bismillah skripsi

49
Skripsi Penapisan Fitokimia, Uji Aktivitas Antioksidan Dengan DPPH dan Uji Aktivitas Biologi Secara BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) Dari 2 Jenis Buah, Suku Rosaceae oleh : Yovie Prayekti NPM : 2007210234 Fakultas Farmasi Universitas Pancasila Jakarta 2011

Upload: yovie-prayekti

Post on 01-Dec-2015

181 views

Category:

Documents


2 download

TRANSCRIPT

Skripsi

Penapisan Fitokimia, Uji Aktivitas Antioksidan Dengan DPPH dan Uji Aktivitas Biologi Secara BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) Dari 2 Jenis

Buah, Suku Rosaceae

oleh :

Yovie Prayekti

NPM : 2007210234

Fakultas Farmasi

Universitas Pancasila

Jakarta

2011

Latar Belakang

KesehatanSumber

keanekaragaman hayati

Strawberry dan Arbei

AntioksidanRadikal bebasPenyakit

Penapisan Fitokimia, Uji aktivitas antioksidan dan Uji

Aktivitas Biologi

Perumusan masalah1. Golongan senyawa apakah yang terdapat

pada ekstrak buah strawberry dan buah arbei?

2. Apakah ekstrak dari fase n-heksana, etil asetat, dan n-butanol buah strawberry dan buah arbei mempunyai aktivitas antioksidan dan aktivitas biologi?

3. Ekstrak dari fase manakah yang memiliki aktivitas antioksidan dan aktivitas biologi tertinggi?

Tujuan penelitian1. Mengetahui data kandungan metabolit

sekunder dari buah strawberry dan buah arbei.

2. Mendapatkan nilai IC50 dengan metode peredaman radikal bebas dan nilai LC50 dengan metode BSLT dari ekstrak buah strawberry dan ekstrak buah arbei.

3. Mengetahui fase mana dari ekstrak buah strawberry dan ekstrak buah arbei yang mempunyai aktivitas antioksidan dan aktivitas biologi tertinggi.

Manfaat penelitian

1. Memberikan informasi data ilmiah tentang kandungan metabolit sekunder dari buah strawberry dan buah arbei.

2. Memberikan informasi ekstrak dari fase mana yang memiliki aktivitas antioksidan dan aktivitas biologi tertinggi.

Tinjauan pustakaTinjauan BotaniStrawberry Klasifikasi

Divisi : SpermatophytaSub divisi : MagnoliophytinaKelas : MagnoliataeSub kelas : RosidaeBangsa : RosalesSuku : RosaceaeMarga : FragariaJenis : Fragaria ananassa Duchesne.

StrawberryKandungan

Kimia Antosianin Asam ellagik Katekin Kuersetin Kaempferol

KhasiatMampu menyusutkan kadar kolesterolDapat membantu melumpuhkan kerja

aktif kankerDapat meredam gejala strokeDapat memutihkan atau membersihkan

permukaan gigiAmpuh melawan encok dan radang

sendiDapat menghaluskan kulit dan

membuat warna kulit terlihat lebih cerah dan bersih

Tinjauan pustakaTinjauan BotaniArbei Klasifikasi

Divisi : SpermatophytaSub divisi : MagnoliophytinaKelas : MagnoliataeSub kelas : RosidaeBangsa : RosalesSuku : RosaceaeMarga : RubusJenis : Rubus rosaefolius J.E. Smith

Arbei Kandungan

Kimia Glukosa Asam askorbat

Khasiat : Sebagai obat

sariawan

PRINSIP PENELITIAN

Buah segar strawberry dan

arbei

Dimaserasi dengan etanol

96%

Maserat dari masing2 ekstrak

dipekatkan dengan rotavapor

Ekstrak kental etanol

96%

Penapisan fitokimia

Penapisan fitokimia, uji aktivitas antioksidan dengan DPPH dan uji

aktivitas biologi secara BSLT

Ekstrak kental etanol 96%

dipartisi dengan n-heksana, etil asetat,

dan n-butanol

Metode penelitian1. Determinasi tanaman2. Pengumpulan dan penyediaan bahan3. Pembuatan ekstrak buah strawberry dan

arbei : Ekstrak kental etanol 96% Partisi ekstrak4. Penapisan fitokimia5. Pengujian ekstrak buah strawberry dan

arbei : Uji aktivitas antioksidan dengan DPPH (1,1-

difenil-2-pikrilhidrazil) Uji aktivitas biologi secara BSLT (Brine Shrimp

Lethality Test)

