andre fixer

PROPOSAL PROGRAM KREATIVITAS MAHASISWAJUDUL PROGRAM

UJI AKTIVITAS FLAVONOID DALAM FRAKSI KLOROFORM KULIT BATANG CEMPAKA KUNING (Michelia champaca L) SEBAGAI

ANTITUBERKULOSIS TERHADAP ISOLAT Mycobacterium tuberculosis STRAIN MULTI-DRUG RESISTANT

BIDANG KEGIATAN:PKM PENELITIAN

Diusulkan oleh:Ketua : Putu Andre Angga Agastia (1108505059 / Angkatan 2011)Anggota 1 : Pande Made Diah Antaryami (1208505041 / Angkatan 2012)

Harum Pawitri RimbawanAnggota 2 : I Dewa Gede Panca Yoga (1208505048 / Angkatan 2012)

SubrathaAnggota 3 : Kadek Chintya Sanita Dewi (1408505053 / Angkatan 2014)

UNIVERSITAS UDAYANADENPASAR

2014

i

PENGESAHAN USULAN PKM-PENELITIAN1. Judul kegiatan : Uji Aktivitas Flavonoid Dalam Fraksi Kloroform

Kulit Batang Cempaka Kuning (Michelia champaca L.) Sebagai Antituberkulosis Terhadap Isolat Mycobacterium tuberculosis Strain Multi-Drug Resistant

2. Bidang Kegiatan : PKM-P3. Ketua Pelaksana Kegiatan

a. Nama Lengkap : Putu Andre Angga Agastiab. NIM : 1108505059c. Jurusan : Farmasid. Perguruan Tinggi : Universitas Udayanae. Alamat dan No HP : Jalan Taman Sekar V Blok 46/085737323997f. Email : [email protected]

4. Anggota Pelaksana Kegiatan/Penulis : 5 orang

5. Dosen Pendampinga. Nama Lengkap : Ni Putu Ariantari, S.Farm., M. Farm., Apt.b. NIDN : 0007128102

c. Alamat dan No HP : Jl. Taman Giri Perum. Peson Giri Paramitha 2 F-7, Kampial, Kuta Selatan, Badung-Bali/081337047287

6. Biaya Kegiatan Totala. Dikti : Rp 11.800.000b. Sumber lain : -

7. Jangka Waktu Pelaksanaa : 5 bulan

Denpasar, 17 September 2014MenyetujuiKetua Jurusan Farmasi FMIPA Ketua Pelaksana KegiatanUniversitas Udayana

(Dr. rer. Nat. I M.A.G. Wirasuta, M.Si., Apt.) (Putu Andre Angga Agastia)NIP. 196804201994021001 NIM. 1108505059

Pembantu Rektor III Dosen Pendamping

(Dr. I Nyoman Suyatna, SH., MH.) (Ni Putu Ariantari, S.Farm., M.Farm., Apt.)NIP. 195909231986011001 NIDN. 0007128102

ii

DAFTAR ISIHalaman

HALAMAN SAMPUL................................................................................ iLEMBAR PENGESAHAN ........................................................................ iiDAFTAR ISI................................................................................................ iiiDAFTAR GAMBAR................................................................................... vDAFTAR TABEL........................................................................................ viDAFTAR LAMPIRAN................................................................................ viiRINGKASAN..............................................................................................viiiBAB 1 PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang..................................................................... 11.2. Rumusan Masalah................................................................ 21.3. Tujuan Khusus...................................................................... 21.4. Urgensi Penelitian................................................................ 21.5. Luaran yang Diharapkan...................................................... 21.6. Manfaat Kegiatan................................................................. 2

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA1.7. Cempaka Kuning (Michelia champaca L.).......................... 3

1.7.1. Klasifikasi Tanaman.................................................. 31.7.2. Deskripsi Tanaman ................................................... 31.7.3. Khasiat ...................................................................... 31.7.4. Kandungan Kimia...................................................... 3

1.8. Tuberkulosis......................................................................... 41.9. Ekstraksi............................................................................... 41.10.Fraksinasi.............................................................................. 4

BAB 3 METODE PENELITIAN1.11.Tahapan Penelitian............................................................... 51.12.Variabel Penelitian .............................................................. 51.13.Tempat dan Waktu Penelitian ............................................. 51.14.Subyek Penelitian ................................................................ 51.15.Bahan Penelitian .................................................................. 5

3.5.1 Bahan Tanaman ......................................................... 53.5.2 Bahan Kimia untuk Ekstraksi dan Fraksinasi ........... 53.5.3 Bahan untuk Uji Aktivitas Antituberkulosis ............. 5

1.16.Alat Penelitian ..................................................................... 51.17.Prosedur Kerja ..................................................................... 6

1.17.1.................................................................................... Determinasi Jenis Tanaman................................................. 6

1.17.2.................................................................................... Pengumpulan dan Preparasi Sampel..................................... 6

1.17.3....................................................................................Pembuatan Ekstrak Kloroform Kulit Batang ..................................................................................... 6

iii

1.17.4....................................................................................Fraksinasi Ekstrak Kloroform Kulit Batang M. champaca L. dengan Metode KVC.................................................. 6

1.17.5.................................................................................... Uji Aktivitas Antituberkulosis 6

1.18.Analisis Data........................................................................ 8BAB 4 BIAYA DAN JADWAL KEGIATAN

