K., Ikeda, F., Ishii, R., Matsumoto, T., Hayashi, N.,
Gotoh, N., 2017. Bactericidal Activity and Post-antibiotic Effect of
Ozenoxacin against Propionibacterium acnes. Journal of Infection and
Chemotherapy, 23(6), 374–380.
Katno, 2008. Tingkat Manfaat Keamanan dan Efektifitas Tanaman Obat dan Obat
Tradisional. Badan Penelitian dan Kesehatan Departemen Kesehatan RI.
Khanafer, N., Daneman, N., Greene, T., Simor, A., Vanhems, P., Samore, M.,
Brown, K.A., 2018. Susceptibilities of Clinical Clostridium Difficile Isolates
to Antimicrobials: A Systematic Review and Meta-Analysis of Studies Since
1970. Clinical Microbiology and Infection, 24(2), 110–117.
Klančnik, A., Piskernik, S., Jeršek, ., Možina, S.S., 2010. Evaluation of
Diffusion and Dilution Methods to Determine the Antibacterial Activity of
Plant Extracts. Journal of Microbiological Methods, 81(2), 121–126.
Krishanti, M.P., Rathinam, X., Kasi, M., Ayyalu, D., Surash, R., Sadasivam, K.,
Subramaniam, S., 2010. A Comparative Study on The Antioxidant Activity
of Methanolic Leaf Extracts of Ficus religiosa L, Chromolaena odorata (L.)
King & Rabinson, Cynodon dactylon (L.) Pers. and Tridax procumbens L.
Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 3(5), 348–350.
Kumar, N., Goel, N., 2019. Phenolic acids: Natural Versatile Molecules with
Promising Therapeutic Applications. Biotechnology Reports, 24, 1–10.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
Lee, H., and Park, J., 2017. Evaluation of The Effects of Dimethylsulphoxide on
Morphology, Cellular Viability, mRNA, and Protein Expression of Stem
Cells Culture in Growth Media. Biomedical Reports, 7, 291-296.
Madelina, W., Sulistiyaningsih, 2018. Review : Resistensi Antibiotik pada Terapi
Pengobatan Jerawat. Jurnal Farmaka, 16(2), 105–117.
Maimulyanti, A., Prihadi, A. R., dan Safrudin, I., 2016. Chemical Composition,
Phytochemical Screening and Antioxidant Activity of Acmella uliginosa
(Sw.) Cass Leaves. Indones J. Chem., 16(2), 162-174.
Maji, S., Dandapat, P., Ojha, D., Maity, C., Halder, S.K., Mohapatra, P.K. Das,
Pathak, T.K., Pati, B.R., Samanta, A., Mondal, K.C., 2010. In Vitro
Antimicrobial Potentialities of Different Solvent Extracts of Ethnomedicinal
Plants against Clinically Isolated Human Pathogens. Journal of Phytology,
2(4), 57–64.
Mayrhofer, S., Domig, K. J., Mair, C., Zitz, U., Huys, G., and Kneifel, W., 2008.
Comparison of Broth Microdilution, Etest, and Agar Disk Diffusion Methods
for Antimicrobial Susceptibility Testing of Lactobacillus acidophilus Group
Members. American Society for Microbiology, 3745-3748.
Mditshwa, A., Fawole, O.A., Al-Said, F., Al-Yahyai, R., Opara, U.L., 2013.
Phytochemical Content, Antioxidant Capacity and Physicochemical
Properties of Pomegranate Grown in Different Microclimates in South
Africa. South African Journal of Plant and Soil, 30(2), 81–90.
Nair , S. S., et al., 2017. A Polycation Antimicrobial Peptide Mimic without
Resistance Buildup against Propionibacterium Acnes. WILLEY-VCH
Advanced Science News Macromolecular Bioscience, 1700090, 1-6.
Nelson, K., Lyles, J.T., Li, T., Saitta, A., Addie-Noye, E., Tyler, P., Quave, C.L.,
2016. Anti-acne activity of Italian Medicinal Plants Used for Skin Infection.
Frontiers in Pharmacology, 7(NOV), 1–14.
Odutayo, F., Ezeamagu, C., Kabiawu, T., Aina, D., Mensah-Agyei, G., 2017.
Phytochemical Screening and Antimicrobial Activity of Chromolaena
odorata Leaf Extract against Selected Microorganisms. Journal of Advances
in Medical and Pharmaceutical Sciences, 13(4), 1–9.
