AKURASIAnggota Kelompok: Widyaningrum DV Angga Budi P Nirma Febriyani Rilli Pustikaningtiyas Denny Hendra S Ida Marwa Iras Diah P Tommy Pradana Aulia Damayanti Putri Arasita R Rike Yuniarta Muzairotun R.S Amanda Cindy R (082210101017) (082210101023) (082210101024) (082210101028) (082210101029) (082210101034) (082210101040) (082210101041) (082210101043) (082210101046) (082210101051) (082210101052) (082210101053)

Definisi Akurasi merupakan prosedur analitikal yang tepat untuk penyesuaian dosis antara nilai yang akan diterima baik sebagai nilai kebenaran konvensional atau penerimaan nilai referensi dan nilai yang ditemukan. Akurasi dapat di tunjukkan dengan pendekatan sebagai berikut :a. b. c. d. e. Berasal dari presisi, linearitas, dan spesifisitas Perbandingan hasil dengan karakteristik yang baik ditandai dengan prosedur yang independen Sebagai bahan referensi (untuk substansi obat) Rekoveri dari substansi obat meningkat dengan plasebo atau produk obat (untuk produk obat) Rekoveri dari pengotor meningkat untuk substansi atau produk obat (untuk pengotor)

1. Substansi Obat Apa yang dapat dipertimbangkan sebagai karakteristik yang baik, prosedur independent?a. Memberikan pengukuran yang absolut dari analit. Ex: titrasi, nitrogen (atau elemen konstituen lain), determinasi (seluruh sampel atau sampel dengan penggabungan antara LC dan NMR) atau diuji langsung dengan menggunakan pereaksi analit yangspesifik (misal reaksi enzimatis). Untuk metode absolutsesuai dengan pedoman (semacam definisi dari stokiometri, komposisi, dan mekanisme reaksi)akurasinya dapat diperkirakan. Jika tidak ada metode absolut yang tersediamemastikan hasil antara kedua prosedur analitik yang bebas yang dapat digunakan untuk menentukan akurasi (meskipun tingkat kepercayaan lebih kecil dibandikan dengan pendekatan absolut).

b. c.

Lanjutan.. Metode absolut kurang selektif jika dibandingkan dengan pemisahan secara kromatografi. Bagaimanapun, tujuanya adalah untuk memastikan akurasi dari suatu prosedur, bukan untuk menunjukan bahwa kedua prosedur tersebut sama. Oleh karena itu, tes statistik yang signifikan harus digunakan dengan cermat. Jika tidak dimungkinkan melakukan koreksi, maka tidak bisa dilakukan tes signifikansi dan t-test.

Lanjutan..T-test mengetahui ada/tidak nya perbedaan antara rata-rata ttest dengan dua sampel, antara rata-rata dan referensi atau nilai target (nilai nominal t-test), atau antara nilai sampel yang tereplikasi dengan menggunakan kedua metode (paired t-test) menjadi signifikan. Dihitung berdasarkan Eqs dibandingkan dengan t-value kritis, yang tergantug oleh level statistik convidence-p (atau kemungkinan kesalahan a=1-P, i.e., a 95% kemungkinan kesalahan adalah 0,05), dan angka determinasi (derajad kebebasan). Jika nilai dari p kurang dari 0,05 berarti perbedaan signifikan sebesar 95% secara statistik.

Lanjutan..Tes kesamaan/kesetaraan untuk menentukan perbedaan yang dapat diterima yaitu pengukuran relevansi praktis Kesetaraan dapat diasumsikan, jika batas bawah dan batas atas dari interval kesetaraan (Ct.u) berada dalam interval yang dapat diterima (-Ct Cu ). Secara teknis,ini menunjukkan dua t-tes satu sisi. Alternatif lain adalah evaluasi sederhana apakah perbedaan magnitude absolut berada dibawah nilai yang dapat diterima (misalnya dibawah 2%).