1.19.Anggaran Biaya.................................................................... 91.20.Jadwal Kegiatan................................................................... 9

DAFTAR PUSTAKA.................................................................................. 10LAMPIRAN................................................................................................. 11

iv

DAFTAR GAMBARHalaman

Gambar 2.1. Tanaman cempaka (M. champaca L.)..................................... 3Gambar 3.1. Skema Umum Penelitian......................................................... 8

v

DAFTAR TABELHalaman

Tabel 4.1. Ringkasan Anggaran Biaya PKM-P.......................................... 9Tabel 4.2. Jadwal Pelaksanaan Kegiatan..................................................... 9

vi

DAFTAR LAMPIRANHalaman

Lampiran 1. Biodata Ketua, Anggota dan Dosen Pembimbing................... 11Lampiran 2. Justifikasi Anggaran Kegiatan................................................. 17Lampiran 3. Susunan Organisasi Tim Peneliti dan Pembagian Tugas........ 20Lampiran 4. Surat Pernyataan Ketua Peneliti/Pelaksana............................. 21

vii

RINGKASAN

Dalam Ayurveda, kulit batang cempaka kuning (Michelia champaca L.), suku Magnoliaceae secara tradisional digunakan sebagai obat batuk. Penelitian sebelumnya melaporkan ekstrak n-heksan kulit batang cempaka kuning diketahui memiliki kandungan kimia minyak atsiri dan triterpenoid, ekstrak kloroform mengandung minyak atsiri, triterpenoid dan flavonoid, serta ekstrak metanol mengandung minyak atsiri, triterpenoid, tanin dan flavonoid. Pada dosis 10 mg/mL ekstrak kloroform memiliki persentase hambatan hingga pengamatan terakhir sebesar 91,73%. Dalam ekstrak tersebut terdapat senyawa flavonoid yang diduga termasuk golongan dihidroflavonol, auron, flavanon, atau flavonol. Penelitian ini bertujuan Untuk mengetahui aktivitas hambatan senyawa flavonoid yang terkandung dalam fraksi kloroform kulit batang cempaka kuning (Michelia champaca L.) terhadapn isolat M. tuberculosis strain MDR. Ekstraksi dilakukan dengan maserasi menggunakan pelarut kloroform. Proses ini dilakukan sebanyak 4 kali. Filtrat diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu 50°C sehingga diperoleh ekstrak kental yang selanjutnya dikeringkan dalam oven suhu 40°C. Fraksinasi dilakukan dengan metode KVC (Kromatografi Vakum Cair), dengan fase diam serbuk silica dan fase gerak sistem gradient yaitu dengan perbandingan n-heksana:etil asetat (8:2; 7:3; 6:4; 5:5; 4:6; 3:7; 2:8 v/v). Fraksi tampungan yang dihasilkan, diperiksa profil kromatogramnya dengan metode KLT menggunakan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak n-heksana:etil asetat (5:1 v/v), kemudian disemprot dengan H2SO4 10% dan diuapi dengan amonia. Fraksi yang memberikan profil bercak yang sama dikumpulkan menjadi satu, diuapkan, dan ditimbang.

Aktivitas antituberkulosis fraksi kloroform secara in vitro terhadap isolat M. tuberculosis strain MDR. Metode uji yang digunakan adalah metode L-J (Loweinstein Jensen). Media L-J serta bakteri uji dimasukan dalam tabung reaksi yang telah steril kemudian dimasukan larutan ekstrak kulit batang M. champaca Linn. Dengan konsentrasi sesuai dengan masing-masing perlakuan begitu juga dengan larutan DMSO, Rifampisin dan INH dimasukan dalam masing-masing kelompok kontrol normal dan kelompok kontrol positif. Penelitian menggunakan 5 tabung yang kemudian dibagi ke dalam 5 kelompok yaitu kelompok I merupakan kontrol negatif, kelompok II merupakan kontrol obat Rifampisin dosis 40 μg/mL, kelompok III-V merupakan kelompok perlakuan dengan pemberian fraksi kloroform M. champaca Linn. dengan konsentrasi masing-masing 0,1mg/mL, 1 mg/mL, dan 10 mg/mL. Masing-masing kelompok terdiri dari 1 biakan bakteri. Semua kelompok diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37° C pada inkubator CO2 selama 6 minggu Pengamatan dilakukan setiap hari dari minggu ke-III sampai ke-IV. Analisis data dengan membandingkan jumlah cfu (colony forming unit) dari kelompok perlakuan terhadap kontrol. Ekstrak memiliki aktivitas tuberkulosis apabila mampu memberi hambatan ≥ 90%.

Kata kunci : Antituberkulosis, Michelia champaca, Mycobacterium tuberculosis strain MDR, Loweinstein Jensen

viii

1

BAB 1PENDAHULUAN

1.1. Latar BelakangTuberkulosis adalah penyakit menular langsung yang disebabkan oleh

Mycobacterium tuberculosis, yang sebagian besar (80%) menyerang paru-paru (DepKes RI, 2005). Pada tahun 2010, di dunia terdapat 8,8 juta kasus tuberkulosis dengan angka kematian sebesar 1,1 juta orang. Kasus tuberkulosis pada tahun 2011 di Indonesia juga sangat tinggi dengan jumlah penderita menduduki urutan keempat terbanyak di dunia setelah India, Cina, dan Afrika Selatan, dengan prevalensi sekitar 440.000-6300.000 per tahun dan jumlah kematian akibat TB diperkirakan 61.000 kematian per tahun (WHO, 2011).

