booklet juknis biakan ok

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  • 7/23/2019 Booklet JUKNIS Biakan OK

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    Petunjuk TeknisPemeriksaan Biakan, Identifikasi, Dan

    Uji Kepekaan Mycobacterium

    tuberculosis pada Media Padat

    DIREKTORAT JENDERAL BINA UPAYA KESEHATANDIREKTORAT JENDERAL PENGENDALIAN PENYAKIT DAN

    PENYEHATAN LINGKUNGAN

    2012

    KEMENTERIAN KESEHATAN RI

  • 7/23/2019 Booklet JUKNIS Biakan OK

    2/66

    Katalog Dalam Terbitan. Kementerian Kesehatan RI

    616.995 1Indp

    Indonesia. Kementerian Kesehatan RI. DirektoratJenderal Bina Upaya Kesehatan

    Petunjuk teknis pemeriksaan biakan, indentifikasi,dan uji kepekaan Mycobacterium tuberculosispada media padat,-- Jakarta : KementerianKesehatan RI. 20121

    ISBN 978-602-235-144-3

    1. Judul I. TUBERCULOSIS - DIAGNOSISII. TUBERCULOSIS - LABORATORY MANUALSIII. MICROSCOPY - LABORATORY MANUALSIV. MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

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    KATA PENGANTAR

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    TIM PENYUSUN

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    KEPUTUSAN DIREKTUR JENDERAL BINA UPAYA KESEHATAN

    KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA

    NOMOR : HK.02.04/V/1808/2012.

    TENTANG

    PETUNJUK TEKNIS PEMERIKSAAN BIAKAN, IDENTIFIKASI DAN

    UJI KEPEKAAN MYCOBACTERIUM TUBERCULOSISPADA MEDIA PADAT

    DENGAN RAHMAT TUHAN YANG MAHA ESA

    DIREKTUR JENDERAL BINA UPAYA KESEHATAN,

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    VI. ALUR KERJA BIAKAN, IDENTIFIKASI DAN UJI KEPEKAAN

    Mycobacterium tuberculosis ..............................................................................43

    VII. PRAKTEK LABORATORIUM ............ ............. ............. ............ ............. ............. .51

    A. Pengambilan, Pengiriman dan Penerimaan Spesimen .................................51

    B. Pembuatan Media Lowenstein-Jensen...........................................................54

    C. Biakan Mycobacterium tuberculosis ..............................................................57

    D. Pembacaan Hasil Biakan .................................................................................62

    E. Subkultur Isolat Mycobacterium tuberculosis ..............................................63

    F. Identifikasi Mycobacterium tuberculosis .......................................................69

    G. Pembuatan Media untuk Uji PNB dan Resistensi .........................................75

    H. Pembuatan Suspensi Kuman untuk Uji Kepekaan........................................79

    I. Uji Resistensi Mycobacterium tuberculosisCara Proporsi ..........................81

    J. Interpretasi Hasil Uji Kepekaan .......................................................................84

    K. Preservasi Kuman pada Suhu -70oC ..............................................................87

    L. Resusitasi Mycobacterium tuberculosisdari -70oC .....................................89

    M. Pengiriman Isolat ke Laboratorium Rujukan .................................................89N. Pengelolaan Limbah.........................................................................................90

    VIII. PEMANTAPAN MUTU BIAKAN DAN UJI KEPEKAAN .....................................93

    A. Tujuan Pemantapan Mutu ................................................................................93

    B. Komponen Pemantapan Mutu Laboratorium Tuberkulosis .........................93

    IX. PENCATATAN DAN PELAPORAN .....................................................................103

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    DAFTAR ISI

    KATA PENGANTAR ............ ............ ............. ............. ............ ............. ............ ............. ...i

    KATA SAMBUTAN .......................................................................................................iii

    TIM PENYUSUN ..........................................................................................................iv

    KEPUTUSAN DIRJEN BINA UPAYA KESEHATAN KEMENTERIAN KESEHATANREPUBLIK INDONESIA NOMOR : HK.02.04/V/1808/2012 ............ ............ ............. .v

    DAFTAR ISI .................................................................................................................ix

    DAFTAR TABEL ..........................................................................................................xi

    DAFTAR GAMBAR .....................................................................................................xii

    DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................................xiii

    DAFTAR SINGKATAN ...............................................................................................xiv

    I. PENDAHULUAN ............. ............ ............. ............ ............. ............. ............ ............. ..1