Ogawa, R., 2017. Keloid and Hypertrophic Scars are The Result of Chronic
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
Inflammation in the Reticular Dermis 18, 1–10.
Omokhua, A.G., McGaw, L.J., Finnie, J.F., Van Staden, J., 2016. Chromolaena
odorata (L.) R.M. King & H. Rob. (Asteraceae) in Sub-Saharan Africa: A
Synthesis and Review of Its Medicinal Potential. Journal of
Ethnopharmacology, 183, 112–122.
Ozkaya, G.U., Durak, M.Z., Akyar, I., Karatuna, O., 2019. Antimicrobial
Susceptibility Test for The Determination of Resistant and Susceptible S.
aureus and Enterococcus spp. Using A Multi-Channel Surface Plasmon
Resonance Device. MDPI, 9(4).
Portillo, M.E., Corvec, S., Borens, O., Trampuz, A., 2013. Propionibacterium
acnes: An Emerging Pathogen in Biomaterial-Associated Infection. BioMed
Research International, 1–10.
Pubchem, 2020. Methanol (Pubchem Online). https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/
compound/887 diakses pada tanggal 23 Maret 2020.
Purath, J., Coyner, T., 2017. Pharmacologic Therapy for Acne A Primer for
Primary Care. American Academy of Physician Assistants, (October), 22–29.
Putri, D.A., Fatmawati, S., 2019. A New Flavanone as a Potent Antioxidant
Isolated from Chromolaena odorata L. Leaves. Evidence-based
Complementary and Alternative Medicine, 1–12.
Quave, C.L., Plano, L.R.W., Pantuso, T., Bennett, B.C., 2008. Effects of Extracts
from Italian Medicinal Plants on Planktonic Growth, Biofilm Formation and
Adherence of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Journal of
Ethnopharmacology, 118(3), 418–428.
Rusdy, M., 2016. The Spread, Impact and Control of Chromolaena odorata (L.)
R.M. King and H. Robinson in Grassland Area. Journal of Agriculture and
Ecology Research International, 5(1), 1–8.
Schneider, A., Hommel, G., Blettner, M., 2010. Lineare Regressions Analysis.
Deutsches Arzteblatt International, 107(44), 776–782.
Schwarz, S., Silley, P., Simjee, S., Woodford, N., van duijkeren, E., Johnson,
A.P., Gaastra, W., 2010. Editorial: Assessing The Antimicrobial
Susceptibility of Bacteria Obtained from Animals. Journal of Antimicrobial
Chemotherapy, 65(4), 601–604.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
Scientific, T., 2013. Remel and Oxoid Microbiology Products.
Sukandar, E.Y., Fidrianny, I., Triani, R., 2014. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak
Etanol Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa Bilimbi L.) terhadap
Propionibacterium acnes, Staphylococcus epidermidis, MRSA dan MRCNS.
Acta Pharmaceutica Indonesia, 39(3 & 4), 51–56.
Tambun, R., Limbong, H.P., Pinem, C., Manurung, E., 2016. Pengaruh Ukuran
Partikel, Waktu Dan Suhu Pada Ekstraksi Fenol Dari Lengkuas Merah
Influence of Particle Size, Time and Temperature To Extract Phenol From
Galangal. Jurnal Teknik Kimia USU, 5(4), 53.
Turnidge, J., Kahlmeter, G., Kronvall, G., 2006. Statistical Characterisation of
Bacterial Wild-Type MIC Value Distributions and The Determination of
Epidemiological Cut-Off Values. Clinical Microbiology and Infection, 12(5),
418–425.
Vijayaraghavan, K., Rajkumar, J., Bukhari, S.N.A., Al-Sayed, B., Seyed, M.A.,
2017. Chromolaena odorata: A Neglected Weed with A Wide Spectrum of
Pharmacological Activities (Review). Molecular Medicine Reports, 15(3),
1007–1016.
Vora, J., Srivastava, A., Modi, H., 2018. Antibacterial and Antioxidant Strategies
for Acne Treatment through Plant Extracts. Informatics in Medicine
Unlocked, 13(June 2017), 128–132.
Walsh, T.R., Efthimiou, J., Dréno, B., 2016. Systematic Review of Antibiotic
Resistance in Acne: An Increasing Topical and Oral Threat. The Lancet
Infectious Diseases, 16(3), e23–e33.