Permasalahan tuberkulosis di dunia semakin memburuk dengan munculnya strain bakteri tuberkulosis yang resisten terhadap obat antituberkulosis baik lini pertama maupun lini kedua. Terapi jangka panjang selama 6 hingga 9 bulan seringkali menyebabkan pasien tidak tuntas dalam menggunakan terapi. Hal ini menyebabkan beberapa orang telah mulai teridentifikasi membawa bakteri yang resisten terhadap obat antituberkulosis yang ada (DepKes RI, 2006).

Resistensi bakteri tuberkulosis terhadap obat antituberkulosis dapat berupa monoresistensi, MDR, XDR atau TDR. MDR merupakan resistensi tuberkulosis terhadap setidaknya 2 jenis obat lini pertama yaitu rifampisin dan INH. Dari total kasus tuberkulosis secara global, sebanyak 3,6% diperkirakan memiliki resistensi terhadap obat lini pertama (WHO, 2012).

Permasalahan resistensi obat ini mendorong perlunya penelitian mengenai obat baru dalam menanggulangi masalah tuberkulosis. Usaha pengembangan obat baru, dapat dilakukan dengan eksplorasi dari bahan alam berdasarkan pendekatan dari sistem pengobatan tradisional (etnomedisin) dan pendekatan kemotaksonomi. Dalam Ayurveda, kulit batang cempaka kuning (Michelia champaca L.), suku Magnoliaceae secara tradisional digunakan sebagai obat batuk (Dwajani dan Shanbhag, 2009).

Penelitian yang dilakukan oleh Ariantari dan Rustini (2011) melaporkan bahwa ekstrak n-heksan kulit batang cempaka kuning diketahui memiliki kandungan kimia minyak atsiri dan triterpenoid, ekstrak kloroform mengandung minyak atsiri, triterpenoid dan flavonoid, serta ekstrak metanol mengandung minyak atsiri, triterpenoid, tanin dan flavonoid.

Yanti dkk., (2014) melaporkan bahwa pada dosis 10 mg/mL ekstrak kloroform memiliki persentase hambatan hingga pengamatan terakhir sebesar 91,73%. Dalam ekstrak tersebut terdapat senyawa flavonoid yang diduga termasuk golongan dihidroflavonol, auron, flavanon, atau flavonol. Berdasarkan profil kromatogram dan pola persentase hambatan dari ekstrak yang aktif sebagai antituberkulosis maka ekstrak kloroform juga dapat

2

dikembangkan sebagai penuntun untuk menemukan senyawa yang bertanggung jawab terhadap aktivitas antituberkulosis dari kulit batang M. champaca L.

Proses penelusuran kandungan kimia ini dapat dilakukan melalui proses pemisahan yang dipandu aktivitas. Sehingga akan diperoleh beberapa fraksi disertai kandungan kimia yang terdapat pada masing-masing fraksi dan profil aktivitas fraksi tersebut (Sarker dan Nahar, 2007).

Berdasarkan latar belakang diatas maka pada penelitian ini akan dilakukan uji aktivitas flavonoid dalam fraksi kloroform kulit batang cempaka kuning (Michelia champaca L.) sebagai antituberkulosis terhadap isolat Mycobacterium tuberculosis Strain Multi-Drug Resistant.

1.2. Rumusan MasalahBerdasarkan latar belakang di atas maka dapat dirumuskan permasalahan

sebagai berikut : apakah senyawa flavonoid yang terkandung dalam fraksi kloroform kulit batang cempaka kuning (M.champaca Linn.) memiliki aktivitas hambatan terhadap isolat M. tuberculosis strain MDR.

1.3. Tujuan KhususUntuk mengetahui aktivitas hambatan senyawa flavonoid yang terkandung

dalam fraksi kloroform kulit batang cempaka kuning (Michelia champaca L.) terhadapn isolat M. tuberculosis strain MDR.

1.4. Urgensi PenelitianUrgensi dari penelitian ini yang bisa disampaikan adalah tingginya angka

prevalensi penyakit tuberkulosis yang disertai resistensi di dunia, sehingga diperlukan pengembangan obat untuk mengurangi angka prevalensi penyakit tuberkulosis.

.1.5. Luaran yang Diharapkan

Dari penelitian ini diharapkan untuk dapat dibuat artikel ilmiah mengenai aktivitas senyawa flavonoid yang terkandung dalam fraksi kloroform kulit batang cempaka kuning (Michelia champaca L.).

1.6. Manfaat KegiatanHasil penelitian ini diharapkan dapat digunakan dalam pengembangan obat

herbal antituberkulosis dari kulit batang Michelia champaca L.

3

BAB 2TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Cempaka ( Michelia champaca L.)2.1.1 Klasifikasi Tanaman

Divisi : SpermatophytaKelas : DicotyledoneaeBangsa : RanalesSuku : MagnoliaceaeMarga : MicheliaJenis : Michelia champaca L.

Gambar 2.1Tanaman M. champaca L ( Wijayakusuma, 2000).