    A. Latar Belakang ....................................................................................................1

    B. Tujuan Petunjuk Teknis ......................................................................................4

    II. MANFAAT PEMERIKSAAN BIAKAN, IDENTIFIKASI DAN UJI KEPEKAANPADA PROGRAM PENGENDALIAN TB .................................................................5

    A. Biakan Mycobacterium tuberculosis ................................................................7

    B. Uji kepekaan ( Drug Susceptibility Test/ DST) .................................................9

    III. KARAKTERISTIK MYCOBACTERIA ............ ............ ............. ............. ............ ...... 11

    IV. SUMBER DAYA LABORATORIUM .......................................................................15

    A. Ruang laboratorium .........................................................................................15

    B. Peralatan dan penjaminan kinerja alat, termasuk kalibrasi .........................23

    V. KEAMANAN KERJA UNTUK BIAKAN DAN UJI KEPEKAAN ........ ............. .......29

    A. Desain Laboratorium........................................................................................29

    B. Pedoman Umum Keamanan Laboratorium ....................................................29

    C. Pedoman Khusus .............................................................................................32

    D. Penanganan Limbah. .......................................................................................38

    E. Penanganan Tumpahan Infeksius ...................................................................39

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    DAFTAR SINGKATAN

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    DAFTAR TABEL

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    DAFTAR GAMBAR

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    DAFTAR LAMPIRAN

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    LAMPIRAN

    KEPUTUSAN DIREKTUR JENDERAL BINA UPAYA KESEHATAN

    NOMOR : HK.02.04/V/1808/2012

    TANGGAL : 27 SEPTEMBER 2012

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    B. Uji kepekaan ( Drug Susceptibility Test/ DST)

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    Gambar 2. Contoh lay out laboratorium pemeriksaan Mycobacterium tuberculosis

    dengan fasilitas biomolekuler

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    Tabel 4. Peralatan laboratorium biakan dan uji kepekaan dengan media padat

    untuk beban kerja 6000 uji/tahun

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    Gambar 3. Tanda baku biohazard international

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    5. Penggunaan BSCkelas II

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    Gambar 5. Skema aliran udara pada BSC klas 2

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    Komposisi Kit tumpahan biologi

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    Pedoman Umum pada Insiden tumpahan

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    Pembersihan tumpahan

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    D. Penanganan Limbah.

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    CatatanR

    Pada sampel dahak SPS atau SP, kerjakan pemeriksaan biakan dalam

    tabung yang sama. Kumpulkan dahak menjadi satu atau ambil dahak

    dengan hasil BTA terbanyak

    Identifikasi dikerjakan pada koloni murni dan jumlah memadai (confluent)

    Untuk bahan yang steril,misalnya cairan liquorserebrospinal, bronkolaveolar

    lavage tidak perlu dilakukan dekontaminasi dan homogenisasi, cukup

    dilakukan konsentrasi dengan sentrifugasi minimum 3000 g selama 15

    menit

    Untuk bahan bilasan lambung biarkan sisa makanan mengendap, kemudian

    dilakukan sentifugasi 3000g selama 15 menit terhadap supernatannya.

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    Pembersihan tumpahan di BSC.

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    Pembersihan tumpahan sentrifugasi

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    Gambar 8. Alur Uji Kepekaan Mycobacterium tuberculosis

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    Tabel 7. Diferensiasi diantara Mycobacterium tuberculosis complex

    Species Niasin Nitrat

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    tahan

    panas

    Pyra-

    zinami-

    dase

    Urease

    Hidro-

    lisa

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    10 hari

    Kepe-

    kaan

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    Gambar 7. Alur Kerja Identifikasi Rutin

    *Subkultur hanya dilakukan apabilajumlah koloni tidak memadai (

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    VII. PRAKTEK LABORATORIUM

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    A. Pengambilan, Pengiriman dan Penerimaan Spesimen

    Spesimen dahak

    1. Alat dan bahan yang diperlukan

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    B. Pembuatan Media Lowenstein-Jensen

    1. Alat dan bahan yang diperlukan untuk membuat media :

    Alat :

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    .: #'") %'5' 5*$+"(

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    Bahan :

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    media. Hal ini dianjurkan jika pengolahan dahak dilakukan pada

    tabung 15 ml.