2. Produk ObatDua aspek penting yang berkaitan dengan recovery. Pertama, didasarkan pada akurasi (divalidasi) prosedur zat obat, jika tidak, penambahan jumlah akan salah. Kedua, dalam preparasi produk obat dilarutkan, penyimpangan analis (lebih atau kurang) dari prosedur analisis rutin. Note: Tidak ada kemungkinan lain dari penambahan jumlah yang diketahui persis,namun pertimbangan harus diberikan untuk kemungkinan implikasi. Misalnya, solusi dari plasebo yang ditambah dengan larutan stok.

2.1 Persentase RekoveriRecovery dapat diuji dari : a. Statistik versus nilai teoritis dari 100%, yaitu, jika interval kepercayaan 95% meliputi nilai teoritis, dengan masalah yang diketahui dari tes signifikansi statistik

b. tes kesetaraan Analis dapat menetapkan batas yang dapat diterima untuk deviasi absolut dari rekoveri teoritis. Jika batasan ini berlaku untuk rekoveri utama, nilai tersebut harus lebih kecil dari nilai rekoveri utama untuk tes kesetaraan, karena variabilitas dari rekoveri individu dikurangi untuk rata-rata Nilai rekoveri harus selalu diplot, untuk mendeteksi kecenderungan atau ketergantungan konsentrasi Berikut adalah rumus uji kesetaraan untuk salah satu slope:

2.2 Fungsi Rekoveri Fungsi rekoveri merupakan analisis tidak obyektif memiliki satu untuk kemiringan (slope) dan nol untuk intercept. Hasil eksperimen dapat diuji statistik dengan membandingkan nilai-nilai teoritis dengan interval kepercayaan 95%. tes kesetaraan (equivalence tests) dapat diterapkan untuk menguji slope dan intercept untuk deviasi (penyimpangan) yang dapat diterima dari nilainilai teoritis. Slope dan intercept juga dapat dibandingkan dengan batas penerimaan mutlak, seperti yang diusulkan untuk titrasi volumetrik . Untuk pengujian, recovery biasanya diselidiki dalam area kerja 80-120%. Hal ini menghasilkan ekstrapolasi besar dan akibatnya dalam ketidakpastian yang lebih tingi dari suatu intercept . Karena efek bobot yang berbeda, persentase recovery dan fungsi recovery dapat menyebabkan hasil statistik yang berbeda.

2.3 Standar Adisi Jika tidak ada plasebo yang memadai dapat dipersiapkan, jumlah yang diketahui dari suatu zat obat juga dapat ditambahkan ke batch otentik dari produk obat (penambahan standar). Batas atas kisaran spiking, yaitu tidak lebih besar dari 150%. Karena presisi tergantung konsentrasi, perhitungan persentase recovery harus didasarkan pada jumlah keseluruhan yang aktif yaitu jumlah teoritis adalah jumlah bahan aktif dalam batch, dan jumlah spiked.

2.4 Akurasi Produk Obat oleh Perbandingan Penerapan regresi diasumsikan bahwa tidak ada kesalahan dalam variabel independen (x-value), jika hal ini tidak dapat dipastikan, maka kesalahan dalam x-value harus jauh lebih sedikit daripada yang diharapkan untuk y-value, jika tidak regresi statistik lain harus diterapkan Sebagai pilihan lain, rasio antara metode validasi dan metode referensi dapat dihitung, dengan analogi persentase rekoveri Prediksi dari standard eror :N : jumlah batch : referensi metode nilai Y : nilai NIR

3. Pengotor / Degradants dan Air3.1 rekoveri dari spiked impuritiesatau air Untuk pengotor dan degradants, validasi individu hanya diperlukan jika mereka ditentukan dalam prosedur analitis, dengan batas. dalam kasus penentuan air, menurut karl fischer, mungkin lebih tepat untuk spike dengan air setelah sampel ditambahkan ke bejana titrasi (misalnya, sebagai penambahan standar, lihat bagian 8.3.9). Jika beberapa pengotor divalidasi secara bersamaan, co-elution memberikan impurity dengan puncak dari kotoran lain mungkin dapat meningkatkan area puncak. Sebuah matriks yang memuat kurang dari 10 - 20% dari konsentrasi pengotor, spike terendah akan diterima. Jika matriks mengandung pengotor lebih, jumlah pemulihan tidak hanya terkait dengan jumlah spike, karena variabilitas adalah fungsi dari konsentrasi keseluruhan, tidak hanya dari satu spike