2.1.2 Deskripsi TanamanHabitus pohon, tinggi 15-25 m, ujung ranting berambut. Daun bulat

telor memanjang dengan ujung dan pangkal runcing, panjang 10-28 cm, lebar 4,5-11 cm. Bunga berdiri sendiri/tunggal, warnanya kuning oranye, baunya sangat harum. Buah bentuk bola memanjang. Batang berbentuk bulat, lurus, kulit batangnya halus berwarna cokelat keabu-abuan, diameter batangnya sampai 180 cm (Wijayakusuma, 2000).

2.1.3 KhasiatTiap bagian tanaman cempaka kuning mempunyai khasiat berbeda

berdasarkan pengobatan empiris. Bunga cempaka kuning digunakan sebagai aroma perawatan rambut. Daunnya memiliki khasiat mengobati perut mulas, batu ginjal dan bau mulut. Kulit kayunya digunakan untuk mengobati demam serta haid tidak teratur (Widyaningrum, 2011).

2.1.4 Kandungan KimiaKulit batang M. champaca dilaporkan mengandung senyawa

golongan triterpenoid, steroid, dan asam lemak (Chandrashekar et al., 2010).

4

2.2 TuberkulosisTuberkulosis merupakan infeksi bakteri kronik yang disebabkan oleh

Mycobacterium tuberculosis pembentukan granuloma pada jaringan yang terifeksi dan oleh hipersensitivitas yang diperantarai sel (Asdie, 1995). Tuberkulosis yang menyerang organ paru disebut dengan tuberkulosis paru sedangkan yang menyerang kelenjar limfe, kulit, otak, tulang, usus dan ginjal disebut dengan tuberkulosis ekstra paru (Smith, 2003).

Mycobacterium. tuberculosis merupakan bakteri obligat aerob. Pada kultur, M. tuberculosis tumbuh lambat dengan waktu penggandaan 14-15 jam. Suhu optimum pertumbuhannya adalah 37°C. Bakteri ini tidak dapat tumbuh pada suhu di bawah 25°C dan di atas 40°C, pH optimum untuk pertumbuhan M. tuberculosis adalah 6,4-7 (Parija, 2009).

2.3 Ekstraksi Ekstraksi merupakan proses pemisahan bagian aktif jaringan tanaman

atau hewan dari komponen tidak aktif dengan menggunakan pelarut tertentu dan prosedur ekstraksi standar. Maserasi adalah metode yang dilakukan dengan merendam serbuk simplisia dengan pelarut yang sesuai, tempat tertutup dan pada suhu ruangan. Digesti adalah cara maserasi kinetik dengan menggunakan pemanasan lemah, yaitu pada suhu 40o-50o C dan disertai dengan pengadukan kontinu. Metode perkolasi dilakukan dengan mengaliri pelarut pada serbuk simplisia dalam perkolator. Pelarut yang ditambahkan akan mengaliri serbuk perlahan-lahan dari atas perkolator hingga mencapai dasar percolator perkolator. Sokhletasi merupakan penyarian simplisia secara berkesinambungan menggunakan alat sokhlet. Refluks adalah kelanjutan dari proses maserasi atau perkolasi untuk mendapatkan ekstrak cair yaitu dengan proses penguapan dengan menggunakan alat refluks (Handa, 2008).

2.4 FraksinasiProses fraksinasi dapat dilakukan melalui metode kromatografi vakum

cair dan kromatografi kolom lambat. Kromatografi vakum cair dapat dianggap sebagai KLT preparatif yang dijalankan dalam bentuk kolom. Pada KVC digunakan vakum pada bagian akhir kolom untuk mempercepat laju aliran eluen. Fase diam yang dapat digunakan antara lain aluminium oksida, silika gel, CN, diol, poliamida, atau fase balik. Eluen yang biasanya digunakan adalah heksana yang dilanjutkan dengan campuran heksana dan etil asetat dengan peningkatan proporsi etil asetat untuk meningkatkan kepolarannya. Keuntungan metode ini dibandingkan kromatografi kolom lambat yaitu, menurunkan biaya, menghemat waktu, dan meningkatkan resolusi (Sticher, 2007).

5

BAB 3METODE PENELITIAN

3.1 Tahapan PenelitianPenelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorik dan

dilakukan dalam beberapa tahap yaitu :1. Ekstraksi kulit batang M. champaca L. dengan metode maserasi dan

fraksinasi dengan metode KVC.2. Uji potensi antituberkulosis flavonoid dalam fraksi kloroform kulit

batang cempaka dengan metode proporsi dengan media L-J (Loweinstein Jensen).

3.2 Variabel Penelitian1. Variabel bebas : Dosis fraksi kloroform kulit batang M. champaca Linn.2. Variabel terikat : persentase (%) hambatan fraksi kloroform kulit batang

cempaka kuning terhadap M. tuberculosis strain MDR.

3.3 Tempat dan Waktu PenelitianPenelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi dan Fitokimia

Jurusan Farmasi Fakultas MIPA dan Laboratorium Mikrobiologi RSUP Sanglah untuk melakukan uji aktivitas antituberkulosis. Penelitian ini dilakukan selama 5 bulan.

3.5 Bahan Penelitian3.5.1 Bahan tanaman

Sampel kulit batang M. champaca Linn. yang diperoleh dari daerah Pupuan, Tabanan.

