abi proposal 1 fix harus dikerjain kata nindhy, okee

65
PROPOSAL KARYA TULIS ILMIAH PENGARUH EKSTRAK BIJI LABU KUNING (Cucurbita moschata) TERHADAP PROLIFERASI SEL TULANG TIKUS (IN VITRO) Disusun oleh ABI NUBLI MUHAMMAD YUSUF 20110310134 HALAMAN JUDUL PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH YOGYAKARTA 2015

Upload: abi-nubli-muhammad-yusuf

Post on 26-Jan-2016

239 views

Category:

Documents


1 download

DESCRIPTION

qwrqwrqrqwrwq

TRANSCRIPT

Page 1: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

PROPOSAL KARYA TULIS ILMIAH

PENGARUH EKSTRAK BIJI LABU KUNING (Cucurbita moschata) TERHADAP PROLIFERASI SEL TULANG TIKUS

(IN VITRO)

Disusun oleh

ABI NUBLI MUHAMMAD YUSUF

20110310134

HALAMAN JUDUL

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH YOGYAKARTA

2015

Page 2: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

HALAMAN PENGESAHAN PROPOSAL KTI

PENGARUH EKSTRAK BIJI LABU KUNING (Cucurbita moschata) TERHADAP PROLIFERASI SEL TULANG TIKUS

(IN VITRO)

Disusun oleh:

ABI NUBLI MUHAMMAD YUSUF

20110310134

Telah disetujui dan diseminarkan pada tanggal:

Dosen Pembimbing

dr. Alfaina Wahyuni, Sp. OG., M.Kes.NIK : 173 027

Dosen Penguji

ii

Page 3: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

KATA PENGANTAR

Assalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh. Segala

puji kepada Allah SWT atas berkat, rahmat, taufik, serta hidayah-

Nya, dan Syukur Alhamdulillah penulis ucapkan, karena telah

menyelesaikan proposal KTI yang berjudul “Pengaruh Ekstrak

Labu Kun ing Terhadap Proliferasi Sel Tulang (in vitro)” ini.

Selain untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh

gelar sarjana di jurusan Pendidikan Dokter Fakultas Kedokteran

dan Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Yogyakarta,

Penulis berharap hasil dari KTI ini bermanfaat bagi masyarakat

untuk kedepannya. Proposal KTI ini tidak akan selesai tanpa

bantuan dari berbagai pihak. Penulis mengucapkan terima kasih

dan penghargaan kepada :

1. dr. Alfaina Wahyuni, Sp.OG., M.Kes selaku dosen

pembimbing, yang selalu dengan sabar memberikan

arahan dan bimbingan kepada penulis.

2. Ayah dan ibu yang selalu memberikan dukungan penuh

untuk keberhasilan penulis menyelesaikan proposal KTI ini.

3. Eyang Sumarti yang selalu memberi perhatian kepada

penulis agar penulis tetap semangat dalam melakukan

penelitian

4. Aqmarlia selaku adik penulis sebagai salah satu alasan

penulis ingin segera menyelesaikan penelitian ini.

iii

Page 4: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

5. Nindhy Marchelia R. sebagai sahabat dekat penulis yang

selalu memberi motivasi agar penulis tidak menyerah

dalam usahanya dan penelitian ini danat selesai tepat

waktu.

6. Teman teman 1 tempat tinggal seperti Bram,Aan,Bangga

dan Adhitya yang selalu ada dan membantu penulis agar

penelitian ini cepat terselesaikan

7. Seluruh teman sejawat yang telah memberi semangat,

menemani, dan membantu penulis atas selesainya

proposal ini.

Semoga Allah SWT membalas kebaikan dan ketulusan

semua pihak yang telah membantu kelancaran proposal KTI ini,

hingga kali ini proposal selesai dibuat. Seperti yang penulis

katakana sebelumnya, semoga proposal ini bermanfaat bagi

masyarakat serta bernilai dihadapan Allah SWT. Amin.

Yogyakarta,

Penulis

iv

Page 5: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

v

Page 6: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL................................................................................................................ i

HALAMAN PENGESAHAN PROPOSAL KTI...........................................................................ii

KATA PENGANTAR.............................................................................................................iii

DAFTAR ISI..........................................................................................................................v

DAFTAR TABEL.................................................................................................................viii

DAFTAR GAMBAR..............................................................................................................ix

DAFTAR BAGAN..................................................................................................................x

BAB IPENDAHULUAN..........................................................................................................1

A. Latar Belakang Masalah................................................................................1

B. Rumusan Masalah..................................................................................................5

C. Tujuan Penelitian....................................................................................................5

D. Manfaat Penelitian.................................................................................................6

E. Keaslian Penelitian.................................................................................................6

BAB IITINJAUAN PUSTAKA..................................................................................................8

A. Labu Kuning (Cucurbita moschata).........................................................................8

I. Asal dan Nama Tanaman....................................................................................8

II. Klasifikasi Tanaman............................................................................................9

vi

Page 7: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

III. Kandungan Kimia dan Manfaat Tanaman.....................................................10

IV. Fitoestrogen.................................................................................................10

V. Estrogen...........................................................................................................12

B. Tulang...................................................................................................................14

VI. Senyawa Organic..........................................................................................14

VII. Substansi Dasar Tulang.................................................................................15

VIII. Komponen Sel Tulang...................................................................................15

(a) Sel Osteoprogenitor......................................................................................16

(b) Osteoblas......................................................................................................16

(c) Osteosit........................................................................................................16

VI. Pertumbuhan Tulang (Modeling dan Remodeling Tulang)...........................18

C. Kerangka Konsep..................................................................................................23

D. Hipotesis...............................................................................................................24

BAB III...............................................................................................................................25

A. Desain Penelitian..................................................................................................25

B. Subyek Penelitian.................................................................................................25

C. Waktu dan Tempat Penelitian..............................................................................26

D. Variabel Penelitian...............................................................................................26

E. Definisi Operasional.............................................................................................27

F. Alat dan Bahan Penelitian....................................................................................27

vii

Page 8: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

G. Alur Penelitian......................................................................................................29

H. Analisis Data.........................................................................................................30

I. Etika Penelitian.....................................................................................................30

DAFTAR PUSTAKA.............................................................................................................31

viii

Page 9: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

DAFTAR TABEL

Tabel 3.1. Waktu Penelitian

....................................................................................................