3.2 Akurasi Mode Integrasi Penyimpangan sistematis dalam rekoveri konsentrasi yang kecil dalam sebagian kasus ketidak murnian puncak mungkin disebabkan oleh penggunaan modus integrasi yang tidak tepat (drop atau rider). Pengotor yang tidak diketahui sebagai daerah puncak dapat bervariasi secara substansial sesuai modus integrasi. Gambar 2,3-2: Pengaruh modus integrasi puncak pada hasilnya. Garis solid dan putus-putus mewakili kromatogram dari sampel dan overlay, fraksi kembali dikromatografikan dari masing-masing puncak utama (untuk mendapatkan sampel pengotor bebas).

3.3 Respon Faktor Jika respon analitis untuk konsentrasi yang identik dari bahan aktif dan pengotor berbeda, dan yang terakhir harus diukur dengan normalisasi daerah (100% standar) atau dengan menggunakan kalibrasi eksternal dengan bahan aktif itu sendiri, koreksi atau faktor respons harus ditentukan. Untuk meminimalkan variabilitas eksperimental, baik pengotor dan bahan aktif harus dianalisis dalam kisaran konsentrasi yang sama yaitu di atas batas kuantisasi. Faktor respons dapat dihitung dari slope dari dua garis regresi. Dalam kasus pengotor yang tidak diketahui atau tidak ada, respon faktorpersatuan biasanya diasumsikan.

Gambar 2.3-3: Kromatogram overlay pada nominal panjang gelombang (240nm) dan cek-panjang gelombang (220nm). Kromatogram dinormalkan sehubungan dengan puncak utama dan puncak pengotor yang diukur sebagai area persentase

Kemungkinan pengotor mencakup studi untuk mengidentifikasi struktur, sintesis, dan penentuan eksperimental faktor respon atau, kandungan mutlak atau rasio ketidakmurnian dan substansi obat. Masalah utama dalam kromatografi adalah untuk mencapai pemisahan yang baik dengan waktu retensi singkat untuk ketinggian puncak yang cukup, diperlukan kondisi di bawah isokratik. Gambar 2,3-4: Estimasi (A) dan penentuan (B) dari faktor respon dari pengotor dengan cara UV(kromatogram atas) dan deteksi indeks bias (kromatogram lebih rendah). Kromatogram kiri (A) menunjukkan sampel keseluruhan, sedangkan dalam kromatogram kanan (B) salah satu puncak pengotor yang relevan (diberi label dengan panah) dikumpulkan dan redikromatografikan dalam kondisi optimal untuk deteksi RI.

4. Metode Validasi PembersihanUntuk mencegah kontaminasi silang obat dalam produksi farmasi, pembersihan peralatan manufaktur merupakan aspek penting GMP. Proses efisiensi prosedur pembersihan dikenal sebagai cleaning validation. Efisiensi prosedur pembersihan diselidiki dengan : menyeka daerah yang sudah ditentukan dari permukaan peralatan yang bersih dengan bahan yang tepat. Zat sisa sampel tsb kemudian diekstraksi dan dianalisis jumlahnya. Jumlah maksimum yang dapat diterima residu tergantung pada aktivitas farmakologi atau toksikologi masing-masing substansi pada ukuran batch dan dosis dari produk sebelumnya dan berikutnya, serta pada permukaan peralatan. Batas sisa pembersihan ini kemudian dinormalisasi ke daerah peralatan sampel, sebagai specific residual cleaning limit (SRCL). SRCL dilaporkan antara 4 ng/cm2 dan 3 g/cm2. Dalam cleaning (validasi), tidak ada authentic, sampel homogen yang tersedia. Oleh karena itu, presisi dari prosedur analitis harus diestimasi dengan menggunakan spiked samples.

