Slide 1

Deproteinisasi1Bagian darah yg tertinggal setelah komponen sel & protein plasma dihilangkan. Fraksi ini mengandung bahan yg tidak terikat pd protein plasma (elektrolit, glukosa, dll). Pengukuran kadar obat dalam fraksi bebas protein berguna untuk menentukan senyawa bebas dan yang terikat pd protein. Fraksi ini didapat dengan cara ultrafiltrasi, yg membiarkan air dan molekul kecil menerobos lewat penyaring, sedangkan molekul besar (albumin dan globulin) tertahan.Fraksi bebas protein :2DeproteinisasiMengapa Sampel Perlu Di-Deproteinisasi

? ? ?3Deproteinisasi Metode yang paling umum digunakan adalah : Pengendapan protein sebagai garam yang tidak larut

4Denaturasi protein dapat diartikan suatu perubahan atau modifikasi terhadap struktur sekunder, tersier dan kuartener molekul protein tanpa terjadinya pemecahan ikatan-ikatan kovalen. Karena itu, denaturasi dapat diartikan suatu proses terpecahnya ikatan hydrogen, interaksi hidrofobik, ikatan garam dan terbukanya lipatan atau wiru molekul protein(Sumardjo, 2008).

5Pengaruh pH Protein

pH rendah ( asam kuat ) pH tinggi ( basa kuat )

muatan positif muatan negatif

6Pengaturan pHSampel (protein)Sampel (protein)pH larutan titik isoelektriktitik isoelektrikprotein sbg kationprotein sbg anionbereaksi dng anion ttt. membentuk garam tak larutbereaksi dng kation ttt. membentuk garam tak larut7Precipitating AgentsAnionikKationikpikratIon-ion logam berat spt. :molibdattungstatsulfosalisilatmetafosfatperklorattrikloroasetat-------seng merkuri Kadmiumuraniumbesitembagatimbal(Zn)(Hg)(Cd)(U)(Fe)(Cu)(Pb)--ZnSO4ZnSO4/Ba(OH)28Titik Isoelektrik (TI) adalah daerah pH tertentu di mana protein tidak mempunyai selisih muatan atau jumlah muatan positif dan negatifnya sama, sehingga tidak bergerak ketika diletakkan dalam medan listrik. Pada pH isoelektrik (pI), suatu protein sangat mudah diendapkan karena pada saat itu muatan listriknya nol.

9Protein akan mengalami perubahan muatan pd pH di atas & di bawah titik isoelektriknya. Pada pH di bawah TI muatan positifnya lebih besar, sedangkan di atas TI muatan negatifnya lebih besar. Perubahan muatan menyebabkan menurunnya daya tarik menarik antara molekul protein shg molekul lebih mudah terurai. Semakin jauh perbedaannya dari TI maka kelarutan protein semakin meningkat.10Deproteinisasi dgn dehidrasiBila sejumlah tertentu air

dihilangkan dari protein

Protein akan mengendapSENTRIFUGASI11Deproteinisasi dengan cara dehidrasi Solvent ( suhu rendah )AsetonitrilAsetonMetanolEtanol

(menarik mantel air yg melingkupi molekul2 protein)

Salting out ( protein pada titik isoelektrik )+Garam( Na sulfat, Na sulfit )

Protein mengendap12Salting out :kebanyakan protein tidak larut dalam larutan garam pekat & mengendap atau didesak keluar dari larutan dalam keadaan tidak berubah. Prinsip ini digunakan utk memisahkan protein dari darah.

13