21

Tabel 3.2.Alur Penelitian

....................................................................................................

24

ix

Page 10: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1. Labu Kuning............................................................9

Gambar 2.2. Struktur Kimia Flavonoid pada Isoflavon

....................................................................................................

11

Gambar 2.3. Bone Remodelling

....................................................................................................

22

x

Page 11: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

DAFTAR BAGAN

Bagan2.1. Kerangka Konsep

....................................................................................................

19

xi

Page 12: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

BAB IPENDAHULUAN

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Masalah

Saat kini hingga mendatang sebagian besar wanita di dunia akan

mengalami sepertiga kehidupannya dalam masa menopause. Oleh karenanya,

diperkirakan masalah kesehatan saat menopause akan sering dijumpai.

Sehubungan dengan berkurangnya respons ovarium terhadap FSH dan LH,

terganggunya pola pelepasan GnRH dari hipotalamus, berkurangnya respons

hipofise terhadap GnRH dan konsekuensi berkurangnya/hilangnya estrogen

yang berdampak terhadap keadaan fisik dan psikologi wanita. Menopause

yang terjadi pada perempuan menyebabkan turunnya kadar estrogen dalam

tubuh. Kekurangan hormon estrogen berkaitan erat dengan penurunan

tingkat penyerapan kalsium dan kepadatan tulang. Oleh karena itu,

kelompok ini memiliki resiko tinggi terkena osteoporosis dan mengalami

patah tulang.

Berbagai penelitian memperlihatkan bahwa saat

terjadinya menopause umumnya pada usia sekitar 45 sampai

55 tahun pada 60–70% wanita. Usia rata-rata pada populasi

barat adalah sekitar umur 50 tahun dan terjadi lebih awal

pada wanita di negara-negara berkembang dibandingkan

dengan populasi barat. Menopause terjadi oleh karena

keadaan hipo-estrogenik akibat penurunan fungsi dari

ovarium (Sawitri, Fauzi, & Widyani, 2009).

1

Page 13: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

2

Penderita osteoporosis di dunia ditemukan sebanyak 200 juta

sedangkan di Indonesia prevalensi osteoporosis pada usia <70% sebesar 18-

36% pada perempuan dan 20- 27% pada laki laki, sedangkan untuk kelompok

umur > 70 tahun prevalensi osteoporosis pada wanita sebanyak 53,6% dan

pada laki laki sebanyak 38%. Pada usia 75-85 tahun, wanita memiliki risiko 2

kali lipat dibandingkan laki laki. Kondisi ini didukung oleh kejadian

menopause pada perempuan yang semakin meningkatkan risiko ostroporosis.

Salah satu penyebab osteoporosis adalah rendahnya produksi hormon

estrogen. Rendahnya estrogen menyebabkan meningkatkan aktifitas

osteoklastik, berkurangnya matriks tulang, berkurangnya defosit kalisum dan

fosfat tulang dan efek ini sangat besar pada wanita menopause. (Depkes,

2007).

Tulang merupakan bagian tubuh yang memiliki fungsi utama sebagai

pembentuk rangka dan alat gerak tubuh, pelindung organ-organ internal, serta

tempat penyimpanan mineral (kalsium-fosfat). Proses pembentukan tulang

disebut dengan osifikasi. Proses osifikasi terjadi pada masa perkembangan

fetus (prenatal) dan setelah individu lahir (postnatal). Pada tulang panjang

perkembangan terjadi sampai individu mencapai dewasa (Djuwita, et al.,

2012).

Jaringan tulang bersifat dinamis karena secara konstan mengalami

pembaharuan yang dikenal dengan proses remodeling. Remodeling tulang

merupakan suatu proses yang kompleks yang melibatkan resorpsi tulang yang

diikuti dengan pembentukan tulang baru. Remodeling tulang ditujukan untuk

Page 14: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

3

pengaturan homeostasis kalsium, memperbaiki jaringan yang rusak akibat

pergerakan fisik, kerusakan minor karena faktor stres dan pembentukan

kerangka pada masa pertumbuhan (Hill dan Orth, 1998; Fernandez et al.,

2006).

Jaringan tulang memiliki tiga tipe sel yakni osteosit, osteoblas, dan

osteoklas. Proses remodeling melibatkan osteoblas dan osteoklas melalui

mekanisme signal parakrin dan endokrin. Osteoklas merupakan sel dengan

beberapa inti sel dan berkembang dari hematopoetic stem cells serta memiliki

fungsi dalam meresorpsi tulang, sedangkan osteoblas memiliki fungsi sebagai

penghasil matriks organik (yang terdiri atas protein kolagen dan nonkolagen)

serta mengatur proses mineralisasi (kalsium-fosfat) pembentuk osteoid.

Osteoblas berkembang dari osteoprogenitor yang terdapat di bagian dalam

periosteum dan sumsum tulang (Orwoll, 2003).

Ketidakseimbangan antara resorpsi dan pembentukan tulang pada

proses remodeling tulang dapat mengakibatkan kepadatan tulang berkurang

sehingga dapat menimbulkan penyakit metabolik tulang (Seeman, 2003).