Pembuatan ekstrak kental etanol 96%

Buah segar strawberry dan

arbei

Dimaserasi dengan etanol

96%

Maserat dari masing2 ekstrak

dipekatkan dengan rotavapor

Ekstrak kental etanol

96%

Partisi ekstrak

Dipartisi dengan n-heksana

Ekstrak kental etanol 96%

Fase air

Dipartisi dengan etil asetat

Fase air

dipartisi dengan n-butanol

Fase airFase n-butanol

pekatkan

ekstrak kental n-butanol

Fase etil asetat

pekatkan

ekstrak kental etil asetat

Fase n-heksana

pekatkan

ekstrak kental n-heksana

Metode penelitianMasing-masing ekstrak kental yang didapatkan dilakukan penapisan fitokimia meliputi :

a. Identifikasi golongan alkaloid

b. Identifikasi golongan flavonoid

c. Identifikasi golongan saponin

d. Identifikasi golongan tanin

e. Identifikasi golongan kuinon

f. Identifikasi golongan steroid atau triterpenoid

g. Identifikasi golongan minyak atsiri

h. Identifikasi golongan kumarin

Dan kemudian dilakukan Uji aktivitas antioksidan

dengan DPPH

Uji aktivitas biologi secara BSLT

SKEMA KERJA DENGAN DPPH

Larutan induk (1000 µg/mL)

Larutan uji ( ekstrak etanol 96%, n-heksana, etil asetat, dan n-butanol )

Kontrol positif ( Vitamin C )

25 µL 50 µL 125 µL 250 µL 500 µL 10 µL 20 µL 30 µL 40 µL 50 µL

+ 1,0 mL DPPH + metanol ad 5,0 mL, homogenkan

Tutup dengan alumunium foil

5 µg / µL 10 µg /µL25 µg /

µL50 µg /

µL 100µg /

µL2 µg / µL 4 µg / µL 6 µg / µL

8 µg / µL

10µg / µL

Inkubasi 37 ° C , 30 menit. Ukur pada λ 516.5 nm

Serapan

% hambatanY = a + bxIC50

Metode penelitian

Uji aktivitas biologi secara BSLTLarutan induk

(20 mg ekstrak + pelarut ad. 2 mL)

Pipet 500 µL Pipet 50 µL Pipet 5 µL

Uapkan.+ air laut ±

3mL

Uapkan.+ air laut ±

3mL

Uapkan.+ air laut ±

3mL

Masukkan 10 ekor larva

udang.+ air laut ad.

5mL

Masukkan 10 ekor larva

udang.+ air laut ad.

5mL

Masukkan 10 ekor larva

udang.+ air laut ad.

5mL

1000 bpj

100 bpj

10 bpj

Hasil Penelitian

A. Determinasi tanamanHasil determinasi tanaman menunjukkan bahwa tanaman yang digunakan dalam penelitian ini adalah Fragaria ananassa Dechesne. dan Rubus rosaefolius J.E. Smith.

B. EkstraksiPelarut

Bobot Ekstrak (gram)

Rendemen (%)

Strawberry Arbei Strawberry

Arbei

Etanol 96%

53,8723 81 10,69 15,95

n-heksana

1,2867 1,5643 4,12 3,86

Etil asetat

2,3685 2,8695 7,58 7,09

n-butanol

3,2674 3,7358 15,37 9,22

C. Penapisan Fitokimia

Menggunakan metode Phytochemical Screening Farnsworth terhadap buah segar dan ekstrak buah strawberry dan arbei.