3.5.2 Bahan kimia untuk ekstraksi dan fraksinasiPelarut yang digunakan untuk ekstraksi dan fraksinasi kulit batang

M. champaca Linn adalah kloroform, n-heksana dan etil asetat.3.5.3 Bahan kimia untuk uji aktivitas antituberkulosis

Bahan-bahan yang digunakan dalam uji aktivitas antituberkulosis adalah media L-J, DMSO, rifampisin dan INH.

3.6 Alat PenelitianAlat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas, stamper,

mortir, alat penggiling (blender), timbangan analitik, desikator, cawan porselen, oven, vaccum rotary evaporator, autoclave, incubator, pompa vakum, kolom KVC lampu UV254 dan UV366.

6

3.7 Prosedur Kerja3.7.1 Determinasi jenis tumbuhan

Determinasi tanaman M. champaca Linn. dilakukan di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia Kebun Raya Eka Karya Bedugul.

3.7.2 Pengumpulan dan preparasi sampelSampel kulit batang M. champaca Linn. diperoleh dari wilayah

Pupuan, Tabanan. Sampel kulit batang dikumpulkan, dicuci, dikeringkan, dan digiling hingga diperoleh serbuk.

3.7.3 Pembuatan ekstrak kloroform kulit batang M. champaca Linn.Sebanyak satu kilogram serbuk kulit batang M. champaca L.

dimaserasi menggunakan 5 L kloroform selama 24 jam, lalu maserat yang dihasilkan disaring sehingga diperoleh filtrat dan residu. Proses ini dilakukan sebanyak 4 kali. Filtrat kloroform diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu 50°C sehingga diperoleh ekstrak kental yang selanjutnya dikeringkan dalam oven suhu 40°C. Ekstrak kental yang diperoleh kemudian ditimbang menggunakan timbangan analitik. Luaran dari proses ini adalah dihasilkannya ekstrak kloroform kulit batang M. champaca Linn, sedangkan indikator keberhasilannya adalah ekstrak yang diperoleh berupa ekstrak kental (crude extract).

3.7.4 Fraksinasi ekstrak kloroform kulit batang M. champaca L. dengan metode KVC

Sebanyak 10 gram fase diam silika dimasukkan dalam kolom. Kolom dikondisikan dengan menuang fase gerak awal yang digunakan yaitu n-heksana:etil asetat (4:1 v/v) sebanyak 50 mL. Sebanyak 0,5 g ekstrak kloroform dilarutkan dalam pelarutnya, kemudian dikeringkan dengan silika dengan perbandingan 1:1 b/b, selanjutnya dimasukkan ke dalam kolom. Eluasi diawali dengan fase gerak n-heksana:etil asetat (8:2; 7:3; 6:4; 5:5; 4:6; 3:7; 2:8 v/v). Masing-masing eluen yang digunakan untuk setiap kali eluasi adalah 50 mL. Masing-masing fraksi tampungan yang dihasilkan, diperiksa profil kromatogramnya dengan metode KLT menggunakan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak n-heksana:etil asetat (5:1 v/v), kemudian disemprot dengan H2SO4 10% dan diuapi dengan amonia. Amati di bawah lampu UV366 nm. Fraksi yang memberikan profil bercak yang sama dikumpulkan menjadi satu, diuapkan, dan ditimbang. Luaran dari proses ini adalah diperolehnya fraksi yang postif mengandung flavonoid, sedangkan indikator keberhasilannya adalah fraksi berfluoresensi kuning intensif di bawah lampu UV366 nm.

3.7.5 Uji aktivitas antituberkulosisA. Pembuatan media kultur

Sterilisasi media L-J dalam autoklaf dengan suhu 1210C. Disiapkan 1000 ml suspensi telur dengan metode aseptis kemudian

7

dicampurkan dalam media dan didinginkan hingga suhu 60-500C. Kemudian masukan kedalam tabung reaksi yang steril, miringkan media kemudian panaskan pada suhu 850C selama 45 menit. Kontrol kualitas dilihat dari kehomogenan bahan, tidak adanya gelembung udara dan warna media ketika terpapar cahaya biru-hijau. Luaran dan indikator keberhasilan dari proses ini adalah diperolehnya media kultur yang homogeny dan steril.

B. Uji konfirmasi bakteri ujiUji konfirmasi bakteri uji dilakukan dengan pewarnaan bakteri

tahan asam Ziehl- Neelsen. Fiksasi hapusan bakteri dengan pemanasan kemudian genangi dengan carbolfuchsin, uapi perlahan-lahan selama 5 menit langsung diatas api (atau 20 menit di atas penguapan), setelah itu dibasuh dengan air. Dilakukan dekolorisasi dalam asam-alkohol (95% alkohol yang berisi 3% asam hidroklorat) sampai tinggal warna merah muda tipis kemudian basuh dengan air. Imbangi pewarnaan dengan methylene blue lofller selama 10-30 menit kemudian bilas dengan air dan biarkan mengering. Luaran yang diharapkan adalah memastikan bakteri yang diuji adalah M. tuberculosis, sedangkan indikator keberhasilannya adalah uji positif apabila bakteri berwarna merah.