Berkurangnya kepadatan sel tulang dapat diakibatkan oleh berkurangnya

jumlah osteosit atau kurangnya kadar mineral, namun keduanya dapat

mengakibatkan kerapuhan tulang (Manolagas, 2000). Proses diferensiasi

osteoblas merupakan salah satu faktor penting dalam proses remodeling

tulang. Proses proliferasi dan diferensiasi osteoblas diatur oleh growth factor

(faktor pertumbuhan) yang dihasilkan oleh osteoblas. Growth factor yang

berperan diantaranya insulin growth factor (IGF I dan II), bone morphogenic

Page 15: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

4

proteins (BMPs), fibroblast growth factor (FGF), dan platelet-derived

growth factor (PDGF), (Chen et al., 2004; Asahina et al., 2007) yang bekerja

secara autokrin dan parakrin, serta hormon estrogen (Hofbauer et al., 1999;

Ogita et al., 2008).

Fitoestrogen diperkirakan bekerja sebagai agonis

estrogen dengan cara mengisi tempat reseptor estrogen

ketika tidak tersedia natural estrogen dalam tubuh (Sawitri,

Fauzi, & Widyani, 2009). Fitoestrogen merupakan bahan alami

dari tumbuhan yang juga memiliki sifat mirip estrogen.

Sumber fitoestrogen salah satunya adalah isoflavon pada susu

kedelai (Cahyati, Santoso, & Juswono, 2013).

Pada penelitian ini akan meneliti apakah biji labu kuning

tersebut bisa dimanfaatkan atau tidak, dan bagaimana

pengaruhnya terhadap proliferasi sel tulang yang dilakukan

secara in vitro. Menurut Li et al. (2009), terdapat senyawa

glikosida fenolik baru dari biji C. moschata.Dan diketahui

bahwa senyawa glikosida termasuk dalam golongan isoflavon.

Penelitian ini mengujikan pada sel tulang tikus yang dikultur

dengan sistem in vitro. Tidak dilakukan terhadap manusia

dengan alasan etika serta keterbatasan tempat dan waktu.

Sisi penting lain tentang informasi yang disebutkan dalam ayat-ayat Al

Qur'an adalah tahap-tahap pembentukan manusia dalam rahim ibu. Disebutkan

Page 16: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

5

dalam ayat tersebut bahwa dalam rahim ibu, mulanya tulang-tulang terbentuk,

dan selanjutnya terbentuklah otot yang membungkus tulang-tulang ini.

"Kemudian air mani itu Kami jadikan segumpal darah, lalu

segumpal darah itu Kami jadikan segumpal daging, dan

segumpal daging itu Kami jadikan tulang-belulang, lalu tulang

belulang itu Kami bungkus dengan daging. Kemudian Kami

jadikan dia makhluk yang (berbentuk) lain. Maka Maha Sucilah

Allah, Pencipta Yang Paling Baik" (Al Qur'an, 23:14)

B. Rumusan Masalah

Dari latar belakang tersebut, peneliti ingin mengetahui

bagaimana pengaruh estrogenik ekstrak biji labu kuning

(Cucurbita moschata) terhadap proliferasi sel tulang tikus (in

vitro).

C. Tujuan Penelitian

1. Tujuan Umum

Untuk mengetahui pengaruh estrogenik ekstrak biji labu

kuning (Cucurbita moschata) terhadap proliferasi sel tulang

tikus (in vitro).

2. Tujuan Khusus

a. Mengetahui proliferasi sel tulang tikus yang di kultur

dengan sistem in vitro tanpa perlakuan.

Page 17: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

6

b. Mengetahui efek estrogenik ekstrak biji labu kuning

terhadap proliferasi sel tulang tikus yang di kultur

dengan sistem in vitro dengan dosis tertentu.

D. Manfaat Penelitian

1. Manfaat Teoritis

Menambah ilmu dan wawasan peneliti dan masyarakat

akan pengaruh estrogenik ekstrak biji labu kuning

terhadap proliferasi sel tulang pada masa pertumbuhan

dan menambah pengetahuan peneliti tentang kultur

sistem in vitro.

2. Manfaat Praktisi

Efek estrogenik ekstrak biji labu kuning bermanfaat

terhadap pertumbuhan sel tulang terutama pada masa

pertumbuhan.

E. Keaslian Penelitian

Penelitian ini mengacu pada beberapa penelitian-

penelitian sebelumnya, yaitu:

1. Melita Monteiro (2013) yang meneliti tentang pengaruh pemberian

ekstrak labu kuning per oral (Cucurbita moschata Duchenes)

terhadap kadar trigliserida tikus jantan (Rattus Norvegicus Strain

Wistar).

Page 18: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

7

2. Ita Djuwita (2012) mengevaluasi mengenai proliferasi dan

diferensiasi sel tulang tikus dalam medium kultur In Vitro yang

mengandung ekstrak batang Cissus quadrangula Salisb. (Sipatah-

Patah).

3. Ardicho Irfantian (2015) melakukan uji efek ekstrogenik

ekstrak biji labu kuning (Cucurbita moschata)

terhadap ketebalan endometrium pada tikus

ovariektomi.

Perbedaan dengan penelitian ini adalah variabel

terikatnya, dimana peneliti melakukan pengamatan

terhadap proliferasi sel tulang pada tikus, serta jumlah

sampel yang digunakan, yakni sebanyak 20 ekor tikus

Sprague Dawley jantan.

Page 19: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

BAB IITINJAUAN PUSTAKA

TINJAUAN PUSTAKA

A. Labu Kuning (Cucurbita moschata)

I. Asal dan Nama Tanaman

Tanaman labu kuning berasal dari Amerika utara. Jenis-jenis

tanaman yang serumpun dengan tanaman labu kuning adalah timun

(Cucumis sativus L), semangka (Citrullu vulgaris), melon (Cucumis melo

L), blewah (Cucumis melo L), labu siam (Sechium edule Sw), pare

(Momordica charantia L), dan lain-lain. Tanaman labu kuning berasal dari

Amerika utara. Jenis-jenis tanaman yang serumpun dengan tanaman labu

kuning adalah timun (Cucumis sativus L), semangka (Citrullu vulgaris),

melon (Cucumis melo L), blewah (Cucumis melo L), labu siam (Sechium

edule Sw), pare (Momordica charantia L), dan lain-lain. Labu kuning

dikenal juga dengan nama waluh (Jawa), pumpkin (Inggris), labu parang

(Jawa Barat), labu merah dan labu manis (Sudarto, 2000 : 11)