Contoh : rekoveri suatu zat obat dari swab dan plat stainless steel. Meclizine, yaitu, 1 - (p-kloro-(-fenil-benzil)-4 mmethylbenzyl) piperazine dihidroklorida. SRCL ini dibuat untuk 50 g/100 cm2. Sistem presisi LC assay dari 0,21% dan 0,41% diperoleh dari lima pengulangan suntikan pada konsentrasi yang sesuai . Tidak ada perbedaan yang relevan yang diamati antara rekoveri dari swab dan plat, oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwa meclizine dapat dipulihkan hampir sepenuhnya dari permukaan stainless steel, dan kerugian utamanya adalah adsorpsi pada bahan swab.

Gambar 2.3-5: Rekoveri meclizine dari pelat stainless steel dan dari swab (data dari [13]). Dilakukan lima spiking individu per tingkat konsentrasi (simbol kecil). Untuk hasil yang tepat dari tiap rata-rata (simbol lebih besar), ditunjukkan standar deviasi relatif

aging effect dapat diamati pada pelat dan dalam larutan ekstraksi, sehubungan dengan rekoveri dan variabilitas.

Gambar 2,3-6: Pengaruh dari penuaan pada pengembalian meclizine ( dari data [13]). Penelitian ini dilakukan pada SCRL 200% dengan tiga spikings per interval penyimpanan. Artinya dilambangkan dan menunjukkan pemulihan minimum dan maksimum dari setiap rangkaian. Penuaan dari sampel pada swab tidak mempengaruhi hasilnya.

5. Kriteria yang dapat diterima Hasil maksimum selisih dari rekoveri rata-rata ke nilai teoritis 100% atau antara sarana dengan referensi dalam kasus perbandingan, dapat didefinisikan berdasarkan ketentuan prosedur analitis, misalnya 2% untuk pengujian LC atau 0,3% untuk kesalahan sistematis proporsional titrasi volumetri Jika rekoveri individu dievaluasi, rentang yang lebih besar harus diperhitungkan. Untuk sembilan penentuan, diharapkan standar deviasi memiliki jangkauan maksimum sekitar 45 kali sesuai dengan 6 kali standard deviasi target. Kriteria ketepatan yang diterima (untuk deviasi antara hasil atau target) atau uji ekuivalensi statistic harus ditentukan, karena ini termasuk pengukuran yang praktis.

Bisakah rasio antara variabilitas analisis dan deviasi rekoveri secara teoritis dikonfirmasi dengan eksperimen?

Karena konstribusi variabilitas dalam percobaan rekoveri berbeda dengan sampel otentik. Namun, hasil menunjukkan bahwa variabilitas studi rekoveri tidak begitu berbeda dari pengulangan yang diamati dengan bahan obat dan produk obat yang preparasi sampelnya kurang kompleks. Maka diperkirakan rasio teoritis antara variabilitas analisis dan deviasi rekoveri dapat dikonfirmasi dengan eksperimen.

kesimpulan Kalibrasi yang sama harus digunakan sebagai tujuan untuk penggunaan rutin. Uji akurasi bahan obat harus divalidasi harus dibandingkan dengan prosedur tetap yang lain. Untuk produk obat, direkomendasikan evaluasi presentase rekoveri, disebabkan oleh interpretasi yang lebih sederhana. Ketidakmurnian (jika spesifik dan tersedia) harus dihilangkan dari bahan obat atau produk obat. Kriteria ketepatan yang diterima (untuk deviasi antara hasil atau target) atau uji ekuivalensi statistic harus ditentukan, karena ini termasuk pengukuran yang praktis. Perbedaan tetapan yang diterima diperkirakan diterima untuk presisi.