Hasil penapisan fitokimia buah strawberry

Nama Senyawa

Hasil Pengamatan

Buah

segar

Etanol

96%

n-heksa

na

Etil asetat

n-butanol

Alkaloid - - - - -

Flavonoid + + - + +

Saponin + + - + +

Tanin + + - + +

Kuinon - - - - -

Steroid/Triterpenoid

+/+ +/+ +/+ -/+ -/+

Minyak atsiri + + + - -

Kumarin - - - - -

Hasil PenelitianPenapisan Fitokimia

Hasil penapisan fitokimia buah arbei

Nama Senyawa

Hasil Pengamatan

Buah segar

Etanol

96%

n-heksan

a

Etil aseta

t

n-butano

l

Alkaloid - - - - -

Flavonoid + + - + +

Saponin + + - + +

Tanin + + - + +

Kuinon - - - - -

Steroid/Triterpenoid

+/+ +/+ +/+ +/+ +/+

Minyak atsiri + + + - -

Kumarin - - - - -

Hasil PenelitianHasil uji aktivitas antioksidan

EkstrakNilai IC50 (bpj)

Strawberry Arbei

Etanol 96% 53,12 36,31

n-heksana 144,52 166,29

Etil asetat 76,69 40,78

n-butanol 82,44 95,97

Hasil PenelitianHasil uji aktivitas biologi secara

BSLTEkstrak

Nilai LC50 (bpj)

Strawberry Arbei

Etanol 96% 80,56 85,70

n-heksana 324,34 232,65

Etil asetat 115,32 108,22

n-butanol 159,62 169,08

Simpulan dan SaranSimpulan1. Hasil penapisan fitokimia terhadap buah strawberry dan arbei

segar, ekstrak etanol 96% menunjukkan adanya senyawa flavonoid, saponin, tanin, steroid/triterpenoid, minyak atsiri. Ekstrak pada fase n-heksana menunjukkan adanya senyawa steroid/triterpenoid dan minyak atsiri, ekstrak pada fase etil asetat dan n-butanol menunjukkan adanya senyawa flavonoid, saponin, tanin, dan steroid/triterpenoid.

2. Pada uji aktivitas antioksidan dengan DPPH dan uji aktivitas biologi secara BSLT terhadap ekstrak buah strawberry dan arbei menunjukkan ekstrak kental etanol 96% memiliki aktivitas antioksidan dan aktivitas biologi tertinggi. Nilai IC50 ekstrak kental etanol 96% buah strawberry sebesar 53,12 bpj dan nilai LC50 sebesar 80,56 bpj, sedangkan nilai IC50 ekstrak kental etanol 96% buah arbei sebesar 36,31 bpj dan nilai LC50 sebesar 85,70 bpj.

Simpulan3. Berdasarkan uji aktivitas antioksidan dengan DPPH

dan uji aktivitas biologi secara BSLT diperoleh data bahwa ekstrak etanol 96% dari buah strawberry dan arbei memiliki aktivitas antioksidan dan aktivitas biologi tertinggi. Hal tersebut diduga karena adanya golongan senyawa flavonoid, saponin, dan tanin.

• SaranPerlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui senyawa aktif yang terkandung dalam buah strawberry dan buah arbei yang bersifat antioksidan dan mempunyai aktivitas biologi terhadap Artemia salina Leach.

Terima kasih

Pembuatan Lar. DPPH

± 4 mg DPPH (BM 394,32)

Metanol p.a ad 25,0 mL

Pembuatan Lar. Blangko

Dipipet 1 mL lar. DPPH

Metanol p.a ad 5,0 mL

Pembuatan Lar. uji

Larutan Induk (1000 bpj) Dipipet 25, 50,

125, 250, 500 µL

+ 1,0 mL lar. DPPH

metanol p.a ad. 5,0 mL

Pembuatan Lar. Vit.C

Larutan Induk (1000 bpj) Dipipet

10,20,30,40,dan 50 µL

+ 1,0 mL lar. DPPH

metanol p.a ad. 5,0 mL

Penetasan telur Artemia salina Leach

Air laut sintetik ( 38 g garam tanpa iodium+air 1L) → saring dg kertas

whatman → dimasukkan telur Artemia salina Leach

(sinari dg lampu TL 18watt)

Uji aktivitas biologi secara BSLTLarutan induk

( 20 mg ekstrak + pelarut ad. 2mL )