Cucurbita moschata Duch ex Poret, memiliki

beberapa nama daerah yaitu labu parang (Melayu), Waluh

(Sunda), Waluh (Jawa Tengah), Nama asing: butternut

(Inggris). Terdapat lima spesies labu yang dikenal, yaitu

Cucubita maxima Duchenes, Cucurbita ficifolia Bouche, Cucurbita mixta,

Cucubita moschata Duchenes, dan Cucurbita pipo L. Kelima spesies

tersebut di Indonesia disebut labu kuning (waluh) karena memiliki ciri-ciri

8

Page 20: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

9

yang hamper sama.Buah labu kuning ini berbentuk bulat pipih,

lonjong, atau panjang dengan banyak alur (15-30 alur).

Ukuran pertumbuhannya cepat sekali, mencapai 350 gram

per hari(Sarmoko& Maryani, n.d.).

Gambar 2.1. Labu Kuning

Sumber : : http:// http://alamendah.org/2010/06/20/labu-tumbuhan-

kaya-manfaat

II. Klasifikasi Tanaman

Cucurbita moschata memiliki klasifikasi tanaman dari

kingdom Plantae, subkingdom Viridaeplantae, infrakingdom

Streptophyta, divisi Tracheophyta, subdivisi

Page 21: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

10

Spermatophytina, infradivisi Angiospermae,

kelasMagnoliopsida, superordo Rosanae, ordo Cucurbitales,

family Cucurbitaceae, genus Cucurbita, spesies Cucurbita

moschata Duchenes(Integrated Taxonomic Information

System, 2014).

III. Kandungan Kimia dan Manfaat Tanaman

Labu kuning mengandung karotenoid (betakaroten),

Vitamin A dan C, mineral, lemak, serta karbohidrat. Pada

tahun 2005, ditemukan lima fenolik glikosida dari biji

Cucurbita moschata yaitu : 2-(4-hydroxy)phenylethanol 4-

O-(5-O-benzoyl)-beta-D-apiofuranosyl(1-->2)-beta-D-

glucopyranoside (1), 2-(4-hydroxyphenyl)ethanol 4-O-[5-O-

(4-hydroxy)benzoyl]-beta-D-apiofuranosyl(1-->2)-beta-D-

glucopyranoside (2), 4-hydroxybenzyl alcohol 4-O-(5-O-

benzoyl)-beta-D-apiofuranosyl(1-->2)-beta-D-

glucopyranoside (3), 4-hydroxybenzyl alcohol 4-O-[5-O-(4-

hydroxy)benzoyl]-beta-D-apiofuranosyl(1-->2)-beta-D-

glucopyranoside (4) and 4-hydroxyphenyl 5-O-benzoyl-

beta-D-apiofuranosyl(1-->2)-beta-D-glucopyranoside (5)

(Koike et al., 2005).

Pada tahun 2009, ditemukan senyawa glikosid fenolik

baru pada biji Cucurbita moschata yaitu :phenylcarbinyl 5-

Page 22: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

11

O-(4-hydroxy)benzoyl-beta-D-apiofuranosyl (1-->2)-beta-D-

glucopyranoside (Li et at., 2009).Senyawa glikosida fenolik

dalam biji C. moschataini termasuk dalam golongan

isoflavon.

IV. Fitoestrogen

Phytoestrogen atau disebut dengan phytosterols / phytochemical

adalah bahan yang terkandung dalam tananaman atau makanan yang

mempunyai kemiripan dengan estrogen dalam tubuh (Sawitri, Fauzi, &

Widyani, 2009). Isoflavon atau fitoestrogendapat berikatan dengan

reseptor estrogen sebagai bagian dari aktivitas hormonal. Pada saat kadar

estrogen menurun, akan terdapat banyak kelebihan reseptor estrogen yang

tidak terikat. Meskipun afinitasnya rendah, isoflavon masih dapat

berikatan dengan reseptor tersebut. Jika tubuh mendapatkan suplai

isoflavon atau fitoestrogenyang cukup, maka akan terjadi pengaruh

pengikatan isoflavon dengan reseptor estrogen shingga akan dapat

meningkatkan kadar estrogen (Halliwell, 1991 cit.Cahyati, Santoso, &

Juswono, 2013).

Gambar 2.2 Struktur kimia Flavonoid pada Isoflavon

Page 23: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

12

Sumber : (Astuti, 2009 cit. Cahyati, Santoso, & Juswono, 2013)

Page 24: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

13

V. Estrogen

Estrogen merupakan hormon golongan steroid yang

memiliki banyak fungsi yakni untuk pertumbuhan dan

diferensiasi dan fungsi lain dibeberapa jaringan dan

merupakan faktor penting dalam pemeliharaan kesehatan

tulang (Enmark et. al, 1997). Estrogen dapat meningkatkan

aktivitas osteogenesis (Bord, 2001; McDougal et. al, 2002).

Estrogen yang terdapat secara alamiah adalah 17 β estradiol, estron dan

estriol, dimana 17β estradiol adalah yang paling dominan. Zat-zat ini

adalah steroid C18. Hormon-hormon ini disekresikan oleh teka interna dan

sel granulosa folikel ovarium, korpus luteum dan plasenta. Estrogen juga

dibentuk melalui aromatisasi androstenedion di dalam sirkulasi.

