DiagnosisUntuk menegakkan diagnosis anemia defisiensi besi harus dilakukan anamnesis dan pemeriksaan fisis yang teliti disertai pemeriksaan laboratorium yang tepat. Terdapat tiga tahap diagnosis ADB. Tahap pertama adalah menentukan adanya anemia dengan mengukur hemoglobin atau hematocrit. Cutt off point anemia tergantung kriteria yang dipilih, apakah kriteria WHO atau kriteria klinik. Tahap dua adalah memastikan adanya defisiensi besi Menentukan penyebab defisiensi besi yang terjadi

Secara laboratoris untuk menegakkan diagnosis anemia defisiensi besi (tahap satu dan tahap dua) dapat dipakai kriteria diagnosis anemia defisiensi besi (modifikasi dari kriteria Kerlin et al) sebagai berikut:Anemia hipokromik mikrositer pada hapusan darah tepi, atau MCCV < 80 fl dan MCHC < 31% dengan salah satu dari a,b,c,atau d. Dua dari tiga parameter di bawah ini: Besi serum 350 mg/dl Saturasi transferrin 4000 pada laiki-laki. Dalam suatu penelitian lapangan ditemukan hubungan yang yata antara derajat infeksi cacing tambang dengan cadangan besi pada laki-laki, tetapi hubungan ini lebih lemah pada perempuan.Anemia akibat cacing tambang (hookworm anemia) adalah anemia defisiensi besi yang disebabkan oleh karena infeksi cacing tambang berat (TPG>2000). Anemia akibat cacing tambang sering disertai pembengkakan parotis dan warna kuning pada telapak tangan. Pada pemeriksaan laboratorium, disamping tanda-tanda defisiensi besi dijumpai pula adanya eosinophilia. Pada suatu penelitian di Bali, anemia akibat cacing tambang dijumpai pada 3,3% pasien infeksi cacing tambang atau 12,2% dari 123 kasus anemia defisiensi besi yang dijumpai. Jika tidak ditemukan perdarahan yang nyata, dapat dilakukan tes darah samar (occult blood test) pada feses, dan jika terdapat indikasi dilakukan endoskopi saluran cerna atas atau bawah.