Wijaya, H., Novitasari, Jubaidah, S., 2018. Perbandingan Metode Ekstraksi
terhadap Rendemen Ekstrak Daun Rambut Laut (Sonneratia caseolaris L.
Engl). Jurnal Ilmiah Manuntung, 4(1), 79–83.
Yajarla, V. N. G., et al., 2014. Anti-Inflammatory and Anti-Proliferative
Properties of Chromolaena odorata Leaf Extracts in Normal and Skin-
Cancer Cell Lines. Journal of Herbs, Spices and Medicinal Plants, 20, 359-
371.
Zaid, H., Raiyn, J., Nasser, A., Saad, B., and Rayan, A., 2010. Physicochemical
Properties of Natural Based Products versus Synthetic Chemicals. The Open
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
Nutraceuticals Journal, 3, 194-202.
Zgoda, J.R., Porter, J.R., 2001. A Convenient Microdilution Method for Screening
Natural Products against Bacteria and Fungi. Pharmaceutical Biology, 39(3),
221–225.
Zhang, N., Yuan, R., Xin, K. Z., Lu, Z., and Ma, Y., 2019. Antimicrobial
Susceeptibility, Biotypes and Phylotypes of Clinical Cutibacterium
(Formerly Propionibacterium) acnes Strains Isolated from Acne Patients: An
Observational Study. Dermatol Ther (Heidelb), 9, 735-746.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Determinasi Tanaman
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
Lampiran 2. Tanaman Lengkap Chromolaena odorata
Gambar 2. Tanaman Lengkap Chromolaena odorata
Lampiran 3. Proses Maserasi Daun Kirinyuh
Gambar 3. Proses Maserasi Penambahan Pelarut Metanol
Lampiran 4. Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh
Gambar 4. Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
Lampiran 5. Pengujian Kelarutan Ekstrak Metanol pada DMSO
(A) (B) (C)
Gambar 5. Pengujian Kelarutan Ekstrak Metanol pada DMSO
Keterangan : Pengujian Kelarutan Ekstrak Metanol pada (A) = DMSO 50%; (B) =
DMSO 75%; (C) = DMSO 100%.
Lampiran 6. Penetapan Kadar Air dengan Metode Destilasi Toluena
Gambar 6. Penetapan Kadar Air Volume Air Akhir
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
Lampiran 7. Bobot Tetap
(A) (B) (C)
Gambar 7. Penimbangan bobot tetap (A) Cawan porselen kosong (B)
Ekstrak sebelum di oven (C) Ekstrak setelah di oven
Perhitungan :
Bobot cawan porselen kosong : 80,3417 gram
Penimbangan 1
Penimbangan ekstrak sebelum di oven : 87,4889 gram
Penimbangan dinyatakan sudah mencapai bobot tetap apabila perbedaan dua kali
penimbangan berturut-turut setelah dikeringkan atau dipijarkan selama 1 jam
tidak lebih dari 0,25%
Penimbangan =
Penimbangan =
= 0,21872 gram
Range bawah = 87,4889 gram – 0,21872 gram = 87,27018 gram
Range atas = 87,4889 gram + 0,21872 gram = 87,70762 gram
Penimbangan 2
Penimbangan ekstrak setelah di oven : 87,4329 gram
Hasil ekstrak = bobot cawan dan isi – bobot cawan
= 87,4329 gram – 80,3417 gram
= 7,0912 gram
Hasil penimbangan ke-2 didapatkan masuk ke dalam range bawah dan range atas,
sehingga memenuhi persyaratan bobot tetap
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
Rendemen =
=
= 14,1824 %
Lampiran 8. Isolat Murni Propionibacterium acnes ATCC 11827
Gambar 8. Isolat Murni Propionibacterium acnes ATCC 11827 dengan
Media Blood Agar
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
Lampiran 9. Surat keterangan Propionibacterium acnes ATCC 11827
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
Lampiran 10. Pengkondisian Anaerob
(A) (B) (C)
Gambar 9. Pengkondisian Anaerob dengan diberikan anaerogen dan
indikator anaerobik
Keterangan : (A) = Pengkondisian Anaerob dengan diberikan anaerogen dan
indikator anaerobik; (B) = anaerogen; (C) = indikator anaerobik
Lampiran 11. Perlakuan pada 96-Well Plate Broth Microdilution
(A) (B) (C)
(D) (E)