Aromatase adalah enzim yang mengkatalisis perubahan androstenedion

menjadi estron dan perubahan testosteron menjadi 17 β estradiol. 17 β

estradiol berada dalam keseimbangan dengan estron dan estron mengalami

metabolisme lebih lanjut pada hati menjadi estriol. Estradiol paling kuat

sedang estriol paling lemah. Estradiol yang berada bebas dalam darah

hanya 2% sedang yang lain terikat yaitu : 6% ke albumin dan 38% ke

gonadal steroid binding globulin (GBG) serupa dengan yang mengikat

testosteron. Hampir semua estrogen berasal dari ovarium dan terdapat dua

puncak sekresi yaitu: pada saat sebelum ovulasi dan selama fase midluteal

(Ganong, 2003; Sherwood, 2004). Aksi biologi estrogen diketahui melalui

reseptor estrogen. Reseptor estrogen (ERs) disintesis oleh beberapa tipe sel

Page 25: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

14

dalam dua isoform yaitu ERα dan ERβ. Distribusi ERα dan ERβ

terdapat pada berbagai target

Organ antara lain: endometrium, (Matsuzaki et al,1999), uterus, oviduct,

cervix/vagina (Wang et al,2000), tulang, otak, pembuluh darah dan

jantung, sistem imun, kulit, ginjal dan paru (Wierman, 2007). Aksi biologi

reseptor estrogen melalui dua mekanisme yaitu : Secara klasik yang biasa

disebut genomic action (mekanisme genomik) dan non genomic action

(mekanisme non genomik) (Losel et. al, 2003; Bjornstorm, 2005).

Mekanisme klasik lebih dahulu ditemukan sedang mekanisme non klasik

baru beberapa tahun terakhir secara intensif dipelajari (Levin, 2001). Aksi

genomik melibatkan reseptor estrogen yang terletak di nukleus (nuclear

receptor). Ikatan antara ligan dan reseptor atau molekul yang agonis akan

menyebabkan perubahan formasi pada ER dan akan membentuk

dimerisasi yaitu homodimer atau heterodimer kemudian akan berikatan

dengan daerah promoter yang dinamakan estrogen response element

(ERE) pada target gen dan akan mengatur terjadinya proses transkripsi gen

(Nilson et al, 2001; Losel et al, 2003). Aksi biologi ini memerlukan waktu

yang lama dan sensitif terhadap inhibitor trankripsi demikian halnya

dengan inhibitor tranlasi (Losel et al., 2003). Aksi biologi genomik juga

terjadi pada sel osteoblas dalam mempengaruhi aktivitas osteogenesis

(Almaeda et al, 2006; Windahl et al, 2006). Aksi biologi estrogen genomik

maupun non genomik dapat mengaktivasi faktor pertumbuhan lain dalam

hal ini IGF-I sehingga terjadi cross-talk antara IGF-I dan Estrogen (Kato et

Page 26: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

15

al, 2000). IGF-I berperan pada proses proliferasi dan diferensiasi

osteoblas. IGF-I terdapat pada ekstrak tulang dari berbagai spesies dan

diketahui sebagai salah satu mitogenik yang jumlahnya cukup banyak baik

pada fetus maupun pada tulang dewasa.

B. Tulang

Tulang adalah jaringan yang hidup dan sebagai jaringan

penghubung (connective tissue) yang mempunyai tiga fungsi sebagai

berikut:

1. Fungsi mekanik yaitu untuk gerakan dan melekatnya otot

2. Melindungi organ vital, dan

3. Sebagai cadangan kalsium dan fosfat (Sherwood, 2004 ; Baron, 2006).

Tulang merupakan struktur yang dinamik dan menjalani proses

regenerasi secara terus-menerus yang dinamakan proses remodeling

(Monologas, 2000; Murray, 2003; Robling et al., 2006). Tulang pada

hakekatnya terdiri atas 3 tiga komponen utama sebagai berikut:

I. Senyawa Organic

Senyawa organik utama penyusun tulang adalah protein, dan

protein utama penyusun tulang adalah kolagen tipe I yang merupakan

90-95% bahan organik utama sedang sisanya adalah medium

homogen yang disebut subtansi dasar, (Baron, 2006).

Page 27: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

16

II. Substansi Dasar Tulang

Subtansi dasar terdiri atas cairan ekstraseluler ditambah

dengan proteoglikan khususnya kondroitin sulfat dan asam

hialuronat. Fungsi utama dari bahan tersebut belum diketahui, akan

tetapi diduga membantu pengendapan garam kalsium. Sedang bahan

anorganik utama adalah garam kristal yang diendapkan di dalam

matrik tulang terutama terdiri dari kalsium dan fosfat yang dikenal

sebagai kristal hidroksi apatit (Guyton, 2004; Murray, 2003).

Subtansi dasar juga mengandung protein non kolagen, dan beberapa

protein tersebut sangat spesifik pada tulang. Protein non kolagen

tersebut antara lain: osteonektin, osteokalsin (bone GLA-protein),

osteopontin (bone sialoprotein I) dan bone sialoprotein II, growth

faktor (IGF-I dan II), transforming growth factor (TGF), bone

morphogenetic protein (BMP) (Murray, 2003). Protein non kolagen

utama adalah osteokalsin, yang menyusun matriks tulang sebesar 1%

(Baron, 2006).

III. Komponen Sel Tulang

Komponen sel yang terdiri atas empat tipe sel yaitu:

osteoprogenitor cel, osteoblas (OB), osteosit (OS) dan osteoklas

(OK) (Deftos, 2002).

Page 28: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

17

(a) Sel Osteoprogenitor

Sel osteoprogenitor berasal dari mesenkim

yang merupakan jaringan penghubung yang masih

bersifat embrional, oleh karena itu osteoprogenitor

masih memiliki kemampuan untuk mitosis, dengan

demikian sel ini berfungsi sebagai sumber sel baru

dari osteoblas dan osteoklas (Compston, 2001).

