bab iii fenol

BAB III

METODE

3.1 Waktu dan Tempat

Praktikum uji koefisien fenol pada sampel pembersih lantai Veja dilakukan pada :

a) Hari, tanggal : Rabu, 14 Mei 2014

b) Tempat : Laboratorium Bakteriologi Jurusan Analis Kesehatan

Politeknik Kesehatan Denpasar

3.2 Alat dan Bahan

A. ALAT

1. Neraca analitik

2. Gelas beaker 50 ml, 100 ml

3. Tabung reaksi

4. Rak tabung reaksi

5. Gelas ukur 250 ml

6. Pipet ukur 1 ml, 10 ml

7. Bola hisap

8. Erlenmeyer 100, 250, 500 ml

9. Botol steril

10. Ose bulat

11. Plate/petridish

12. Tabung fenol

13. Api spiritus/Bunsen

14. Api Bunsen

15. Autoclave

16. Botol steril

17. Kertas label

18. Spatel

19. Ose

20. Kompor listrik

21. Benang pulung/ tali

22. Botol semprot

B. BAHAN

1. Kapas berlemak

2. Aluminium foil

3. Benang pulung

4. Label

5. Sampel Desinfektan pembersih lantai Veja

6. Koloni bakteri Salmonella sp

C. MEDIA/REAGEN

1. Bubuk Nutrien Agar (NA) OXOID CM0003

2. Aquades steril

3. Fenol

3.3 Cara Kerja

3.3.1 Pembuatan media Nutrient Agar

1. Media NA dibuat sebanyak 200 ml, sehingga harus dihitung dahulu massa media

yang ditimbang yaitu : 28/1000 x 250 = 7 g

2. Ditimbang 7 gram bubuk nutrient agar (NA) OXOID CM0003 pada neraca

analitik dengan menggunakan gelas beaker.

3. Dilarutkan dengan aquades dan diaduk hingga homogen.

4. Dimasukkan ke dalam Erlenmeyer dan ditambahkan aquades sampai volumenya

mencapai 250 ml.

5. Lalu ditutup dengan aluminium foil.

6. Dipanaskan hingga larut sempurna pada kompor listrik dan dicek-PHnya (PH

media = 7,4).

7. Disterilisasi pada autoclave dengan suhu 1210C selama 15 menit.

8. Dituang ke dalam 20 plate sebanyak 15-20 ml (40-500C).

9. Media siap digunakan.

3.3.2 Pembuatan pengenceran fenol (standar baku)

1. Tabung reaksi disiapkan sebanyak 3 buah dan dilabeli.

2. Pada masing-masing tabung dibuat :

Pengenceran 1:70 : 6,9 ml aquades steril + 0,1 ml fenol.



3.3.3 Pembuatan pengenceran desinfektan

1. Tabung reaksi disiapkan sebanyak 3 buah dan dilabeli.

2. Pada masing-masing tabung dibuat :

Pengenceran 1:100 : 9,9 ml aquades steril + 0,1 ml desinfektan.



3.3.4 Pembuatan formulasi bakteri

1. Disiapkan 1 buah tabung reaksi.

2. 3,5 ml aquades steril dimasukkan ke dalam tabung.

3. 1-2 ose koloni bakteri diambil dengan ose bulat steril dan dihomogenkan pada

aquades steril tersebut hingga terbentuk kekeruhan yang diinginkan.

3.3.5 Tahap Pengujian

1. Sebanyak 0,5 ml formulasi bakteri dimasukkan kedalam masing-masing pengenceran

fenol dan desinfektan serta dihomogenkan (dengan perhitungan waktu agar tidak

lebih dari 5 menit).

2. Cawan petri yang berisi Nutrient Agar diberi kode pengenceran untuk Fenol dan

Desinfektan.

3. Setelah 5 menit, setiap pengenceran fenol dan desinfektan diinokulasikan pada media

Nutrient Agar dengan ose bulat (digoreskan).

4. Setelah 10 menit, setiap pengenceran fenol dan desinfektan diinokulasikan lagi pada

media nutrient agar yang baru dengan ose bulat (digoreskan).

5. Setelah semua ditanam kemudian diinkubasikan pada incubator selama 48 jam

dengan suhu 370C.

6. Dilihat pertumbuhan bakterinya pada masing-masing waktu dan pengenceran fenol

dan desinfektan.