C. Uji aktivitas antituberkulosisMetode uji yang digunakan adalah metode L-J (Loweinstein

Jensen). Media L-J serta bakteri uji dimasukan dalam tabung reaksi yang telah steril kemudian dimasukan larutan ekstrak kulit batang M. champaca Linn. dengan konsentrasi sesuai dengan masing-masing perlakuan begitu juga dengan larutan DMSO, Rifampisin dan INH dimasukan dalam masing-masing kelompok kontrol normal dan kelompok kontrol positif.

D. Perlakuan kelompok biakan bakteri ujiPenelitian menggunakan 5 tabung yang kemudian dibagi ke

dalam 5 kelompok yaitu kelompok I merupakan kontrol negatif, kelompok II merupakan kontrol obat Rifampisin dosis 40 μg/mL, kelompok III-V merupakan kelompok perlakuan dengan pemberian fraksi kloroform M. champaca Linn. dengan konsentrasi masing-masing 0,1mg/mL, 1 mg/mL, dan 10 mg/mL.

8

3.8 Analisis dataPersentase hambatan dihitung dengan membandingkan jumlah CFU dari

kelompok perlakuan terhadap kontrol negatif dengan menggunakan persamaan sebagai berikut:

Keterangan:CFU: Colony Forming Unit

Ekstrak dinyatakan memiliki aktivitas antituberkulosis apabila mampu memberi persentase hambatan ≥ 90%.

Gambar 3.1 Skema Umum Penelitian

% hambatan = CFU kontrol negatif-CFU perlakuanCFU kontrol negatif

x 100%

9

BAB 1VBIAYA DAN JADWAL KEGIATAN

4.1 Anggaran Biaya

Tabel 4.1 Ringkasan Anggaran Biaya PKM-P

No Jenis PengeluaranBiaya yang Diusulkan

(Rp)1 Peralatan Penunjang 2.950.0002 Bahan Habis pakai (material penelitian) 4.130.0003 Biaya Perjalanan 2.950.000

4Lain – lain : Biaya administrasi, laporan, publikasi ilmiah

1.770.000

Jumlah 11.800.000

4.2 Jadwal Kegiatan Tabel 4.2 Jadwal Pelaksanaan Kegiatan

No. Jenis Kegiatan Bulan ke-

1 2 3 4 5

1 Persiapan

2 Pengumpulan alat dan bahan

3 Ekstraksi dan Fraksinasi

4 Uji aktivitas antituberkulosis

5 Analisis data

6 Penyusunan laporan

15 Publikasi

10

DAFTAR PUSTAKA

Ariantari, N. P. dan Rustini, N. L. 2011. Kajian Potensi Antimalaria Kandungan Kimia dari Kulit Batang Michelia champaca L. terhadap Plasmodium falciparum (laporan penelitian). Jimbaran: Universitas Udayana.

.Asdie, A.H. 1995. Prinsip-Prinsip Ilmu Penyakit Dalam. Yogyakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC. P. 799-808.

Chandrashekar, K.S., Vignesh, H., dan Prasannna, K.S. 2010. Phytochemical Studies of Stem Bark of Michelia champaca Linn. International Research Journal of Pharmacy, Vol. 1 (1): 243-246.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2005. Pharmaceutical Care untuk Penyakit Tuberkulosis.Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. P. 12.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2006. Penanggulangan Tuberkulosis, Edisi 2. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. P. 2, 3, 19-21

Dwajani, S. dan Shanbhag, T. 2009. Michelia champaca: Wound Healing Activity in Immunosuppressed Rats. The Internet Journal of Alternative Medicine, Vol. 7 (2): 1540-1545.

Handa, S. S. 2008. An Overview of Extraction Techniques for Medicinal and Aromatic Plants. Trieste: International Centre for Science and High Technology. P. 21-26. 31-32.

Parija. 2009. Textbook of Microbiology and Immunology. India: Elsevier. P. 360Sarker, S.D. dan Nahar, L. 2007. Chemistry for Pharmacy Students. Engand: John

Wiley & Sons Ltd. P. 285-288. Smith, I. 2003. Mycobacterium tuberculosis Pathogenesis and Molecular

Determinants of Virulence. Clinical Microbiology Reviews, Vol 16 (3): 464-467.

Sticher, O. 2007. Natural Product Isolation. The Royal Society of Chemistry, Vol. 25: 517-554.

Wijayakusuma, M.H. 2000. Tumbuhan Berkhasiat Obat Indonesia. Jilid 1. Jakarta: Prestasi Insan Indonesia. P. 52-53.

Widyaningrum H. 2011. Kitab Tanaman Obat Nusantara. Yogyakarta: MedPress. P. 620-622.

World Health Organization. 2011. Global Tuberculosis Report 2011. France: World Health Organization. P.1-3, 20.