(b) Osteoblas

Osteosit adalah osteoblas yang terbenam dalam matriks

tulang yang berhubungan dengan sel osteosit lain dan juga

osteoblas pada permukaan tulang melalui kanalikuli yang

mengandung cairan ekstraseluler. Hubungan antara sitoplasma

dengan kanalikuli melalui gap junction yang memungkinkan

osteosit dapat memberikan tanggapan oleh adanya signal mekanik

dan biokimiawi (Rowlinson et al., 1996; Ehrlich, 2002). Osteosit

diyakini memainkan peran dalam hal merespon stimulasi mekanik,

sensor adanya strain dan inisiasi respon terhadap modeling dan

remodeling melalui beberapa mesengger kimia yang meliputi

glukosa 6 fosfat dehidrogenase, nitric oxide (NO), dan IGF

(Burger, 1999; Bonewald, 2002). Hasil penelitian akhir-akhir ini

diketahui bahwa osteosit juga memelihara homeostasis mineral

tulang (Bonewald, 2007).

(c) Osteosit

Page 29: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

18

Osteosit adalah osteoblas yang terbenam dalam matriks

tulang yang berhubungan dengan sel osteosit lain dan juga

osteoblas pada permukaan tulang melalui kanalikuli yang

mengandung cairan ekstraseluler. Hubungan antara sitoplasma

dengan kanalikuli melalui gap junction yang memungkinkan

osteosit dapat memberikan tanggapan oleh adanya signal mekanik

dan biokimiawi (Rowlinson et al., 1996; Ehrlich, 2002).

Osteosit diyakini memainkan peran dalam hal merespon

stimulasi mekanik, sensor adanya strain dan inisiasi respon

terhadap modeling dan remodeling melalui beberapa mesengger

kimia yang meliputi glukosa 6 fosfat dehidrogenase, nitric oxide

(NO), dan IGF (Burger, 1999; Bonewald, 2002). Hasil penelitian

akhir-akhir ini diketahui bahwa osteosit juga memelihara

homeostasis mineral tulang (Bonewald, 2007).

(d) Osteoklas

Osteoklas bentuknya besar, bersifat multinukleat berasal

dari hematopoietic stem cell (sel hematopoietik) yang merupakan

prekusor monosit/makrofag. Sel ini kaya dengan enzim lisosom

yang meliputi tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) (Baron,

2006). Osteoklas berperan pada proses resorpsi tulang dan selama

proses resorpsi, ion hidrogen yang dibentuk dari carbonic

anhydrase (karbonik anhidrase) memasuki plasma membran untuk

Page 30: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

19

melarutkan matriks tulang, lebih lanjut enzim lisosom yaitu

kolagenase dan katepsin K dikeluarkan untuk kemudian mencerna

matriks tulang (Arnet, 2003).

VI. Pertumbuhan Tulang (Modeling dan Remodeling Tulang)

Pertumbuhan tulang adalah terminologi yang digunakan

untuk menggambarkan perubahan struktur tulang yakni pada saat

pembentukan skeleton, pertumbuhan dan pematangan (Baron,

2006).

Pertumbuhan tulang (modeling) mengarah ke proses pengubahan

ukuran dan bentuk tulang. Pertumbuhan tersebut terjadi hingga

akhir pubertas, akan tetapi peningkatan kepadatan masih terjadi

hingga dekade ke empat (Deftos, 2002), sedang remodeling adalah

proses regenerasi yang terjadi secara terus menerus dengan

mengganti tulang yang lama (old bone) dengan tulang yang baru

(new bone) (Monologas, 2000). Tempat dimana terjadi peristiwa

remodeling diberi istilah basic multicelluler units (BMUs) atau

bone remodeling unit. Remodeling berlangsung antara 2-8 minggu

dimana waktu terjadinya pembentukan tulang berlangsung lebih

lama dibanding dengan terjadinya resorpsi tulang. Proses

remodeling berlangsung sejak pertumbuhan tulang sampai akhir

kehidupan. Tujuan remodeling tulang belum diketahui secara pasti,

tetapi aktivitas tersebut dapat berfungsi antara lain untuk:

1. Mempertahankan kadar ion kalsium dan fosfat ekstraseluler.

Page 31: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

20

2. Memperbaiki kekuatan skeleton sebagai respon terhadap

beban mekanik.

3. Memperbaiki kerusakan (repair fatique demage) tulang dan,

4. Mencegah penuaan sel tulang (Monologas, 2000; Baron,

2006; Murray, 2003).

Modeling dan remodeling akan mencapai dua hal dalam

kehidupan seseorang yaitu: pemanjangan tulang (longitudinal bone

growth) dan kepadatan tulang (bone massa) (Baron, 2006).

Proses remodeling meliputi dua aktivitas yaitu:

proses pembongkaran tulang (bone resorption) yang

diikuti oleh proses pembentukan tulang baru (bone

formation), proses yang pertama dikenal sebagai

aktivitas osteoklas sedang yang kedua dikenal

sebagai aktivitas osteoblas (Murray, 2003). Proses

remodeling melibatkan dua sel utama yaitu osteoblas

dan osteoklas, dan kedua sel tersebut berasal dari

sumsum tulang (bone marrow) (Raisz, 1999;

Monologas, 2000). Osteoblas berasal dari pluripotent

mesenchymal stem cell yaitu: fibroblast coloni

forming unit (CFU-F), sedang osteoklas berasal dari

hematopoietic stem cell yaitu granulocyt-

macrophage colony-forming units (CFU-GM)

(Monologas, 1995; Baron, 2006).

Page 32: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

21

Raisz (1999) dan Monologas (1995) menyatakan bahwa

proses remodeling tulang merupakan suatu siklus yang meliputi

tahapan yang komplek yaitu:

1. Tahap aktivasi (activation phase) adalah tahap interaksi antara

prekusor osteoblas dan osteoklas, kemudian terjadi proses

diferensiasi, migrasi, dan fusi multinucleated osteclast dan

osteoklas yang terbentuk kemudian akan melekat pada

permukaan matrik tulang dan akan dimulai tahap berikutnya

yaitu tahap resorpsi. Sebelum migrasi ke matrik tulang

osteoklas tersebut akan melewati sederetan lining sel osteoblas

pada permukaan tulang untuk dapat mengeluarkan enzim

proteolitik. Interaksi sel antara stromal cell (sel stroma) dan

hematopoietik cell (sel hematopoietik) menjadi faktor penentu

perkembangan osteoklas. Perkembangan osteoklas dari

prekusor hematopoietik tidak bisa diselesaikan jika tidak ada

kehadiran sel stroma. Oleh karena itu hormon sistemik dan

lokal yang mempengaruhi perkembangan osteoklas disediakan

oleh stromal-osteoblastic lineage (sel stroma).