7. Dihitung nilai koefisien fenolnya dengan rumus :

KF = DF/F

Keterangan :

KF : Koefisien fenol

D : Pengenceran tertinggi desinfektan yang mematikan kuman dalam 10 menit tapi

tidak mematikan kuman dalam 5 menit.

F : Pengenceran tertinggi fenol yang mematikan kuman dalam 10 menit tapi tidak

mematikan kuman dalam 5 menit.

BAB IV

PEMBAHASAN

4.1. Hasil pengamatan

A. Pembuatan media

Gambar Keterangan

Media NA (Nutrient Agar) :

berwarna kuning jernih

konsistensi padat

dalam keadaan steril

Fenol

berwarna merah

konsistensi cair

dalam keadaan steril

Keterangan :

- Koloni bakteri Salmonella sp

berwarna kuning.

- Warna media juga kuning.

-Konsistensi padat

B. Pembuatan pengenceran fenol (standar baku)

Gambar Keterangan

Disiapkan alat dan bahan yang

dibutuhkan. Kemudian siapkan

masing-masing 3 tabung untuk

pengenceran fenol dan

desinfektan. Lalu diberi label.

Pengenceran 1:70 yaitu dipipet

6,9 ml aquades steril + 0,1 ml

fenol.



fenol.



fenol.

C. Pembuatan pengenceran desinfektan

Gambar Keterangan

Desinfektan yang diuji adalah

pembersih lantai merk Veja.

Pengenceran 1:100 yaitu

dipipet 9,9 ml aquades steril

+ 0,1 ml desinfektan.

D. Pembuatan Formulasi Bakteri

Gambar Keterangan

Disiapkan 1 buah tabung

rekasi lalu dimasukkan 3,5 ml

aquades steril.

1-2 ose koloni bakteri diambil

dengan ose bulat steril dan

dihomogenkan pada aquades

steril tersebut hingga terjadi

kekeruhan.

0,5 ml formulasi bakteri

dimasukkan ke masing-

masing pengenceran fenol

dan desinfektan.

Setelah 5 menit setiap

pengenceran fenol (F5) dan

desinfektan (D5)

diinokulasikan pada media

NA.



desinfektan (D10)


NA.

Desin-fektan

Fenol

Fenol

Desin-fektan



desinfektan (D15)


NA.

Setelah semua ditanam lalu

diinkubasi pada incubator

selama 48 jam dengan suhu

370C.

E. Gambar hasil pemeriksaan Uji Koefesiensi Fenol

Waktu

5 menit 10 menit 15 menit

Fenol

1:70 - - -

1:80 - - -

1:90 - - -

Disinfektan

1:100 - - -

1:150 - + +

1:200 - - +

Keterangan :

(+) terdapat koloni bakteri(-) tidak terdapat koloni bakteri

Gambar Keterangan

Hasil Inokulasi F5 dan D5 setelah di

inkubasi tidak terdapat koloni bakteri

pada media NA jadi hasilnya negatif.

Ini artinya baik fenol dan Pembersih

lantai Veja dapat mematikan kuman

dalam waktu 5 menit.

Hasil Inokulasi F10 dan D10 setelah

di inkubasi. Pada fenol tidak terdapat

koloni bakteri jadi hasilnya negatif.

Sedangkan pada desinfektan dengan

pengenceran 1:150 menunjukkan hasil

positif terdapat koloni bakteri namun

pada pengenceran desinfektan lainnya

menunjukkan hasil negatif. Ini artinya

fenol dapat mematikan kuman dalam

waktu 10 menit. Pembersih lantai

Veja kurang ampuh mematikan

Koloni bakteri

kuman dalam waktu 10 menit.

Hasil Inokulasi F10 dan D10 setelah

di inkubasi. Pada fenol tidak terdapat

koloni bakteri jadi hasilnya negatif.

Sedangkan pada desinfektan dengan

pengenceran 1:150 dan 1:200

menunjukkan hasil positif terdapat

koloni bakteri namun pada

pengenceran desinfektan lainnya

menunjukkan hasil negatif. Ini artinya

fenol dapat mematikan kuman dalam

waktu 15 menit. Pembersih lantai

Veja kurang ampuh mematikan

kuman dalam waktu 15 menit.

Koloni bakteri

bab iii fenol

Documents