Pipet 500 µL

Uapkan+

Air laut ± 3 mL

Pipet 50 µLUapkan

+Air laut ± 3

mL

Pipet 5µLUapkan

+Air laut ± 3

mL

Masukkan 10 ekor larva

udang+ air laut ad

5mL

Masukkan 10 ekor larva

udang+ air laut ad

5mL

Masukkan 10 ekor larva

udang+ air laut ad

5mL1000 bpj 100 bpj 10 bpj

Diamkan selama 24 jam

Diamati jumlah kematian larva udang

Hitung nilai LC50

REAKSI ANTARA DPPH DENGAN HIDROGEN DARI ANTIOKSIDAN

*N-N(C6H5)2

NO2

NO2

O2N

+ AH

NH-N(C6H5)2

NO2O2N

NO2

+ A*

1,1-difenil-2-pikrilhidrazil 1,1-difenil-2-pikrilhidrazin

Rumus sruktur DPPH

*N-N(C6H5)2

NO2O2N

NO2

Struktur kimia polifenol (Quercetin)

Contoh perhitungan aktivitas antioksidan

Konsentrasi (µg/mL)

Ab As

5

0,7300

0,6702

10 0,6488

25 0,4533

50 0,3216

100 0,1472

Data uji aktivitas antioksidanpada ekstrak etanol 96% buah strawberry

Contoh perhitungan aktivitas antioksidan (lanjutan)

1. Pada konsentrasi 5 µg/mL

2. Pada konsentrasi 10 µg/mL

3. Pada konsentrasi 25 µg/mL

4. Pada konsentrasi 50 µg/mL

5. Pada konsentrasi 100 µg/mL

%1918,8%1007300,0

6702,07300,0

x

%1233,11%1007300,0

6488,07300,0

x

%9041,37%1007300,0

4533,07300,0

x

%9452,55%1007300,0

3216,07300,0

x

%8356,79%1007300,0

1472,07300,0

x

Contoh perhitungan aktivitas antioksidan (lanjutan)

Perhitungan persamaan regresi antara konsentrasi (μg/mL) dan peredaman radikal bebas (%)y = bx + aKeterangan : y = 50x = IC50

   Perhitungan nilai IC50 ekstrak etanol 96% dari

buah strawberry, dengan konsentrasi (μg/mL) sebagai sumbu x dan peredaman radikal bebas (%) sebagai sumbu y, maka didapat persamaan regresiy = bx + a50 = 0,7540x + 9,9480x = IC50 = 53,12 μg/mL

Contoh perhitungan aktivitas biologi secara BSLT dengan probit

C (bpj)

Log C ∑ mati ∑ total % kematian

Probit LC50 (bpj)

1000 3 30 30 100 8

169,08100 2 7 30 23,33 4,2633

10 1 0 30 0 0

Data hasil uji aktivitas biologi ekstrak fase n-butanol buah arbei

Contoh perhitungan aktivitas biologi secara BSLT dengan probit (lanjutan)

Perhitungan persamaan regresi antara log konsentrasi dan nilai probity = bx + aKeterangan : y = 5

x = log konsentrasi   Perhitungan nilai LC50 ekstrak fase n-butanol dari

buah arbei dengan log konsentrasi sebagai sumbu x dan nilai probit sebagai sumbu y, maka didapat persamaan regresiy = bx + a5 = 4x + -3,9122x = 2,2281LC50 = 169,0830 ~ 169,08 bpj

Contoh perhitungan aktivitas biologi secara BSLT dengan regresi linier (non probit)

C (bpj) Log C ∑

mati∑

hidup ∆ mati ∆ hidup Total%

kematian

1000 3 30 0 37 0 37 100

100 2 7 23 7 23 30 23,3333

10 1 0 30 0 53 53 0

Data hasil uji aktivitas biologi ekstrak fase n-butanol buah arbei

Contoh perhitungan aktivitas biologi secara BSLT dengan regresi linier (lanjutan)

Perhitungan persamaan regresi antara log konsentrasi dan persen kematiany = bx + aKeterangan : y = 50

x = log konsentrasi   Perhitungan nilai LC50 ekstrak fase n-butanol

dari buah arbei dengan log konsentrasi sebagai sumbu x dan nilai persen kematian sebagai sumbu y, maka didapat persamaan regresiy = bx + a50 = 50x + -58,8889x = 2,1778LC50 = 150,5913 ~ 150,59 bpj

Gambar pohon strawberry

Gambar pohon arbei

Penapisan fitokimia