World Health Organization, 2012. Multidrug-resistant Tuberculosis (MDR-TB) 2012 Update. (serial online), (cited 2014 Agst, 17). Available from: http://www.who.int/entity/tb/publications /MDRFactSheet2012.pdf

Yanti, P.E.W., Ariantari, N.P., dan Dwija, I.B.N.P. 2014. Aktivitas Antituberkulosis Ekstrak n-Heksana Kulit Batang Cempaka Kuning terhadap Mycobacterium tuberculosis Strain Multidrug Resistant (laporan penelitian). Jimbaran : Universitas Udayana. P. 50

11

Lampiran 1. Biodata Ketua, Anggota dan Dosen PembimbingI. Ketua

A. Identitas Diri1 Nama Lengkap (dengan gelar) Putu Andre Angga Agastia2 Jenis Kelamin Laki-laki3 Program Studi Farmasi4 NIM 11085050595 Tempat dan Tanggal Lahir Tabanan, 3 September 19936 E-mail [email protected]

7 Nomor Telepon/HP 085737323997B. Riwayat Pendidikan

SD SMP SMA

Nama InstitusiSDN 1 Padang

SambianSMP PGRI 5

DenpasarSMAK

HarapanJurusan IPA

Tahun Masuk-Lulus

1999-2005 2005-2008 2008-2011

C. Pemakalah Seminar Ilmiah (Oral Presentation)No.

Nama Pertemuan Ilmiah / Seminar

Judul Artikel Ilmiah

Waktu dan Tempat

1 - - -D. Penghargaan dalam 10 Tahun Terakhir (dari pemerintah, asosiasi atau

institusi lainnya)No.

Jenis PenghargaanInstitusi Pemberi

PenghargaanTahun

1 - - -

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat dipertanggung jawabkan secara hukum. Apabila di kemudian hari ternyata di jumpai ketidaksesuaian dengan kenyataan, saya sanggup menerima sanksi.Demikian biodata ini saya buat dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam pengajuan Hibah Program Kreativitas Mahasiswa.

Denpasar, 17 September 2014Pengusul,

(Putu Andre Angga Agastia)

mailto:[email protected]

12

Lampiran 1. LanjutanII. Biodata Anggota 1

A. Identitas Diri1 Nama Lengkap (dengan gelar) Pande Made Diah Antaryami Harum

Pawitri Rimbawan2 Jenis Kelamin Perempuan3 Program Studi Farmasi4 NIM 12085050415 Tempat dan Tanggal Lahir Denpasar, 08 Juni 19946 E-mail [email protected] Nomor Telepon/HP 085739331022

B. Riwayat PendidikanSD SMP SMA

Nama Institusi

SDK Marsudirini

NegaraSMP N 1 Negara

SMA N 1 Negara

Jurusan IPA

Tahun Masuk-Lulus

2000-2006 2006-2009 2009-2012




Waktu dan Tempat




PenghargaanTahun

1 - - -


Denpasar, 17 September 2014 Pengusul,

(Pande Made Diah Antaryami Harum Pawitri Rimbawan)


13

Lampiran 1. LanjutanIII.Biodata Anggota 2

A. Identitas Diri1 Nama Lengkap (dengan gelar) I Dewa Gede Panca Yoga

Subratha2 Jenis Kelamin Laki-laki3 Program Studi Farmasi4 NIM 12085050485 Tempat dan Tanggal Lahir Jayapura, 1 Januari 19946 E-mail [email protected]

m7 Nomor Telepon/HP 08563913544


Nama Institusi SDN 1 GianyarSMPN 1 Gianyar

SMAN 1 Gianyar

Jurusan IPATahun Masuk-

Lulus2000-2006 2006-2009 2009-2012




Waktu dan Tempat


institusi lainnya)

No.Jenis

PenghargaanInstitusi Pemberi

PenghargaanTahun

Juara II Lomba OSN bidang

Biologi Tingkat Kabupaten

Dinas Pendidikan Kabupaten

Gianyar

2011

Juara II Lomba OSN bidang

Biologi Tingkat Kabupaten



(I Dewa Gede Panca Yoga Subratha)Lampiran 1. Lanjutan



14

IV.Biodata Anggota 3A. Identitas Diri

1 Nama Lengkap (dengan gelar) Kadek Chintya Sanita Dewi

2 Jenis Kelamin Perempuan3 Program Studi Farmasi4 NIM 14085050535 Tempat dan Tanggal Lahir Denpasar, 13 April 19966 E-mail [email protected] Nomor Telepon/HP 085737432572


Nama Institusi SDN 3 PanjerSMPN 6 Denpasar

SMK Farmasi Saraswati 3 Denpasar

JurusanTahun Masuk-

Lulus2002-2007 2007-2010 2011-2014




Waktu dan Tempat




PenghargaanTahun

1 - - -



(Kadek Chintya Sanita Dewi)Lampiran 1. Lanjutan


15

V.Biodata Dosen PembimbingA. Identitas Diri

1 Nama Lengkap (dengan gelar) Ni Putu Ariantari, S.Farm., M.Farm., Apt.

2 Jenis Kelamin Perempuan3 Program Studi Farmasi4 NIDN 0007128102

5 Tempat dan Tanggal Lahir6 E-mail [email protected] Nomor Telepon/HP 081337047287

B. Riwayat PendidikanS1 S2 S3

Nama InstitusiUniversitas Gajah Mada

Universitas Gajah Mada

Jurusan Farmasi FarmasiTahun Lulus 2003 2009

16

Lampiran 2. Justifikasi Anggaran Kegiatan

17

1. Peralatan Penunjang

18

MaterialJustifikasi Pemakaian

Kuantitas

Harga Satuan(Rp.)