2. Tahap resorpsi (resorption phase) adalah tahap pada waktu

osteoklas akan mensekresi ion hydrogen dan enzim lisosom

terutama cathepsin K dan akan mendegradasi seluruh

komponen matriks tulang termasuk kolagen. Setelah terjadi

resorpsi maka osteoklas akan membentuk lekukan atau

Page 33: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

22

cekungan tidak teratur yang biasa disebut lakuna howship pada

tulang trabekular dan saluran haversian pada tulang kortikal.

3. Tahap reversal (reversal phase), adalah tahap pada waktu

permukaan tulang sementara tidak didapatkan adanya sel

kecuali beberapa sel mononuclear yakni makrofag, kemudian

akan terjadi degradasi kolagen lebih lanjut dan terjadi deposisi

proteoglycan untuk membentuk coment line yang akan

melepaskan faktor pertumbuhan untuk dimulainya tahap

formasi.

4. Tahap formasi (formation phase), adalah tahap pada osteoblas

yang dilanjutkan dengan pembentukan matrik tulang yang baru

dan akan mengalami mineralisasi. Tahap formasi akan berakhir

ketika defek (cekungan) yang dibentuk oleh osteoklas telah

diisi.

Page 34: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

23

Proses remodeling tersebut secara skematis disajikan pada gambar 2.3

Tahapan Proses Remodeling Tulang (Compston, 2001)

Keterangan :

Activation = tahap terjadi aktivasi

Resorption = tahap resorpsi

Formation = tahap formasi

Mineralisation = tahap mineralisasi

Page 35: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

GnRH

Estrogen

FSH/LHHipothalamus

Hipofisis Anterior Growth Hormone

Osteoblas(Proliferasi Sel Tulang)

Ekstrak biji labu kuning :

Isoflavon

Kultur in vitro jaringan tulang tikus

24

Quiscence = tahap tidak terjadi remodeling

Berdasarkan uraian diatas dapat disimpulkan bahwa proses remodeling

adalah aktivitas yang meliputi pembentukan tulang dan resorpsi tulang. Faktor

pengatur pembentukan dan resorpsi tulang dilaksanakan melalui dua proses

yang selalu berada dalam keadaan seimbang yang disebut coupling. Proses

coupling ini memungkinkan aktivitas pembentukan tulang sebanding dengan

resorpsi tulang (Raisz, 1999).

4. Kerangka Konsep

Bagan2.1. Kerangka Konsep

Keterangan :

: Fisiologi normal

: Menghambat

Page 36: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

25

: Meningkatkan

5. Hipotesis

Ekstrak biji labu kuning dapat menyebabkan peningkatan

proliferasi sel tulang pada jaringan tikus yang telah di kultur sistem

invitro.

Page 37: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

26

BAB III

METODE PENELITIAN

A. Desain Penelitian

Penelitian ini menggunakan metode eksperimental in vitro pada hewan uji

dengan desain posttest only control group design.

B. Subyek Penelitian

Subyek penelitian adalah tikus betina Spraque-Dawley, umur 8 minggu,

berat badan 230-280 gram, diperoleh dari Unit Pengembangan Hewan Percobaan

Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Pakan tikus berupa pakan standar BR I.

Jumlah kelompok subyek pada penelitian ini disesuaikan dengan

perlakuan yang akan diberikan, yaitu 4 kelompok.

Page 38: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

27

Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan dalam waktu 4 bulan.

Tabel 3.2. Waktu Penelitian

No.

Jenis KegiatanBulan I Bulan II Bulan III Bulan IV

1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

1Persiapan alat dan bahan

2Pembuatan & standarisasi ekstrak biji C. moschata

3 Aklimatisasi tikus

4Pemeliharaan tikus sampai timbul efek ovariektomi

Pemberian perlakuan penelitian

6

Pembuatan preparat dan pengukuran ketebalan endometrium

7 Analisis data8 Pembuatan laporan

Tempat penelitian adalah di Laboratorium Biomedik Fakultas

Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Yogyakarta

dan LPPT Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.

C. Variabel Penelitian

1. Variabel bebas : Ekstrak biji labu kuning (Cucurbita

moschata)

2. Variabel tergantung : Proliferasi sel tulang

3. Variabel terkendali :

Page 39: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

28

a. Tikus putih galur Spraque-Dawley, umur 8 minggu, berat

badan 230 – 280 gram..

D. Definisi Operasional

1. Ekstrak etanol biji C. moschata diperoleh dengan cara dikeringkan

dan diekstraksi dengan teknik maserasi, penyari etanol 70%

sehingga terbentuk ekstrak etanol biji C. moschata.

2. Efek estrogenik adalah perubahan fisiologis dan struktur yang

terjadi karena terpapar bahan yang bersifat estrogenik. Efek ini bisa

dilihat pada organ-organ yang menjadi organ target estrogen, salah

satunya tulang. Parameter yang akan dilihat pada penelitian ini

adalah peningkatan proliferasi sel tulang.

3. Proliferasi sel tulang dihitung dengan mengamati peningkatan

jumlah sel tulang pada preparat invitro

E. Alat dan Bahan Penelitian

1. Alat pembuat ekstrak uji: timbangan, blender kering, alat-alat gelas

(erlenmeyer, gelas ukur, gelas beker, corong), homogenizer

Heidolph®, rotary evaporator Heidolph®.

2. Alat perlakuan hewan uji: kandang hewan uji, timbangan hewan,

timbangan analitik sonde lambung, alat gelas, peralatan bedah.