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    U: BSC Class II

    Cara pengolahan dahak

    P: Dahak tanpa CPC diolah sebagai berikut :

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    5'+4)7 *')7')X 5''* 3$)"3&')7 S'/G %'+$)' S'/G &$+5"K'* %'45*"%

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    PX 1"3&')7 S'HGJ/

    U'),"-+'* T:UI 7C ('+4*%') -'('3 POOO 3( 'h4'-$5 '*'4

    *"3&')7 S'HGJ/

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    HX 1"3&')7 T:OI 7 #GHJ/

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    Catatan :

    PBS dapat dibuat dalam bentuk konsentrat 10x. Untuk itu

    timbang bahan 10 kali lipat. Larutan kerja dibuat dengan jalan

    menambahkan 1 bagian volume PBS 10 x dengan 9 bagian

    volume aquades,pH 7.0

    HCl adalah asam kuat. Jika terjadi tumpahan, segera siram

    dengan air sebanyak mungkin

    M: J$)79(',') -$)7') S'/G U_

    PX 14')7%') -','% %$ -'('3 *'&4)7 5$)*+"K45 YO 3(: N"%' ($&", -'+" PO 3(C

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    YX 14*4. *'&4)7 -$)7') +'.'*C 5$)*+"K45 3")"3'( =OOO 7 5$('3' PY5% ganti menjadi NaOH 6%

    Jika menggunakan medium Ogawa 3% untuk inokulasi, setelah

    dihomogenisasi dengan NaOH 4% dan didiamkan selama 15

    menit, contoh uji yang sudah diolah langsung ditanam pada

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    L?" +$-4%5" )"*+'* .95"*"K

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    F. Identifikasi Mycobacterium tuberculosis

    8-$)*"!%'5" Mycobacterium tuberculosis ,'+45 -"%$+?'%') .'-' "59('* 54&%4(*4+ 6')7

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    Inokulasi bahan pada media :

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    _ S'/G

    Catatan

    Kristal sianogen bromida sangat sukar larut. Karena itu

    pembuatan larutan sianogen bromida dapat juga dilakukan

    dengan menambahkan 50 ml air dalam botol berisi 25 gr

    sianogen bromida dan dibiarkan minimal semalam. Sianogen

    bromida yang terlarut mempunyai konsentrasi sekitar 10%

    Cara kerja

    P: 1'3&', P

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    PO 3$)"* V?')7') ($&", -'+" PO 3$)"* 5$&'& '%') *$+?'-" wM'+'3$(nX

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    3")774

    Y: #$+9% %9(9)" *$+5$&4* -') 3'54%%') %$ -'('3 &9*9( @M d'+*)$6 6')7 *$(', &$+"5"

    ('+4*') J2E 5*$+"( -') 7('55 &$'-5 5$M4%4.)6'

    W: G9397$)%') -$)7') 3$)774)'%') >9+*$e 3"e$+ 5$('3' k =O -$*"%

    I: A"'3%') 5$('3' 3")"3'( PY 3$)"* 54.'6' 7$($3&4)7 6')7 *$+&$)*4% -'.'*

    3$)7$)-'.: E$54'"%') %$%$+4,') 545.$)5" %43') 5'3' -$)7') @M a'+(')- P:O

    ]: J".$* 545.$)5" %43') *$+5$&4* 5$&')6'% O:Y 3( -') 3'54%%') -'('3 M+69 >"'( 6')7

    *$(', &$+"5" O:Y 3( 545.$)5" 5454 5%"3: E"3.')(', 5$&')6'%"'(

    T: E"3.') -'('3 4(*+' -$$. K+$$g$+: #43') -'.'* &$+*',') .4(4,') *',4) 5$.')?')7

    54,4)6' 5*'&"(: 8)" 3$+4.'%') 7$)$+'5" P

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    p j

    Suspensi (1mg/ml

    107/ ml )

    Media bebas

    Obat

    Obat/konsentrasi (mg/L)

    Pengenceran (estimasi

    jumlah kuman per ml )

    E VUX G VO:HX B VUOX c VHX

    10-1 (106)

    10-2 (105)

    10-3 (104) UkC Uk U k

    VtYOOX

    P =k ] Hk

    10-4 (103)

    10-5 (102) =WC UYp UY O PH O HO

    Proporsi resistensi xO:P_ HI_ O:H_ UU:U_

    Hasil dilaporkan E B E B

    p pilih angka tertinggi dari jumlah koloni pada media tanpa obat sebagai dasar

    perhitungan.

    Koloni yang dipakai dalam perhitungan pada tabel contoh diatas adalah :

    H (12) pada 10-5; E (20) pada 10-5 & R (8) pada 10-3) dan S (1) pada 10-3).

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    2. Pemantapan Mutu External (PME) atau External Quality Assurance (EQA)

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    3. Peningkatan mutu (Quality Improvement)

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    IX. PENCATATAN DAN PELAPORAN

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    Lampiran 3. Form TB 05 MDR (Formulir permohonan lab TB MDR)

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