Keterangan

Sewa Rotari evaporator dan alat KVC

Ekstraksi dan Fraksinasi

100 jam 5.000/jam 500.000

Sewa inkubator

Pengujian aktivitas antituberkulosis

2 bulan 300.000/bulan 600.000

Sewa LAF Pengujian aktivitas antituberkulosis

2 bulan 300.000/bulan 600.000

Sewa Oven Ekstraksi-Pengeringan ekstrak

100 jam 10.000/jam 1.000.000

Sewa autoklaf

Pengujian aktivitas antituberkulosis

2 bulan 125.000/bulan 250.000

SUB TOTAL (Rp.) 2.950.0002. Bahan Habis Pakai


KuantitasHargaSatuan

(Rp.)Keterangan

N-Heksan Pelarut untuk Fraksinasi

5 L 50.000/L 250.000

Kloroform Pelarut untuk ekstraksi

10 L 171.000/L 1.710.000

Etil Asetat Pelarut untuk Fraksinasi

5 L 60.000/L 300.000

Media L-J Media Uji Aktivitas Antituberkulosis

1 botol 1.500.000/botol 1.500.000

Plat KLT silica gel GF254

KLT hasil Fraksinasi

2 lembar 50.000/lembar 100.000

Serbuk Silica Fraksinasi dengan KVC

10 gram 10.000/gram 100.000

Masker Keamanan kerja 1 box 50.000/box 50.000

Sarung tangan steril

Keamanan kerja 1 box 50.000/box 50.000

19

Rifampisin Kontrol Positif 2 tablet 35.000/pcs 70.000

SUB TOTAL (Rp) 4.130.0003. Perjalanan


KuantitasHarga Satuan

(Rp.) KeteranganPerjalanan ke laboratorium mikrobologi RSUP Sanglah

Administrasi 1 kali 110.000 110.000

Perjalanan ke laboratorium mikrobologi RSUP Sanglah

Pembuatan media

1 kali 110.000 110.000


Pengembangbiakan bakteri dan inkubasi

3 kali 110.000 330.000


Uji Aktivitas Antituberkulosis

5 kali 120.000 600.000


Pengamatan penelitian

15 kali 120.000 1.800.000

SUB TOTAL (Rp) 2.950.0004. Lain-Lain Kertas A4 Penyusunan

proposal, publikasi dan laporan

2 rim 30.000/rim 60.000

Tinta printer Penyusunan proposal, publikasi dan laporan

2 kotak 50.000/kotak 100.000

Fotokopi Penyusunan proposal, publikasi dan laporan

5 eks Rp 8.000/eks. 40.000

Jilid Penyusunan 5 eks 5.000/eks 25.000

20

proposal, publikasi dan laporan

Materei 6000 Penyusunan proposal

10 buah 6000/buah 60.000

Publikasi nasional

Publikasi 1 kali 1.500.000/kali 1.235.000

Administrasi di RSUP Sanglah

Uji Aktivitas Antituberkulosis

1 kali 250.000/kali 250.000

SUB TOTAL (Rp) 1.770.000TOTAL KESELURUHAN (Rp) 11.800.000

Lampiran 3. Susunan Organisasi Tim Kegiatan dan Pembagian Tugas

21

No Nama/NIMProgram

StudiBidang Ilmu

Alokasi Waktu

(jam/minggu)Uraian Tugas

1

Putu Andre Angga

Agastia/1108505059

Farmasi Kesehatan 20

Penyusunan proposal, uji

aktivitas antituberkulosis, analisa data dan back up seluruh

kegiatan

2

Pande Made Diah Antaryami

Harum Pawitri

Rimbawan/120850504

1


Penyusunan proposal,

ekstraksi serbuk kulit batang

M.champaca L pengadaanan alat

dan bahan

3

I Dewa Gede Panca

Yoga Subratha/1208505048


Penyusunan proposal dan

Fraksinasi ekstrak kloroform kulit

batang M.champaca L

4

Kadek Chintya Sanita

Dewi/1408505053


Penyusunan proposal dan

mengurus administrasi di RSUP Sanglah

Lampiran 4. Surat Pernyataan Ketua Peneliti/Pelaksana

22

SURAT PERNYATAAN KETUA PENELITI/PELAKSANA

Yang bertanda tangan di bawah ini:Nama : Putu Andre Angga AgastiaNIM : 1108505059Program Studi : FarmasiFakultas : MIPA

Dengan ini menyatakan bahwa proposal PKM Penelitian saya dengan judul: Uji Aktivitas Flavonoid Dalam Fraksi Kloroform Kulit Batang Cempaka Kuning (Michelia champaca L.) Sebagai Antituberkulosis Terhadap Isolat Mycobacterium tuberculosis Strain Multi-Drug Resistant yang diusulkan untuk tahun anggaran 2014/2015 bersifat original dan belum pernah dibiayai oleh lembaga atau sumber dana lain. Bilamana di kemudian hari ditemukan ketidaksesuaian dengan pernyataan ini, maka saya bersedia dituntut dan diproses sesuai dengan ketentuan yang berlaku dan mengembalikan seluruh biaya penelitian yang sudah diterima ke kas negara. Demikian pernyataan ini dibuat dengan sesungguhnya dan dengan sebenar-benarnya.

Denpasar, 17 September 2014Mengetahui Yang menyatakan,

(Putu Andre Angga Agastia)NIM. 1108505059

Wakil Rektor Bidang Kemahasiswaan

(Dr. I Nyoman Suyatna, S.H., M.H.)NIP. 195909231986011001

andre fixer

Documents