Mikroskop dilengkapi kamera Olympus®.

3. Alat pembedahan tikus.

Page 40: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

29

4. Alat pembuatan preparat histologi: oven, mikrotom,

stainingjar/benjana pereaksi warna, hot plate, lampu spiritus,

spatula, kuas, pipet tetes.

5. Tikus putih galur Spraque-Dawley, umur 8 minggu, berat badan

230-280 gram diperoleh dari UPHP (Unit Pengelolaan Hewan

Percobaan) UGM, pakan dan minum standar.

6. Biji labu kuning (Cucurbita moschata) yang diperoleh dari

produsen tepung labu kuning di Yogyakarta

7. Ekstrak etanol biji Cucurbita moschata diperoleh dari biji labu

kuning yang dikeringkan, dihaluskan, kemudian diekstrasi dengan

cairan penyari etanol 70%. Ekstraksi dilakukan dengan metode

maserasi, ekstrak dibuat di Laboratorium Biomedik FKIK UMY.

Page 41: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

30

F. Alur Penelitian

Tabel 3.2 Alur Penelitian

Tikus dikorbankan dengan anestesi

Sel tulang diambil

Analisis data

Penyusunan laporan dan naskah publikasi

Pembuatan kultur jaringan

in vitro

Pengukuran proliferasi sel tulang

pada kultur

Page 42: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

31

G. Analisis Data

Data diuji normalitasnya dengan uji Shapiro-Wilkuntuk mengetahui data

mempunyai distribusi normal atau tidak, karena besar sampel < 50. Apabila data

memiliki distribusi normal, maka diuji dengan one way ANOVAdan apabila

terdapat perbedaan yang bermakna dilanjutkan dengan uji Tukey untuk

mengetahui letak perbedaan masing-masing kelompok. Apabila data memiliki

distribusi tidak normal, maka diuji dengan Kruskall-Wallis.

H. Etika Penelitian

Proposal penelitian ini akan diajukan untuk mendapatkan persetujuan

ethical clearance kepada Komisi Etik Penelitian FKIK UMY.

Page 43: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

DAFTAR PUSTAKA

Bloom, & Fawcett. (2012). Buku Ajar Histologi. Jakarta: EGC.

Cahyati, Y., Santoso, D. R., & Juswono, U. P. (2013). Efek Radiasi pada Penurunan

Estrogen yang Disertai Konsumsi Isoflavon untuk Mencegah Menopause Dini pada

Terapi Radiasi. NATURAL B , 114.

Despopoulos, A., & Silbernagl, S. (2003). Color Atlas and Physiology (5th ed.). New York:

Thieme.

Guyton, A. C. (2006). Buku Ajar Fisiologi Kedokteran Edisi 11. Jakarta: Buku Kedokteran

EGC.

Hendrasty, H. K. (2003). Tepung Labu Kuning. Yogyakarta: Kanisius.

ITIS. (2014, April 19). Retrieved from ITIS:

http://www.itis.gov/servlet/SingleRpt/SingleRpt?

search_topic=TSN&search_value=22370

Junqueira, L. C., & Carneiro, J. (2003). Basic Histology : Text & Atlas, 10 Ed. New York:

McGraw-Hill.

Koike, K., Li, W., Liu, L., Hata, E., & Nikaido, T. (2005). New phenolic glucosides from the

seeds of Cucurbita moschata. PubMed .

Laila, S. N. (2010). Hubungan Lama Pemakaian Kontrasepsi Depot

Medroxyprogesterone Acetate Dengan Kejadian Amenorea Sekunder di Puskesmas

Kratonan Surakarta.

Page 44: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

33

Li, F., Xu, J., Dou, D., Chi, X., Kang, T., & Kuang, H. (2009). Structure of new phenolic

glycoside from the seeds of Cucurbita moschata. PubMed .

Manson, J. E., & Martin, K. (2001). Postmenopausal Hormone-Replacement Therapy. The

New England Journal of Medicine , 35.

Monteiro, M. (2013). Pengaruh Pemberian Ekstrak Labu Kuning Per Oral (Cucurbita

Moschata Duchenes) Terhadap Kadar Trigliserid Tikus Jantan (Rattus novergicus Strain

Wistar) Model Diabetes Melitus Tipe 2. 2-3.

Murray, R. K., Granner, D. K., Mayes, P. A., & Rodwell, V. W. (2003). Harper's Illustrated

Biochemistry (26th ed.). New York: McGraw-Hill.

Pernoll, M. L. (2001). Benson & Pernoll's handbook of Obstertics and Gynecology. New

York: McGraw-Hill.

Pratiwi, L., & Raksanagara, A. (2014). Pengaruh Gejala Menopause terhadap Kualitas

Hidup Wanita Menopause. 1.

Sarmoko, & Maryani, R. (n.d.). Labu Kuning (Cucurbita moschata Durch). Retrieved from

http://ccrc.farmasi.ugm.ac.id/?page_id=131

Sawitri, E. I., Fauzi, N., & Widyani, R. (2009). Kulit dan Mneopause dan Penatalaksanaan.

55.

Sitasiwi, A. J. (2009). Efek Paparan Tepung Kedelai dan Tepung Tempe sebagai Sumber

Fitoestrogen terhadap Jumlah Kelenjar Endometrium Uterus Mencit (Mus musculus L.).

Sushanty, D. (2013, November 15). Retrieved from

http://shanty.staff.ub.ac.id/2013/11/15/sekilas-si-labu-kuning/comment-page-1/

Page 45: Abi Proposal 1 Fix Harus Dikerjain Kata Nindhy, Okee

34

Wiyatna, F., Warsono, I. U., & Parakkasi, A. (2009). Pengaruh Tepung Cangkang Rajungan

(Portunus Pelagicus) Sebagai Sumber Kitin dalam Ransum terhadap Kandungan Lemak

Feses dan Efisiensi Pakan Tikus Putih (Rattus norvegiccus) Strain Wistar. 3.