Gambar 10. Perlakuan pada 96-Well Plate Broth Microdilution
Keterangan : (A) = ekstrak metanol daun Kirinyuh (B) = kontrol negatif (C) =
kontrol pertumbuhan (D) = kontrol media (E) = kontrol positif
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
Lampiran 12. Pengukuran Optical Density Jam ke-0
Perlakuan Replikasi
1
Replikasi
2
Replikasi
3
Rata-
rata SD
EM 6,25
mg/Ml 1,659 1,752 1,660 1,690 0,053
EM 3,125
mg/mL 0,727 0,753 0,662 0,714 0,047
EM 1,5625
mg/mL 0,343 0,335 0,345 0,341 0,005
EM 0,781
mg/mL 0,191 0,194 0,200 0,195 0,005
EM 0,391
mg/mL 0,146 0,131 0,146 0,141 0,009
EM 0,195
mg/mL 0,116 0,104 0,102 0,107 0,008
Kontrol Media 0,016 0,012 0,021 0,016 0,005
Kontrol
pertumbuhan 0,168 0,170 0,167 0,168 0,002
CLD 0,504
µg/mL 0,114 0,115 0,120 0,116 0,003
DMSO (2%) 0,115 0,115 0,114 0,115 0,001
Keterangan: EM = Ekstrak Metanol daun Kirinyuh;CLD = Klindamisin
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
Lampiran 13. Pengukuran Optical Density Jam ke-48
Perlakuan Replikasi
1
Replikasi
2
Replikasi
3
Rata-
rata SD
EM 6,25
mg/Ml 1,948 1,905 1,998 1,950 0,047
EM 3,125
mg/mL 1,379 1,379 1,385 1,381 0,003
EM 1,5625
mg/mL 1,204 1,164 1,175 1,181 0,021
EM 0,781
mg/mL 1,333 1,324 1,342 1,333 0,009
EM 0,391
mg/mL 1,355 1,369 1,362 1,362 0,007
EM 0,195
mg/mL 1,371 1,377 1,389 1,379 0,009
Kontrol Media 0,032 0,022 0,013 0,022 0,010
Kontrol
pertumbuhan 1,560 1,501 1,542 1,534 0,030
CLD 0,504
µg/mL 0,657 0,672 0,657 0,662 0,009
DMSO (2%) 1,460 1,468 1,456 1,461 0,006
Keterangan: EM = Ekstrak Metanol daun Kirinyuh;CLD = Klindamisin
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
Lampiran 14. Uji Statistika
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
37
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
38
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
39
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
40
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
41
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
42
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
43
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
44
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
45
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
46
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
47
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi yang berjudul “Aktivitas Antibakteri
Ekstrak Metanol Daun Kirinyuh (Chromolaena odorata
(L.) R. M. King & H. Rob.) terhadap Bakteri
Propionibacterium acnes” memiliki nama lengkap
Grezelia Feronica Harsono, lahir di Pemalang pada
tanggal 17 Maret 1999. Penulis merupakan anak tunggal
dari pasangan Budi Harsono dan Junilia. Pendidikan
formal yang telah ditempuh yaitu TK Handayani
Pekalongan (2002-2004), SDN Sampangan 01
Pekalongan (2004-2010), SMP PIUS Pekalongan (2010-2013), SMA Santo
Bernardus Pekalongan (2013-2016). Pada tahun 2016, penulis melanjutkan
pendidikan sarjana ke Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
Semasa menempuh kuliah penulis aktif berpartisipasi dalam mengikuti
kepanitiaan dan organisasi di kampus seperti Koordinator Divisi Publikasi dan
Dokumentasi dalam kepanitiaan Komisi Pemilihan Umum (2017), Wakil Ketua
dalam kepanitiaan Komisi Pemilihan Umum (2018), organisasi DPMF periode
2017 sebagai anggota Komisi Publikasi dan Informasi, dan organisasi DPMF
periode 2018 sebagai koordinator Komisi Publikasi dan Informasi. Selain itu,
penulis juga aktif sebagai asisten praktikum yaitu praktikum Biologi Sel dan
Molekuler (2017-2018), dan praktikum Mikrobiologi (2018-2020).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI